塞来昔布抑制人结肠癌细胞COLO205增殖及对COX-2、MMP-9mRNA表达影响的体外实验研究

目的研究塞来昔布在体外对人结肠癌细胞COLO205生长增殖及对环氧化酶2(COX-2)、金属蛋白酶9(MMP-9)mRNA表达的影响。方法体外培养人结肠癌细胞COLO205,分组为正常对照组和塞来昔布干预组,MTT法检测正常对照组和塞来昔布组抑制率,塞来昔布在不同时间且相同浓度的条件下,不同时间对于结肠癌细胞增殖的影响,测得抑制率并算得半抑制浓度(IC50)值;RT-PCR检测COX-2、MMP-9的mRNA的表达影响。结果 MTT结果显示:相同浓度的塞来昔布干预结肠癌COLO205细胞,分别在24 h,48 h,72 h测算IC50结果为:96.620±9.044μmol/L、71.561±5.706μmol/L、58.982±11.069μmol/L,塞来昔布浓度提高和干预时间延长,结肠癌COLO205细胞活力下降。RT-PCR结果显示:正常对照组与塞来昔布干预组COX-2 mRNA灰度值分别为:0.832±0.012,0.113±0.001,干预组塞来昔布干预细胞的COX-2mRNA表达降低,所应显示的条带消失,无表达率,两组比较差异有显著性(t=18.051,P=0.000);正常对照组与塞来昔布干预组MMP-9 mRNA灰度值分别为:0.756±0.050,0.171±0.001,干预组MMP-9 mRNA表达明显降低,条带消失,无mRNA表达,两组比较差异有显著性(t=17.286,P=0.001)。结论体外实验表明:塞来昔布抑制结肠癌COLO205细胞增殖,通过抑制COX-2及MMP-9的mRNA的表达来实现抗肿瘤作用。     

塞来昔布对胃癌细胞株BGC-823的增殖的影响

目的研究塞来昔布在体外对人胃癌细胞BGC-823生长增殖的影响及其抗肿瘤的相关分子机制。方法体外培养人胃癌BGC-823,MTT法检测塞来昔布在相同浓度下,不同时间对于胃癌细胞增殖的影响,并计算半数抑制浓度(IC50)值;RT-PCR法检测对COX-2、MMP-9的mRNA的表达影响。结果 MTT结果显示:相同干预浓度塞来昔布抑制人胃癌细胞增殖,其24h、48h、72h的IC50分别为:158.98μmol/L、75.45μmol/L、45.08μmol/L;RT-PCR结果显示:人胃癌细胞BxPC-3正常对照组及塞来昔布干预组COX-2 mRNA灰度值分别为:0.873±0.026,0.115±0.008,P<0.05;MMP-9 mRNA灰度值分别为:0.890±0.011,0.209±0.012,P<0.05。结论塞来昔布抑制胃癌细胞增殖,塞来昔布抗肿瘤机制可能通过抑制COX-2及MMP-9的mRNA的表达来实现的。     

姜黄素体外抑制人结肠癌癌细胞Caco-2增殖

目的研究姜黄素在体外对人结肠癌细胞Caco-2生长增殖及其抗肿瘤的相关分子机制。方法体外培养人结肠癌细胞Caco-2,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测姜黄素在相同浓度下、不同时间对于结肠癌细胞增殖的影响,并计算半数抑制量(IC50)值;反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检环氧合酶-2(COX-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的mRNA的表达影响。结果 MTT:相同干预浓度姜黄素抑制人结肠癌细胞增殖,其24 h,48 h,72 h的IC50分别为:205.737±14.929μmol/L、102.023±6.809μmol/L、86.627±9.005μmol/L;RT-PCR:人结肠癌细胞Caco-2正常对照组及姜黄素干预组MMP-9 mRNA灰度值分别为:0.786±0.101、0.310±0.046,P<0.05;COX-2 mRNA灰度值分别为0.830±0.173、0.063±0.035,(P<0.05)。结论姜黄素可能通过抑制COX-2及MMP-9的mRNA的表达来抑制结肠癌细胞Caco-2增殖。     

