木犀草素诱导非小细胞肺癌细胞株A549 凋亡和G2 周期阻滞

目的:研究木犀草素诱导非小细胞肺癌细胞株A549细胞凋亡和抑制其细胞周期(G2期)的分子机制。方法:MTT法分析木犀草素对A549细胞的生长抑制作用和半数抑制率IC50。Hoechst 33258核染色,Annexin V-FITC/PI双染,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Western blot分析木犀草素引起的周期相关蛋白和凋亡相关蛋白的变化。Western blot和免疫细胞化学推测可能存在的分子机制。结果:木犀草素对A549细胞有显著的生长抑制作用,48 h的IC50为45.2μmol.L-1,流式细胞术检测细胞周期发现A549细胞经木犀草素处理后主要阻滞在G2期,周期蛋白cyclin A,p-CDC2和p-Rb都呈低表达。Hoechst 33258核染色,Annexin V-FITC/PI双染发现木犀草素处理组细胞凋亡率明显高于未处理组。Western blot发现木犀草素可上调JNK的磷酸化,下调NF-κB(p65)的磷酸化水平。免疫细胞化学显示木犀草素可抑制TNF-α刺激的p65入核,抑制其入核发挥转录因子的作用,促进细胞凋亡。结论:木犀草素能显著诱导人非小细胞肺癌细胞A549细胞凋亡和细胞周期阻滞,其可能的分子机制是通过上调JNK磷酸化继而激活线粒体凋亡途径,同时抑制NF-κB入核使其不能发挥转录活性。     

鸡血藤黄酮类有效部位SSCE对人肺腺癌细胞A549细胞周期调控的分子机制

目的:探讨鸡血藤黄酮类有效部位(SSCE)对人肺癌A549细胞的周期阻滞作用及其分子机制。方法:采用CCK-8法检测SSCE对A549细胞的增殖影响;流式细胞仪检测细胞周期;RT-PCR法检测CDK1、2、4、6mRNA表达;Western-blot法测定CDK1、2、4、6蛋白表达。结果:SSCE抑制A549细胞的增殖,SSCE引起A549细胞G1/S期和/或G2/M期阻滞。160mg/L SSCE作用A549细胞24h后,CDK1、CDK2、CDK6mRNA表达较对照组减少(P0.05);CDK1、CDK2、CDK6蛋白含量较对照组低(P0.05);160mg/L SSCE作用A549细胞48h后,细胞内CDK1mRNA表达较对照组减少(P0.05);细胞内CDK1蛋白含量较对照组低(P0.05)。结论:SSCE通过下调CDK1mRNA转录水平及蛋白表达量引起A549细胞G2/M期阻滞;通过下调CDK2、6mRNA转录水平及蛋白表达量引起A549细胞G1期阻滞。     

白花蛇舌草乙醇提取物对肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响

目的 探讨白花蛇舌草乙醇提取物在体外对肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响及其作用机制.方法 采用MTT法测定不同浓度白花蛇舌草乙醇提取物对A549细胞增殖的影响;Hoechst 33258检测白花蛇舌草乙醇提取物作用后细胞凋亡情况;流式细胞仪检测药物作用后的细胞周期和凋亡率;Western Blot 检测药物作用后的Bax和Bcl-2蛋白的表达.结果 白花蛇舌草乙醇提取物抑制A549细胞增殖呈时-效和量-效关系;Hoechst 33258检测白花蛇舌草乙醇提取物作用A549细胞后可见凋亡细胞;40 mg/ml白花蛇舌草乙醇提取物作用A549细胞12,24,36,48h,药物组G1～G0期细胞百分比分别为(42.82±3.95)%,(51.84±6.37)%,(54.76±8.85)%和(64.94±7.56)%,药物组细胞凋亡率分别为(5.72±0.98)%,(7.10±2.08)%,(19.89±4.25)%,(32.55±6.51)%,均高于对照组(P均﹤0.05),且G1～G0期细胞百分比和凋亡率随药物作用时间增加而增加;Western Blot显示,白花蛇舌草乙醇提取物作用A549细胞,Bax的表达随作用时间增加而增加,Bcl-2的表达随作用时间增加而减低.结论 白花蛇舌草乙醇提取物随着药物浓度和作用时间的增加对肺腺癌A549细胞的体外抑制效应增加;其抑制作用可能通过将细胞周期阻滞于G1～G0期和通过上调Bax和下调Bcl-2的表达而诱导细胞凋亡来实现的.     

