组织蛋白酶B及其抑制剂Cystatin C在人腹主动脉瘤平滑肌细胞中的表达

目的 观察组织蛋白酶B及其抑制剂Cystatin C在人腹主动脉瘤平滑肌细胞中的表达情况,以探讨其在腹主动脉瘤发生发展中的作用.方法 对21例腹主动脉瘤患者和8例正常腹主动脉尸检者的腹主动脉血管标本行苏木精-伊红染色和免疫组织化学染色,观察组织蛋白酶B及其抑制剂Cystatin C对血管中膜的影响.结果 免疫组织化学染色可见组织蛋白酶B和Cystatin C分别在腹主动脉瘤、正常腹主动脉中免疫反应阳性,阳性定位于平滑肌细胞质;腹主动脉瘤平滑肌细胞中组织蛋白酶B阳性细胞平均光密度值明显增高,Cystatin C明显降低,与正常腹主动脉之间有显著差异(P<0.01).结论 腹主动脉瘤平滑肌细胞中组织蛋白酶B表达增强,Cystatin C表达下降,组织蛋白酶及其抑制剂Cystatin C间的不平衡可能引起动脉瘤壁细胞外基质广泛降解,从而导致腹主动脉瘤的发生和破裂.     

整合素β3在大鼠腹主动脉瘤中的表达及意义

目的 观察整合素β3在大鼠腹主动脉瘤模型中的表达情况,探讨其在腹主动脉瘤发病中的意义.方法 弹力蛋白酶灌注法构建大鼠腹主动脉瘤模型并测量腹主动脉直径,计算直径扩张度;HE染色观察主动脉病理改变;免疫组织化学技术和实时定量PCR技术分别从蛋白水平和基因水平检测主动脉组织中整合素β3的相对表达量.结果 腹主动脉瘤组主动脉扩张度明显高于生理盐水组和正常组(3.689±0.443比1.175±0.159和1),差异有统计学意义(P＜0.05);HE染色腹主动脉瘤组主动脉结构紊乱并有炎症细胞浸润;免疫组织化学结果显示整合素β3在腹主动脉瘤组、生理盐水组和正常组中的表达分别为0.33±0.07、0.20±0.06和0.19±0.07(P＜0.05);整合素β3mRNA在以上三组的相对表达量为36.23±5.65、1.14±0.30和1,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 整合素β3的高表达可能参与腹主动脉瘤的发生发展.     

α-SMA、CD68在人胸主动脉瘤和腹主动脉瘤中表达的比较

目的通过对胸主动脉瘤（TAA）、腹主动脉瘤（AAA）和正常主动脉的研究，探讨TAA和AAA的病理学特点。方法收集A从标本17例、TAA标本11例和正常主动脉标本6例，进行α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、CD68免疫组化技术染色，研究血管壁改变情况。结果TAA和从A在病变类型、血管平滑肌细胞（VSMC）和巨噬细胞的分布方面基本相同，TAA和AAA病变处巨噬细胞增多，VSMC数量减少。但是与TAA相比，AAA常合并有AS病变和更多的巨噬细胞浸润。结论TAA和AAA病理特点大体相同，但在某些量化指标上存在差异。     

组织蛋白酶B在人腹主动脉瘤中的表达及其意义

目的:研究组织蛋白酶B在人腹主动脉瘤(AAA)中的表达情况,以探讨其在AAA发生发展中的作用。方法:对17例AAA患者(AAA组)和6例正常腹主动脉尸体供肾者(正常腹主动脉组)的腹主动血管标本行苏木精-伊红染色、Van Gieson法染色和免疫组化技术染色,研究组织蛋白酶B对血管中膜的改变情况。结果:与正常主动脉组相比,在Van Gieson法染色中可见AAA组胶原含量有不同程度的增加。α-平滑肌肌动蛋白在AAA组和正常主动脉组中表达的平均吸收度分别是0.2634±0.0530和0.3335±0.0549,其表达水平明显降低(P<0.01)。组织蛋白酶B的平均吸收度2组分别为0.3465±0.0479和0.1306±0.0579(P<0.01)。结论:AAA患者血管平滑肌细胞表达的组织蛋白酶B水平增加,参与了血管壁的破坏和重建过程。     

