头孢西丁和拉氧头孢低密度菌落法检测耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌

目的 评价头孢西丁和拉氧头孢低密度菌落法检测耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)的可靠性和临床实用性.方法 临床收集的93株凝固酶阴性葡萄球菌(CNS),按法国生物学会(CASFM)推荐的头孢西丁和拉氧头孢30μg低密度菌落法检测MRCNS,并与mecA基因PCR扩增法进行比较.结果 以mecA基因PCR扩增法为金标准,其中MRCNS 56株(阳性率60.2%),低密度菌落法头孢西丁的敏感性和特异性分别为94.6%和100%,拉氧头孢的敏感性和特异性分别为100%和97.3%.结论 头孢西丁和拉氧头孢低密度菌落法是鉴定异质性MRCNS的良好方法.     

耐甲氧西林葡萄球菌检测方法的比较

目的以PCR法检测葡萄球菌的mecA基因为金标准，比较头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林纸片扩散法和乳胶凝集法检测耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的优缺点。方法对临床分离的70株葡萄球菌（其中金黄色葡萄球菌40株，凝固酶阴性的葡萄球菌30株）分别用PCR法、头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林纸片扩散法和乳胶凝集法检测耐甲氧西林葡萄球菌，药敏试验方法按标准KB（Kirby Bauer）法进行。结果经PCR法检测mecA基因，耐甲氧西林的金葡菌（MRSA）和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS）的发生率分别为75．0％（30／40）和80．0％（24／30）；头孢西丁纸片扩散法检测MRSA和MRCNS的敏感性、特异性分别为93．3％、95．9％；90．0％和100％；苯唑西林纸片扩散法检测MRSA和MRCNS的敏感性、特异性分别为90．00%、87．5％；90．0％和83．3％；乳胶凝集法检测MRSA和MRCNS的敏感性、特异性分别为100．0%、100．0％；100．0％和100．0％。与PCR结果比较，3种方法所获得的结果经统计学分析，差异无显著性。结论头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林纸片扩散法是成批检测的理想方法；乳胶凝集法检测快速，结果可靠，但检测成本高；实验室应选择合适的方法，以提高MRS的检出率。     

应用头孢西丁纸片扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌

目的 比较头孢西丁纸片扩散法与传统的苯唑西林纸片扩散法对耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)检测的效率.方法 收集66株葡萄球菌,分别采用苯唑西林琼脂平板筛选试验、头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林纸片扩散法来检测MRS,结果以苯唑西林琼脂平板筛选结果为对照,分别比较头孢西丁和苯唑西林纸片扩散法的特异性和敏感性. 结果 66株葡萄球菌中,37株金黄色葡萄球菌经苯唑西林琼脂平板筛选判定为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的有15株,29株凝固酶阴性的葡萄球菌有24株判定为耐甲氧西林凝固酶阴性的葡萄球菌(MRCNS).与苯唑西林琼脂平板筛选法比较,头孢西丁纸片扩散法检测MRSA的敏感性和特异性均为100%,而苯唑西林纸片扩散法其敏感性和特异性分别为93%(14/15)和91%(20/22);头孢西丁纸片扩散法检测MRCNS的敏感性和特异性均为100%,而苯唑西林纸片扩散法其敏感性和特异性分别为96%(23/24)和40%(2/5).结论 头孢西丁纸片扩散法对MRS检出优于苯唑西林纸片扩散法.     

VITEK-32对耐甲氧西林葡萄球菌检测及耐药性研究

目的 调查金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌的耐药现状.方法 对195株金黄色葡萄球菌和286株凝固酶阴性葡萄球菌,用VITEK-32和GPS-107药敏卡、GPI鉴定卡、API-Spath手工条鉴定细菌并测定其对药物的敏感性.应用胶乳凝集试验检测青霉素结合蛋白2a(PBP2a),同时用NCCLS推荐的纸片扩散法检测耐甲氧西林的葡萄球菌.耐万古霉素的葡萄球菌(VRSA)和异质性耐万古霉素的葡萄球菌(hetro-VRSA).结果 耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌仪器法、PBP2a、纸片扩散法阳性率分别为72%、76%、68%,凝固酶阴性的葡萄球菌耐甲氧西林仪器法、纸片扩散法(CNS)分别是78%、72%,PBP2a全部阴性.未检出VRSA和hetro-VRSA.结论 万古霉素、复方新诺明和四环素对耐甲氧西林的葡萄球菌有较好的抗菌活性,胶乳凝集试验检测PBP2a简便、快速、准确.     