番茄红素对人肺癌A549细胞凋亡及细胞周期的影响

目的:探讨番茄红素对人非小细胞肺癌细胞A549凋亡及对细胞周期的影响。方法:体外培养并取处于对数生长期的A549细胞进行分组,分别给予培养液(空白对照组)、不同浓度番茄红素(20、10、5μg/mL)及顺铂(40μg/m L)进行干预,每组10个复孔。药物干预48小时后,噻唑蓝(MTT)比色法测定各组细胞增值抑制率;流式细胞术(FCM)检测各组细胞周期、观察细胞凋亡状况并计算凋亡率;应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测细胞凋亡相关基因Bcl-2 mRNA、Bax m RNA表达;蛋白免疫印迹(Western blotting)法检测细胞周期蛋白(cyclin B1、cyclin D1)和周期蛋白依赖性激酶(CDK1、CDK2)表达。结果:与空白对照组比较,番茄红素各剂量组和顺铂组A549细胞增值抑制率提高,番茄红素(20、10μg/mL)组细胞处于G2-M期的比例提高、凋亡率显著升高,Bcl-2 mRNA表达下调且Bax mRNA表达上调,Bax/Bcl-2值显著提高,cyclin B1蛋白和CDK1蛋白表达上调,cyclin D1蛋白和CDK2蛋白表达下调,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论:番茄红素具有促进人非小细胞肺癌A549细胞凋亡,阻滞其有丝分裂,从而抑制其增殖的作用,可能与番茄红素影响凋亡相关调控基因及细胞周期相关调控蛋白表达有关。     

七叶皂苷对肺腺癌A549细胞的增殖抑制作用

目的 研究七叶皂苷(aescine)对肺腺癌细胞A549的增殖抑制作用,及对细胞周期分布和细胞凋亡的影响.方法 采用MTT方法观察药物对A549的增殖抑制作用;流式细胞仪分析细胞周期的变化;Annexin-FITC/PI双标记检测细胞凋亡.结果 七叶皂苷能明显抑制A549的生长,且呈时间剂量依赖性;流式细胞仪结果表明,七叶皂苷能明显的将细胞周期阻滞在G0/G1期,并诱导细胞凋亡.结论 七叶皂苷对A549细胞增殖有明显的抑制作用,并可诱导A549细胞凋亡.     

白英总碱通过VEGF相关信号通路调控A549细胞的凋亡与周期

目的基于血管内皮生长因子(VEGF)相关信号通路探讨白英总碱对A549细胞的凋亡与周期的影响。方法设立对照组和白英总碱低、中、高剂量组(50,100,200 mg·L~(-1)),通过流式细胞术检测细胞凋亡及周期分布情况,Western blot法检测PI3K、Akt、Ras、MAP2、VEGF蛋白的表达。结果流式细胞术检测白英总碱将该细胞周期阻滞于G_2期,呈现剂量依赖性的诱导A549细胞的凋亡,尤其是早期凋亡细胞。Western blot结果显示,白英总碱均可下调PI3K、Akt、Ras、MAP2、VEGF蛋白的表达,中、高剂量组各蛋白的相对表达量与对照组比较,差异均有统计学意义(P0.01)。结论白英总碱可通过调控VEGF相关信号通路诱导A549细胞的凋亡,阻滞细胞周期于G_2期。     

麻黄附子细辛汤联合紫杉醇诱导A549/T细胞凋亡的研究

目的:研究麻黄附子细辛汤的大鼠含药血清配伍紫杉醇对人肺腺癌紫杉醇耐药株A549/T的影响,探索其诱导耐药肺癌细胞凋亡的机制。方法:采用MTT法检测各组对A549/T细胞的影响;以Hoechst33342/PI双标记荧光染色法检测细胞凋亡;Western blot法检测各组细胞Caspase-9蛋白的表达。结果:8g/kg、4g/kg、2g/kg麻黄附子细辛汤大鼠含药血清联合紫杉醇均能抑制A549/T细胞的增殖,促进A549/T细胞凋亡和Caspase-9蛋白表达。结论:麻黄附子细辛汤大鼠含药血清能促进紫杉醇体外抑瘤作用,其机制可能与上调细胞凋亡相关因子Caspase-9有关。     

