“补肾活血”法对骨性关节炎大鼠关节液中炎性因子的影响

目的探讨"补肾活血"法对骨性关节炎大鼠关节液中炎性因子的影响。方法 2016年5月,采用72只雄性10周龄SD大鼠,分别设为正常组、对照组和实验组,每组各24例。实验组给予牛膝煎煮液灌胃给药,正常和对照组给予同等量清水灌胃。6周后观察三组大鼠关节液中白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和转化生长因子β1(TGF-β1)水平,同时分析膝关节软骨组织中MMP-13、ADAMTS-5 mRNA相对表达量和Makin评分。结果干预前实验组和对照组IL-1β、TNF-α、MMP-13、ADAMTS-5 mRNA相对表达量和Makin评分水平均显著高于正常组,而TGF-β1均显著低于正常组(P0.05);实验组和对照组IL-1β、TNF-α、MMP-13、ADAMTS-5 mRNA相对表达量、Makin评分和TGF-β1均无统计学差异(P0.05)。与干预前比较,干预后实验组IL-1β、TNF-α、MMP-13、ADAMTS-5 mRNA相对表达量和Makin评分显著降低,而TGF-β1显著升高(P0.05)。干预后6w,实验组IL-1β显著低于对照组[(15.38±3.28)ng/L vs.(23.57±4.17)ng/L,P0.05];TNF-α显著低于对照组[(15.43±6.37)ng/L vs.(36.48±9.25)ng/L,P0.05];但TGF-β1显著高于对照组[(87.47±14.3)ng/L vs.(41.38±11.58)ng/L,P0.05];MMP-13 mRNA相对表达量显著低于对照组(0.54±0.21 vs.(0.92±0.28,P0.05);ADAMTS-5 mRNA相对表达量也显著低于对照组(0.61±0.21 vs.0.98±0.32,P0.05];Makin评分显著低于对照组(3.76±1.37 vs.8.54±4.12,P0.05)。结论 "补肾活血"法有助于降低骨性关节炎大鼠关节液中炎性因子水平和MMP-13等蛋白酶mRNA的表达。     

消化道肿瘤贫血患者血清铁调素及炎症介质的表达

目的 研究血清铁调素(Hepcidin)和炎症介质细菌脂多糖(LPS)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF)和干扰素(IFN)等细胞因子在消化道肿瘤贫血患者中的表达特点以及与消化道肿瘤贫血之间的关系.方法 应用双抗夹心生物素-亲和素-酶联免疫吸附试验(ABC-ELISA)检测31例消化道肿瘤贫血患者的Hepcidin、LPS、IL-6、TNF-α、TNF-β 、IFN-β、IFN-γ的水平,分析Hepcidin与炎症介质之间的关系,以同期30例健康体检者作为对照.结果 1.实验组Hepcidin、IL-6、TNF-β、IFN-β、LPS分别为53.8±32.4μg/L、20.3±26.1ng/L、117.4±110.7ng/L、9.8±7.2ng/L、81.6±46.1μg/L,均明显高于对照组的23.1 ±5.2μg/L、7.9±9.6ng/L、65±23.0ng/L、6.0±2.3ng/L、49.0± 19.0μg/L (P＜0.05),而IFN-γ及TNF-α与对照组比较差异无统计学意义.2.Hepcidin与IL-6、LPS之间存在正相关关系(r=0.27,p＜0.01、r=0.222,P＜0.05),与TNF-β、IFN-β呈负相关关系(r=-0.348,P＜0.001,r=0.265,P＜0.01),与IFN-γ、TNF-α之间无相关关系.结论 消化道肿瘤贫血患者高表达Hepcidin、IL-6、TNF-β、IFN-β、LPS,Hepcidin与IL-6、LPS均呈正相关关系.     

痰热清注射液对内毒素所致全身炎症反应综合征大鼠核转录因子-κB的调控作用

目的 观察痰热清注射液对内毒素致全身炎症反应综合征(SIRS)大鼠核转录因子-κB(NF-κB)的调控作用.方法 将60只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、SIRS组和痰热清组,每组20只.腹腔注射内毒素复制SIRS大鼠模型.制模成功后2 h,痰热清组腹腔注射痰热清注射液4.5 ml/kg.各组于实验后6 h开胸取心脏血,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测NF-κB活性以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)的表达.结果 与正常对照组[(31.06±16.34)、(76.26±16.88)、(45.37±9.64)ng/L]比较,SIRS组大鼠NF-κB活性[(87.52±36.72)ng/L]以及TNF-α[(321.52±56.74)ng/L]和IL-1β[(136.76±19.68)ng/L]表达明显升高(P均<0.01);与SIRS组比较,痰热清组大鼠NF-κB活性[(49.51±20.51)ng/L]以及TNF-α[(183.46±30.64)ng/L]和IL-1β[(90.62±16.29)ng/L]表达明显降低(P均<0.01).SIRS组大鼠NF-κB活性与TNF-α和IL-1β表达均呈明显正相关(r1＝0.67,r2=0.43,P均<0.01).结论 痰热清注射液可明显抑制SIRS大鼠的炎症反应,其作用机制可能是抑制NF-κB的活化.     

