吗啡依赖和戒断大鼠脊髓内NA能神经元变化的研究

目的探讨慢性吗啡处理及戒断后大鼠脊髓内NA能神经元的形态变化.方法24只雄性SD大鼠随机分为吗啡依赖组、吗啡戒断组和生理盐水对照组,每组8只.依赖组大鼠以腹腔注射吗啡方法建立吗啡依赖模型.戒断组大鼠在依赖模型建立后于腹腔注射纳洛酮5 mg/kg诱导戒断症状,对照组大鼠注射等量生理盐水.注射24 h后取脑和脊髓作冰冻切片.利用免疫组化方法检测各组大鼠脊髓及LC内NA能神经元的变化.结果正常组LC内DBH阳性细胞数为(98±17),吗啡依赖组和戒断组LC内DBH阳性细胞数分别为(212±20)和(229±27),明显高于正常组(P＜0.01),但平均灰度值无明显差异.慢性吗啡处理后脊髓前角DBH阳性神经元数量增多,染色加深,后角和侧角新增加大量阳性神经元,吗啡依赖组和戒断组DBH阳性神经元增加具有极显著意义(P＜0.01).结论慢性吗啡处理和戒断引起LC和脊髓内NA能神经元增多,提示NA与吗啡依赖和戒断的形成有关,其可能是吗啡依赖及戒断的分子机制之一.     

中枢去甲肾上腺素能神经元在脑水肿发生过程中的作用实验研究

为探讨中枢去甲肾上腺素（ＮＥ）能神经元兴奋对脑水肿的影响，作者观察了刺激或损毁大鼠右侧蓝斑后，同侧大脑半球脑水含量的变化．结果，ＮＥ能神经元兴奋时，同侧半球脑皮质神经元也处于兴奋状态，脑内ＮＥ，肾上腺素（Ｅ）含量分别达正常组的３０７．４６％和２９９．４１％，脑水含量（７９．２１±０．２８％）也较正常组（７８．４６±０．４２％）明显增高（Ｐ＜０．０１）．损毁蓝斑后，同侧半球脑内ＮＥ，Ｅ含量仅为正常组的１２．８０％和３２．３１％，脑水含量稍有下降，无统计学意义．提示中枢ＮＥ能神经元兴奋可能是脑水肿发生过程中的重要环节之一．     

糖基化终末产物对大鼠基底前脑胆碱能神经元的损伤作用

目的 研究糖基化终末产物(AGE BSA)对原代培养的基底前脑胆碱能神经元形态、生存率、凋亡率、胆碱乙酰转移酶(ChAT)与乙酰胆碱酯酶(AchE)活性的影响。在体外水平研究AGEs在阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)神经元缺失发生中的作用及其可能机制。方法 原代培养大鼠基底前脑胆碱能神经元,观察细胞生长变化,进行免疫荧光细胞化学鉴定;用300μg/mLAGE BSA以及糖基化终末产物受体(RAGE)中和抗体阻断处理原代培养的基底前脑胆碱能神经元,作用不同时间后置于倒置显微镜下观察细胞形态变化;采用MTT法检测神经元的存活率;采用流式细胞术检测神经元的凋亡率;经比色法检测ChAT和AchE的活性变化。结果 AGE-BSA干预胆碱能神经元72h后,细胞形态发生明显损伤性变化,细胞存活率明显降低,凋亡率增高,ChAT活性明显下降,AchE活性明显升高;RAGE中和抗体阻断组72h较之AGE-BSA组,细胞形态损伤变化较轻,生存率偏高,凋亡率较低,ChAT活性较高,AchE活性偏低,但比空白对照组生存率降低,凋亡率增高,ChAT活性明显下降,AchE活性明显升高。结论 糖基化终末产物作用72h可以引起胆碱能神经元的损伤,并造成ChAT活性下降和AchE活性明显升高,部分阻断其与特异性受体RAGE的结合可以减弱其损伤作用,提示糖基化终末产物通过其受体参与了对胆碱能神经元的损伤作用。     

