NF-κB抑制剂增敏卡铂对卵巢癌细胞毒性作用的机制研究

[目的]探讨NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）增敏卡铂对卵巢癌细胞的毒性作用及其机制。[方法]采用凝胶迁移率变动试验（EMSA）法,观察卡铂作用下和卡铂与PDTC共同作用下NF-κB的活化反应;MTT和流式细胞仪分别比较2种情况下SKOV3细胞的生长情况和凋亡率;RT-PCR方法检测2种情况下survivinmRNA的表达。[结果]EMSA实验结果表明,卡铂可以诱导NF-κB活化,PDTC可以抑制此作用。PDTC预处理后可增强卡铂对卵巢癌SKOV3细胞的生长抑制作用。卡铂作用24h、48h后卵巢癌SKOV3细胞的凋亡率分别为3.4%、20.1%;卡铂＋PDTC作用24h、48h后卵巢癌SKOV3细胞的凋亡率明显增加,分别为14.0%、32.7%,与卡铂组相比有显著性差异（P〈0.01）。卡铂作用3d、5d后卵巢癌SKOV3细胞中survivinmRNA的相对表达量分别为0.48±0.04、0.57±0.03,卡铂＋PDTC组分别为0.33±0.04、0.38±0.04,对应时间点两组差异显著（P〈0.01）。[结论]卡铂能诱导NF-κB的活化,NF-κB抑制剂可以增强卡铂诱导的SKOV3细胞的凋亡。NF-κB可能通过上调SKOV3细胞内survivinmRNA的表达来抵抗卡铂诱导的SKOV3细胞的凋亡。     

阿糖胞苷诱导NF-κB活化与白血病细胞凋亡的关系

目的：研究地塞米松(DXM)和长春新碱(VCR)对阿糖胞苷(Ara—C)诱导HL60—n白血病细胞凋亡与核因子—κB(NF—κB)活化的影响。方法：采用TdT介导的dUTP缺口末端标记(Tunel)和DNA电泳技术检测H160—n细胞凋亡；采用电泳迁移率变动分析(EMSA)检测HL60—n细胞NF—κB活化水平。结果：Ara—C同时具有诱导HL60—n细胞凋亡和NF—κB活化的作用；DXM lμmol/L和VCR0．1μmol/L能显著增强Ara—C诱导的HL60—n细胞凋亡和抑制Ara—C诱导的HL60—n细胞的NF—κB活化，细胞凋亡增强率分别为39．1％和59．2％(均P＜0．05)，NF—κB活化抑制率分别为31．0％和47．0％(均P＜0．05)。结论：Ara—C诱导HL60—n细胞凋亡的同时激活NF—κB；DXM和VCR可通过抑制NF—κB活化，增强其诱导HL60—n细胞凋亡的作用。     

NF-κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷提高卵巢癌细胞顺铂化疗的敏感性

目的:探讨核因子κB(nuclear factor kappa B, NF-κB)抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)提高人卵巢癌SKOV-3细胞对顺铂(cisplatin)化疗敏感性的作用及其可能的机制.方法:用不同浓度PDTC联合顺铂在不同时间作用于卵巢癌SKOV-3细胞,MTT法观察药物作用对细胞生长的抑制,Western Blotting分析胞质内NF-κB 抑制蛋白α(inhibitor of NF-κB ,I-κBα)、胞核P65蛋白的表达;流式细胞术检测细胞凋亡.结果:PDTC(10～40 μmol/L)或顺铂(0.1～100 μg/ml )均明显抑制SKOV-3细胞的生长(P<0.05或P<0.01),并引起细胞的凋亡;小剂量PDTC(2.5、5 μmol/L)和顺铂(0.01 μg/ml)联合应用与单用顺铂比较,可明显增加细胞生长抑制率和细胞凋亡率(均P<0.05).单用顺铂组与对照组比较,胞质I-κBα蛋白减少而胞核P65蛋白增多,联合使用PDTC可逆转此现象.结论:小剂量PDTC可增强卵巢癌细胞对顺铂的敏感性,这一作用可能与PDTC增加I-κBα蛋白的表达而抑制P65蛋白进入核内有关.     