癌症患者血清Hepcidin及炎症介质细胞因子表达特点及其与贫血的关系

目的 研究血清铁调素(Hepcidin)和炎症介质因子细菌脂多糖(LPS)白细胞介素(IL)、肿瘤坏死因子(TNF)和干扰素(IFN)等细胞因子在癌症患者中的表达特点以及与癌症相关性贫血(癌性贫血)发生发展之间的关系.方法 应用双抗夹心生物素-亲和素-酶联免疫吸附试验(ABC-ELISA)检测190例癌症患者的血清Hepcidin和LPS,IL-1β,IL-6,IL-8,IL-10,IL-12,IFN-β,IFN-γ,TNF-α以及TNF-β水平,并分析Hepcidin与贫血、IL-6以及LPS等细胞因子之间的相关关系.以同期的30名健康献血员为对照组.结果 ①癌症患者的血清Hepcidin,LPS,IL-6,TNF-α,TNF-β和IFN-β分别为40.67±7.98 μg/L,66.57±46.36 μg/L,17.99±47.56 ng/L,8.43±6.02 ng/L,94.39±61.68 ng/L和8.42±4.61 ng/L均明显高于对照组23.17±5.21 μg/L,49.01±18.95 μg/L,7.89±9.62 ng/L,6.12±2.57 ng/L,65.00±23.45 ng/L和6.04±2.26 ng/L(分别为P<0.01和P<0.05),而IL-1β,IL-8,IL-10,IL-12和IFN-γ则两组差异无统计学意义(均为P>0.05).②癌症贫血患者的血清Hepcidin为51.99±32.56 μg/L明显高于无贫血患者的36.63±31.99μg/L(P<0.01);LPS和 IL-6分别为75.33±62.63 μg/L和39.36±82.60 ng/L,均高于无贫血患者的63.43±38.76 μg/L和10.38±22.00 ng/L(P<0.05);IL-10为4.88±9.25 ng/L,高于无贫血患者的2.44±2.72 ng/L(P<0.01).其余7种细胞因子则贫血与无贫血患者之间无显著差异(均为P>0.05).③癌症患者的Hepcidin与LPS呈正相关关系(r=0.248,t=3.507 8,P<0.01);与IL-6也呈正相关关系(r=0.216,t=3.018 2,P<0.01);而Hepcidin与IFN-β呈负相关关系(r=-0.284,t=4.305 71,P<0.01),与TNF-β也呈负相关关系(r=-0.456,t=7.037 0,P<0.01).但与其他细胞因子无相关关系.④癌症患者的血红蛋白值与Hepcidin,IL-6和IFN-β三者呈负相关关系(分别为r=-0.165,-0.152和-0.180,均为P<0.05);而与LPS等其他细胞因子均不相关.结论 癌性贫血患者高表达Hepcidin,LPS和IL-6,Hepcidin与LPS和IL-6均呈正相关关系;它们在癌性贫血的发生发展过程中起重要的作用.     

