泛耐药铜绿假单胞菌耐药机制研究进展

铜绿假单胞菌是医院感染最常见的病原菌之一,对多种抗生素有天生的耐药性。近年来随着广谱抗菌药物的大量应用其耐药情况日趋严重,甚至出现了多药耐药及泛耐药株。泛耐药铜绿假单胞菌的耐药机制极为复杂,主要包括耐药基因突变、产生灭活酶、改变药物的作用靶点、药物渗透障碍与主动外排机制高表达、形成生物被膜等。本文就近年来有关的研究进展进行综述。     

泛耐药铜绿假单胞菌耐药机制研究

目的 研究铜绿假单胞菌(PA)泛耐药(PDR)机制.方法 琼脂稀释法测定14种抗菌药物对泛耐药铜绿假单胞菌(PDR-PA)的最低抑菌浓度(MIC).肠杆菌基因间重复一致序列-聚合酶链反应(ERIC-PCR)分析耐药菌株同源性.PCR扩增检测超广谱B内酰胺酶(ESBL)、碳青霉烯酶、质粒介导AmpC酶等分析B.内酰胺类的耐药机制;PCR扩增检测16种氨基糖苷钝化酶基因分析氨基糖苷类耐药机制;PCR扩增检测qnr基因、DNA旋转酶基因gyrA、gyrB和拓扑异构酶Ⅳ基因parC和parE,分析氟喹诺酮类耐药机制;PCR扩增oprD2编码基因及序列分析和MC207110检测外排泵分析膜屏障机制引起的碳青霉烯类耐药机制.结果 19株PDR-PA的ERIC-PCR分型结果显示具有5个型别,其中以A和B型为主,分别有6株和7株.17株检出VEB-3型ESBL基因,其中1株同时检出OXA-10型ESBL基因;未检测出质粒AmpC酶和碳青霉烯酶基因.19株均检出ant(3")I氨基糖苷钝化酶基因,其中18株同时捡出ant(3)Ⅱ酶基因;19株发生gyrA突变,其中14株同时发生了parC突变,未检测出qnr基因.19株oprD2编码基因均发生小片段缺失.16株显示具外排泵机制.结论 提示产生VEB-3型ESBL、aac(3)Ⅱ和ant(3")I氨基糖苷钝化酶、DNA旋转酶gyrA和拓扑异构酶ParC基因发生突变,以及OprD2蛋白缺失和外排泵高表达是本组PDR-PA泛耐药的重要原因.     

一株携带多种耐药基因的铜绿假单胞菌研究

目的了解铜绿假单胞菌的多重耐药情况和有关机理。方法聚合酶链反应（PCR）法对多重耐药的铜绿假单胞菌进行β-内酰胺酶基因、氨基糖苷类修饰酶（AMEs）基因、耐消毒剂和磺胺基因（qacE△1—sul1）的检测。并对CARB基因进行了测序。结果PCR显示CARB、TEM型β-内酰胺酶基因，aac（6’）-Ⅰ、aac（6’）-Ⅱ、ant（2″）-Ⅰ、ant（3″）-Ⅰ AMEs基因、qacE△1-sul1耐消毒剂基因和耐磺胺基因扩增阳性，oprD2基因扩增检测呈缺失型。CARB基因扩增产物测序，经BLAST程序分析（WWW．ncbi．nlm．nih．gov）为CARB-3型。结论铜绿假单胞菌存在多重耐药基因，管壁涂有季胺类、双胍类消毒剂和磺胺的Ⅱ代导管的抑菌效果需重新评价。     