大鼠海马CA3区神经元和星形胶质细胞三维结构重塑

目的 观察大鼠海马CA3区神经元锥体细胞及其周围星形胶质细胞(AST)的分布,重塑两者之间的三维构象。方法 采用脑片膜片钳全细胞记录、细胞内荧光黄(LY)染色、免疫荧光和激光共聚焦显微镜检查(LSCM)相结合的技术。结果 根据放电形式的不同把海马锥体细胞分为位相型和非位相型放电神经元。LSCM下单层光学图像和三维立体重建显示许多AST紧密围绕在LY染色锥体细胞周围并形成紧密接触。2类神经元与AST形成接触的部位存在区别。非位相型放电神经元的树突和胞体周围都有许多AST形成接触的部位在,而位相型放电神经元则仅位于树突。结论 不同特性海马神经元周围AST的空间分布可能存在差异。     

大鼠海马CA3区神经元和星形胶质细胞三维结构重塑

目的 观察大鼠海马CA3区神经元锥体细胞及其周围星形胶质细胞(AST)的分布，重塑两者之间的三维构象。方法 采用脑片膜片钳全细胞记录、细胞内荧光黄(LY)染色、免疫荧光和激光共聚焦显微镜检查(LSCM)相结合的技术。结果 根据放电形式的不同把海马锥体细胞分为位相型和非位相型放电神经元。LSCM下单层光学图像和三维立体重建显示许多AST紧密围绕在LY染色锥体细胞周围并形成紧密接触。2类神经元与AST形成接触的部位存在区别。非位相型放电神经元的树突和胞体周围都有许多AST形成接触的部位在，而位相型放电神经元则仅位于树突。结论 不同特性海马神经元周围AST的空间分布可能存在差异。     

大鼠脂肪干细胞的培养及向神经细胞的定向分化

目的 从大鼠脂肪组织中分离出脂肪干细胞(Adsc),并通过体外培养观察其在形态、生长方式以及贴壁率、生长曲线等方面的生物学特征,以及其向神经细胞方向分化的能力.方法 取SD大鼠的腹股沟和腹膜后脂肪.分离体外培养ADSC,观察形态并进行传代.取第3代细胞测定其贴壁率、MTT比色法描绘生长曲线.免疫荧光法鉴定干细胞标志物CD44.通过两步诱导法诱导ADSC向神经细胞方向分化,免疫荧光法检测分化后细胞NSE、GFAP的表达情况.在分化过程中,用免疫组化检测Nestin的动态变化,验证ADSC分化与神经干细胞的关系.结果 从大鼠的脂肪组织中可成功提取ADSC,在含血清培养中能够连续传代并稳定增殖.而且ADSCs强烈表达CD44.经诱导剂诱导后,大部分ADSC分化表达NSE,而未见GFAP的表达.分化过程中,Nestin 表达水平经统计学分析后呈逐渐下降趋势.结论 ADSC具有强大的扩增能力和定向分化为神经元的生物学特性,分化后在形态、表型同时体现出了显著变化,可以成为治疗神经系统损伤、退行性疾病的较为理想的成体干细胞.     

Clinical isolates of Mycobacterium abscessus in Guangzhou area most possibly from the environmental infection showed variable susceptibility

Background Mycobacterium abscessus (M.abscessus) can cause a variety of human infections,involving the lung,skin and soft tissues,and is generally believed to be acquired from environmental sources.The aim of this study was to investigate the molecular diversity and antibiotic susceptibility of M.abscessus isolates as the basis for strategies to improve control and management of infection.Methods Seventy M.abscessus isolates from patients attending the Guangzhou Thoracic Hospital were identified from 2003 to 2005 by biochemical tests,gas chromatography,polymerase chain reaction (PCR)-restriction analysis (PRA) of heat shock protein gene hsp65,and sequencing of the quinolone resistance determining regions (QRDRs) of gyrA.Susceptibilities to six antibiotics were determined by micro-broth dilution.Isolates were genotyped using randomly amplified polymorphic DNA (RAPD) analysis.Results Most isolates (63/70; 90％) were susceptible to amikacin but rates of susceptibility to other antibiotics varied from moderate,clarithromycin (60％) and imipenem (43％),to low for ciprofloxacin and ofloxacin (3％),and 87％ of isolates had intermediate susceptibility to cefoxitin.RAPD analysis showed that the 70 clinical isolates displayed 69 unique RAPD patterns.Conclusions The high genetic diversity of isolates suggests that they are not transmitted from person to person but,presumably,are acquired independently from environmental sources.M.abscessus isolates displayed variable levels of susceptibility to all antibiotics tested,other than amikacin,indicating a need for routine susceptibility testing to guide treatment.     