头孢西丁替代苯唑西林检测"耐甲氧西林"的金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌

目的探讨头孢西丁纸片扩散法替代苯唑西林检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)的准确率。方法临床标本培养鉴定出的金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性的葡萄球菌同时用苯唑西林和头孢西丁筛选(K-B法)耐药菌株,再用PBP2a胶乳法进一步检测耐药菌株的mecA基因。结果121株的葡萄球菌,对苯唑西林的耐药率为97.5%,其中金黄色葡萄球菌31株,表皮葡萄球菌67株,腐生葡萄球菌18株,溶血葡萄球菌5株,用PBP2a胶乳试剂和头孢西丁纸片检测金葡菌中MRSA发生率均为77.4%(24/31),凝固酶阴性葡萄球菌中MRCNS发生率96.6%(87/90)和94.4%(85/90)。头孢西丁纸片扩散法的符合率为99%(109/111)。结论苯唑西林纸片扩散法检测MRSA假阳性率较高,而头孢西丁纸片法(K-B法)与PBP2a胶乳凝集法检测MRSA和MRCNS的结果相近,适合实验室推广使用。     

耐甲氧西林葡萄球菌检测及耐药性研究

目的 调查金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球的耐药性现状.方法 对195株金黄色葡萄球菌和286株凝固酶阴性葡萄球,用VITEK-32和GPS-107药敏卡,GPI鉴定卡,API-Spath手工条鉴定细菌并测定其对药物的敏感性.应用胶乳凝集试验检测青霉素结合蛋白2a(PBP2a),同时用NCCLS推荐的纸片扩散法检测耐甲氧西林的葡萄球菌.耐万古霉素的葡萄球菌(VRSA)和异质性耐万古霉素的葡萄球菌(hetro-VRSA).结果 耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌仪器法、PBP2a、纸片扩散法阳性率分别为72%、76%、68%,凝固酶阴性的葡萄球菌耐甲氧西林仪器法、纸片扩散法(CNS)分别是78%、72%,PBP2a全部阴性.未检出VRSA和hetro-VRSA.结论 万古霉素、复方新诺明和四环素对耐甲氧西林的葡萄球菌有较好的抗菌活性,胶乳凝集试验检测PBP2a简便、快速、准确.     

4种检测耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌方法的评估

目的 评价4种检测耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)方法的临床应用价值.方法 对287株临床分离的凝固酶阴性葡萄球菌采用苯唑西林纸片扩散法,头孢西丁纸片扩散法和苯唑西林微量稀释法筛选MRCNS,并采用聚合酶链反应(PCR)检测mecA基因作为检测MRCNS的金标准.结果 287株中有218株为MRCNS,头孢西丁纸片扩散法筛选MRCNS敏感性为97.7%,特异性为95.7%;苯唑西林K-B法筛选MRCNS敏感性为99.1%.特异性为66.7%;苯唑西林微量稀释法筛选MRCNS敏感性为98.6%.特异性为60.9%.结论 头孢西丁纸片扩散法可作为医院微生物实验室日常工作中检测MRCNS的简便又准确的实验方法.     

头孢西丁扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌异质性耐药菌株的评价

目的:评价头孢西丁扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌异质性耐药菌株的可靠性和临床实用性.方法:将临床分离得到的葡萄球菌310株,按美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)标准操作规程进行苯唑西林纸片扩散法、头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林琼脂稀释法实验,并以PCR检测葡萄球菌mecA基因为判断标准,比较4种方法的敏感性及特异性.结果:经mecA基因检测,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)为57.1%(113/198),耐甲氧西林的凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)为62.5%(70/112).头孢西丁纸片扩散法检测MRSA的敏感性和特异性均为100%,检测MRCNS敏感性为98.6%,特异性为100%.结论:头孢西丁纸片扩散法操作简便,结果可靠,可作为临床实验室检测耐甲氧西林葡萄球菌的常规方法.     

多重PCR快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的建立多重PCR方法,快速鉴定金黄色葡萄球菌并同时检测耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的mecA基因。与PBP2a乳胶凝集法及头孢西丁纸片扩散法进行比较。方法以nuc基因以及mecA基因合成2对引物,采用多重PCR扩增法,在279bp和310bp处出现扩增条带,表示检出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）。结果 171株临床分离菌的mecA基因检出率为52.63%;nuc基因扩增结果与常规检测结果的符合率为100%;以PBP2a乳胶凝集法为＂金标准＂,PCR法和头孢西丁纸片扩散法的敏感性均为100%,特异性分别为98.78%和92.68%。3种方法结果差异无统计学意义（P〉0.05）。Kappa值均大于0.90。结论此多重PCR法能准确鉴定金葡菌,并可同步检测MRS,可作为临床实验室检测MRS的可靠方法。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测方法的评估