铜绿假单胞菌氯霉素耐药相关基因研究

目的了解铜绿假单胞菌（PAE）氯霉素耐药相关基因的携带状况。方法采用K-B法分别对山东（A院）、江苏（B院）二家医院PAE菌临床分离株进行抗菌药物的敏感试验。采用聚合酶链反应法（PCR）对氯霉素耐药相关基因（catB、cmlA）进行检测,并对相关基因进行序列分析。结果A院30株PAE对16种抗菌药物多药耐药;B院20株PAE对16种抗菌药物均耐药;二家医院PAE对氯霉素均不敏感。A医院30株多药耐药PAE菌catB、cmlA基因均阴性;B医院20株泛耐药PAE菌cmlA基因阳性18株（阳性率90．0％）,并经测序证实;catB基因均阴性。结论不同医院PAE氯霉素耐药机制可不相同,氯霉素耐药率高的原因需进一步研究。     

多重耐药铜绿假单胞菌相关耐药基因的研究

目的探讨临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌β-内酰胺酶相关耐药基因及氨基糖苷类修饰酶基因。方法采用MicroScan40微生物全自动鉴定系统微量肉汤稀释法测定菌株的耐药性。采用聚合酶链反应(PCR)方法检测β-内酰胺酶基因型及氨基糖苷类修饰酶基因型。结果 32株铜绿假单胞菌除对哌拉西林/他唑巴坦和替卡西林/克拉维酸耐药率分别为75.9%和93.1%外,对其余抗菌药物耐药率均为100%。氨基糖苷类修饰酶基因检出30株(93.7%),aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6)-Ⅰ、aac(6)-Ⅱ、ant(3)-Ⅰ和ant(2)-Ⅰ基因阳性率分别为9.3%、90.6%、12.5%、90.6%、90.6%和0,检出β-内酰胺酶基因28株(87.5%),TEM、DHA、OXA和IMP基因阳性率分别为62.5%、43.7、21.8%和3.1%,未检出VIM、SHV和CTX-M-9,检出OprD2基因缺失23株(71.8%)。结论广州地区多重耐药铜绿假单胞菌携带多种氨基糖苷类修饰酶基因和β-内酰胺酶基因。     

某院348株铜绿假单胞菌耐药性分析及多重耐药铜绿假单胞菌耐药基因检测

目的研究该院检出的348 株铜绿假单胞菌（PAE）耐药性及多重耐药PAE 耐药基因检测。方法将血液科检出348 例PAE 菌株进行体外耐药监测,并对其中36 株多重耐药PAE 菌株进行耐药相关基因OprD2、VIM、GIM、SPM、IMP-1、TEM、VEB、PER、aac（3）-Ⅲ、aac（6）’-Ib-Cr 、TEM检测。结果多重耐药PAE 对妥布霉素、哌拉西林/ 他唑巴坦、美罗培南比较敏感,对其他临床常用抗生素均有明显的耐药性,PCR 基因分析结果显示, OprD2 和IMP-1 基因阳性率分别为97.22%和94.44%, aac（3）-Ⅲ和aac（6）’-Ib-Cr 阳性率分别为38.89%和27.78%,TEM 阳性率为75.00%, qnrA、qnrS和qnrD阳性率为50.00%、61.11%和47.22%,其他基因低于15.00%。结论PAE 耐药性较强,多重耐药PAE 耐药基因主要为OprD2 和IMP-1 基因。     

铜绿假单胞菌消毒剂磺胺耐药基因研究

目的 探讨铜绿假单胞菌（PA）消毒剂磺胺耐药基因存在状况。方法 对临床分离的96株铜绿假单胞菌采用PCR检测消毒剂磺胺耐药基因（qacE△1-sulⅠ）。结果 96株PAqacE△1-sulⅠ阳性42株（阳性率43．8％）。结论 铜绿假单胞菌qacE△l-sulⅠ携带率很高。     

ICU泛耐药铜绿假单胞的调查分析

目的分析ICU泛耐药铜绿假单胞菌（pseudomonas aeruginosa,PAE）,为控制该菌所致的医院感染提供依据。方法对2010年1月-2012年12月间我院住院患者送检标本进行泛耐药铜绿假单胞菌的分离鉴定及分析。结果各类临床标本分离到的478株铜绿假单胞菌分析,ICU分离84株,占17.57%,而全院107株泛耐药铜绿假单胞菌当中ICU29株,占27.10%,显著高于非泛耐药菌株的比例;从标本类型的分布来看,主要来自于下呼吸道的痰标本。结论 ICU在我院成了泛耐药铜绿假单胞菌的集中区域,并且有增加的趋势;呼吸系统是泛耐药铜绿假单胞菌的易感部位。     