束缚-浸水应激对大鼠迷走背核胆碱能神经元活动的影响

目的研究束缚-浸水应激(RWIS)大鼠迷走神经背核(DMV)中胆碱能神经元的活动情况。方法随机将10只雄性Wistar大鼠分为对照组和应激组,采用Fos和胆碱乙酰化酶(ChAT)免疫组织化学双标技术,统计对照组和应激组Fos、ChAT、Fos/ChAT双标阳性神经元数目。结果与对照组相比,应激组大鼠DMV大量神经元表达Fos,Fos阳性神经元主要集中于DMV尾段和吻段(P<0.01);ChAT阳性神经元主要分布于DMV中段和尾段,应激组大鼠DMV中单位面积内ChAT阳性神经元数目减少(P<0.01);Fos/ChAT双标阳性神经元的分布与Fos阳性神经元分布情况相似,RWIS组Fos/ChAT双标阳性神经元数目显著增加(P<0.01),Fos/ChAT双标阳性神经元占ChAT阳性神经元的比例在对照组和RWIS组中分别为7.17%、21.12%(P<0.01)。结论 DMV中胆碱能神经元参与RWIS调控过程。     

猫基底前脑内胆碱能神经元的分布、形态特征及隔——海马投射

本文用胆碱乙酰化酶(choline acetyltransferase ChAT)免疫组化法观察了猫基底前脑内胆碱能神经元的分布及细胞形态特征,并研究了在切断一侧伞一穹窿后,隔区胆碱能神经元消失情况。含有胆碱能神经元的核包括:内侧隔核、斜束带核、隔袱核、尾核、苍白球、下丘脑视前区和外侧区及冠状回邻近的皮质区。核中细胞呈多角形、卵圆形、梭形或三角形。以中型(20-25μm)和小型(<20μm)为常见,偶有大型的(>25μm)。切断一侧伞—穹窿后,术侧内侧隔核和斜束带垂直部胆碱能神经元比健侧的明显减少(P<0.01),说明此处胆碱能神经元发支经伞—穹窿投射至海马。     

新生大鼠大脑皮质神经干细胞的分离培养与胆碱能神经元的鉴定

目的:体外分离和培养新生大鼠大脑皮质神经干细胞并进行鉴定,为用于脑梗死动物模型梗死区移植细胞作准备.方法:分离新生大鼠皮质神经干细胞,进行体外培养,使用免疫细胞荧光染色技术对细胞的特性进行鉴定,并对细胞的胆碱能特征进行鉴定.结果:获得了Nestin阳性的神经干细胞,其分化后可获得MAP-2、GFAP和 CNPase阳性的神经元、星形胶质细胞和寡突胶质细胞;通过胆碱能鉴定发现大脑皮质干细胞可分化为胆碱能神经元. 结论:体外分离和培养的大脑皮质神经干细胞具有增殖分化的能力,并可以分化为胆碱能神经元,有望应用于皮质损伤后认知障碍及运动障碍的细胞移植治疗.     