辛伐他汀对脂多糖诱导的Ⅱ型肺泡上皮细胞钠通道α亚基的影响

目的 通过体外给药的方式观察辛伐他汀对脂多糖(LPS)诱导的原代培养大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(ATⅡ)钠通道α亚基(α-ENaC)mRNA表达的影响.方法 ATⅡ细胞原代培养,分为空白对照组、LPS损伤组(终浓度1 mg/L)、辛伐他汀低和高剂量组(20μmol/L、30μmol/L)、溶剂对照组.分别于培养1、12、24 h用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清中肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、白细胞介素-1 β(IL-1β)的浓度,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中α-ENaC mRNA表达.结果 LPS损伤后1、12、24 h时TNF-α、IL-1β浓度均较空白对照组显著升高.辛伐他汀低剂量组1、12、24h TNF-α(ng/L)和IL-1β(ng/L)均较LPS损伤组明显下降(TNF-α 1h:1178.80±127.43比2336.00±170.04,12 h:1003.60±59.61比2479.80±210.41,24 h:695.80±25.24比1167.60±132.72;IL-1β 1 h:285.00±42.60比429.60±27.39,12 h:238.60±24.12比822.20±12.74,24 h:213.40±17.87比637.60±22.96,均P＜0.05),高剂量组较低剂量组下降更明显(TNF-α1h:965.60±24.45比1178.80±127.43,12 h:522.80±16.89比1003.60±59.61,24 h:252.40±17.64比695.80 ±25.24;IL-1β 1 h:225.60±34.44比285.00 ±42.60,12 h:190.60 ±17.64比238.60±24.12,24 h:152.80±14.70比213.40±17.87,均P＜0.05),但仍较空白对照组明显上升.在培养1h时各组α-ENaC mRNA表达差异均无统计学意义.培养12h、24 h时,LPS损伤组α-ENaC mRNA表达(A值)明显低于空白对照组(12 h:0.211±0.021比0.496±0.027,24 h:0.253±0.030比0.482±0.030,均P＜0.05);辛伐他汀低剂量组α-ENaC mRNA表达均较LPS损伤组明显上升(12 h:0.363 ±0.030比0.211±0.021,24 h:0.309±0.024比0.253±0.030,均P＜0.05),高剂量组较低剂量组升高更明显(12h:0.413±0.034比0.363±0.030,24h:0.346±0.024比0.309±0.024,均P＜0.05),但仍较空白对照组明显下降.空白对照组与溶剂对照组各指标差异无统计学意义.结论 大剂量辛伐他汀可上调LPS诱导的大鼠ATⅡ细胞α-ENaC mRNA表达,其机制可能与调节TNF-α、IL-β的分泌有关.     

三七总皂苷对佐剂性关节炎大鼠的保护作用及机制研究

目的:探讨三七总皂苷(PNS)对佐剂性关节炎(AA)大鼠的保护作用及可能机制。方法:以弗氏完全佐剂(FCA)制备AA大鼠模型,于造模第12天起,给药组分别灌胃给予相应的受试药物,疗程12d。足容积法测量大鼠继发侧足肿胀度;放免法测定血清白细胞介素IL-1、IL-6、肿瘤坏死因子TNF-α含量;HE染色法检测大鼠关节病理组织学改变;RT-PCR法检测AA大鼠腹腔巨噬细胞(PMΦ)中TNF-αmRNA的表达。结果:PNS(100,200mg.kg-1)能明显抑制AA大鼠继发性足肿胀,改善关节病理损伤程度,降低血清IL-1、IL-6、TNF-α的含量,同时抑制PMΦ中TNF-αmRNA的表达。结论:PNS对AA大鼠具有一定的保护作用,其机制可能与调节细胞因子的产生有关。     

补阳还五汤对大鼠脑缺血后白细胞介素-1β和肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的 探讨补阳还五汤对脑缺血后大鼠脑组织白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响.方法 按随机数字表法将SD大鼠分为正常对照组、假手术组、模型组、补阳还五汤组,后3组再按给药后1、3和7 d分为亚组,每组5只.采用大脑中动脉闭塞法(MCAO)建立右侧局灶性脑缺血大鼠模型;补阳还五汤组于术后2 h起灌服补阳还五汤10 ml/kg(14.2 g/kg)、每日1次.分别于相应时间点处死大鼠后取脑组织,采用酶联免疫吸附法(ELISA)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定IL-1β和TNF-α的蛋白及mRNA表达.结果 正常对照组和假手术组有低水平的IL-1β和TNF-α蛋白及mRNA表达.模型组IL-1β、TNF-α蛋白及mRNA表达于给药后1 d开始升高,IL-1β蛋白及mRNA表达在3 d时达高峰后开始下降,TNF-α蛋白及mRNA表达于7 d达高峰.与模型组比较,补阳还五汤组给药后1、3和7 d脑组织中IL-1β和TNF-α蛋白及mRNA表达均明显下降[IL-1β蛋白(ng/L),1 d:90.290±8.693比102.556±13.934,3 d:129.632±11.050比150.117±8.552,7 d:66.185±9.020比91.362±9.901;TNF-α蛋白(ng/L),1 d:210.341±19.247比236.887±20.137,3 d:267.503±21.006比322.659±15.068,7 d:299.637±17.717比386.678±16.297;IL-1β mRNA,1 d:0.54±0.09比0.64±0.11,3 d:0.80±0.06比0.89±0.07,7 d:0.70±0.09比0.78±0.08;TNF-α mRNA,1 d:0.64±0.09比0.73±0.11,3 d:0.74±0.13比0.85±0.07,7 d:0.82±0.07比0.93±0.08],差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 补阳还五汤可能通过下调缺血脑组织IL-1β和TNF-α的蛋白及mRNA表达来调控炎症因子的释放,从而起到脑保护作用.     