抗氧化剂PDTC对卡铂诱导宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨抗氧化剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)联合卡铂对宫颈癌HeLa细胞增殖及凋亡的影响.方法:体外培养HeLa细胞,药物作用分为空白组、PDTC组、卡铂组和PDTC+卡铂联合组.各组药物处理后,MTT法检测细胞生长抑制率,FCM法检测细胞凋亡率和细胞周期分布情况,免疫细胞化学方法观察核转录因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)p65在细胞质和细胞核中表达水平的变化.结果:MTT法检测结果显示,PDTC能够有效地抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖,呈时间和剂量依赖关系;小剂量(12.5 μmol/L)PDTC 和卡铂联合应用较单用卡铂,能明显提高细胞生长抑制率(P<0.01).FCM法检测结果显示,各用药组较对照组以及PDTC+卡铂联用组与单用卡铂组比较,宫颈癌HeLa细胞的凋亡率差异有统计学意义(P<0.01).HeLa细胞经PDTC作用后,G0/G1期细胞比例较对照组明显增加(P<0.01),S期细胞比例降低(P<0.01);卡铂单用组使细胞周期阻滞于G2/M期;联合用药组使细胞周期进一步阻滞于G2/M期,且与对照组比较,降低了S期细胞比例(P<0.01).免疫细胞化学法检测结果显示,NF-κBp65在宫颈癌HeLa细胞中主要表达于细胞质,卡铂诱导24 h后细胞质中NF-κBp65转移至细胞核,其活性增强,而PDTC能够抑制此作用.结论:卡铂能够诱导NF-κBp65的活化.小剂量(12.5 μmol/L)PDTC 和卡铂联合应用较单用卡铂,能明显增加对宫颈癌HeLa细胞的生长抑制率和细胞凋亡率.PDTC可能提高宫颈癌HeLa细胞对卡铂的敏感性.     

抑制NF—κB通路增强蟾蜍灵诱导的HL-60细胞凋亡

目的：观察蟾蜍灵对HL-60细胞活力和凋亡的影响,对NF—κB通路的作用,探讨NF—KB通路在蟾蜍灵诱导HL-60细胞凋亡过程中的作用。方法：锥虫蓝染色检测细胞活力;流式细胞仪技术检测细胞凋亡和周期分布;采用WesternBlot技术检测IKK的磷酸化。结果：蟾蜍灵以时间和剂量依赖性方式诱导HL-60细胞凋亡。24,48和72h抑制细胞活力的Ic50浓度分别为26．3,7．8和2．0nmol／L。对照组HL-60细胞有pIKK表达,蟾蜍灵可诱导IKK的快速活化。NF—κB通路的特异性抑制剂Bay11—7082增强蟾蜍灵的凋亡诱导作用。结论：蟾蜍灵可诱导HL-60细胞凋亡,促进IKK活化与NF—κB通路调节相关,而且与NF—κB通路抑制剂有协同作用。     

核转录因子κB抑制剂PDTC对胃癌细胞株增殖和凋亡相关蛋白caspase-3表达影响的实验研究

目的:探讨核转录因子NF κB活性特异性抑制剂PDTC(吡咯烷二硫代氨基甲酸盐)对胃癌细胞增殖和凋亡相关蛋白caspase 3表达的影响。方法:利用TransAMTM NF κBP65活性测定试剂盒,检测PDTC作用胃癌细胞株AGS、SGC 7901 12h、24h后,NF κB亚基P65活性的变化。采用噻唑蓝 (MTT)比色法观察PDTC作用 24h、48h、72h,对细胞增殖的影响。用Hoechst33258荧光染色观察凋亡细胞核形态变化,利用免疫印迹法 (Western blot法)检测细胞中活化型caspase 3蛋白表达的变化。结果:经PDTC处理的实验组胃癌细胞NF κB的活性受到抑制(P<0. 01),与对照组相比,细胞的增殖活性明显受到抑制(P<0. 05)。经PDTC处理后的实验组细胞呈现典型的凋亡核固缩表现,胞核呈致密浓染的颗粒状或块状荧光,胞质检测到活性caspase 3蛋白的表达。结论:核因子NF κB参与胃癌细胞的增殖与凋亡调控,PDTC可通过抑制NF κB活性上调caspase 3表达,从而诱导细胞的凋亡。     