神经生长因子和神经节苷脂GM1联合应用对鼠基底前脑胆碱能神经元的保护作用

目的 探讨神经生长因子(NGF)和神经节苷脂GM1联合应用对基底前脑胆碱能神经元是否具有延缓退变的作用.方法 实验分为NGF组、NGF+神经节苷脂GM1组和单纯对照组.取孕20 d SD大鼠胚基底前脑原基制成细胞悬液接种子24孔培养板中,按分组加入NGF、NGF+神经节苷脂GMI和不含神经营养因子的DMEM培养液,分别于体外培养12、18、24、30 d后进行乙酰胆碱酯酶组织化学反应.显微镜下计数各孔中乙酰胆碱酯酶阳性神经元数,每孔随机测量和计数20个乙酰胆碱酯酶阳性神经元的平均胞体直径、发出的突起数和最长突起长度.数据用方差分析和SNK检验进行统计学处理.结果 在培养的4个时期,NGF组和联合组的各项数据均明显优于单纯对照组,神经节苷脂GM1+NGF组的各项数据,特别是最长突起长度优于单独使用NGF组.结论 NGF和神经节苷脂GM1联合应用及NGF单独应用不仅对体外培养的胚胆碱能神经元发育生长具有促进作用,而且还可延缓体外长期培养的人鼠胚基底前脑胆碱能神经元的退变;联合应用效果更佳.     

大鼠延髓和脑桥中生长抑素样神经元对咽肌前运动神经元的调控

用PRV和SOM免疫荧光双标记法研究了大鼠延髓和脑桥中SOM样神经元对咽肌前运动神经元的调控。PRV注射大鼠咽肌后，在三叉神经脊束核、三叉旁核、外侧网状核、C3细胞群、巨细胞网状核、A5细胞群、蓝斑核、蓝斑下核及Barrington核中见到数量不等的PRV和SOM双标记细胞。首次证明了大鼠延髓和脑桥中许多核团的SOM样神经元对咽肌前运动神经元的调控。推测延髓和脑桥中的SOM可能和咽肌运动的精确调控有关。     

大鼠纹状体边缘区神经元中乙酰胆碱激活的离子通道特性

用细胞贴附式膜片钳技术研究了急性分离的新生SD大鼠纹状体边缘区神经元中乙酰胆碱激活的离子通道的特性。发现通道有25PS和60PS两种电导状态,25PS通道为主要类型,因此,本文主要报道25PS通道的特性。ACh激活的单通道电流为快速内向电流,随着超极化程度增加而增加,反转电位约为0mV。通道开放具单个开放和簇状开放,其开放时间均可权指数拟和,单个开放时间常数为0．29ms和1.84ms,簇状开放时间常数为1．96ms和18.24ms。平均关闭时间也可双指数拟和,两个时间常数为1．70ms和54．00ms。通道开放概率为0．012,未表现出电压依赖性。提示纹状体边缘区神经元上存在乙酸胆碱受体离子通道。根据特性证实为烟碱型离子通道。     

Suppressive effect of acupuncture stimulation to the sacral segment on the state of vigilance and the brainstem cholinergic neurons

The effects of acupuncture stimulation to the sacral segment on the electroencephalogram (EEG) and activity of the cholinergic neurons in the laterodorsal tegmental nucleus (LDT) were examined in urethane-anesthetized rats. When EEG was small amplitude and higher frequency, the stimulation to the sacral segment induced large amplitude and slow EEG with latencies ranged from 45 sec to 12 min, and durations from 48 sec to 56 min. The stimulus induced EEG is composed of significant increase in delta power and significant decrease in theta and beta powers. Firing rate of the cholinergic LDT neurons significantly decreased from 2.9+/-1.5 Hz to 1.1+/-0.8 Hz after the stimulus (n=12, p<0.05). The decrease of neuronal activity always preceded to the start of large and slow EEG, while the increase of the activity always preceded to the change of EEG from large slow wave to small faster wave. These results suggest that the acupuncture stimulation to the sacral segment changes the state of the animals from light anesthesia to deep anesthesia, and that the change is mediated by the suppression of the cholinergic neurons in the LDT.     

Tonic and phasic components of the ascending reticular activating system.

The classical concept of the ascending reticular activating system was reviewed basing upon recent neuroanatomical findings and two kinds of physiological studies, such as recording from brainstem neurons in the discrete nuclei and stimulation of the brainstem nuclei influencing thalamic neuronal activity. We propose that the reticular activating system is not a single system, but is composed of two systems arising from the brainstem: the noradrenergic projection conveying a rather tonic control, and the cholinergic projection responsible for the phasic aspects of the activating system.