src抑制的蛋白激酶C底物调控内皮细胞分泌TNF-α

目的 探讨src抑制的蛋白激酶C底物(SSeCKS)对脂多糖(LPS)诱导大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)分泌肿瘤坏死因子(TNF)-α的影响.方法 体外培养Wistar大鼠PMVEC,按随机数字表法分组(n=4),10 mg/L LPS刺激1h、3h、6h、12h、24 h或0.1 mg/L、1 mg/L、10 mg/L LPS刺激24 h;蛋白激酶C抑制剂(BIM)预处理0.5h或50 nmol/L SSeCKS-siRNA转染PMVEC 48 h后再加入10 mg/L LPS孵育24 h,酶联免疫吸附法检测细胞培养液上清TNF-α量(ng/L).采用SPSS10.0软件进行分析,组间比较采用单因素方差分析,以P＜ 0.05为差异具有统计学意义.结果 0.1、1、10 mg/L LPS刺激PMVEC 24 h后的,TNF-α分泌量分别为(253.70±23.55)、(327.88±37.25)、(403.20±36.22) ng/L,均高于未刺激组(82.28±22.56) ng/L(均P =0.000);10 mg/L LPS刺激PMVEC后,TNF-α分泌量于1h升高(170.11±49.22) ng/L,6h达峰值(404.82±13.78) ng/L,刺激24 h后仍维持高水平(395.67±36.23) ng/L,分别与未刺激组(84.60±23.61) ng,/L比较:P=0.001,0.000,0.000;BIM预处理PMVEC后再给予LPS刺激,TNF-α分泌量(200.44±27.39) ng/L较LPS单独刺激(402.28±31.07) ng/L显著较少(P=0.000);与LPS单独刺激比较(407.28±32.64) ng/L,SSeCKS-siRNA抑制SSeCKS表达后,LPS对PMVEC分泌TNF-α的诱导效应(195.20±13.28)ng/L也显著下降(P=0.000).结论 下调SSeCKS表达和蛋白激酶C活性可抑制LPS对PMVEC分泌TNF-α的诱导效应,从而减轻PMVEC的炎症反应.     

慢性血吸虫感染对脓毒症小鼠保护作用的研究

目的 初步探讨慢性血吸虫(SJ)感染对脓毒症小鼠的保护作用及其机制.方法 选择BALB/c雄性小鼠,按随机数字表法分组进行三部分实验.实验1:经腹部皮肤接种SJ尾蚴感染8周建立慢性SJ感染模型,分为正常组和SJ组,每组10只;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清白细胞介素(IL-4和IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ-干扰素(IFN-γ)水平,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测腹腔巨噬细胞IL-10和TNF-α的mRNA表达,了解慢性SJ感染小鼠免疫状态.实验2:以脂多糖(LPS)腹腔注射诱导小鼠脓毒症模型,分为LPS组和SJ-LPS组,每组15只;用ELISA法动态观察注射LPS后0、24、48和72 h细胞因子的变化,0 h的水平相当于正常小鼠和SJ感染8周水平,观察慢性SJ感染对脓毒症过程的影响.实验3:分别以盲肠结扎穿孔术(CLP)和LPS诱导两种不同的脓毒症模型,评价慢性SJ感染对脓毒症小鼠72 h存活率的影响.结果 实验1:SJ组血清抗炎因子IL-4[(151.35±12.24)ng/L]和IL-10[(133.22±11.09)ng/L]水平较正常组[IL-4(56.32±8.66)ng/L,IL-10(48.17±7.23)ng/L]显著升高(均P＜0.05),并可使巨噬细胞向替代活化性巨噬细胞分化,慢性SJ感染使腹腔巨噬细胞高表达IL-10 mRNA(SJ组4.46±1.82,正常组1.52±0.60),抑制TNF-α mRNA表达(SJ组1.61±0.93,正常组2.32±1.03,均P＜0.05).实验2、3:慢性SJ感染小鼠血清IL-4、IL-10于注射LPS后0 h即显著升高,随后下降,至72 h仍明显高于LPS组[IL-4(ng/L):92.2±7.6比41.5±4.5;IL-10(ng/L):92.1±7.8比35.6±4.0,均P＜0.05];TNF-α、IFN-γ均于24 h达峰值后逐渐下降,至72 h SJ-LPS组仍显著低于LPS组[TNF-α(ng/L):82.9±5.6比91.5±5.2;IFN-γ(ng/L):44.1±4.8比52.6±4.0,均P＜0.05].慢性SJ感染可明显改善CLP或LPS所致脓毒症小鼠的存活率(CLP:80%比20%,LPS:70%比30%,均P＜0.05).结论 慢性SJ感染可使脓毒症小鼠血清抗炎因子升高,存活率上升,从而起到保护作用.

