SOCS1沉默的树突状细胞疫苗在喉癌治疗中的实验研究

目的:研究SOCS1沉默的树突状细胞(DC)疫苗特异性抗肿瘤作用机制,并探讨RNAi技术在喉癌基因治疗中的应用前景,为DC的临床应用提供新思路。方法:以细胞因子GM-CSF、IL-4和TNF-α体外诱导扩增外周血单核细胞来源的DC,倒置显微镜下观察DC形态特征;构建RNAi载体转染DC,Western blot检测SOCS1的表达情况,筛选抑制SOCS1表达的有效靶序列;流式细胞术检测DC表面分子CD83、CD86和HLA-DR的表达;ELISA法分析上清中IFN-γ的含量;MTT法评估DC刺激T细胞增殖的能力及诱导细胞毒性T细胞(CTL)的杀伤活性。结果:DC体外诱导培养成功;设计的RNAi载体经测序验证无误。干扰序列5可显著下调SOCS1表达水平;SOCS1沉默联合喉癌Hep-2抗原致敏的DC可显著上调表面分子标志CD83(85.61±0.96)%、CD86(96.86±1.20)%和HLA-DR(98.02±0.94)%的表达;该组DC能有效刺激T细胞增殖,增加IFN-γ的分泌量,最终增强CTL的特异性杀伤作用,效靶比为50∶1时其杀伤活性与对照组之间的差异有统计学意义(P<0.01)。结论:SOCS1沉默并负载喉癌Hep-2抗原的DC疫苗可以产生高效而特异性的抗喉癌免疫应答。     

鼻咽癌可溶性抗原负载DC诱导CTL杀伤鼻咽癌细胞的体外研究

目的用负载鼻咽癌细胞(CNE)可溶性抗原的树突状细胞(dendritic cells, DC)诱导自身淋巴细胞,使之活化为鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma, NPC)特异性细胞毒性T细胞(cytotoxic T lymphocyte, CTL),观察其对鼻咽癌细胞的体外特异性杀伤作用. 方法用GM-CSF、IL-4和TNF-α体外诱导健康成人外周血单核细胞,使其分化为高纯度DC.用鼻咽癌细胞(CNE)可溶性抗原负载成熟DC,流式细胞仪检测负载前后DC的表型特征,MLR检测负载前后DC对同种异体T淋巴细胞增殖的能力.在白细胞介素-2(IL-2)的作用下,用负载鼻咽癌细胞可溶性抗原的DC诱导自身淋巴细胞成NPC特异性CTL,通过杀伤活性实验观察它对鼻咽癌细胞(CNE)的特异性杀伤效应. 结果人外周血单核细胞体外在GM-CSF、IL-4、TNF-α诱导下获得具典型表型特征的成熟DC.负载CNE可溶性抗原对成熟DC表面共刺激分子及特异性表面标志无影响,仍有较强的刺激同种异体淋巴细胞增殖能力,所诱导的CTL对鼻咽癌细胞(CNE)有明显的特异性杀伤作用.结论负载鼻咽癌细胞(CNE)可溶性抗原的DC所诱导的CTL在体外对鼻咽癌细胞有特异性杀伤作用,对NPC的临床治疗有潜在的应用价值.     

IFN-γ对喉鳞癌细胞系(Hep-2)HLA表达的调节

应用流式细胞测量术、蛋白斑点杂交及Northern blot分析在蛋白和RNA水平研究了不同浓度γ-干扰素(IFN-γ)作用48小时及去除IFN-γ作用后48小时的喉鳞癌细胞系(Hep-2)细胞组织相容性抗原(HLA)的表达情况。发现不经IFN-γ处理的对照组的Hep-2细胞表达HLA-Ⅰ类抗原,不表达Ⅱ类抗原。加IFN-γ作用48小时后HLA-Ⅰ类抗原表达增强,与IFN-γ的剂量呈量效关系,HLA-Ⅱ类抗原可被诱导表达;Hep-2细胞HLA-B27位点基因表达mRNA增强,HLA-DRα位点基因可被诱导表达mRNA,而IFN-γ作用后HLA-A2位点基因表达mRNA的量无变化。去除IFN-γ48小时后HLA抗原及mRNA的表达水平均恢复至未经IFN-γ处理的对照组水平。IFN-γ对Hep-2细胞HLA-Ⅰ类基因B位点的调节作用强于A位点,提示在HLA基因导入肿瘤细胞进行基因治疗时,用易调节表达增强的HLA-B位点基因为宜。     