166株铜绿假单胞菌的耐药谱分析

对1997年1月至1998年1月从临床标本分离培养的166株铜绿假单胞菌，应用K-B法测定该分离菌株对18种抗生素的耐药性。选择出其中113株作对7种首选抗生素的多重耐药分析。结果表明：铜绿假单胞菌对青霉素类抗生素、一代头孢菌素、二代头孢菌素高度耐药，对三代头孢菌素和喹诺酮类抗生素比较敏感，该菌多重耐药有上升趋势。结果提示：临床合理使用抗生素可避免或减少耐药菌株的出现。     

重症监护室多重耐药铜绿假单胞菌耐药基因分型研究

目的 了解ICU检出多重耐药铜绿假单胞菌耐药基因存在情况。 方法 将ICU检出Pae菌株进行体外耐药监测，并对其中19株多重耐药菌株进行耐药相关基因OprD2、IMP-1、GIM、SPM、VIM、TEM、PER、DHA和VEB检测。 结果 PCR结果显示OprD2基因、IMP-1基因阳性率100％；TEM基因阳性率73.7％；VEB基因阳性率10.5％；PER、DHA 、GIM、SPM、VIM基因无阳性检出。 结论 ICU铜绿假单胞菌中携带率多种耐药基因是导致菌株出现多重耐药性的重要原因。     

1株多耐药阴沟肠杆菌耐药基因研究

目的了解1株多耐药阴沟肠杆菌（MDR—ECL）耐药基因携带状况。方法采用PCR检测该株MDR—ECL菌22种基因。结果该株MDR—ECL菌携带TEM、SHV、CTX—M-1、aac（3）-Ⅱ、aac（6’）-Ⅰb、ant（2”）-Ⅰ、qnrA基因。结论该株MDR—ECL菌携带多种耐药基因是多耐药原因。     

泛耐药鲍曼不动杆菌相关耐药基因检测及分析

【目的】了解泛耐药鲍曼不动杆菌(PDR-AB)10簇β-内酰胺酶(bla)基因、2簇碳青霉烯酶基因(OXA)、2簇氨基糖苷类修饰酶(AMEs)基因、3种整合子酶基因和消毒剂-磺胺类耐药基因携带情况。【方法】用聚合酶链反应(PCR)及序列分析方法对30株从我院分离的PDR-AB进行各种耐药基因的检测和分析。【结果】在30株PDR-AB中blaADC阳性30株(100%),blaSHV阳性29株(97%),blaVIM阳性26株(87%),blaIMP阳性24株(80%),blaPER阳性14株(47%),blaTEM阳性14株(47%),blaDHA阳性12株(40%),blaGES阳性8株(27%)b,laGIM阳性6株(20%);OXA-23阳性27株(90%);Ant(3’’)-I阳性30株(100%)I;ntI1阳性30株(100%)I,ntI2阳性8株(27%)I,ntI3阳性2株(7%);QacE△1-sull阳性30株(100%);没有检测到blaVEB、OXA-24和Aac(6’)-II基因。【结论】泛耐药鲍曼不动杆菌同时携带多种耐药基因是导致其对所有常用药物均耐药的重要原因,临床应加强有效的监测和隔离工作来控制其传播。     