Abstract：

Objective To preliminarily study the protective effect of chronic schistosoma japonica (SJ)infestation against sepsis in mice and its mechanism. Methods BALB/c male mice were used, and the experiment was divided into three parts. Experiment 1: chronic SJ infestation model was reproduced by SJ cercaria inoculation through abdominal skin for 8 weeks. Twenty mice were randomly grouped into normal group (n=10) and SJ group (n=10). The levels of interleukins (IL-4, IL-10), tumor necrosis factor-α(TNF-α) and interferon-γ (IFN-γ) in serum were detected by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA).Real-time polymerase chain reaction (PCR) was employed to detect the levels of IL-10 mRNA and TNF-αmRNA in abdominal macrophages. This experiment was meant to evaluate immune state in mice with chronic SJ infestation. Experiment 2: lipopolysaccharide (LPS) was intraperitoneally injected to reproduce sepsis model. Thirty mice were randomly grouped into LPS group (n=15) and SJ-LPS group (n=15). The levels of cytokines were determined by ELISA at 0, 24, 48 and 72 hours after LPS injection. This experiment was meant to detect the effect of chronic SJ infestation in mice during the septic process. Experiment 3 : two types of sepsis model were reproduced by cecal ligation and puncture (CLP) and LPS injection, respectively. The survival rate of mice with chronic SJ infestation in 72 hours in either type of sepsis was evaluated. Results Experiment 1, compared with normal group [IL-4 (56.32±8.66) ng/L, IL-10 (48.17±7.23) ng/L],chronic SJ infestation showed an increase in serum IL-4 [(151. 35 ± 12. 24) ng/L] and IL-10 [(133. 22 ±11. 09) ng/L, both P＜0. 05]. Chronic SJ infestation also resulted in an increase in IL-10 mRNA expression (SJ group 4. 46±1. 82, normal group 1. 52±0. 60) and inhibited TNF-α mRNA expression (SJ group 1. 61±0.93, normal group 2. 32±1.03) in abdominal macrophages (both P＜0. 05), indicating that macrophages could be differentiated into alternative activated macrophages. Experiments 2 and 3 showed that the levels of serum IL-4 and IL-10 were increased at 0 hour after LPS injection, and then gradually decreased in SJ-LPS group, but the levels were still higher than those in LPS group at 72 hours [IL-4 (ng/L): 92. 2±7. 6 vs.41.5±4. 5; IL-10 (ng/L): 92. 1±7. 8 vs. 35. 6±4. 0, both P＜0. 05]; the levels of TNF-α and IFN-γ were increased at 24 hours, and then decreased in SJ-LPS group, and the levels were lower than those in LPSgroup at 72 hours [TNF-α (ng/L): 82. 9±5. 6 vs. 91. 5±5. 2; IFN-γ (ng/L): 44.1±4. 8 vs. 52. 6±4. 0,both P＜0. 05]. Therefore, chronic SJ infestation could improve the survival rate of mice with sepsis induced by CLP or LPS (CLP: 80% vs. 20%, LPS: 70% vs. 30%, both P＜0.05). Conclusion Chronic SJ infestation could elevate anti-inflammatory factors in septic mice, thus ameliorating the survival rate, so it has protective effect on mice with sepsis.     

清肝化瘀方药对原发性肝癌患者的疗效及对细胞免疫功能的影响

目的探讨清肝化瘀方药对原发性肝癌患者的疗效及对细胞免疫功能的影响。方法原发性肝癌患者80例,随机分为两组;治疗组50例,服用清肝化瘀方药,对照组30例给予复方氟脲嘧啶多相脂质体口服液,观察临床疗效和外周血细胞因子白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素12(IL-12)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、转化生长因子1β(TGF-β1)和γ-干扰素(IFN-γ)的变化。结果清肝化瘀方药能改善患者细胞免疫功能,有效率达36.0%,对照组为10.0%,两组比较差异有统计学意义(P<0.01);服用清肝化瘀方药前与用药后相比TGF-β1(0.69±0.06 vs 0.58±0.09)ng/LI、L-12(48.87±10.21 vs 28.58±18.39)ng/L、TNF-α(263.16±29.02 vs 217.78±30.56)ng/L明显下降(P<0.05);IL-2(1.47±0.33 vs 1.89±0.38)ng/L、IFN-γ(39.10±12.21 vs 54.77±6.63)ng/L明显升高(P<0.05)。结论清肝化瘀方药是治疗肝癌有效的药物。     