拓扑替康对卵巢癌SKOV3细胞水通道蛋白5及NF-κB表达的影响

背景与目的：水通道蛋白5（aquaporin 5,AQP5）的表达异常与卵巢癌细胞的浸润转移和血管形成有关。核转录因子NF-κB参与细胞的增殖、分化、凋亡,且能影响肿瘤细胞对化疗的敏感性。本研究探讨拓扑替康（topotecan,TPT）对卵巢癌SKOV3细胞中AQP5、核转录因子（nuclear factor kappa B,NF-κB）及其抑制因子（inhibitor kappa B,IκKBa）表达的影响。方法：用不同浓度TPT作用SKOV3细胞不同时间后,应用MTT法检测并计算卵巢癌细胞增殖抑制率,蛋白质印迹法检测AQP5、NF-κB及IκBα蛋白表达。并分析各蛋白表达水平的相关性。结果：0．4μg／mL TPT与SKOV3细胞温育24h,AQP5、胞浆和胞核NF-κB p65以及胞浆IκKBa表达随着作用时间延长均明显下降,并维持至72h后（P〈0．05）。不同浓度（0．2μg／mL、0．4μg／mL、0．6μ／mL、0．8μg／mL）TPT作用于SKOV3细胞24h,随着TPT浓度增加,SKOV3细胞AQP5表达量逐渐减少（P〈0．05）,0．8μg／mL TPT AQP5表达抑制率为57．9％;同时,细胞核NF-κBp65、IκKBa表达量也逐渐减少。TPT对细胞的增殖抑制率与AQP5表达呈负相关（r=-0．965;P〈0．05）,AQP5表达与NF-κB p65和IκKBa呈正相关（r=0．903,0．896;P〈0．05）。结论：TPT抑制肿瘤细胞增殖时下调AQP5及核转录因子NF—κB表达。     

EGCG影响TNF-α诱导的NF—KB／p65入核及促凋亡效应

背景与目的：研究表明，表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin-3-gallate，EGCG）抗肿瘤作用机制尚不十分清楚，本研究旨在观察EGCG调节TNF—α诱导的胃癌SGC-7901细胞核转录因子KB／p65（NF—KB／p65）的入核并发挥诱导凋亡的作用。方法：Hoechst染色法检测EGCG处理SGC-7901细胞前后凋亡的形态学改变；Westemblot方法观察EGCG作用前后NF—KB／p65蛋白在胞质内及核内的变化；流式细胞术检测EGCG调节NF—KB／p65入核前后细胞凋亡的变化；DNA ladder方法观察EGCG诱导细胞DNA断裂情况。结果：Hoechst染色法显示EGCG处理后细胞形态改变：核致密浓染或呈碎块状、苍白色。Western blot方法检测发现，10ng／ml的TNF—d作为NF—KB／p65入核的诱导剂分别作用细胞30、60、90和120min后，核内NF—KB／p65明显增多并在60min达高峰；60斗g／ml的EGCG预处理细胞不同时间（0、12、24、36和48h）后，再以TNF—d处理60min，检测发现核内NF—KB／p65明显下降并在24h达低谷；不同浓度EGCG（40、60、80和100μg／m1）预处理细胞24h后，再加TNF—d处理60min，核内NF—KB／p65呈时间依赖性下降。流式细胞术显示，10ng／ml的TNF—α处理细胞60min后，细胞凋亡率为3．7％，60μg／mlEGCG处理细胞24h后再以TNF—α处理细胞，凋亡率为16．6％；NF—KB通路阻断剂吡咯啉烷二甲基硫脲（PDTC）100μmoL／L预处理30min后再以TNF—α处理细胞60min，细胞凋亡率为21．4％。EGCG60μg／ml处理细胞24h、PDTC处理细胞30min后再以TNF—α处理细胞60min，DNA凝胶电泳出现明显梯形条带。结论：EGCG能够抑制TNF—α诱导的NF—KB／p65入核，并可能通过此机制发挥诱导细胞凋亡的作用。     