桔梗皂苷D诱导人肺癌细胞A549的凋亡及机制

目的:研究桔梗皂苷D(platycodin,PD)抑制人肺癌A549细胞株增殖和诱导凋亡的分子机制.方法:体外培养人肺癌细胞株A549,PD作用终浓度分别为5～ 20μmol·L-1.MTF法测定PD对细胞的增殖抑制作用,显微镜观察细胞的形态学变化,Annexin V-FITC/PI双标法检测细胞凋亡率,JC-1检测线粒体膜电位的变化,Western blot方法检测PD对Caspase-3,Caspase-9,PARP的剪切片段和Bax,Bcl-2,Bak,Bcl-xl蛋白表达的影响.结果:PD抑制A549细胞的增殖,并随药物浓度的增加和作用时间的延长,作用更显著;与对照组相比,不同浓度的PD作用24 h后,细胞凋亡率增加,线粒体膜电位降低,且差异显著.蛋白电泳检测结果显示蛋白Caspase-3,Caspase-9均出现剪切片断,并随着时间的增加断裂更明显.PD处理A549细胞后,Bax和Bak蛋白表达升高,Bcl-2和Bcl-xl蛋白表达下降.结论:PD具有明显的细胞毒作用,能诱导A549细胞凋亡,通过对Bax,Bak和Bcl-2,Bcl-xl表达的调控,导致线粒体膜电位的下降,进而激活Caspase最终导致肺癌细胞死亡.     

姜黄素与博来霉素联用对A549细胞增殖抑制及细胞周期和凋亡的影响

目的:研究姜黄素和博来霉素联合应用对人肺泡Ⅱ型样细胞A549细胞增殖和细胞周期及细胞凋亡的影响,探讨姜黄素抗博来霉素诱导的肺纤维化机制。方法:采用MTT法观察姜黄素和博来霉素对A549细胞的增殖抑制作用,并用流式检测细胞周期分布,凋亡试剂盒检测细胞凋亡。结果:姜黄素及博来霉素能抑制A549细胞的增殖,并呈浓度及时间依赖性。姜黄素(Cur)浓度为60μmol/L与博来霉素(BLM)2、4、6、8μg/mL联合24h的抑制率显著高于单用博来霉素组;姜黄素可引起体外培养的A549细胞G0/G1期阻滞;而且对G0/G1期阻滞随作用时间延长而增强。单用博来霉素刺激细胞,培养24h和48h,对细胞周期各个时期的影响没有统计学意义;姜黄素联合博来霉素诱导A549细胞凋亡,细胞核变的不规则皱缩,可见凋亡小体。结论:姜黄素联合博来霉素在体外对A549细胞的增殖有明显的抑制作用,对细胞周期G0/G1期有显著阻滞作用,并可改变细胞凋亡;姜黄素和博来霉素联合应用可能通过改变肺泡上皮细胞细胞周期分布,并通过影响肺泡细胞凋亡从而起到抑制博来霉素治疗过程中肺纤维化的发生发展。     

苇茎汤调控人肺腺癌A549细胞中EGFR、STAT3抗凋亡的机制研究

目的:研究苇茎汤对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响。方法:将苇茎汤培养液浓度稀释为0.25、2.5、25g/L,与A549细胞共同培养,AO∕EB荧光染色观察细胞凋亡形态学改变;流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡率;Real-time PCR检测EGFR、STAT3基因的表达。结果:0.25~25g/L苇茎汤能诱导A549细胞发生凋亡形态学改变,且细胞凋亡率随苇茎汤浓度增加而升高;苇茎汤可将A549细胞周期阻滞于G0/G1期;Real-time PCR结果表明,苇茎汤可以下调A549细胞中EGFR、STAT3基因的表达。结论:苇茎汤可能通过调控EGFR、STAT3信号通路诱导人肺腺癌A549细胞发生早期凋亡。     