CD68与α-平滑肌肌动蛋白在老年冠状动脉粥样硬化病变中的表达及意义

目的:探讨CD68、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在老年人冠状动脉粥样硬化(AS)病变和弥漫性内膜增厚(DIT)中的表达,及其与AS病变类型、管腔狭窄之间的关系。方法:选用53例尸检病例的312份冠状动脉组织标本,光镜下诊断DIT和AS病变及其类型,用免疫组织化学和Scion图像软件系统,检测和计算AS病变中CD68-阳性巨噬细胞数和α-SMA阳性面积(%)、冠状动脉管腔狭窄程度、脂质坏死核心面积(%)和钙化基质面积(%)。结果:①CD68阳性巨噬细胞随着病变进展和管腔狭窄程度的加重而增多,呈正相关(r=0.351、0.197,P<0.01),而α-SMA阳性面积随着病变进展和管腔狭窄程度的加重而减少,呈负相关(r=-0.494、-0.362,P<0.01),两者在AS早期和进展期均差异有统计学意义(均P<0.05);②CD68阳性巨噬细胞、α-SMA阳性面积在AS不同病变类型、管腔狭窄程度以及胆固醇分组之间均差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:老年人冠状AS病变内膜CD68阳性巨噬细胞增多及α-SMA阳性面积减少自始至终促进病变进展。     

葫芦素B对压力负荷诱导的心肌纤维化的作用机制

目的探讨葫芦素B对压力负荷诱导的心肌纤维化的作用机制。方法选择C57小鼠60只,随机分为假手术组、葫芦素B组、结扎术组(主动脉结扎术)、联合组(葫芦素B+主动脉结扎术),每组15只。术后1周给予葫芦素B灌胃处理[0.2mg/(kg·2d),持续到术后4周],主动脉结扎术诱导心肌纤维化模型。用免疫组织化学方法检测心脏微血管密度;免疫荧光检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;运用免疫荧光染色和蛋白免疫印迹法检测CD31、CD34、α-SMA和波形蛋白表达和内皮间质转化程度。结果假手术组和葫芦素B组术后4周心脏微血管密度、α-SMA,波形蛋白、CD31、CD34表达无明显变化(P0.05)。与假手术组比较,结扎术组术后4周心脏微血管密度、CD31、CD34表达明显下调,α-SMA、波形蛋白表达明显增加(P0.05)。联合组术后4周心脏微血管密度、CD31、CD34表达明显高于结扎术组(4.31±1.06 vs 2.24±0.78,0.22±0.04 vs 0.05±0.02,0.12±0.02 vs0.04±0.01,P0.05),α-SMA、波形蛋白表达明显低于结扎术组(0.31±0.03 vs 0.98±0.04,0.05±0.02 vs 0.53±0.07,P0.05)。结论葫芦素B可以通过抑制内皮向间质转化改善压力负荷诱导的心肌纤维化。     

CD137-CD137配体对巨噬细胞基质金属蛋白酶9及血管平滑肌细胞钙化形成的影响

目的探讨CD137-CD137配体(CD137L)信号是否通过调控巨噬细胞基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达影响血管平滑肌细胞(VSMC)钙化形成。方法采用巯基乙酸盐腹腔灌洗法获取C57BL/6J小鼠腹腔巨噬细胞(PM),采用组织块贴壁法取3~6代胸主动脉VSMC分为对照组、共培养组、CD137激动组和MMP-9抑制组(n=3)。对照组用重组CD137L蛋白干预VSMC,共培养组用PM和VSMC共培养,CD137激动组和MMP-9抑制组分别用重组CD137L蛋白和MMP-9抑制剂干预PM后,与VSMC共培养,再加入重组CD137蛋白(10μg/ml)干预。采用Western blot检测各组钙化相关的骨桥蛋白(OPN)、Runt相关转录因子2(Runx-2)表达,微板法检测钙离子浓度和碱性磷酸酶(ALP)活性,Von Kossa和茜素红染色检测各组细胞钙化程度。结果CD137激动组VSMC中OPN和Runx-2蛋白表达、钙离子浓度及ALP活性明显高于共培养组(P<0.01),而MMP-9抑制组VSMC中OPN和Runx-2蛋白表达、钙离子浓度及ALP活性明显低于CD137激动组,差异有统计学意义[0.25±0.27 vs 2.12±0.34,0.30±0.32 vs 2.63±0.41,(1.92±0.09)mmol/g vs(4.99±0.37)mmol/g,(1.11±0.50)KU/g vs(2.63±0.04)KU/g,P<0.01]。共培养组VSMC中OPN和Runx-2蛋白表达、钙离子浓度及ALP活性与对照组比较,无统计学意义(P>0.05)。CD137激动组茜素红染色红色颗粒物质沉积和Von Kossa染色黑色颗粒物质沉积明显多于对照组和共培养组;MMP-9抑制组钙化程度显著降低;对照组和共培养组钙化程度则无明显差异。结论CD137-CD137L信号可能通过调控巨噬细胞MMP-9表达影响VSMC钙化形成。     