塞来昔布对人白血病细胞株HL-60细胞增殖及凋亡的影响及其作用机制

本研究旨在探讨塞来昔布（celecoxib）对人急性髓系白血病细胞株HL-60细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。不同浓度塞来昔布作用于HL-60细胞24h后,CCK-8法测定细胞增殖活性,流式细胞技术分析细胞凋亡及细胞周期分布的变化,定量RT—PCR的方法检测细胞周期蛋白DJ、EI及COX-2mRNA的表达。结果表明,不同浓度塞来昔布作用于HL-60细胞24h后,细胞增殖明显受抑,且呈-定的浓度依赖性（r=0．955）,24h的IC50值为63．037μmol／L。塞来昔布可诱导HL-60细胞的凋亡,也呈剂量依赖性（r=0．988）。塞来昔布可使HL-60细胞明显阻滞于G0／G1期,可下调cyclinD1、cyclinE1mRNA的表达。塞来昔布可使细胞COX-2mRNA表达水平降低。结论：塞来昔布呈浓度依赖性抑制HL-60细胞增殖,并可能通过下调cyclinD1、cyclinE1的表达引起细胞G0／G1,期阻滞,下调COX-2的表达诱导细胞凋亡。     

环氧化酶2抑制剂塞来昔布诱导 NB4细胞凋亡的研究

目的：研究环氧化酶2（COX-2）选择性抑制剂塞来昔布对髓性白血病细胞株 NB4凋亡的影响,探讨塞来昔布诱导细胞凋亡的机制。方法RT-PCR 检测不同细胞系中 COX-2 mRNA 表达,MTT 法检测 NB4细胞增殖抑制,DNA Ladder 试验分析NB4细胞 DNA 片段化,流式细胞术检测 NB4细胞 Bcl-2蛋白的表达。结果与未加药处理组相比,不同浓度塞来昔布作用后DNA Ladder 片段随浓度的增加而更为明显。不同用药组25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L 塞来昔布组 Bcl-2蛋白表达率分别为（71．69±1．65）％、（34．51±2．53）％和（29．28±2．38）％,与空白对照组 Bcl-2蛋白表达率为85．34±2．89％相比,50μmol/L、100μmol/L 塞来昔布组 Bcl-2蛋白明显下降（P ＜0．05）。结论COX-2选择性抑制剂塞来昔布通过下调 NB4细胞 Bcl-2蛋白表达致诱导其凋亡。     

塞来昔布对U266细胞株增殖和凋亡的研究

目的观察环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布对骨髓瘤细胞株U266细胞的增殖抑制和凋亡诱导的影响,并通过比较单用塞来昔布和加用Caspase-3阻断剂Ac-DEVD-FMK后的U266细胞株的凋亡率以及Caspase-3的表达,探讨其诱导U266细胞株凋亡的分子机制。方法骨髓瘤细胞株U266细胞经不同浓度的塞来昔布处理后,应用CCK-8体外药物筛选法测定受试样品塞来昔布对人骨髓瘤细胞U266体外增殖有无抑制作用及作用强弱;Annexin V-FITC染色流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法测定不同实验组样品中Caspase-3总量的表达。结果塞来昔布浓度>40μmol/L能抑制人骨髓瘤细胞U266体外增值,并呈浓度依赖性,IC50=66.83μmol/L。塞来昔布在40～120μmol/L浓度范围内能诱导人骨髓瘤细胞U266细胞凋亡,呈浓度依赖性。用Ac-DEVD-FMK阻断Caspase-3活性,塞来昔布诱导的U266细胞凋亡明显受抑。结论塞来昔布可诱导骨髓瘤细胞株U266细胞株凋亡,其机制涉及Caspase-3依赖性凋亡调节信号通路。     