白细胞介素-10对内毒素诱导急性肺损伤大鼠炎症因子的影响

目的研究白细胞介素-10(IL-10)对内毒素诱导急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织炎症因子mRNA表达的影响,探讨IL-10对急性肺损伤的保护作用。方法24只SD大鼠随机分为3组:对照组,实验组,治疗组。实验组于尾静脉注射内毒素,治疗组注射内毒素和IL10,对照组注射生理盐水。测定各组肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)和白介素-6(IL-6)mRNA表达和血浆TNF-α、IL-1β和IL-6水平,观察各组大鼠肺组织的病理改变。结果TNF-α、IL-1β和IL6mRNA的表达:实验组、治疗组高于对照组,P<0.01;实验组高于治疗组,P<0.05。血浆TNF-α、IL1-β、IL-6:实验组高于治疗组对照组,P<0.05。肺组织病理改变:治疗组明显轻于实验组。结论IL10能抑制内毒素诱导ALI大鼠肺组织中TNF-α、IL-1β和IL6mRNA的表达,降低血浆炎症因子水平,减轻肺组织的病理损害,能起到治疗ALI的作用。     

CCL20单克隆抗体与雷公藤治疗胶原诱导性关节炎模型小鼠的对照研究

目的 研究趋化因子CCL20在胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)小鼠中的表达,探讨CCL20单克隆抗体对CIA小鼠的治疗作用及临床治疗类风湿关节的潜在价值.方法 ①建立CIA小鼠模型:40只DBA/1小鼠随机分为健康对照组、模型组、CCL20单克隆抗体治疗组、雷公藤治疗组;②观察不同时间点小鼠一般情况、关节肿胀度;③测定造模42天后小鼠血清CCL20、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)的表达水平;④观察各组小鼠关节病理变化.结果 ①模型组、雷公藤组和单抗组CCL20,TNF-α和IL-1β均高于对照组,CCL20(29.45±4.92) ng/L、(18.32±4.80) ng/L、(14.13±3.82) ng/L vs (2.83±1.37) ng/L;TNF-α(63.1±2.82) ng/L、(43.15±2.31) ng/L、(42.91±2.02) ng/L vs (26.78±3.50) ng/L;IL-1β(83.72±4.04) ng/L、(53.78±5.89) ng/L、(56.77±4.98)ng/L vs(16.54±2.45)ng/L,雷公藤组和单抗组的CCL20、TNF-α和IL-1β均低于模型组.②HE染色观察,模型组较正常组滑膜肥厚,排列紊乱、滑膜内有大量炎症细胞浸润,有血管翳形成.雷公藤组和单抗组较模型组明显减轻.结论 CCL20在CIA小鼠中异常高表达,以CCL20单克隆抗体阻断CCL20作用可有效缓解关节炎症,且与雷公藤效果相当,CCL20单克隆抗体在临床治疗类风湿关节炎方面具有潜在价值.     

佐剂关节炎大鼠血小板参数和细胞因子的变化及其相关性研究

目的观察佐剂关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠血小板参数(血小板计数PLT、血小板压积PCT、血小板平均体积MPV、血小板分布宽度PDW)、细胞因子(IL-1β、TNF-α、IL-10)的变化并对其行相关性分析。方法将16只SD雄性大鼠随机分为健康对照组、模型组,每组8只,用弗氏完全佐剂(Freund's com-plete adjuvant,CFA)向模型组大鼠右后足跖皮内注射0.1ml诱发大鼠产生关节炎,观察两组大鼠血小板参数(PLT、PCT、PDW、MPV)和细胞因子(IL-1β、TNF-α、IL-10)的变化。结果与健康对照组相比,模型组大鼠血小板参数PLT、PCT、IL-1β、TNF-α显著升高,IL-10降低(P<0.05或P<0.01)。AA大鼠的血小板参数PLT、PCT与IL-1β、TNF-α、足跖肿胀度、关节炎指数呈正相关,与IL-10呈负相关(P<0.01或P<0.05)。结论佐剂关节炎大鼠PLT、PCT是升高的,且与IL-1β、TNF-α、IL-10、足跖肿胀度、关节炎指数具有正相关性;升高机制可能与致炎因子IL-1β和TNF-α升高,抑炎因子IL-10下降有关。     