格尔德霉素对人卵巢癌细胞SKOV3增殖和凋亡的影响及其机制探讨

目的:研究格尔德霉素(geldanamycin,GA)对人卵巢癌SKOV3细胞的体外抑制作用,探讨GA抑制SKOV3细胞增殖及诱导其凋亡的可能机制。方法:MTT法检测GA单独或联合顺铂(cisplatin)对SKOV3细胞的增殖抑制作用;FCM法检测GA作用后SKOV3细胞周期及凋亡率的变化;分别应用免疫细胞化学法(immunocytochemistory,ICC)和FCM法检测GA处理SKOV3细胞48h后细胞内Akt、Raf-1蛋白的表达变化。结果:GA对SKOV3细胞的体外增殖可产生明显的抑制作用(P<0.05),该作用随着GA浓度的增高和作用时间的延长而增强。而且,GA可增强顺铂对SKOV3细胞的增殖抑制作用,在一定浓度范围内随着GA浓度的增高,两药联合应用对SKOV3细胞的增殖抑制作用越强。经0～2000nmol/L GA作用SKOV3细胞48h后,G2/M期细胞逐渐增多,细胞凋亡率也显著升高(P<0.05)。ICC和FCM法检测结果均表明,经0～2000nmol/L GA处理48h后,SKOV3细胞中Akt、Raf-1蛋白的表达水平随着药物浓度增高而逐渐降低(P<0.05)。结论:GA能够对卵巢癌SKOV3细胞产生明显的体外增殖抑制作用,并诱导其凋亡,其作用机制可能与下调卵巢癌细胞中Akt和Raf-1蛋白表达相关。     

TRAIL对原代卵巢癌细胞增殖、凋亡及核 因子κB的影响

 目的 观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TNF-related apoptosis inducing- ligand; TRAIL）对原代卵巢癌细胞生长的抑制和诱导肿瘤细胞凋亡效应,以及细胞核因子κB(NF κＢ)激活和转运的影响。方法 来源于12例病人原代卵巢癌细胞,给予TRAIL 0、5、10、20、50、100μg/L分别作用24、48、72和96h,运用MTT比色法检测原代卵巢癌细胞生长、增殖情况;细胞免疫荧光法检测原代卵巢癌细胞凋亡和细胞内NF κB激活－转运情况。结果 TRAIL对原代卵巢癌细胞的生长抑制呈剂量依赖性,浓度大于20μg/L时抑制率增辐减慢;浓度相同时对癌细胞的抑制呈时间依赖性,72h后抑制率上升减缓;肿瘤细胞凋亡率随TRAIL作用时间延长而增加,5μg/L 24h、96h凋亡率分别是（28±1.18）%、（55±4.12）%;肿瘤细胞凋亡率也呈剂量依赖性;TRAIL作用后原代卵巢癌细胞质和胞核中NF κB表达增加。结论 TRAIL抑制原代卵巢癌细胞的增殖和生长,并诱导癌细胞的凋亡;激活癌细胞质中NF κB向细胞核内转运。     