胞嘧啶转氨酶基因联合5-氟胞嘧啶对喉癌细胞的抑制作用

目的 研究腺病毒载体（Ad）介导的胞嘧啶转氨酶（CD）基因转移联合5-氟胞嘧啶（5-FC）对喉鳞状细胞癌（简称喉癌）细胞株Hep-2的体外作用.方法 将构建的含CD基因的重组腺病毒载体在293细胞中扩增,体外感染喉癌细胞株Hep-2,并给予不同浓度前药5-FC进行肿瘤细胞体外杀伤效果观察.结果 用制备的Ad-CD液感染Hep-2细胞,加入不同浓度的前药5-FC,肿瘤细胞生长受到不同程度的抑制.结论 Ad介导的CD基因转染效果强,可直接杀伤喉癌细胞Hep-2.     

重组腺病毒介导的p16基因在喉癌细胞系Hep-2的表达

目的 研究外源性P16基因对喉癌细胞系Hep-2的作用，并探讨P16基因用于治疗喉癌的可行性，方法 将重组体泉病毒介导的P16基因转染到人喉癌细胞系Hep-2，用免疫组化、打点杂交方法检测P16基因在细胞转染前后的表达情况，应用流式细胞仪，细胞DNALadder等方法研究P16基因对喉细胞周期、形态、生长等特性的影响。结果 感染P16基因的Hep-2细胞内有源外源性P16基因的表达，细胞周期明显变化，细胞从G1期到S期发生抑制，细胞有退行性改变，重组体腺病毒能介导外源基因P16在喉癌Hep-2细胞系中高效表达。重组体腺病毒介导的P16在Hep-2细胞系中表达，能抑制Hep-2细胞系的生长，流式细胞仪计数和细胞DNALadder证实p16能诱导喉癌细胞系Hep-2发生调亡并导致G1期阻滞。结论 P16基因抑制喉癌细胞系Hep-2的生长可能是通过诱导肿瘤细胞凋亡及G1期阻滞而发挥作用。     

pVVP3IL-18HN核酸疫苗的构建及其对喉癌细胞杀伤作用的研究

目的通过构建共表达凋亡素基因、新城疫病毒HN基因和白介素18（interleukin-18，IL-18）基因的核酸疫苗，观察联合应用此三种基因对喉癌细胞的杀伤效应。方法在真核表达质粒pVAX1中的CMV启动子下游插入凋亡素基因和含有IL-18HN嵌合基因并携带IRES启动子的基因片段，构建能同时表达三种基因的真核表达质粒pVVP3IL-18HN，经RT—PCR、间接免疫荧光和Western—blot法检测外源基因的表达。采用脂质体介导法将构建的重组质粒pVVP3IL-18HN体外转染Hep-2细胞，运用MTT法检测不同质粒浓度、不同作用时间，该重组质粒对喉癌细胞Hep-2的杀伤率。结果pVVP3IL-18HN可有效杀伤喉癌细胞，且在作用72h、质粒浓度为20μg／ml时杀伤率最高，达61．9％。结论重组质粒pVVP3IL-18HN能有效杀伤Hep-2细胞，可用于喉癌的治疗和研究。     