槲皮素对脓毒症急性肺损伤大鼠肿瘤坏死因子-α/白细胞介素-1β的影响

目的 观察槲皮素对脓毒症相关急性肺损伤(ALI)大鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)的影响,以及槲皮素对脓毒症时的肺保护作用.方法 选用健康雄性Wistar大鼠35只,按随机数字表法分为对照组(5只)、模型组(10只)、槲皮素高剂量组(75mg/kg,10只)和槲皮素低剂量组(50mg/kg,10只).腹腔注射脂多糖(LPS)10mg/kg 2ml建立脓毒症ALI大鼠模型;对照组给予等量生理盐水.治疗组于制模前30min腹腔注射槲皮素.各组于制模后6、12、24h取血,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中TNF-α,IL-1β含量;于制模后24h腹腔注射水合氯醛麻醉并处死大鼠,取肺组织行苏木素-伊红(HE)染色观察组织病理学改变,取肺叶测定肺组织湿/干重比值(W/D比值).结果 与对照组比较,模型组制模后6h血清TNF-α(ng/L),IL-1β(ng/L)含量即明显升高(TNF-α:73.00±0.28比28.48±0.26,IL-1β:46.30±0.21比28.38±1.07,均P<0.01),肺W/D比值明显升高(5.710±0.025比3.860±0.034,P<0.01);与模型组比较,槲皮素低、高剂量组制模后6h TNF-α,IL-1β含量即明显下降(TNF-α:55.52±0.31、57.76±0.27,IL-1β:39.47±9.65、41.83±0.16,均P<0.05),肺组织病理改变明显好转,肺W/D比值明显下降(4.810±0.036、4.900±0.029,均P<0.05),两治疗组间炎症介质比较差异无统计学意义;高剂量组肺组织病理损伤改善程度明显优于低剂量组.结论 槲皮素可下调大鼠血清TNF-α,IL-1β含量,对脓毒症ALI大鼠的肺组织起保护作用.     

乌司他丁对脓毒症大鼠急性肺损伤的保护作用及其机制研究

目的研究乌司他丁对脂多糖诱导的脓毒症大鼠急性肺损伤的保护作用及其机制。方法将52只大鼠分为乌司他丁组和对照组,每组26只。两组大鼠腹腔注射脂多糖溶液(10 mg/kg)以制备脓毒症模型,分别于建模前18 h和3 h,乌司他丁组大鼠给予乌司他丁(100 000 U/kg),对照组注射等量生理盐水。于造模成功后0.5、2、4、12、24、72 h各时间点采血检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、IL-10及肺泡灌洗液蛋白浓度,并通过光学显微镜观察肺组织病理学改变。结果两组大鼠血浆TNF-α、IL-6、IL-10及肺泡灌洗液总蛋白浓度各时间点比较,差异均有统计学意义(F=5.899,P=0.040;F=7.932,P=0.029;F=18.450,P=0.005;F=6.467,P=0.038),且与对照组相比较,乌司他丁组在0.5、2、4、12、24、72 h各时间点的血浆TNF-α[(21.6±3.8)ng/L vs.(14.8±2.5)ng/L,(69.2±3.2)ng/L vs.(48.8±3.9)ng/L,(74.8±6.9)ng/L vs.(56.3±4.2)ng/L,(120.2±43.8)ng/L vs.(106.4±65.8)ng/L,(190.2±30.4)ng/L vs.(119.8±28.9)ng/L,(159.7±10.5)ng/L vs.(112.3±10.2)ng/L]、IL-6[(145±6)ng/L vs.(119±5)ng/L,(344±19)ng/L vs.(225±22)ng/L,(458±36)ng/L vs.(273±28)ng/L,(949±64)ng/L vs.(328±27)ng/L,(841±61)ng/L vs.(306±6)ng/L,(899±35)ng/L vs.(278±16)ng/L]及肺泡灌洗液总蛋白浓度[(320±8)mg/L vs.(290±17)mg/L,(400±7)mg/L vs.(336±9)mg/L,(536±10)mg/L vs.(492±14)mg/L,(806±10)mg/L vs.(608±17)mg/L,(781±17)mg/L vs.(579±16)mg/L,(662±24)mg/L vs.(505±9)mg/L]均明显降低(P均0.05),而血浆IL-10浓度[(5.7±0.8)ng/L vs.(11.7±0.9)ng/L,(17.2±1.6)ng/L vs.(31.9±2.6)ng/L,(22.3±2.1)ng/L vs.(54.7±4.8)ng/L,(42.3±4.9)ng/L vs.(80.7±1.9)ng/L,(29.7±1.4)ng/L vs.(69.4±3.4)ng/L,(21.4±2.9)ng/L vs.(74.3±5.5)ng/L]均明显升高(P均0.05)。对照组大鼠肺泡间隔增厚,间质充血水肿,炎性细胞浸润,肺泡塌陷,而乌司他丁组大鼠上述病理学改变明显减轻。结论乌司他丁是通过下调TNF-α、IL-6,上调IL-10水平,从而抑制炎症细胞在肺部的浸润以及肺组织中蛋白酶的表达来保护脂多糖诱导的脓毒症大鼠急性肺损伤。     