NGX6基因联用5-Fu对人结肠癌细胞凋亡的影响

目的:探讨候选抑瘤基因NGX6联用5-Fu对结肠癌细胞凋亡的影响.方法:以稳定转染并表达NGX6基因的HT-29细胞与5-Fu联用作为实验组.以PDTC与5-Fu联用的HT-29细胞作为对照组.通过EMSA检测各组结肠癌HT-29细胞核转录因子-κB(NF-κB)的激活情况,利用MTT比色法检测各组细胞增殖的情况.吖啶橙(AO)/溴化乙啶(EB)双染法显微镜观测以及PI/Annexin-V双染流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况.结果:稳定转染并表达NGX6基因的HT-29细胞以及应用了PDTC的HT-29细胞NF-κB的激活均明显受到抑制;与5-Fu作用的HT-29细胞组比较,5-Fu联合PDTC作用于HT-29细胞后,HT-29细胞增殖受到明显抑制,5-Fu诱导HT-29细胞凋亡作用增强;与5-Fu联合PDTC作用于HT-29细胞的对照组比较,在诱导细胞凋亡以及抑制细胞增殖方面,稳定转染并表达NGX6基因的HT-29细胞与5-Fu联用组和对照组所取得一致的效果,NGX6基因增强5-Fu对HT-29细胞增殖抑制的能力及诱导HT-29细胞凋亡的能力.结论:NGX6基因抑制了肿瘤细胞NF-κB的激活,具有增强5-Fu诱导结肠癌细胞凋亡的能力,其机制可能是抑制肿瘤细胞NF-κB的激活,NGX6基因对肿瘤的治疗及预后起积极作用.     

食管鳞癌细胞中NF-κB与IκBα的mRNA、蛋白表达

目的：核转录因子NF—kappaB（NF—κB）是一种重要的转录因子，参与调控多种与炎症、抗凋亡、肿瘤形成和转化有关的基因表达。本研究通过检测食管鳞癌细胞中NF—κB与IκBαmRNA、蛋白的表达及NF—κB的DNA结合活性．分析NF—κB在食管鳞癌细胞中的激活状态及其在食管鳞癌细胞的生存及转化中的作用。方法：采用Western blotting法检测两株食管鳞癌细胞胞质中NF—κB亚单位p50和p65、阻遏物IKBα及其磷酸化IKBα的蛋白表达．检测细胞核中p50和p65的蛋白表达并采用EMSA法检测其与DNA的结合活性。使用RT-PCR法检测p50、p65、IκBαmRNA的表达：结果：NF—κB的亚单位p50、p65、IκBα及磷酸化IκBα在食管鳞癌细胞质中均表达．p50、p65蛋白在细胞核中也表达并具有较高的DNA结合活性.RT-PCR结果表明．p50、p65、IκBα的mRNA在细胞中也存在过表达。结论：本研究发现NF—κ在两株食管鳞癌细胞系中被激活，基因的过表达及IκBα的磷酸化在维持NF—κB的活化中起着重要的作用．     

抑制survivin基因对人卵巢癌SKOV3细胞顺铂药物敏感性的影响

目的：探讨应用RNAi技术下调survivin基因对人卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡及顺铂敏感性的影响。方法：构建survivin基因shRNA真核表达载体,转染人卵巢癌SKOV3细胞。定量PCR和Western blotting观察SKOV3细胞survivinmRNA和蛋白表达的改变;噻唑蓝（Myr）检测细胞增殖活性和药物敏感性;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：SKOV3-siRNA组细胞survivinmRNA及蛋白表达下降,同时细胞增殖能力明显降低,细胞凋亡率显著增加（P〈0．05）。SKOV3-siRNA组细胞对顺铂的化学敏感性升高,顺铂的IC50值降低（P〈0．05）。结论：下调survivin基因表达能够抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖能力,诱导细胞凋亡,增强细胞顺铂药物敏感性。因此,survivin基因可能成为抗肿瘤治疗的潜在靶点。     

NF-кB与柔红霉素对HL-60细胞凋亡作用关系的探讨

目的：探讨核因子NF-кB是否与柔红霉素(DNR)在体外诱导HL-60细胞凋亡的过程有关。方法：应用光镜、流式细胞技术(FCM)检测DNR对HL-60细胞的凋亡作用；并采用细胞免疫化学(IC)、FCM、电泳运动转移分析(EMSA)法分别检测对照细胞组、DNR诱导HL-60细胞凋亡组、PTDC或FBI抑制组细胞核内NF-кB的表达情况。结果：1.0μmol／L DNR对HL-60细胞作用5h时，有显著的凋亡现象发生，且细胞内NF-кB的表达较对照细胞显著增强，PDTC可显著抑制DNR作用HL-60后的凋亡率及NF-кB的表达，而FBI对此无明显作用。结论：DNR诱导HL-60凋亡的过程与细胞核因子NF-кB有关，ROS参与了此凋亡过程。     