肾组织核心蛋白聚糖和转化生长因子-β1的表达与肾间质纤维化的关系

目的探讨转化生长因子β 1(TGF-β1)及核心蛋白聚糖(DCN)表达与肾间质纤维化之间的关系,及α- 平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和单核巨噬细胞浸润在肾脏疾病中的变化. 方法收集30例不同肾脏病肾活检患者的临床和病理资料,应用免疫组织化学染色方法,检测TGF-β1及DCN在肾间质内的表达,以及α-SMA和CD 68的表达.并分析它们的表达与肾间质纤维化之间的关系. 结果肾间质病变严重程度与血清肌酐、肾内TGF-β1和DCN表达程度成正相关,与内生肌酐清除率成负相关.肾间质浸润的巨噬细胞主要见于间质大量炎性细胞浸润的部位及纤维化间质和病变肾小球周围;α-SMA表达可见于血管壁、纤维化间质、增厚的肾小球囊壁或病变肾小球周围以及变性萎缩的肾小管管周,它们的表达与肾间质纤维化程度呈正相关. 结论随着肾间质纤维化程度的加重,DCN和 TGF-β1的表达逐渐增加,同时伴有间质单核巨噬细胞的浸润和间质细胞的激活,参与肾间质纤维化的进程.     

腹主动脉瘤血管平滑肌细胞凋亡和自噬研究

目的探讨血管平滑肌细胞(SMC)凋亡和自噬与腹主动脉瘤(AAA)发病的关系。方法采用原位末端DNA标记(TUNEL)技术观察AAA和人正常主动脉组织中SMC凋亡的情况,并用免疫组织化学分析其中LC3的蛋白表达。提取AAA和正常主动脉组织RNA,采用RT-PCR方法检测其中与自噬相关的基因Beclin1、Atg4b、Bnip3、Vps34的表达。结果 AAA组织中凋亡的SMC明显高于正常主动脉组织(P0.05);LC3蛋白在AAA中的表达高于正常主动脉组织(P0.05);AAA中Beclin1、Atg4b、Bnip3、Vps34表达水平明显高于正常主动脉组织(P0.05)。结论 SMC凋亡和自噬在AAA的发病中起重要作用。     

老年退行性主动脉瓣中巨噬细胞标志分子CD68与ACAT1、ABCA1、促炎因子表达的相关性

目的:研究胆固醇相关因子脂酰辅酶A:胆固醇酯酰转移酶1(ACAT1)、ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)和炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、MCP1、IL-10在老年退行性主动脉瓣疾病(DAVD)中的表达。方法:收集因退行性主动脉瓣狭窄而行手术切除的严重钙化主动脉瓣标本80例,经HE和免疫组织化学染色,观察退行性主动脉瓣组织学改变和ACAT1、ABCA1表达特点,RT-PCR检测组织中胆固醇相关基因CD68、ACAT1、ABCA1和炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、MCP1、IL-10基因的表达,单元线性回归分析巨噬细胞标志分子CD68与ACAT1、ABCA1和TNF-α、IL-1β、MCP1、IL-10表达的相关性。结果:与正常主动脉瓣比较,DAVD增厚,结节性钙化灶存在,增生纤维组织排列紊乱使瓣膜失去原有结构,钙化周围发现巨噬细胞和其他炎性细胞、泡沫细胞、新生血管形成;免疫组织化学染色示:正常主动脉瓣未见巨噬细胞,而DAVD大量巨噬细胞浸润;RT-PCR检测显示,与正常主动脉瓣相比,DAVD中ACAT1和ABCA1的表达增高(P0.05)。正常主动脉瓣无CD68表达,DAVD表达CD68。单元线性回归分析表明,CD68与ACAT1(r=-0.83,P0.05),ABCA1(r=-0.89,P0.05)表达正相关。与正常主动脉瓣相比,DAVD中TNF-α、IL-1β、MCP1的表达增高,而IL-10表达降低(P0.05)。单元线性回归分析表明,CD68表达与TNF-α(r=0.87,P0.05)、IL-1β(r=0.92,P0.05)、MCP1(r=0.87,P0.05)呈正相关,与IL-10(r=-0.64,P0.05)负相关。结论:在DAVD病变中,巨噬细胞浸润的同时伴随着ABCA1、ACAT1和促炎因子表达增加,巨噬细胞标志CD68与胆固醇相关基因ABCA1、ACAT1和促炎因子正相关。     

缬沙坦对心力衰竭家兔钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ的影响

目的 探讨家兔慢性心力衰竭(心衰)时心肌钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)蛋白表达及活性的改变及血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂缬沙坦长期干预的意义.方法 27只家兔随机分为3组,假手术组、心衰组和缬沙坦组各9只,通过超容量负荷联合压力负荷建立家兔心衰模型,于术后7周观察左心室结构、血液动力学的变化及CaMK Ⅱ的表达和活性的改变.结果 与假手术组比较,心衰组左室重量指数(LVMI)、左窒舒张末压显著升高(P＜0.05),左室短轴缩短率及左室射血分数明显降低(P＜0.05);与心衰组比较,缬沙坦组左室重量指数、左室舒张未压显著降低(P＜0.05),左室短轴缩短率及左室射血分数明显升高(P＜0.05);心衰组CaMK Ⅱ蛋白表达及活性显著高于假手术组(P＜0.05);缬沙坦组CaMKⅡ蛋白表达及活性显著低于心衰组(P＜0.05).结论 缬沙坦长期干预心衰,能够改善心脏舒缩功能,可能与其降低CaMK Ⅱ蛋白表达及活性有关.     