白细胞介素-24对喉癌细胞的增殖抑制效应及机制

目的：研究腺病毒介导的人白细胞介素-24（Ad—mda-7／IL-24）基因对喉癌细胞Hep-2增殖抑制效应及机制。方法：将携带有hIL-24基因的重组复制缺陷型腺病毒（Ad-hIL-24）感染喉癌细胞Hep-2,并以正常人脐静脉内皮细胞HUVEC为对照,采用RT-PCR方法检测Hep-2、HUVEC细胞中外源性hIL-24表达,以及Bcl-2和Bax的变化;采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测细胞的生长和凋亡情况。结果：腺病毒介导的hIL-24mRNA能在Hep-2细胞和HuVEC细胞中表达;在Hep-2细胞中,抗凋亡分子Bcl-2表达降低,而促凋亡分子Bax表达增强;在HUVEC细胞中Bcl-2表达没有变化,Bax表达有所增强。MTT法显示Ad—hIL-24能明显抑制喉癌细胞Hep-2的生长。在Hep-2细胞中,显微镜下可见明显的细胞凋亡。结论：Ad—hIL-24能抑制喉癌细胞Hep-2生长和诱导Hep-2细胞凋亡,但对正常细胞无毒性作用。     

RNA干扰DJ-1基因抑制喉癌细胞的增殖

目的 探讨RNA干扰(RNAi)抑制喉癌Hep-2细胞DJ-1基因的表达及观察其细胞效应.方法 设计合成3对特异性针对人DJ-1基因的小干扰RNA(siRNA),脂质体法转染Hep-2细胞,实验分为4组:瞬时转染非特异性siRNA对照组及转染特异性siRNA 3组(siRNA1、siRNA2、siRNA3).采用RT-PCR检测DJ-1 mRNA,蛋白免疫印迹法检测DJ-1蛋白,流式细胞仪检测细胞凋亡及四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测特异性siRNA1组对Hep-2细胞效应.结果 本实验设计合成的3对特异性siRNA均不同程度地抑制DJ-1基因表达,其中特异性siRNA1组抑制效果最佳.M1Tr比色法结果显示特异性siRNAl组(终浓度50 nmo~L、100 nmolZL)对Hep-2细胞增殖具有抑制作用.流式细胞仪检测结果最示特异性siRNA1组能诱导Hep-2细胞凋亡,转染特异性siRNA1组凋亡率为(15.7±4.8)%,非特异性siRNA对照组凋亡率为(4.5±0.4)%,非特异性siRNA对照组与特异性siRNA1组凋亡率比较差异有统计学意义(t=4.736,P<0.01).结论 转染特异性siRNA组能有效抑制Hep-2细胞增殖,诱导Hep-2细胞凋亡.     

Jab1和p27kip1基因在喉鳞状细胞癌组织和喉癌Hep-2细胞中的表达及意义

目的:探讨Jab1和p27kip1基因在喉鳞状细胞癌组织和喉癌Hep-2细胞中的表达及意义。方法:采用免疫组织化学方法检测50例喉鳞状细胞癌组织和10例癌旁正常组织中Jab1和p27kip1的表达。采用人工合成Jab1siRNAⅡ用脂质体2000包裹后转染Hep-2细胞,用RT-PCR方法分析转染后喉癌细胞中Jab1和p27kip1基因的表达情况。结果:Jab1和p27kip1蛋白的阳性表达定位为细胞核中,Jab1在人喉鳞状细胞癌组织中高表达,正常喉黏膜中不表达或弱表达;p27kip1在人喉癌组织中弱表达,正常喉黏膜中强表达;两者呈负相关。Jab1siRNAⅡ可降低Jab1mRNA表达,并且随着时间的延长,Jab1mRNAⅡ在Hep-2细胞中的表达逐渐减弱,而p27kip1 mRNA的表达则无明显变化。结论:Jab1在人喉鳞状细胞癌组织中表达增强,正常喉黏膜中不表达或弱表达;p27kip1则正好相反。两者在喉癌中的表达呈负相关。Jab1siRNAⅡ可以特异性降低Jab1mRNA在喉癌Hep-2细胞中的表达,为进一步研究Jab1基因在喉癌中的作用奠定了基础。     