塞来昔布对神经胶质瘤细胞U251增殖及凋亡的影响

目的探讨非甾体类抗炎药(NSAIDs)对神经胶质瘤细胞增殖的影响。方法选用神经胶质瘤细胞U251,分别加入0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L和80μmol/L的塞来昔布进行处理。四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测U251细胞增殖水平及抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果随塞来昔布浓度的增加,神经胶质瘤细胞U251增殖水平明显降低,增值抑制率升高。不同浓度和不同作用时间,塞来昔布对U251细胞增殖抑制率有显著性差异(P<0.05);流式细胞术细胞凋亡率检测显示,80μmol/L塞来昔布处理48 h的U251细胞凋亡率(17.86%)较0μmol/L(11.23%)增高(P<0.05)。结论塞来昔布可抑制人胶质瘤细胞U251的生长和增殖,促进U251的凋亡发生,以80μmol/L为佳。     

COX2抑制剂对大鼠肺泡巨噬细胞生长及炎症反应的影响及机制研究

目的探讨环氧合酶2(COX2)抑制剂塞来昔布对肺泡巨噬细胞凋亡、炎症反应及吞噬能力的影响。方法四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测0. 1μmol/L、1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L塞来昔布对大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383的细胞毒性,选择合适的塞来昔布浓度。将NR8383细胞随机分为3组,即对照组、LPS组和LPS+塞来昔布组。对照组:细胞培养板加等体积磷酸盐缓冲液(PBS); LPS处理组:细胞用终浓度为1μg/ml的脂多糖(LPS)处理; LPS+塞来昔布组:10μmol/L的塞来昔布处理细胞1 h后,加1μg/ml的LPS处理细胞24 h。流式细胞术检测细胞凋亡率; Western blotting检测NF-κBp65、IκBα、Bax和Bcl-2蛋白表达; qRT-PCR检测炎症因子TNF-αmRNA表达;激光共聚焦技术检测巨噬细胞的吞噬能力。结果 0. 1～10μmol/L塞来昔布处理对NR8383细胞无细胞毒性,20μmol/L塞来昔布处理可抑制NR8383细胞活力。LPS组与对照组比较,细胞凋亡率升高,NF-κBp65和Bax蛋白表达升高,IκBα和Bcl-2蛋白表达降低,TNF-αmRNA表达升高,细胞吞噬能力降低(P 0. 05),LPS+塞来昔布组与LPS组比较,细胞凋亡率降低,NF-κBp65和Bax蛋白表达降低,IκBα和Bcl-2蛋白表达升高,TNF-αmRNA表达降低,细胞吞噬能力升高(P 0. 05)。结论塞来昔布可通过下调NF-κB信号抑制LPS诱导的NR8383细胞凋亡及炎症反应,并维持吞噬功能,从而对肺损伤起保护作用。     

塞来昔布联合 PDTC 对人结肠癌细胞 HT-29 的抑制增殖和促凋亡作用及其机制

目的研究塞来昔布联合吡咯烷二硫氨基甲酸（PDTC）对人结肠癌细胞HT-29增殖、凋亡的影响及其对COX-2、NF-κB、Caspase-3基因表达的影响,探讨塞来昔布联合用药抗肿瘤的机制。方法用不同浓度的塞来昔布（30、60、120、240μmol／L）（单药组）以及不同浓度塞来昔布联合不同浓度的PDTC（50、100μmol／L）（联合组）分别处理人结肠癌细胞,采用CCK-8法检测细胞的增殖情况,流式细胞术分析细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR检测各组细胞COX-2、NF-κB、Caspase-3表达的变化。结果塞来昔布单药组对结肠癌细胞具有抑制增殖、促进凋亡作用,其作用随着药物浓度、给药时间的增加而增强（P均〈0．05）;同时检测到COX-2、NF-κBKBmRNA的表达降低（P均〈0．05）,Caspase-3表达升高（P〈0．05）,且具有浓度依赖性;联合组较同一塞来昔布浓度的单药组上述作用更明显（P均〈0．05）。结论塞来昔布单药组和联合组均能抑制人结肠癌细胞的增殖,促进其凋亡;联合组作用强于单药组;其机制可能与COX-2、NF-κB的下调和Caspase-3表达上调有关。     