丁基苯酞对血管性痴呆大鼠记忆及海马Bcl-2、Bax的影响

目的 研究丁基苯酞(NBP)对血管性痴呆(VD)大鼠记忆、海马病理变化及抗凋亡蛋白(Bcl-2)和促凋亡蛋白(Bax)蛋白表达的影响.方法 采用永久性结扎双侧颈总动脉方法制备VD大鼠模型.SD大鼠被随机分成假手术组、VD模型组、NBP治疗组、尼莫地平治疗组.应用Morris水迷宫检测大鼠记忆能力,苏术精-伊红(HE)染色观察海马神经元形态,免疫组化检测海马Bcl-2和Bax的表达.结果 VD模型组与假手术组大鼠比较记忆能力显著下降,逃避潜伏期分别为(78.79±21.93) s与(16.96±7.44) s (P＜0.05),海马神经元病理改变严重,免疫阳性细胞数量显著增加,其中Bax变化更为显著 (43.00±6.72与6.00±1.29,P＜0.05),Bcl-2与Bax的比值较对照组明显降低;NBP治疗组与模型组比较记忆能力显著改善,逃避潜伏期分别为(47.13±21.75) s与(78.79±21.93) s (P＜0.05),海马神经元病理形态明显改善,Bcl-2免疫阳性细胞数显著增多(33.14±8.05与21.81±4.97,P＜0.05),Bax免疫阳性细胞数显著减少(32.93±4.99与43.00±6.72,P＜0.05).NBP治疗组与尼莫地平治疗组之间比较,各项指标均无显著差异 (P＞0.05).结论 NBP能改善VD大鼠记忆能力,抑制海马细胞凋亡,对VD大鼠有一定的治疗作用.

Abstract：

Objective To study the effects of butylphthalide (NBP) on memory and apoptosis related protein as well as neuronal pathology in hippocampus of vascular dementia (VD) rats. Methods VD model was generated by the permanent occlusion of bilateral common carotid arteries in SD rats to produce the forebran ischemia. Male SD rats were randomly allocated into sham-operation group, VD model group, NBP treatment group and nimodipine treatment group. The function of memory was tested by the Morris water maze. The neuronal pathological changes and the expression of Bcl-2 and Bax proteins in the hippocampus were observed with hematoxylin-eosin (HE) staining and immunohistochemical staining, respectively. Results The impaired memory of VD rats was proved by the lengthened mean escape latency [(78.79±21.93)vs.(16.96±7.44),P＜0.05] and the neuron in hippocampus was severely damaged. The decveased ratio of Bcl-2/Bax resulted from the overexpression of Bax proteins in VD model group versus the sham-operation group [(43.00±6.72)vs.(6.00±1.29),P＜0.05]. The treatment of NBP notably improved the memory function of VD rats and reduced the hippocampus pathological injury (P＜0.05). The expression of Bcl-2 protein raised [(33.14±8.05)vs.(21.81±4.97),P＜0.05] along with reduced expression of Bax protein [(32.93±4.99)vs.(43.00±6.72),P＜0.05] after NBP treatment. However, there was no significant difference in the treatment effects between nimodipine and NBP group (P＞0.05). Conclusions NBP treatment could improve memory of VD rats and reduce the hippocampus pathological lesion by inhibiting the apoptosis related protein.     

超声评价辛伐他汀的抗兔动脉粥样硬化作用及其机制的探讨

目的应用彩色多普勒超声及声学密度定量技术评价辛伐他汀对兔腹主动脉粥样硬化(AS)的作用,并分析辛伐他汀对AS斑块增殖细胞核抗原(PCNA)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响。方法 30只日本大耳白兔平均随机分为3组:健康对照组(A组),AS模型组(B组),辛伐他汀治疗组(C组)。在食物中加入高脂饲料建立兔动脉粥样硬化模型。16周末测定血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)。超声检测腹主动脉壁结构及血流,测量动脉内膜-中层厚度(IMT)、收缩期血流峰值速度(Vp),同时定量测定动脉壁声学密度值,与病理形态学检查结果相对照,并以免疫组织化学方法分析PCNA和bFGF在斑块中的表达。结果 16周末B、C组血清TC、TG、LDL-C较A组显著增高,C组较B组减低(P<0.05)。超声检查可见B组、C组腹主动脉AS改变,与病理形态学结果一致,IMT较A组显著增高,C组IMT为(0.51±0.11)mm较B组(0.68±0.13)mm减低(P<0.05),C组动脉内中膜声学密度值、内中膜校正回声强度值较B组减低[(32.73±2.46)dB比(42.33±1.84)dB]、(1.25±0.11)比(1.67±0.08)(P<0.05)。C组bFGF、PCNA表达较B组减低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论辛伐他汀不仅可以降低血脂水平,还能够减少斑块中bFGF、PCNA表达。超声显像及声学密度定量检测能够准确评价动脉壁形态学及声学密度特征,为临床评估AS进展及消退提供依据。     