微小RNA-106a-5p/E2F3/β-catenin轴增加NK细胞对喉癌细胞的杀伤作用

目的　分析微小RNA-106a-5p（miR-106a-5p）/E2F3/β-catenin轴对喉癌细胞恶性发展的影响及其可能的作用机制。方法　通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术检测喉癌组织和癌旁组织中miR-106a-5p和E2F3的基因表达量。生物信息学软件及其双荧光素酶实验检测miR-106a-5p和E2F3之间的关系。下调miR-106a-5p和E2F3表达,CCK-8试剂盒检测喉癌Hep-2细胞的增殖能力,Western blot实验检测Hep-2细胞上皮间质转化（epithelial mesenchymal transformation,EMT）能力,检测NK细胞对Hep-2细胞的杀伤活性,酶联免疫吸附实验（ELISA）检测γ干扰素（interferon-γ,IFN-γ）和肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor α,TNF-α）的分泌。estern blot分析miR-106a-5p通过E2F3对β-catenin通路的影响。进一步检测抑制β-catenin通路对Hep-2细胞恶性发展及NK细胞杀伤作用的影响。结果　喉癌组织中miR-106a-5p表达（0.62±0.08）低于癌旁组织（1.53±0.24）,E2F3表达（2.65±0.86）高于癌旁组织（1.48±0.74）。miR-106a-5p与E2F3特异性结合。下调miR-106a-5p促进Hep-2细胞增殖和EMT,抑制NK细胞对Hep-2细胞的杀伤活性,而下调E2F3表达抑制Hep-2细胞增殖和EMT,上调NK细胞对Hep-2细胞的杀伤活性。下调miR-106a-5p通过E2F3激活β-catenin通路。XAV939干扰β-catenin通路后显著逆转了下调miR-106a-5p通对Hep-2细胞恶性发展以及NK细胞杀伤作用的影响。结论 miR-106a-5p靶向E2F3激活β-catenin通路调控喉癌细胞的恶性发展。     

树突状细胞在变应性鼻炎实验小鼠发病机制中作用的研究

目的:探讨树突状细胞(DC)在变应性鼻炎实验小鼠发病中的可能作用及机制。方法:采用CpGoligodeoxynucleotide(CpGODN1826)培养诱导变应性鼻炎实验小鼠静脉血DC,进而检测DC协同刺激分子CD80、CD86的表达,以及其分泌的IL10、IL12等水平的变化。结果:实验小鼠静脉血DC其分泌IL10水平(3.6±0.5)μg/L明显低于对照组(6.8±0.8)μg/L,差异有统计学意义(t=20.608,P<0.01);分泌IL12水平(29.5±6.4)ng/L也明显低于对照组(46.2±9.8)ng/L,差异有统计学意义(t=5.979,P<0.01);同时,实验小鼠静脉血人类白细胞抗原DR(20.2±1.3)和协同刺激分子CD86的表达水平(36.8±13.5)明显高于对照组(11.6±1.5)和(26.7±8.5),差异有统计学意义(t=23.301和3.314,均P<0.01)。结论:DC可能通过诱导Th1/Th2细胞分化在变应性鼻炎实验小鼠发作时起重要作用,其可能的机制系通过DC分泌的细胞因子而起作用。     

鼻息肉组织中Th_1、Th_2细胞因子的表达及其意义

目的 :探讨 IL- 4、IL- 5等 8种细胞因子在鼻息肉发病中的作用和对鼻息肉治疗的意义。方法 :采用酶联免疫吸附实验 (EL ISA)法检测 2 5例鼻息肉患者鼻息肉组织中 Th1 细胞因子 IFN- γ、IL- 2、IL- 12和 Th2 细胞因子 IL- 4、IL- 5、IL- 8、IL- 10、IL- 13的表达 ,并比较经皮质激素治疗前后鼻息肉中细胞因子表达的差异。结果 :2 5例中 ,IL- 4、IL- 5、IL- 8、IL- 10、IL- 13等 Th2 细胞因子的表达较正常组织增高 ,其中以 IL- 4、IL- 5最为显著 ,分别达3.9倍和 8.8倍 ;应用皮质激素后细胞因子的表达水平显著降低 ,而 IFN- γ、IL- 2、IL- 12等 Th1 细胞因子浓度较正常组织中降低 ,应用激素后其表达无明显改变。结论 :Th2 细胞因子 IL- 4、IL- 5、IL- 8、IL- 10、IL- 13等的升高 ,在鼻息肉的发病过程中可能具有重要的意义 ,通过改变 Th2 细胞因子的表达趋势 ,可能对鼻息肉的治疗具有一定的意义。     