环氧合酶2抑制剂塞来昔布对结肠癌多药耐药逆转作用的研究

目的 探讨环氧合酶2(COX-2)抑制剂塞来昔布对结肠癌多药耐药(MDR)的逆转作用.方法 在结肠癌多药耐药细胞株colo320/5-FU中,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)方法检测塞来昔布时5-氟尿嘧啶(5-FU)的耐药逆转倍数;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测耐药基因的变化;免疫组织化学法检测细胞膜跨膜蛋白p-170(P-gP)的表达.结果 MTT结果显示塞来昔布对结肠癌细胞的耐药产生明显的逆转作用(F=2285.660,P＜0.01),其逆转倍数分别为1.70,3.80,8.48,且呈浓度依赖性.RT-PCR结果显示塞来昔布明显抑制多药耐药基因1(MDR1)mRNA的表达(F=986.776,P＜0.01),且呈浓度依赖性减低,各浓度组之间差异有统计学意义(P＜0.01).免疫荧光结果显示,细胞膜P-gp荧光强度随着塞来昔布浓度的逐渐增高而减弱.结论 选择性COX-2抑制剂塞来昔布对多药耐药细胞株colo320/5-FU具有明显逆转作用,在非细胞毒剂量范围内呈现剂量依赖性,初步机制可能涉及干预多种转录因子的表达而下调MDR1,继而阻滞细胞周期及增加细胞凋亡.     

茶多酚对人结肠癌细胞株Caco-2凋亡及RhoA蛋白活性的影响

目的探讨茶多酚对人结肠癌细胞株Caco-2凋亡及RhoA蛋白活性的影响。方法将传代后的人结肠癌细胞株Caco-2细胞分为实验组和对照组,实验组加入不同浓度的茶多酚（25、50、100和200μmol／L）,对照组加入等量RPMI-1640培养液,采用四甲基偶氮唑盐（MTr）法测定茶多酚对Caco-2增殖抑制的影响,流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡指数,Pull．down法检测人结肠癌细胞株Caco-2细胞内的RhoA蛋白活性。结果不同浓度的茶多酚对人结肠癌细胞株Caco-2有明显的抑制作用,且呈剂量及时间依赖性;Pull-down法检测结果显示,茶多酚可以降低人结肠癌细胞株Caco-2细胞内的RhoA蛋白活性,且随浓度增加其蛋白活性降低。结论茶多酚可促进人结肠癌细胞株Caco-2的凋亡,其可能通过降低RhoA蛋白活件来实现。     

塞来昔布对肺癌细胞的增殖抑制作用研究

目的研究非甾体类抗炎药塞来昔布对肺癌细胞的体外抑制作用。方法选用肺癌A549细胞系体外培养,在不同塞来昔布浓度作用下,MTT法检测肺癌细胞的增殖抑制,流式细胞仪测定肺癌细胞周期分布以及RTPCR法观察肺癌细胞血管内皮生长因子mRNA(VEGFmRNA)的表达水平。结果塞来昔布对肺癌细胞增殖有抑制作用,且呈剂量依赖关系,IC50为50μmol/L;塞来昔布可将肺癌细胞阻滞在G0/G1期,有剂量依赖性;RTPCR法中,对照组肺癌细胞VEGFmRNA的表达水平高于药物组(P<0.05),药物组中肺癌细胞VEGFmRNA表达水平与塞来昔布浓度相关。结论塞来昔布对肺癌细胞有明显的体外增殖抑制作用,与VEGFmRNA的表达下调和阻滞细胞周期在G/G期有关。     