二氧化碳气腹时间对老年腹腔镜胆囊切除术患者凝血-纤溶和血管内皮细胞活性的影响

目的 观察二氧化碳(CO2)气腹时间对老年人腹腔镜胆囊切除术(LC)患者凝血-纤溶和血管内皮细胞活性的影响.方法 胆石症择期行LC患者45例,年龄＞60岁,术后根据气腹持续时间分组:气腹时间≤60 min组21例;气腹时间＞60 min组24例.于入院检查时(术前)、术毕、术后第1、2、3天抽取静脉血检测凝血酶原时间(PT)、激活部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原片段1+2(F1+2)浓度、抗凝血酶-Ⅲ(AT-Ⅲ)活性、纤维蛋白原(Fib)浓度、组织纤溶酶原激活物(t-PA)浓度、纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)浓度、D-二聚体(D-D)浓度、血管性血友病因子(vWF)活性.结果 (1)凝血指标:术后第3天,＞60 min组的,F1+2为 (1.60±0.26) μg/L,高于≤60 min组的(1.32±0.24) μg/L(P＜0.05);AT-Ⅲ为(84.82±20.21)%,低于≤60 min组的(97.49±16.87)%(P＜0.05);术后第2、3天的Fib分别为(3.87±0.62)、(3.98±0.77)g/L,高于≤60 min组的 (3.42±0.72)、(3.42±0.63)g/L(P＜0.05).(2)纤溶-抗纤溶指标:＞60 min组术后第2 、3天的PAI-1为(33.93±10.42)、(32.90±11.25) μg/L高于≤60 min组的(26.69±9.49)、(26.31±7.06)μg/L(P＜0.05).(3)血管内皮细胞活性指标:＞60 min组术后第2 、3天的vWF为(174.53±44.03)%、(176.31±47.6)%,高于≤60 min组的(134.37±37.74)%、(131.21±36.34)% (P＜0.05).结论 老年LC患者,术后有明显的凝血-纤溶激活和血管内膜损伤;随气腹时间延长,凝血激活和纤溶抑制程度高,凝血-纤溶相对不平衡,血管内膜损伤更明显,可能增加血栓形成风险.

Abstract：

Objective To observe the effect of duration of carbon dioxide pneumoperitoneum on coagulation, fibrinolysis and endothelial activation in elderly patients undergoing laparoscopic cholecystectomy (LC). Methods The 45 elderly patients with cholelithiasis scheduled for LC, aged over 60 yeas, were placed in different groups respectively after surgery according to the duration of pneumoperitoneum. The duration of pneumoperitoneum was ≤60 minutes in group A (n=21),and more than 60 minutes in group B (n=24). Venous blood samples were taken on admission (baseline), at the end of surgery, the 1st, 2nd and 3rd day after surgery for determination of prothrombin time (PT), activated partial thromboplastin time (APTT), prothrombin fragment F1+2 (F1+2), antithrombin 3 (AT-Ⅲ activity), fibrinogen (Fib), tissue plasminogen activator (t-PA), plasminogen activator inhibitor type-1 (PAI-1), D-dimer (D-D), von Willebrand factor (vWF activity). Results Concerning the coagulation activation, at the 3rd postoperative day, the level of F1+2 was significantly higher in group B than in group A [(1.60±0.26) μg/L vs. (1.32±0.24) μg/L, P＜0.05]; AT-III was significantly higher in group B than in group A [(84.82%±20.21%) vs. (97.49%±16.87%), P＜0.05]. At the 2nd and 3rd postoperative day, the levels of Fib were significantly higher in group B than in group A [(3.87±0.62) g/L vs. (3.42±0.72) g/L, (3.98±0.77) g/L vs. (3.42±0.63) g/L, respectively, P＜0.05]. Concerning fibrinolysis, But at the 2nd and 3rd postoperative day, the level of PAI-1 was significantly higher in group B than in group A [(33.93±10.42) μg/L vs. (26.69±9.49) μg/L, (32.90±11.25) μg/L vs. (26.31±7.06) μg/L respectively, P＜0.05]. Concerning endothelial activation, at the 2nd and 3rd postoperative day, vWF was significantly higher in group B than in group A [(174.53%±44.03%) vs. (134.37%±37.74%), (176.31%±47.6%) vs. (131.21%±36.34%), respectively, P＜0.05]. Conclusions Marked activations of coagulation-fibrinolysis and endothelial activation are observed postoperatively in elderly patients undergoing laparoscopic cholecystectomy. Along with prolonged duration of pneumoperitoneum, more pronounced alterations of increased coagulation, reduced fibrinolysis and endothelial activation are observed, which could constitute an imbalanced situation of coagulation-fibrinolysis and increases the risk of venous thrombosis.     