细胞因子基因联合放射治疗小鼠头颈部鳞状细胞癌的实验研究

目的观察白细胞介素-2(interleukin-2，IL-2)基因与白细胞介素-12(interleukin-12，IL-12)基因联合放射治疗小鼠头颈鳞状细胞癌(鳞癌)的疗效。方法模拟临床头颈肿瘤治疗方案，利用鳞癌SCCⅦ细胞株在C3H／HeJ小鼠口底建立头颈鳞癌的荷瘤动物模型，在荷瘤部位直接注射多价阳离子脂质体包裹的表达IL-2基因和IL-12基因的真核表达质粒，对照组分别注射无目的基因的空载体和磷酸盐缓冲液(phosphatic buffered saline，PBS)。次日给予2Gy直线加速器的局部肿瘤放射治疗(简称放疗)。4d后重复IL-2基因和IL-12基因局部治疗。观察肿瘤治疗前后大小变化，检测肿瘤组织中CD4^ 、CD8^ 的表达、IL-2和IL-12的表达水平及自然杀伤(naturalkiller，NK)细胞和细胞毒T淋巴细胞(cytotoxic T—lymphocyte，CTL)的活性。结果IL-2基因和IL-12基因联合加放疗治疗组肿瘤生长明显受抑制，疗效显著优于单基因加放疗治疗组、单基因治疗组和各对照组。在注射有IL-2基因及IL-12基因的治疗组中，IL-2与IL-12表达水平明显升高，小鼠脾细胞NK细胞活性和CTL杀伤活性增强，肿瘤组织内可见大片坏死，并含有大量的CD4^ ，CD8^ 淋巴细胞浸润。结论．多价阳离子脂质体携带的IL-2基因和IL-12基因治疗可提高肿瘤局部和机体全身的抗肿瘤免疫应答，能加强放疗的抗肿瘤效果。     

EB病毒潜伏膜蛋白2A诱导细胞毒性T细胞抗鼻咽癌的体内外实验

目的观察EB病毒（Epstein—Barr virus，EBV）-潜伏膜蛋白2A（1atent membrane protein2A，LMP2A）转染人树突状细胞（dendritic cell，DC）诱导特异性细胞毒性T细胞（cytotoxicity T lymphocyte，CTL）的体外生物学特性；建立表达EBV—LMP2A的裸鼠鼻咽癌动物模型，探讨LMP2A特异性CTL在荷瘤鼠体内的抗肿瘤效应。方法分离人外周血单核细胞（pripheral blood mononuclear cell，PBMC），以粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（granulocyte—monocyte colony stimulating factor，GM—CSF）、白细胞介素4（interleukin-4，IL4）及肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor-α，TNF—α）诱导培养获得DC，荧光激活细胞分选仪（fluorescence activated cell sorter，FACS）检测成熟DC的表面分子表达。用LMP2A重组腺病毒转染成熟DC，将转染DC与自体PBMC混合培养，在白细胞介素2（interleukin-2，IL-2）作用下诱导针对LMP2A的特异性CTL，FACS检测CTL群体中阳性细胞的组成。将鼻咽癌CNE细胞接种BALB／c裸鼠，建立鼻咽癌动物模型；在裸鼠肿瘤局部注射LMP2A特异性CTL，观察治疗后移植瘤生长情况及病理变化。结果人外周血PBMC体外在GM—CSF、IL4、TNF—α诱导下获得典型形态及表型特征的成熟DC。FACS检测表明，以LMP2A重组腺病毒转染DC诱导的CTL细胞群体以CIM、CD8阳性细胞组成为主。在接种CNE细胞3周后建立表达EBV—LMP2A的裸鼠鼻咽癌动物模型；动物体内实验表明注射CTL的裸鼠肿瘤生长缓慢，体积明显小于对照组（P〈0．01）；病理检查显示肿瘤局部发生液化性坏死并有淋巴细胞浸润。结论人外周血单核细胞体外经细胞因子诱导，可生成具典型特征的成熟DC。利用LMP2A重组腺病毒将LMP2A基因转入DC，可在同一个体体外诱导出针对LMP2A的特异性CTL。CNE细胞接种裸鼠，可成功构建鼻咽癌动物模型；LMP2A特异性CTL在动物体内可明显抑制鼻咽癌肿瘤的生长，发挥有效的抗肿瘤作用。     