α-促黑色素细胞激素和KPV合成肽对烫伤大鼠血浆白介素-10水平的调节作用

目的观察烫伤大鼠血浆白介素-10(IL-10)水平的变化及α-促黑色素细胞激素(α -MSH)、合成肽KPV(Ac-Lys-L-ProD-Val)对其产生的调节作用.方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测正常对照组、轻度烫伤组和重度烫伤组大鼠血浆IL-1 0的水平.采用体内注射肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和IL1β中和抗体及α-MSH和合成肽KPV等措施调节其改变.收集大鼠腹腔巨噬细胞,体外观察α-MSH及KPV对其产生IL-10的影响.结果烫伤后12小时的血浆IL-10水平,轻度烫伤组[(83.97±16.08)ng/L]显著高于正常对照组[(6.70±3.93)ng/L,P<0.01] ,重度烫伤组大鼠血浆[(177.50±15.79)ng/L]又明显高于轻度烫伤组(P<0.01 );而抗TNF-α治疗组[(107.84±11.05)ng/L]、抗IL-1β治疗组[(105.22±23.01)ng/L]和α-MSH治疗组[(118.43±18.75) ng/L]及KPV治疗组[(124.69±24.27)ng/L]则均明显低于重度烫伤组(P均<0 .01).α-MSH和KPV可以刺激腹腔巨噬细胞分泌IL-10,分别为 (50.48±15.42)ng/L和(48.94±15.47)ng/L.结论不同程度的烫伤可使大鼠血浆IL-10水平升高,尤以重度烫伤升高更加明显.体内注射TNF-α和IL-1β中和抗体及αMSH和KPV均使重度烫伤大鼠血浆IL-10水平下降.α-MSH 和KPV可刺激大鼠腹腔巨噬细胞分泌IL-10.     

羧胺三唑对TNF-α诱导的佐剂性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞中细胞因子分泌和NF-κB活化的影响

目的 探讨羧胺三唑对TNF-α诱导的佐剂性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞分泌促炎细胞因子的影响及部分机制.方法 用弗氏完全佐剂诱导大鼠佐剂性关节炎模型,分离培养的佐剂性关节炎成纤维样滑膜细胞用20 ng/ml TNF-α刺激并用不同浓度羧胺三唑（10、20、40 μmol/L）处理.ELISA法检测成纤维样滑膜细胞上清中IL-1β和IL-6含量,Western blot法检测NF-KB p65的蛋白表达.结果 经20 ng/mlTNF-α刺激后,成纤维样滑膜细胞分泌IL-1β和IL-6水平,以及细胞核中NF-KB p65的表达显著增加（P＜0.01）.羧胺三唑（20、40 μmol/L）能够显著抑制TNF-α诱导的IL-1β[（417.39 ＋29.80） pg/mlvs.（264.63±9.35） pg/ml,（186.13±25.71）pg/ml,P ＜0.01]和IL-6[（383.45±32.13） pg/ml vs.（248.39±30.51） pg/ml,（189.64±27.86） pg/ml,P＜0.01]分泌,且明显减少细胞核中NF-κB p65的表达（P＜0.01）.结论 羧胺三唑可能通过抑制NF-KB活化来减少TNF-α诱导的佐剂性关节炎成纤维样滑膜细胞中促炎细胞因子IL-1β、IL-6的产生.     

雷公藤多苷通过抑制炎性因子及调整细胞基质改善佐剂性关节炎大鼠心功能的研究

目的探讨雷公藤多苷(TPT)改善佐剂性关节炎(AA)大鼠心功能的机制。方法皮内注射弗氏完全佐剂(FCA)复制AA大鼠模型,以TPT0.9%氯化钠注射溶液混悬液(每毫升含TPT1 mg),按1 m L/100 g的剂量灌胃治疗,自制容积测定仪测量各组大鼠右后足容积并计算关节炎指数(AI);有创血流动力学检查AA大鼠心功能,免疫组织化学检测基质金属蛋白酶9(MMP-9)的蛋白表达情况;ELISA法测定血清细胞炎性因子白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)等变化;透射电镜观察大鼠心肌细胞超微结构改变。结果 TPT治疗后,AA大鼠的足趾肿胀度、关节炎指数水平下降,体质量升高(P<0.05);心脏指数(CI)、左室收缩期压(LVSP)、左室舒张期末压(LVEDP)水平下降,左室内压上升下降最大速率(±dp/dtmax)水平提高(P<0.01);IL-10显著升高(P<0.01),TNF-α、IL-1β、MMP-9显著降低(P<0.01)。结论雷公藤多苷通过抑制炎性因子及调整细胞基质改善AA大鼠心功能。