氯化锂通过上调焦磷酸水平抑制血管平滑肌细胞钙化

目的探讨氯化锂对血管平滑肌细胞钙化的影响及其可能的作用机制。方法体外培养人主动脉血管平滑肌细胞,用钙化培养基(无机磷浓度为3 mmol/L)建立平滑肌细胞钙化模型。药物处理组用氯化锂(10 mmol/L)预处理细胞4 h后加入3 mmol/L的无机磷,继续培养细胞数天后用茜素红染色检测细胞钙盐沉积水平,同时应用焦磷酸偶联酶反应底物烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)消耗法,酶标仪(OD340)检测细胞外焦磷酸的分泌;实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)和免疫印迹法(Western blot)检测细胞中ankh基因的表达;采用慢病毒感染人主动脉平滑肌细胞的方法,建立对照细胞组和ankh敲低的实验细胞组,并观察其对细胞钙化的影响。结果高磷细胞组钙化检测值为(65.00±2.11)ng/g,较对照细胞组(12.39±0.38)ng/g钙化水平明显升高(P<0.01)。氯化锂预处理细胞的钙化检测值为(24.92±1.87)ng/g,与高磷对照组(60.94±4.51)ng/g比较能显著抑制高磷诱导的血管平滑肌细胞钙化(P<0.01);氯化锂预处理明显上调细胞外液中焦磷酸的含量,基础条件下预处理组为(51.70±7.26)×10^-3 mmol/g,对照组为(28.71±2.55)×10^-3mmol/g(P<0.01);高磷刺激下预处理组为(34.35±4.27)×10^-3mmol/g,对照组为(20.89±4.93)×10^-3mmol/g(P<0.05),同时氯化锂预处理显著升高细胞ankh表达水平(P<0.01);而敲低ankh使无机磷诱导的血管平滑肌细胞钙化程度显著加重,敲低ankh细胞钙化检测值为(71.73±2.45)ng/g,对照组为(56.19±3.59)ng/g(P<0.01)。结论氯化锂通过上调平滑肌ANKH的表达,升高细胞外液中的焦磷酸水平,抑制高磷诱导下血管平滑肌细胞的钙化。     

老年2型糖尿病患者动态血糖监测分析

目的 探讨老年2型糖尿病患者的动态血糖波动特点.方法 对老年2型糖尿病患者(老年组)92例和中青年2型糖尿病患者(中青年组)58例进行动态血糖监测,对比分析两组患者血糖谱特征及老年不同糖化血红蛋白(HbA1c)水平糖尿病患者的血糖谱特征.结果 (1)老年组与中青年组比较,血糖波动系数(BGFC)增大[(2.68±1.00)mmol/L对(2.12±0.74) mmol/L,t=-3.691,P＜0.001];餐后血糖漂移幅度(PPGE)增大,早餐后分别为 ( 5.96±2.47) mmol/L对(5.11±2.44) mmol/L(t=-2.058,P＜0.05),晚餐后分别为(5.17±2.15) mmol/L对 (4.16±2.28) mmol/L(t=-2.730,P＜0.01);餐后血糖达峰时间延长,早餐后(112.5±29.7) min对(97.0±27.2) min(t=-3.225,P＜0.01),中餐后(140.0±39.7)min对 (118.1±42.6) min(t=-3.195,P＜0.01);低血糖发生频率增加(26.3%对5.5%,P＜0.05);最大血糖漂移幅度(LAGE)增大,分别为(9.66±2.48) mmol/L对(8.40±3.13) mmol/L(t=-2.720,P＜0.01);(2)老年组患者随HbA1c下降,低血糖发生率增加(P＜0.05);随 HbA1c升高,血糖波动幅度增大;(3)HbA1c与空腹血糖(FBG)、日平均血糖(MBG)、高血糖时间比(PT7.8、PT11.1)、最低血糖(LBG)、最高血糖(HBG)、BGFC、PPGE、LAGE均正相关(r=0.899～0.289,均P＜0.001);逐步回归分析显示,MBG、FBG、PT7.8与HbA1c独立相关(校正的R2=0.807,P＜0.05).结论 老年2型糖尿病患者血糖波动幅度大,易发生餐后高血糖和夜间低血糖,动态血糖监测能较详细地显示患者的血糖水平及波动特征.