Limitations of adenovirus-mediated interleukin-2 gene therapy for oral cancer

OBJECTIVE/HYPOTHESIS: Adenoviral interleukin-2 (AdV-IL-2) gene therapy has previously not proven effective in treating established murine oral cancer. We hypothesize that the intratumoral level of IL-2 expression is a major limiting factor in treatment outcome. METHODS: A microscopic disease and established oral cancer murine model was used to test this hypothesis. IL-2 gene transfer was performed with a recombinant adenovirus vector. RESULTS: Tumor cells were transduced in vitro with AdV-IL-2 and subsequently implanted into the floor of the mouth in C3H/HeJ mice. IL-2 expression in vitro ranged from 990 to 1,050 pg/10(6) tumor cells. This microscopic disease treatment resulted in either complete tumor regression or a dramatic decrease in tumor progression. Cytolytic T-cell (CTL) assays demonstrated a predominance of CD8-specific, T-cell-mediated tumor killing. Reducing IL-2 expression by half with a mixture of 1:1 transduced to nontransduced tumor cells eliminated the antitumor effect and decreased the CTL response. These findings support the presence of a critical "threshold" of IL-2 expression. Adenovirus repurification and amplification allowed isolation of a twofold-higher-titer AdV-IL-2 vector. Treatment of established tumors with the higher-titer AdV-IL-2 at a new maximal dose of 1.4 x 10(9) plaque-forming units (pfu) increased in vivo IL-2 expression to 1,127 pg/10(6) cells and generated a significant antitumor response. Complete regression of established tumors, however, could not be achieved, and we noted a decrease in IL-2 expression well below the threshold at 1 week after treatment. Upon repeat maximal AdV-IL-2 injection in vivo, a greater antitumor effect and increased CTL response was seen, but also, 28% of the animals died of IL-2 toxicity. CONCLUSION: Although limited by expression and toxicity as a single-treatment strategy for established tumors, AdV-IL-2 gene therapy should be considered a potential component of combination therapy strategies.     

变应性鼻炎大鼠IL-35的表达及对辅助性T细胞免疫调节的影响

目的 探讨变应性鼻炎(AR)大鼠IL-35的表达及对辅助性T细胞免疫调节的影响。 方法 以卵清蛋白作为致敏原,建立AR大鼠模型。大鼠随机分为对照组、模型组、地塞米松组和IL-35干预组。分析比较大鼠过敏症状评分;采用RT-PCR分析鼻黏膜中IL-35、IFN-γ、IL-4和IL-17的mRNA表达情况;酶联免疫吸附法测定IL-35、IFN-γ、IL-4和IL-17在外周血的表达水平;流式细胞术检测外周血中Th1、Th2和Th17细胞百分比。 结果 IL-35干预可明显降低AR大鼠的症状积分;AR模型组IL-35和IFN-γ的mRNA表达及在外周血的表达均显著低于对照组,而在IL-35干预组的表达高于AR模型组,AR模型组IL-4和IL-17表达显著高于对照组,而在IL-35干预组的表达低于AR模型组(P<0.05);AR模型组Th1细胞百分比显著低于对照组,而在IL-35干预组Th1细胞百分比显著高于AR模型组,Th2和Th17细胞百分比显著高于对照组,IL-35干预组Th2和Th17细胞百分比显著低于AR模型组(P<0.05)。 结论 AR大鼠IL-35的表达降低,IL-35干预可通过上调IFN-γ和下调IL-4、IL-17表达降低炎症反应,机制可能与调节Th1、Th2和Th17平衡有关。     