大黄及其有效成分对人肺腺癌A549细胞的影响

目的：观察大黄及其有效成分大黄素对人肺腺癌A549细胞的影响,为临床抗肿瘤提供实验证据。方法：采用实时细胞分析系统和改良MTT方法,观察单味中药大黄（0.05μg/L、0.5μg/L、5μg/L）及其有效成分大黄素（16 nmol/L、80 nmol/L、400 nmol/L、2μmol/L、10μmol/L）对A549细胞的作用,同时观察FRAP/mTOR抑制剂、PI3K抑制剂、MAPKK抑制剂和Caspase-3抑制剂对上述作用的影响。结果：大黄及其有效成分大黄素能显著抑制A549细胞增殖,并呈剂量依赖性,动态IC50研究发现大黄素在55 h时IC 50值最低,反应此时刻抑制A549细胞效应最大,其中Caspase-3抑制剂可以明显阻断大黄素对A549细胞的抑制作用。结论：大黄及其有效成分大黄素能有效抑制人肺腺癌A549细胞的增殖,呈剂量依赖性,证实大黄素是通过激活Caspase-3来抑制肺腺癌细胞的增殖。     

三氧化二砷联合TRAIL抑制肺癌A549细胞增殖及诱导凋亡的研究

目的研究三氧化二砷(As2O3)联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)抑制肺癌A549细胞增殖及诱导凋亡的作用。方法采用不同浓度的As2O3与TRAIL联合作用于体外培养的肺癌A549细胞,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和Hoechest染色观察检测其对A549细胞的抑制作用。以流式细胞术检测其对A549细胞的凋亡诱导作用和细胞周期。结果不同浓度的As2O3与TRAIL联用对A549细胞增殖的抑制作用均比单药组强。联合用药组从形态学观察及流式细胞术结果显示联合用药组可检测到大量凋亡A549细胞,明显多于单药组;并将A549细胞阻滞在G2/M期。结论 As2O3与TRAIL联用于人肺癌A549细胞可协同抑制其增殖,机制可能是将细胞阻滞在G2/M期;并可诱导细胞凋亡。     

黄芩素对人肺腺癌A549细胞的药效作用及机制探讨

目的:研究黄芩素对A549细胞增殖、侵袭、迁移,对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)血管形成的影响;观察其体内对裸鼠移植瘤的作用,通过代谢组学探讨其抑瘤机制。方法:体外实验,噻唑蓝(MTT)法检测黄芩素对A549细胞生长的影响;transwell小室法观察黄芩素对A549细胞侵袭及迁移的影响;小管生成实验观察黄芩素对HUVEC新生血管形成的影响。体内实验,移植瘤裸鼠分为模型组、顺铂组、黄芩素(50,100μmol·L~(-1))组,观察黄芩素对移植瘤的干预作用;气相色谱/质谱法对黄芩素干预后裸鼠血清样本进行代谢组学分析,寻找差异性代谢物及代谢通路。结果:黄芩素能抑制A549细胞生长,24,48,72 h的IC50分别为43.02,31.11,28.42μmol·L~(-1)。黄芩素(5,10,20μmol·L~(-1))能抑制A549细胞的侵袭及迁移。黄芩素(10,20μmol·L~(-1))能抑制HUVEC官腔样结构的形成(P0.05)。黄芩素(50 mg·kg~(-1))对移植瘤具有抑制作用;代谢组学方法检测到黄芩素组血清中差异性代谢物14种,代谢通路7条。结论:黄芩素可抑制A549细胞增殖、侵袭、迁移及HUVEC官腔样结构形成,体内对移植瘤生长具有抑制作用;黄芩素干预后,血清中氨基酸、碳水化合物、能量代谢等多条代谢通路发生变化,这些变化可能是其抗肿瘤的作用机制。     