Abstract：

Objective To investigate the characteristics of the blood glucose fluctuation in elderly patients with type 2 diabetes mellitus (T2DM). Methods The 92 elderly patients with T2DM (the elderly group) and 58 young and middle-aged patients with T2DM (the non-elderly group) were monitored using the continuous glucose monitoring system(CGMS). The characteristics of glucose profiles of the two different age groups, and of the different glycosylated hemoglobin (HbA1c) level groups in the elderly were comparatively analyzed. Results (1)There was no significant difference in HbA1c level between the elderly group and the non-elderly group. Compared with the non-elderly group, the elderly group showed the increases in blood glucose fluctuant coefficient [BGFC, (2.68±1.00) mmol/L vs. (2.12±0.74) mmol/L, t=-3.691, P＜0.001], in postprandial glucose excursion (PPGE) of breakfast and supper [(5.96±2.47) mmol/L vs. (5.11±2.44) mmol/L, t=-2.058, P＜0.05; (5.17±2.15) mmol/L vs. (4.16±2.28) mmol/L, t=-2.730, P＜0.01], in the time to postprandial glucose peak of breakfast and lunch [(112.5±29.7) min vs. (97.0±27.2) min, t=-3.225, P＜0.01; (140.0±39.7) min vs. (118.1±42.6) min, t=-3.195, P＜0.01], in the frequency of hypoglycemia (26.3% vs. 5.5%, P＜0.05), and showed the largest amplitude of glycemic excursions [LAGE, (9.66±2.48) mmol/L vs.(8.40±3.13) mmol/L, t=-2.720, P＜0.01]. (2)In the elderly, along with decreased HbA1c, the incidence of hypoglycaemia increased (P＜0.05); And along with increased HbA1c, the amplitude of blood glucose fluctuation increased. There were significant differences in BGFC, PPGE of breakfast and lunch, and LAGE among different HbA1c level groups (P＜0.01, P＜0.05, P＜0.05, P＜0.001). (3)HbA1c was positively correlated with FBG, mean blood glucose (MBG), percentage of time at glycemia (PT7.8, PT11.1), the lowest blood glucose (LBG), the highest blood glucose (HBG), BGFC, PPGE and LAGE (r=0.899-0.289, all P＜0.001). Multiple stepwise regression analysis indicated that MBG, FBG and PT7.8 was the independent influential factor of HbA1c (adjusted R2=0.807, P＜0.05). Conclusions The elderly patients with T2DM are at a particularly high risk for postprandial hyperglycemia and nocturnal hypoglycemic episodes, CGMS could show glucose fluctuation characters of T2DM patients diurnally, and provide a clinical basis for reasonable therapy.     

降钙素原测定指导老年人呼吸机相关性肺炎抗生素治疗的使用价值

目的 探讨在老年人呼吸机相关性肺炎(VAP)治疗中用降钙素原(PCT)水平来指导临床抗生素使用的价值.方法 50例老年VAP患者分为常规治疗组与PCT指导治疗组.常规治疗组按常规治疗方法使用抗生素进行治疗,PCT组通过检测血清PCT浓度来指导抗生素使用.比较两组抗生素使用时间、使用率以及抗生素治疗结束后两组患者炎性指标[白细胞、中性粒细胞、C-反应蛋白(CRP)]和临床肺部感染积分(CPIS)之间的差异.结果 两组经治疗后,PCT组患者白细胞、中性粒细胞、CRP[(8.9±3.5)×109/L、0.62±0.04、(18.7±8.5)mg/L]与常规组[(9.4±3.7)×109/L、0.60±0.04、(21.6±6.0)mg/L]差异无统计学意义(t值分别为0.47、1.84、1.37,均P>0.05),但是PCT组CPIS[(4.0±1.4)分]明显低于常规治疗组[(4.7±1.0)分],差异有统计学意义(t=2.18,P<0.05).两组在治疗前后,各炎性指标中除白细胞计数外,中性粒细胞、CRP及CPIS均较治疗前明显降低;PCT组PCT值也较治疗前降低[(1.7±0.7)mg/L至(0.5±0.9)mg/L].同时,在抗生素使用时间上,常规组[(8.72±1.32)d]与PCT组[(5.17±0.72)d]相比,差异有统计学意义(t=11.96,P<0.01);抗生素使用率分别为95.2%和55.2%,差异有统计学意义(χ2=12.41,P<0.01),PCT组抗生素使用率明显低于常规组.结论 在老年VAP患者治疗中参考PCT水平用药,可以在达到更好治疗效果的同时减少抗生素的使用.     