塞来昔布短期治疗对结肠癌患者胃泌素、VEGF水平的影响

[目的]探讨选择性COX-2抑制剂塞来昔布对结肠癌患者胃泌素、血管内皮生长因子（VEGF）水平的影响及对结肠癌的防治作用.[方法]42例结肠癌和24例结肠腺瘤患者,予塞来昔布400 mg每天两次,连续服药2周.治疗前后放射免疫法检测血清胃泌素、ELISA法检测血浆VEGF水平的变化.[结果]①治疗前结肠癌组和结肠腺瘤组血清胃泌素分别为（108.3±23.4）ng/L、（113.3±27.4）ng/L,治疗后分别降为（81.6±19.3）ng/L、（87.7±20.8） ng/L,有统计学差异（P0.05）.[结论]塞来昔布可降低结肠癌和结肠腺瘤患者胃泌素水平,并可能影响VEGF水平,从而发挥抑制结肠癌、结肠腺瘤生长的作用.     

巨噬细胞移动抑制因子抑制剂对大肠癌细胞增殖的作用

目的 研究选择性巨噬细胞移动抑制因子(MIF)互变异构酶活性抑制剂ISO-1对大肠癌细胞增殖的影响并探讨其可能机制.方法 不同浓度的ISO-1(0.01～100 μmol/L)作用于人大肠癌细胞Lovo、SW116和鼠大肠癌细胞CT26,对照组以相应浓度的二甲基亚砜处理.采用MTT法观察ISO-1对大肠癌细胞增殖的影响...     

螺内酯对肝星状细胞表达基质金属蛋白酶及其抑制剂的影响

目的研究螺内酯干预肝星状细胞（HSCs）后基质金属蛋白酶2（MMP-2）、MMP-9、MMP-13和其组织抑制剂1（TIMP-1）的变化。探讨螺内酯对胶原代谢影响的机制。方法应用不同浓度螺内酯（1×10^-4）mol／L-（1×10^-7）mol／L干预HSCs 48小时,采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测MMP-2、MMP-9、MMP-13 mRNA和TIMP-1 mRNA的表达。结果①螺内酯组的MMP-13基因表达强度上调,螺内酯（1×10^-4）mol／L-（1×10^-5）mol／L浓度组MMP-13基因表达强度（0．91±0．13、0．80±0．01、0．67±0．15）均明显高于对照组（0．53±0．10）（P〈0．01）。1×10^-4mol／L浓度组MMP-13基因表达强度接近对照组的2倍。②螺内酯干预HSCs48小时后,TIMP-1基因表达减少,螺内酯（1×10^-4）mol／L-（1×10^-6）mol／L浓度组（0．15±0．05、0．28±0．15、0．37±0．03）明显低于对照组（0．47±0．04）（P〈0．01或〈0．05）。③螺内酯不同浓度干预HSCs 48小时后,HSCs MMP-2、MMP-9基因表达无明显变化（P〉0．05）。结论螺内酯可抑制HSCs TIMP-1基因的表达,增加间质胶原酶MMP-13 mRNA的含量。螺内酯可能通过对MMPs及TIMP-1影响而促进胶原降解。     

环氧化酶-2抑制剂塞莱昔布对急性白血病细胞VEGF、b-FGF和TGF-β mRNA表达的影响

本研究旨在探讨环氧化酶-2(COX-2)特异性抑制剂塞莱昔布(celecoxib)对急性白血病细胞血管新生因子血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)和转化生长因子-β(TGF-β)mRNA表达的影响及其意义。采用半定量逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法检测30例急性白血病细胞经塞莱昔布干预前、后VEGF、b-FGF和TGF-βmRNA表达及变化。结果表明,急性白血病细胞存在VEGF、b-FGF和TGF-βmRNA的表达。VEGFmRNA与b-FGF mRNA表达存在正相关(r=0.559,P=0.001),VEGF mRNA与TGF-βmRNA表达存在负相关(r=-0.4,P=0.029)。经塞莱昔布(80μmol/L,48 h)处理后急性白血病细胞的VEGF、b-FGF和TGF-βmRNA表达较对照组明显下降,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:塞莱昔布通过下调血管新生因子的表达而抑制血管增生,对急性白血病治疗具有辅助作用。