蛴螬提取物诱导人肺癌A549细胞凋亡的机制研究

目的:观察蛴螬提取物对人肺癌A549细胞增殖的影响及其机制。方法:采用MTT法检测蛴螬提取物对人肺癌A549细胞的生长抑制率;用HE染色方法观测凋亡细胞的形态学变化;运用免疫组织化学SP法检测用药前后细胞周期蛋白D1(CyclinD1)的表达改变。结果:用蛴螬提取物处理的人肺癌A549细胞生长抑制率明显高于对照组;施药早期细胞出现凋亡形态学变化;A549细胞经蛴螬提取物处理后CyclinD1表达均下降。结论:蛴螬提取物在体外对人肺癌A549细胞株有显著的增殖抑制作用,其机制与下调CyclinD1的表达有关。     

塔斯品碱诱导肺癌细胞A549凋亡的实验研究

目的:探讨塔斯品碱对肺癌细胞A549增殖、凋亡以及细胞周期的影响。方法:进行人肺腺癌细胞株A549细胞培养,不同浓度塔斯品碱干预,采用MTT法、流式细胞术、透射电镜等技术,研究不同浓度塔斯品碱对其增生、凋亡以及细胞周期的影响。结果:塔斯品碱可抑制A549细胞增殖,诱导A549细胞凋亡,且呈时间剂量依赖性;FCM检测发现塔斯品碱阻滞细胞周期于S期;电镜下可见塔斯品碱能够诱导细胞出现核固缩、细胞核内染色质凝聚和凋亡小体等凋亡现象。结论:塔斯品碱有抗肿瘤和诱导肿瘤细胞凋亡的作用。     

新藤黄酸诱导细胞凋亡抑制A549细胞裸鼠移植瘤增长的研究

目的:通过体内移植瘤模型探讨新藤黄酸干预人非小细胞肺癌的发生发展的可能机制.方法:采用肺腺癌A549裸鼠移植瘤实验,评价新藤黄酸对人肺腺癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用;透射电镜观察细胞超微结构的变化;TUNEL法检测凋亡指数;免疫组织化学方法检测瘤体组织COX-2和VEGF蛋白的表达.结果:新藤黄酸8,16 mg·kg-1给药后裸鼠的移植瘤较模型组生长缓慢,瘤重及瘤体积明显低于模型组(P<0.01);透射电镜观察发现新藤黄酸各组肿瘤细胞出现典型的凋亡特征;模型组中癌细胞质无明显空泡化,核膜内侧异染色质区域表现正常,其他染色质正常分散分布;TUNEL结果表明,给药组瘤体组织的凋亡指数明显高于模型组;免疫组织化学分析结果显示新藤黄酸作用后能够降低肿瘤组织的COX-2和VEGF的表达(P<0.01).结论:新藤黄酸可能通过诱导肺腺癌A549细胞凋亡而干预人非小细胞肺癌的发生发展,并调控肿瘤组织VEGF和COX-2蛋白的表达.     

硒化纹党参多糖和其抗A549细胞的活性

目的合成硒化纹党参多糖并探讨其抗人肺腺癌细胞A549的活性。方法以HNO3-Na2Se O3方法硒化纹党参多糖,在单因素试验的基础上,以反应时间、反应温度、纹党参多糖与亚硒酸钠投料比为三因素进行L9(34)正交试验设计,选择硒化纹党参多糖含硒量、产率以及对A549细胞生长的抑制率作为考察指标,优选最佳硒化工艺。结果纹党参多糖的最佳硒化条件为反应时间5 h,反应温度60℃,投料比1∶1。在此条件下,硒化纹党参多糖中含硒量可达1.07 mg/g(RSD为3.7%),产率可达50.3%(RSD为2.5%),对A549细胞的抑制率可达到49.36%(RSD为2.8%)。结论硒化纹党参多糖可以作为抗肿瘤候选药物。     