急性坏死性胰腺炎大鼠肠道Cajal间质细胞以及c-kit mRNA表达的改变

目的 检测急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠小肠组织中Cajal间质细胞(ICC)的改变,探讨其参与胃肠道动力障碍的机制.方法 24只雄性SD大鼠按数字表法随机分为ANP组和对照组,各12只.采用胆总管逆行注射5%牛磺胆酸钠建立ANP大鼠模型.术后23 h自胃管注入美蓝1.0 ml,1 h后处死大鼠,测量幽门至蓝染距离,计算活体肠道推进率;胰腺和小肠组织常规病理检查;应用免疫组化和实时PCR法检测ICC标志物酪氨酸激酶(c-kit)蛋白及mRNA的表达;应用透射电镜观察ICC超微结构改变.结果 ANP组胰腺腺泡细胞小叶结构破坏,片状出血,灶性坏死,大量炎症细胞浸润;小肠黏膜水肿、糜烂,炎症细胞浸润.ANP组肠道推进率为(41.55±3.85)%,较对照组的(68.66±2.66)%显著下降(P＜0.05);c-kit阳性细胞数较对照组减少(56.11±5.09对88.47±4.49,P＜0.05);c-kit mRNA表达亦较对照组下降(0.64±0.33对1.29±0.91,P＜0.05).ANP组ICC的线粒体空泡变,周围突起减少,与平滑肌细胞之间的连接结构不清.结论 ICC减少和超微结构改变是ANP时胃肠道动力障碍的重要机制之一,而ICC的这些改变可能是由于c-kit基因表达下降所致.     

缬沙坦联合氨氯地平或氢氯噻嗪对老年高血压患者血压变异性的影响

目的 比较缬沙坦联合氨氯地平或氢氯噻嗪对老年高血压患者血压变异性及一氧化氮、内皮素的影响.方法选取61例2、3级老年高血压患者,随机分为两组,分别给予缬沙坦+氨氯地平或缬沙坦+氢氯噻嗪行降压治疗,观察入选时、治疗第8周和第16周各种相关指示的变化.人选时检测血脂、空腹血糖、血尿酸,试验各个阶段监测24 h动态血压,检测血浆一氧化氮、内皮素水平.结果在患者入选时、治疗第8周和第16周三个时间点,缬沙坦+氨氯地平组和缬沙坦+氢氯噻嗪组24 h血压及白昼血压比较差异无统计学意义.治疗第16周,缬沙坦+氨氯地平组晨峰收缩压较缬沙坦+氢氯嚷嗪组明显降低[(22.6±8.8)mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)比(26.3±13.7)mm Hg,P＜0.05];缬沙坦+氨氯地平组及缬沙坦+氢氯噻嗪组24 h收缩压变异性(SBPV)进行性降低[缬沙坦+氨氯地平组:(12.5±2.8)mm Hg比(10.2 ±2.2)mm Hg比(8.8±1.6)mm Hg,P＜0.01;缬沙坦±氢氯噻嗪组:(12.5±2.5)mmHg比(10.7±2.2)mm Hg比(9.6±2.0)mmHg,P＜0.01],缬沙坦+氨氯地平组及缬沙坦+氢氯噻嗪组白昼SBPV明显降低[缬沙坦+氨氯地平组:(12.2±3.0)mm Hg比(10.1±2.3)mm Hg比(8.4±1.9)mm Hg,P＜0.01;缬沙坦+氢氯噻嗪组:(11.8±2.7)mm Hg比(10.4±1.9)mm Hg比(9.6±2.2)mm Hg,P＜0.01],缬沙坦+氨氯地平组24 h舒张压变异性(DBPV)显著降低[(15.5±3.4)mm Hg比(13.0±3.5)mm Hg比(12.3±2.5)mm Hg,P＜0.01],缬沙坦+氢氯噻嗪组24 h DBPV无显著性变化;缬沙坦+氨氯地平组第16周白昼SBPV低于缬沙坦+氢氯噻嗪组[(8.4±1.9)mm Hg比(9.6 ±2.2)mm Hg,p＜0.05],缬沙坦+氨氯地平第8周、第16周的24 h DBPV、白昼DBPV低于缬沙坦+氢氯噻嗪组(P ＜0.01～0.05);缬沙坦+氨氯地平组一氧化氮进行性升高[(27.3±13.6)μmol/L比(47.2±16.3)μmol/L比(69.5±18.9)μmol/L,P＜0.01]、内皮素进行性降低[(45.3±8.0)ng/L比(37.4±3.9)ng/L比(34.2±4.4)ng/L,P＜0.01];缬沙坦+氢氯噻嗪组一氧化氮进行性升高[(33.5±13.9)μmol/L 比(49.7±21.9)μmol/L比(66.7 ±24.7)μmol/L,P＜0.01]、内皮素显著降低[(46.6±10.4)ng/L比(37.0±5.4)ng/L比(36.1±8.2)ng/L,P＜0.01].治疗第8周,缬沙坦+氨氯地平组收缩压变异性的降幅与一氧化氮的升幅有相关性(r =0.401,P=0.025).结论缬沙坦联合氨氯地平或氢氯噻嗪均能降低老年高血压患者血压变异性、改善血管内皮功能,缬沙坦联合氨氯地平可能更适合于老年高血压患者.