NF-κB在TNF-α诱导的Hela细胞凋亡中的作用

目的：探讨核因子-κB(nuclear factorkappa B，NF-κB)对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)诱导的宫颈癌Hela细胞凋亡的影响。方法：培养宫颈癌Hela细胞。不同处理因素按指定时间作用后，RT一PCR检测NF-κB p65 mRNA的表达。免疫印迹和免疫组化检测NF-κB p65活性的变化，TUNEL法检测细胞凋亡。结果：静息状态下。在Hela细胞中NF-κB p65具有微弱活性水平。TNF-α诱导Hela细胞NF—κB活化与其诱导细胞凋亡明显相关，NF-κB p65单抗能显著抑制TNF-α(10ng／mL)诱导的Hela细胞NF-κB活化，抑制率为49．69％，并增强其诱导Hela细胞凋亡的作用，凋亡增加率为57．52％。结论：TNF-α在诱导宫颈癌Hela细胞凋亡的同时活化NF-κB。NF-κB p65单抗可通过抑制NF-κB活化以增强TNF-α诱导Hela细胞凋亡的作用。     

雷帕霉素增强卵巢癌细胞系对顺铂敏感性的机制研究

目的：研究雷帕霉素对卵巢癌细胞系顺铂敏感性的影响,以及PI3K/AKT/mTOR信号通路（简称mTOR信号通路）与卵巢癌细胞系顺铂耐药的相关性;初探雷帕霉素增强卵巢癌细胞系顺铂敏感性的分子机制。方法采用CCK-8法检测卵巢癌顺铂耐药细胞系SKOV3/DDP的耐药指数（resistance index,RI）、细胞增殖抑制率;采用克隆平板实验观察不同用药方案对卵巢癌顺铂非耐药细胞系及SKOV3细胞系两种细胞系克隆形成的影响;采用蛋白质印迹法（Western blot）检测两种细胞系的蛋白表达差异。结果①SKOV3/DDP细胞系的RI为6.10,属中度耐药。②在SKOV3细胞系中,顺铂联合雷帕霉素作用24 h、48 h后的细胞增殖抑制率明显高于单用顺铂组,差异有统计学意义（P＜0.01）,两组间的72 h细胞增殖抑制率无明显的统计学意义（P＞0.05）;顺铂联合雷帕霉素作用于SKOV3/DDP细胞系24 h、48 h、72 h后的细胞增殖抑制率均明显高于单用顺铂组,差异有统计学意义（P＜0.01）。③雷帕霉素联合顺铂作用于SKOV3细胞系4 h后,其克隆形成抑制率明显高于单用顺铂组,差异有统计学意义（P＜0.01）。④SKOV3/DDP细胞系比SKOV3细胞系p-mTOR、p-AKT的表达升高,而mTOR、AKT的表达则相似。⑤联合用药组比单用顺铂组的PARP断裂增加。⑥雷帕霉素作用SKOV3细胞系24 h ,BCL2表达下调,LC3B由LC3BⅠ向LC3BⅡ转化增加;在SKOV3/DDP细胞系中未发现这两种作用。结论①在体外培养条件下,雷帕霉素能增强SKOV3及SKOV3/DDP细胞系对顺铂的敏感性。②mTOR信号通路激活可能在卵巢癌细胞系顺铂耐药机制中起重要作用。③雷帕霉素增强SKOV3细胞系对顺铂敏感性的分子机制包括：增强顺铂所致的DNA断裂、下调抗凋亡蛋白BCL2及引起细胞自噬;雷帕霉素增强SKOV3/DDP对顺铂敏感性分子机制可能与增强顺铂所致的DNA断裂有关。     