目的 评价 4 种检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)方法的临床应用价值.方法 对94株临床分离的金黄色葡萄球菌采用苯唑西林纸片扩散法、头孢西丁纸片扩散法和苯唑西林微量稀释法筛选MRSA,并采用聚合酶链反应(PCR)检测mecA 基因作为检测MRSA的金标准.结果 94株中有63株为MRSA,检出率为67%;其中头孢西丁纸片扩散法筛选MRSA敏感性为100.0%,特异性100.0%;苯唑西林K-B 法筛选MRSA敏感性为96.8%,特异性为87.1%;苯唑西林微量稀释法筛选MRSA敏感性为98.4%,特异性为96.8%.结论 综合分析头孢西丁纸片扩散法可作为医院微生物实验室日常工作中检测MRSA的简便又准确的实验方法.     

四种初筛试验检测耐甲氧西林葡萄球菌的评价

目的评价四种初筛试验检测耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)的价值。方法收集临床分离金黄色葡萄球菌100株、凝固酶阴性葡萄球菌51株,分别进行头孢西丁纸片、MHA中添加4%NaCl的头孢西丁纸片、MHA中添加2%NaCl的苯唑西林纸片、苯唑西林-盐琼脂,以PBP2a胶乳凝集作为MRS检测标准,按CLSI2006版标准操作和判读结果。结果对于金黄色葡萄球菌,头孢西丁纸片、MHA中添加4%NaCl的头孢西丁纸片、MHA中添加2%NaCl的苯唑西林纸片、苯唑西林-盐琼脂检测MRS灵敏度和特异性分别为96.3%和100.0%、85.2%和100.0%、77.8%和100.0%、92.6%和94.5%,其中2株苯唑西林-盐琼脂24h未生长但延长至48h生长,48h内敏感性100.0%;对于凝固酶阴性葡萄球菌,四种方法检测MRS灵敏度和特异性分别为97.8%和80.0%、95.6%和80.0%、95.6%和80.0%、100.0%和80.0%(P>0.05)。结论四种方法均能可靠检测MRS,头孢西丁纸片和苯唑西林-盐琼脂具有较高应用价值。     

应用ROC曲线评价耐甲氧西林葡萄球菌的检测方法

目的：通过对耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的常用检测方法及实验条件进行评价，选择特异性和敏感性较好的方法和理想的实验条件。方法：以PCR法检测葡萄球菌的mecA基因为“金标准”，比较PBP2a胶乳凝集试验法、头孢西丁（FOX）琼脂筛选法、苯唑西林（OXA）琼脂稀释法（MIC）、FOX纸片扩散法、OXA琼脂筛选法、OXA纸片扩散法检测MRS的敏感性和特异性。同时应用ROC曲线对实验方法及不同的实验条件进行评价。结果：PCR法共检出79株mecA基因阳性菌株，阳性率为73．8％。以PCR法为“金标准”，上述6种方法的ROC曲线下面积分别为0．994，0．964，0．955，0．946，0．932，0．862。结论：选择最佳实验条件，用两种表型检测方法作平行检测，对可疑结果用PBP2a胶乳凝集试验或PCR法确诊。     

获得性金属β内酰胺酶表型检测法的研究

目的探讨适用于临床微生物实验室常规初筛获得性金属β内酰胺酶（MBLs）的实验方法,为指导临床合理选择抗生素提供依据。方法以EDTA为MBLs的抑制剂,以亚胺培南IMP和头孢他啶CAZ为MBLs的底物,采用双纸片增效法作MBLs初筛试验,将两种初筛试验的结果与聚合酶链反应PCR的结果进行比较分析。结果应用PCR法,在70株耐IMP和或CAZ的鲍曼不动杆菌中检出VIM型MBLs阳性株4株,IMP型MBLs阳性株6株。IMP-EDTA纸片法的敏感性50%,特异性28.6%;CAZ-EDTA纸片的敏感性85.8%,特异性13.3%。结论IPM-EDTA纸片法方法简便、结果可靠,可作为获得性MBL的初筛方法在临床微生物室日常工作中开展。     

高效液相色谱法同时测定黄氏响声丸中5种蒽醌类成分含量

目的:建立黄氏响声丸中5种蒽醌类活性成分的高效液相色谱含量测定方法,有利于制剂的质量控制.方法:采用高效液相色谱法,色谱柱:Shimadzu VP-ODS柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸梯度洗脱,流速为1.0ml/min,检测波长为254nm,柱温30℃.结果:5种成分为芦荟大黄素0.0...     