安徽地区铜绿假单胞菌耐药性分析及泛耐药菌体外联合药敏试验的研究

目的 收集安徽省细菌耐药中心临床分离铜绿假单胞菌(PAE)菌株,对其感染分布及耐药性情况进行分析,了解其耐药变迁情况,并筛选出泛耐药铜绿假单胞菌(PDR-PA),评价联合用药组的体外抑菌作用,寻求有效的联合抗菌药物.方法 采用琼脂稀释法测定所收集PAE菌株的最低抑菌浓度(MIC)值.按照2015年美国临床实验委员会指导原则的标准计算抗菌药物的耐药率、中介率和敏感率,进一步采用棋盘法设计,琼脂平板稀释法测定所筛选出的54株PDRPA菌株的MIC,并计算部分抑菌浓度.结果 PAE对阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦、头孢吡肟以及头孢他啶最为敏感且三年内耐药率较为稳定,对头孢唑肟等三代头孢耐药率显著升高(P＜0.05),对环丙沙星耐药率有所下降(P＜0.05),对于亚胺培南及美罗培南的耐药率基本持平.多粘菌素E+利福平、多粘菌素E+亚胺培南、多粘菌素E+头孢他啶、哌拉西林/他唑巴坦+阿米卡星、头孢他啶+环丙沙星5组抗菌药物对于PDRPA主要起到协同相加作用.结论 PAE感染仍占临床感染一定比例,应继续加强对PAE耐药性的监测,多粘菌素等多种抗感染药物联合使用可作为对PDRPA感染的治疗方案.     

泛耐药铜绿假单胞菌肺炎危险因素及护理对策

目的探讨医院感染性肺炎泛耐药铜绿假单胞菌感染的危险因素及护理对策。方法采用1：1病例对照研究方法,病例组收集2001年1月至2005年12月住院的泛耐药铜绿假单胞菌（PDRPA）引起的医院感染性肺炎病例27例,并随机选择同时期非PDRPA感染的医院感染病例27例作为对照组。统计学分析采用t检验或x^2检验。结果在27例PDRPA引起的医院感染肺炎和27例对照病例中单因素分析发现感染前住院时间、感染前入住ICU、APACHEⅡ评分、机械通气、体内留置尿管、胃管、纤维支气管镜吸痰和使用抗菌素数量与PDRPA感染有关。结论感染前住院时间、感染前入住ICU、APACHEⅡ评分、机械通气、体内留置导管（包括尿管、胃管、中心静脉导管和动脉导管）、纤维支气管镜吸痰和使用抗菌素数量是PDRPA肺炎的重要危险因素。加强无菌意识教育、患者气道护理、呼吸机管理和及早营养支持非常必要。     

慢性重型肝炎患者泛耐铜绿假单胞菌40种耐药相关基因的研究

目的研究慢性重型肝炎患者泛耐铜绿假单胞菌40种耐药相关基因。方法应用法国梅里埃公司的API鉴定条／PSE5．0药敏条和美国BD公司的Phoenix NMIC／ID-109鉴定／药敏板鉴定和细菌药敏试验,应用PCR法检测1株泛耐铜绿假单胞菌临床分离株29种β-内酰胺酶相关基因、外膜蛋白D2基因（oprD2）、6种氨基糖甙类修饰酶基因（AMEs）、消毒剂／磺胺耐药基因（qacE△1-sull）、3种整合子基因（intI1、2、3）等40种耐药相关基因,分析其分布情况。结果在本株菌,6种耐药相关基因阳性（二种β-内酰胺酶基因（blaTEM、blaOXA10）、二种氨基糖甙类修饰酶基因（aac（6′）-Ⅱ、aac（3）-Ⅱ）、qacE△1-sull和Ⅰ类整合子基因（intI1））,同时oprD2缺失;其它27种β-内酰胺酶基因、4种氨基糖甙类修饰酶基因（aac（6′）-Ⅰb、aac（3）-Ⅰ、ant（3″）-Ⅰ、ant（2″）-Ⅰ）和2种整合子基因（intI2、intI3）均为阴性。结论本株泛耐菌耐药机制为多重机制,主要与7种耐药相关基因（blaTEM、blaOXA10、oprD2缺失、aac（6′）-Ⅱ、aac（3）-Ⅱ、qacE△1-sul1和Ⅰ类整合子）有关。经检索中文生物医学期刊文献数据库（CMCC）和medline数据库,本研究是泛耐铜绿假单胞菌检测耐药相关基因最多的报道。     