低浓度人参水提液对肺A549细胞癌性的影响及其机制研究

目的：探讨低浓度人参水提液(LWEG)对肺癌A549细胞癌性包括细胞增殖、迁移、侵袭等生物学行为的影响,以更加全面地了解人参对肺癌A549细胞的影响。方法：将细胞分为对照组、WEG组(1.25,2.5,5,10,20,40,80,160 mg/mL)。通过MTT法检测不同浓度WEG对A549细胞增殖的影响,进而筛选出LWEG的浓度范围,再通过划痕实验与Transwell小室侵袭实验分别检测LWEG(2.5,5,10 mg/mL)对A549细胞迁移、侵袭能力的影响。并运用网络药理学研究策略对其潜在的作用机制进行预测分析。结果：与对照组相比,LWEG组A549细胞增殖显著增加,细胞的迁移和侵袭能力均明显增强,差异有统计学意义(P<0.05)。网络药理学预测分析表明这一作用可能与ErbB信号通路及代谢和应激反应有较大关联。结论：LWEG直接作用于A549细胞,能够提高A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

平肺浸膏对人肺腺癌A549细胞的杀伤作用

目的:研究中药复方平肺浸膏对人肺腺癌A549细胞增殖的影响及诱导细胞凋亡的作用。方法:采用CCK-8比色法和磷脂酰丝氨酸外翻分析法分别检测平肺浸膏对人肺腺癌A549细胞增殖和细胞凋亡的作用。平肺浸膏(1 g.mL-1)由中日友好医院药学部提供,实验前经定性滤纸粗滤,0.22μm滤膜过滤后分装。人肺腺癌A549细胞常规复苏、培养及传代,处于对数生长期开始用于实验。实验分为空白对照、生药终浓度1,5,10 g.L-1共4组。细胞以7×104/mL接种于96孔培养板,24 h细胞贴壁后加不同浓度平肺浸膏,对照组只换液不加药。分别于加药后24,48,72 h用CCK-8法检测细胞增殖情况。将细胞以3×104/mL接种于6孔培养板,5 h细胞贴壁后加不同浓度的平肺浸膏。药物作用17 h后收获细胞,应用磷脂酰丝氨酸外翻分析法,于流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:平肺浸膏生药5,10 g.L-1在体外作用24 h以上表现出对A549细胞增殖的抑制作用,与常规对照组相比存在统计学差异(P<0.05),且这种抑制作用随时间和药物浓度增加而增强。生药10 g.L-1可诱导早期细胞凋亡,与常规对照组相比存在统计学意义(P<0.05)。结论:中药复方平肺浸膏能够抑制人肺腺癌细胞A549的增殖,诱导细胞凋亡。     

黄芩苷对人肺腺癌A549细胞的体内外研究

目的:探讨黄芩苷在体外对人肺癌A549细胞增殖、侵袭、迁移、对脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)新生血管形成的影响,在体内对A549细胞裸鼠移植瘤的作用.方法:调整细胞密度为1×104/mL,应用25,50,100,200,400 μmol·L-1黄芩苷作用于A549细胞24,48,72 h,采用MTT法检测黄芩苷对A549细胞的增殖抑制作用;Transwell小室法观察12.5,25,50μmol·L-1黄芩苷对A549细胞侵袭及迁移的影响;小管形成实验观察12.5,25,50μmol·L-1黄芩苷对HUVEC小管形成的影响;将A549细胞移植瘤裸鼠分为黄芩苷高剂量组(100 mg·kg-1)、黄芩苷低剂量组(50 mg·kg-1)、溶剂对照组、顺铂组(1 mg· kg-1),前3组通过ig方式给予,连续21 d;顺铂组ip连用10 d.观察黄芩苷对A549细胞裸鼠移植瘤的作用.结果:①黄芩苷能抑制A549细胞增殖,其增殖抑制率与药物浓度及作用时间呈依赖性,24,48,72 h的IC50分别为100.77,75.02,55.81 μmol·L-1.②25,50μmol·L-1黄芩苷能抑制A549细胞的侵袭及迁移,从而抑制癌细胞转移.③25,50μmol·L-1黄芩苷能抑制HUVEC小管生成,与对照组比较具有统计学意义(P＜0.05).④体内实验表明50 mg·kg-黄芩苷对A549细胞移植瘤具有一定的抑制作用.结论:黄芩苷体外可以抑制A549细胞的增殖、侵袭、迁移,抑制HUVEC小管形成,体内对A549细胞裸鼠移植瘤具有一定的抑制作用.