宫颈人乳头瘤病毒第二代杂交捕获法和实时荧光聚合酶链反应检测法的临床应用比较

目的：比较第二代杂交捕获法（HCⅡ）与实时荧光聚合酶链反应技术（real-time PCR）在检测女性生殖道人乳头瘤病毒（HPV）高危亚型中的临床价值。方法：随机选取2011年1～6月我院妇产科行液基细胞薄层涂片技术进行低度鳞状上皮内病变（LSIL）检查,检查结果为未明确诊断意义的不典型鳞状上皮细胞（ASCUS）患者100例,分别采用real-time PCR与HCⅡ检测HPV高危亚型,比较两者的检测结果。对检测HPV阳性的样本或HPV阴性但液基细胞薄层涂片技术（LCT）≥LSIL的妇女采用阴道镜下活组织病理学检查,以病理结果作为验证两种HPV检测的参考标准。结果：共取病理68例。病理结果证实该人群中子宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅲ级5例,CINⅡ级11例,CINⅠ级19例,慢性宫颈炎和鳞状上皮化生33例。该100例患者HCⅡ和real-time PCR检测高危型HPV的阳性率分别为63.0%和71.0%,二者总符合率为82.3%;HCⅡ检测手段对高危宫颈病变患者进行高危HPV筛查的灵敏性、特异性、准确性、阳性预测值、阴性预测值、阳性似然比和阴性似然比分别为79.3%、88.2%、91.2%、10.1%、99.7%、8.9和0.327;real-time PCR以上各指标分别为100.0%、92.5%、86.7%、8.6%、100.0%、8.7和0。结论：Real-time PCR与HCⅡ检测宫颈上皮内瘤变患者高危型HPV有较好的相关性;但real-time PCR检测高危型HPV具有更好的敏感性和特异性。     

CHROMager念珠菌显色培养基在深部感染念珠菌检测中的应用

目的：评价CHROMager念珠菌显色培养基在念珠菌深部感染标本检测中的应用价值。方法：用CHROMager念珠菌显色培养基分离和鉴定来源于贵州省内不同地区224例深部感染患者的真菌标本,采用PCR扩增和DNA序列分析方法检测分离真菌rDNA的ITS序列。结果：224例深部感染患者标本共分离念珠菌243株,显色培养基鉴定16例标本为混合念珠菌感染,占7.1%,其中155株白假丝酵母菌63.8%,居分离率首位;显色培养基鉴定结果与基因鉴定结果符合率为97.7%。结论：深部感染念珠菌以白假丝酵母菌最常见,CHROMager念珠菌显色培养基能快速、简便、准确地分离临床常见的念珠菌,并可有效地提高混合念珠菌感染的检出率。     

改良Hodge试验在中国产KPC的肠杆菌科细菌检测中的应用研究

目的：初步评价改良Hodge试验（Modified Hodge Test,MHT）在中国产KPC肠杆菌科细菌检测中的应用价值。方法：用MHT和PCR分别检测175株肠杆菌科细菌的KPC。以PCR为金标准,分析MHT在KPC检测中的灵敏度、特异性、诊断效率、阳性预测值和阴性预测值等指标。结果：MHT在检测175株肠杆菌科细菌的KPC时,灵敏度、特异性、诊断效率、阳性预测值及阴性预测值分别为100%、93.7%、96.6%、93.0%和100%。结论：在中国,MHT也是筛查产KPC肠杆菌科细菌的准确且简便的方法。     

肠杆菌科细菌高产AmpC合并膜孔蛋白改变与碳青霉烯类耐药的关系

目的研究碳青霉烯类抗生素敏感性下降的肠杆菌科细菌的分子生物学及其临床感染特征。方法采用VITEK-2全自动细菌鉴定仪进行抗菌药物敏感试验测定最小细菌浓度（MIC）,用酶提取物头孢西丁三维试验检测AmpC酶,用PCR扩增AmpC耐药基因和膜孔蛋白基因,并进行序列分析。结果在55株碳青霉烯类敏感性下降的肠杆菌科细菌中,AmpC酶三维试验阳性菌为30株,PCR结果中AmpC耐药基因DHA阳性9株（16．36％）．CIT阳性16株（29．09％）,未见MOX阳性株。膜孔蛋白基因的测定结果：55株肠杆菌科细菌中有34株（61．82％）膜孔蛋白基因OMPK35缺失,52株膜孔蛋白基因OMPK36缺失。膜孔蛋白基因OMPK35缺失对碳青霉烯类药物的耐药具有一定的统计学意义。结论肠杆菌科细菌由于高产AmpC酶以及膜孔蛋白的缺失而对碳青霉烯类药物耐药,这对临床控制病情及抗感染是极大的困难与挑战。