铜绿假单胞菌对抗生素的耐药性分析

目的：分析铜绿假单胞菌的耐药性与耐药趋势。方法：按标准要求分离用半自动微生物鉴定／药敏分析系统进行菌株鉴定及药物敏感性测试。结果：2007年1月-2008年12月我院共分离出63株铜绿假单胞菌。其中对20种抗菌药物活性较好的是美洛培南、亚胺培南、头胞吡肟,耐药率为：7．0％、15．0％、17．0％,耐药率较高的是阿莫西林88．0％、头胞西丁86．0％、复方新诺明83．0％,其对阿莫西林的耐药率从77．O％升至88．O％,同期对复方新诺明的耐药率从59．2％升至83．0％。β-内酰胺类抗生素、哌拉西林耐药率有下降趋势,从57．3％降至47．0％。结论：监测显示铜绿假单胞菌对碳青霉烯类、氨基糖苷类、β-内酰胺酶抑制剂复合药物保持较好的敏感性。但三代头孢菌素的耐药率高于国家细菌耐药监测研究组（BRSSG）,加强对铜绿假单胞菌耐药率有计划的连续监测对临床有指导意义。     

铜绿假单胞菌耐药分析

【目的】分析本院铜绿假单胞菌的耐药情况，为医院合理使用抗菌药提供可靠的实验依据。【方法】收集本院2001年3月-2004年2月间各种临床标本分离的铜绿假单胞菌214株，应用API细菌鉴定系统进行鉴定，并用K-B法进行药敏实验。【结果】铜绿假单胞菌对亚胺培南、哌啦西林／三唑巴坦、哌啦西林、头孢唑林、头孢呋辛、头孢他啶、头孢哌酮、头孢吡肟、庆大霉素、阿米卡星、环丙沙星的耐药率分别为1．0％、18．5％、20．3％、92．1％、90．6％、12．7％、15．1％、8．2％、32．3％、9．4％、8．9％。【结论】临床应根据药敏实验合理使用抗生素，以减少耐药菌株的产生。     

重症监护病房多重耐药铜绿假单胞菌感染的耐药性分析

目的探讨医院重症监护病房（ICU）多重耐药的铜绿假单胞菌对常用抗生素的耐药性,指导临床合理用药。方法采用Microscan-autoscan半自动细菌鉴定系统鉴定菌株,以药敏分析系统微量稀释法检测药物敏感性,对2008年1月-2011年12月入住我院ICU发生院内多重耐药铜绿假单胞感染的64例患者的药物耐药性进行统计分析。结果 64例多重耐药铜绿假单胞菌显示对喹诺酮类药物较敏感：环丙沙星耐药率为21.9%,左氟沙星耐药率为25.0%;对青霉素类和头孢类耐药率较高：氨苄青霉素、氨苄青霉素/青霉烷砜、头孢唑林、头孢西丁耐药率均为100.0%,头孢噻肟为98.4%,头孢三嗪为90.6%;对氨基糖苷类药物耐药情况：庆大霉素耐药率为40.6%,丁胺卡那霉素为32.8%,妥布霉素为32.8%;对β内酰胺酶/β内酰胺酶抑制剂耐药情况：阿莫西林/克拉维酸耐药率为100.0%,替卡西林/克拉维酸为46.8%,哌拉西林/他唑巴坦为29.7%;对单环内酰胺类代表性药物氨曲南的耐药率为45.3%;对青霉烯类代表性药物亚胺培南的耐药率为32.8%。结论我院ICU的铜绿假单胞菌多具有多重耐药性,对多重耐药的铜绿假单胞菌抗感染用药可以根据药敏结果选择,对于泛耐药菌株则可以选择多黏菌素B抗感染。