Neu RNAi对卵巢癌细胞生长、凋亡及药物敏感性的作用

目的探讨nenRNAi对卵巢癌耐药细胞株SKOV3／DDP细胞生长、凋亡及药物敏感性的作用,寻找下调基因表达并逆转化疗耐药的方法,为卵巢癌的基因治疗探索新途径。方法应用含有u6启动子的pSilencer 1．0-U6表达载体构建neu基因的小干扰RNA（siRNA）表达载体（pSilencer—neu）,用脂质体方法将pSilencer—neu转染卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3／DDP,另设未转染组及转染pSilencer—control组为对照。显微镜下观察转染前后细胞的变化;用RT—PCR及Western Blot检测neu基因mRNA及蛋白的表达;MTT法检测细胞生长情况;流式细胞仪检测细胞凋亡及周期的变化;加入顺铂后检测RNAi对SKOV3／DDP顺铂药物敏感性的影响。结果neuRNAi可明显下调卵巢癌耐药细胞株SKOV3／DDP中neu的基因表达;使其细胞生长受到抑制,生长速度减慢,生长曲线低平;细胞凋亡增加且细胞周期发生变化,G1／G0期细胞增多,S期细胞则减少;顺铂耐药实验显示,转染RNAi的SKOV3／DDP细胞IC50明显下调,细胞凋亡率显著增加。结论应用RNAi可以部分阻抑neu基因在卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3／DDP中的表达,使SKOV3／DDP细胞生长减慢、凋亡增加,而且对顺铂的敏感性增强。     

白血病细胞核因子-κB活化与化疗药物诱导凋亡的关系

目的 研究化疗药物诱导P388白病细胞核因子-κB(NF-κB)活化与凋亡的关系,以及长春新碱(VCR)对它们的影响。方法 采用电泳迁移率变动分析(EMSA)检测细胞NF-κB活化水平;采用TdF介导的dUTF缺口末端标记技术(TUNEL)和DNA电泳方法检测细胞凋亡。结果 化疗药物诱导P388白血病细胞NF-κB活化与化疗药物诱导细胞凋亡有明显关系,0．1μmol／L VCR不仅能显著抑制100μmol／L阿糖胞苷(Ara-C)或100μmol／L鬼臼乙叉甙(Vp-16)诱导的P388细胞NF-κB活化(抑制率分别为52％和63％),而且增强它们诱导P388细胞凋亡的作用(凋亡增加率分别为89%和123%)。P388细胞在接触化疗药物前,NF-κB亦有一定程度的活化。结论 化疗药物诱导P388白血病细胞凋亡的同时,可活化NF-κB;VCR可通过抑制NF-κB活化,增强化疗药物诱导白血病细胞凋亡的作用。     

溶血磷脂酸抑制顺铂诱导的卵巢癌细胞凋亡

目的：探讨溶血磷脂酸（lysophosphatidic acid,LPA）对顺铂诱导的卵巢癌细胞凋亡的抑制作用及其作用机制。方法：体外培养卵巢癌细胞株SKOV3,采用MTT法检测LPA对顺铂（cisplatin,DDP）作用后卵巢癌细胞株SKOV3增殖活性的影响,Hoechst33258荧光染色观察凋亡细胞,用FCM法分析细胞周期变化和细胞凋亡率,DNA片段凝胶电泳观察凋亡细胞的DNA“梯状”条带,免疫细胞化学法及RT-PCR法分别检测细胞凋亡相关蛋白及其mRNA的表达。结果：LPA能降低DDP对SKOV3细胞生长的抑制作用,同时增加G0/G1期细胞比例,降低S期细胞比例和凋亡率。Hoechst33258染色检测示LPA作用后凋亡小体明显减少。DNA片段凝胶电泳示LPA作用后不产生明显的凋亡片段。10μmol/L的LPA作用SKOV3细胞48h后,bcl-2基因及其蛋白表达水平升高,而bax基因及其蛋白表达水平降低（P〈0.01）。结论：LPA可通过上调bcl-2基因及蛋白表达,下调bax基因及蛋白表达,抑制DDP诱导的卵巢癌细胞凋亡。因此,针对LPA的治疗有望提高DDP疗效,改善卵巢癌患者的预后。