Th-2 type cytokine receptors in allergic rhinitis and in response to topical steroids

Objectives: Th-2 type cytokine production (inter-leukin-4 [IL-4] and interleukin-5 [IL-5]) has been demonstrated to play a significant role in the pathophysiology of allergic rhinitis (AR), and the treatment of AR with topical corticosteroids has been shown to reduce the expression of Th-2 type cytokines in vivo. However, the contribution and expression of Th-2 type cytokine receptors in AR and their response to corticosteroid treatment remain to be clarified. Objectives of the current study are 1. To examine the expression of the cytokine IL-4 and IL-5 receptors (IL-4R and IL-5R) in a nasal allergen challenge model and to contrast this with the expression of the receptor for the Th-1 type cytokine, interferon-gamma receptor (IFN-γR), and 2. to examine the effects of pretreatment with topical corticosteroid before allergen challenge on the expression of these same receptors. Study Design: Randomized prospective study involving 14 ragweed-allergic subjects evenly divided between placebo and corticosteroid pretreatment. Methods: Immunocytochemistry (alkaline phosphatase-antial-kaline phosphatase labeling [APAAP] technique) was used to stain nasal biopsy specimens before and after allergen challenge. Antibodies used included anti-CD3, CD4, CD8, MBP, IL-4R, IL-5R, and IFN-γR. Results: Following allergen challenge, we observed a significant increase in the Th-2 type cytokine receptors (IL-4R and IL-5R; P < .05), as well as a significant decrease in the expression of the Th-1 type cytokine receptor (IFN-γR; P < .05). Pretreatment with topical corticosteroids before nasal allergen challenge resulted in decreased expression of IL-4R (P < .05) and IL-5R (P < .05) and increased expression of IFN-γR (P < .05). Further, IL-4R and IL-5R expression correlated with eosinophil infiltration in the tissues. Conclusions: We have demonstrated that in AR, cytokine receptors for IL-4, IL-5, and IFN-γ follow a similar pattern to their ligands. In addition, pretreatment with topical corticosteroids was shown to alter the cytokine receptor expression pattern from a Th-2 profile more toward a Th-1 profile. Laryngoscope, 108:1528–1533,1998     

喉鳞状细胞癌患者Th1/Th2转录因子与细胞因子的表达及其临床意义探讨

目的:从转录因子与细胞因子的角度分析喉鳞状细胞癌患者Th1/Th2细胞分化趋势,探讨T-bet/GATA3与p53的相关性,了解其与肿瘤转移之间的关系。方法:利用荧光定量PCR技术检测49例喉鳞状细胞癌患者(实验组)及30例正常人(正常对照组)外周血单个核细胞(PBMC)中T-bet、GATA3和IFN-γ、IL-4mR-NA的水平;应用免疫组织化学法检测实验组中p53的表达状况。结果:实验组T-bet、GATA3、IFN-γ、IL-4的表达率依次为42.86%(21/49)、71.43%(35/49)、26.53%(13/49)、63.27%(33/49)。定量PCR结果显示,实验组的T-bet和IFN-γ的表达明显低于正常对照组(P<0.05),而GATA3和IL-4的表达则明显高于正常对照组(P<0.05)。在p53阳性的患者中,T-bet的表达量较低,而GATA3的表达量较高,且T-bet和GATA3的表达与p53具有相关性。结论:喉鳞状细胞癌患者有明显的Th2漂移现象,且T-bet与GATA3可作为反映肿瘤转移的参考指标。     

低氧刺激鼻息肉黏膜上皮细胞炎性因子变化的初探

目的:研究低氧刺激慢性鼻窦炎伴鼻息肉（CRSwNP）与正常鼻黏膜上皮细胞炎性因子的变化与异同,探讨其在CRSwNP发病机制中的作用。方法:选择2015年6月至2018年1月在吉林大学中日联谊医院就诊的68例CRSwNP患者,其中男性36例,女性32例,年龄（45.2±12.5）岁（ xˉ±s,下同）,患者的...