CTLA4-Ig基因修饰骨髓间充质干细胞抑制大鼠肝移植排斥反应

目的探讨细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白(CTLA4-Ig)基因转染骨髓间充质干细胞(MSC)在抑制大鼠原位肝移植排斥反应的作用及机制。方法采用重组腺病毒(Ad)5-CTLA4-Ig转染MSC。转染72 h后,提取细胞总蛋白,采用蛋白质印迹法检测转染后MSC中CTLA4-Ig的蛋白表达。采用细胞计数试剂盒(CCK)-8方法检测未转染和转染后的MSC对外周血淋巴细胞增殖的抑制作用。以雄性Lewis大鼠为供体(40只);以雄性Brown Norway(BN)大鼠为受体(40只)。采用改良的Kamada两袖套法进行原位肝移植,建立大鼠原位肝移植急性排斥反应模型。40只受体大鼠随机分为4组,每组10只。其中对照组(A组),于肝移植时门静脉输注生理盐水;MSC治疗组(B组),于肝移植时门静脉输注MSC;转基因MSC治疗组(C组),于肝移植时门静脉输注转基因MSC;免疫抑制剂治疗组(D组),于肝移植时门静脉输注生理盐水,术后即给予环孢素(CsA)1.5 mg/(kg·d)肌内注射,连续8 d。每组大鼠取5只观察生存情况。每组其余5只于术后第9日处死,检测外周血细胞因子白细胞介素(IL)-2、IL-4、干扰素(IFN)-γ水平,光学显微镜下观察肝组织病理学变化和排斥反应程度。结果重组Ad5-CTLA4-Ig转染MSC 72 h后,蛋白质印迹法可检测到转染后的MSC中有CTLA4-Ig的蛋白表达。当未转染的MSC∶外周血单核细胞比例为1∶10、1∶20时,MSC抑制淋巴细胞增殖的作用分别为85.60%、76.69%。重组Ad5-CTLA4-Ig转染MSC 72 h后,在相同的数量比下,其抑制淋巴细胞增殖的作用分别为90.50%、84.20%;与未转染的MSC比较,转染后抑制淋巴细胞增殖的作用增强(P0.05)。A、B、C、D组大鼠肝移植术后存活时间分别为(13±3),(41±6),(90±15),(102±18)d。A、B、C组的大鼠术后存活时间比较差异有统计学意义(P0.05),C组和D组的大鼠术后存活时间比较差异无统计学意义(P0.05)。与A组比较,B组和C组的IL-4水平明显升高;与B组比较,C组的IL-4水平明显升高,差异均有统计学意义(均为P0.05);C组和D组的IL-4水平比较,差异无统计学意义(P0.05)。与A组比较,B组和C组的IL-2、IFN-γ水平明显降低,C组的IL-2、IFN-γ水平亦低于B组,差异均有统计学意义(均为P0.05),C组和D组的IL-2、IFN-γ水平比较,差异无统计学意义(P0.05)。大鼠肝组织病理检查结果显示,A组移植肝发生重度排斥反应,B组移植肝亦发生排斥反应,但与A组比较程度较轻。C组与D组移植肝有轻度排斥反应。结论重组Ad-CTLA4-Ig转染MSC可抑制肝移植排斥反应,其效果优于MSC单独应用。     

PD-L1.Ig与1,25(OH)2D3联合应用对异基因大鼠胰腺移植后急性排斥反应的影响

目的 探讨PD-L1.Ig联合1,25(OH)2D3对大鼠胰腺移植急性排斥反应的免疫调控作用以及对大鼠移植胰腺存活时间的影响.方法 以F344大鼠为供体,Lewis大鼠为受体,建立4组原位胰腺移植模型.每组12例,共48例.A组:对照组、B组:PD-L1.Ig组、C组:1,25(OH)2D3组、D组:PD-L1.Ig+1,25(OH)2D3组;观察术后各组血糖变化,移植物存活以及组织病理学改变;流式细胞检测受体血、脾以及移植胰CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4+CD25+T细胞表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测移植物局部白细胞介素(IL)-2、-4、-10、-12表达水平;于术后第7天分别杀死各组受体和供体鼠各2只,取受体脾细胞与供体作混合淋巴细胞反应(MLR).结果 与A比较,PD-L1.Ig组并未显著延长移植胰腺存活时间(P＞0.05),C、D组对改善血糖水平和延长移植胰腺存活时间作用明显(P＜0.01),其中,D组移植胰腺存活时间最长(23.9±0.8)d;与A组比较,B组无明显改善,C组排斥反应较A组明显减弱,而D组几乎未发生排斥反应;CD3+CD8+T细胞计数D、C、B与A组比较均有减少,差异有统计学意义(P＜0.01).CD4+T细胞D、C、B与A组的差异有统计学意义(P＜0.05).CD4+CD25+调节性T细胞A、B、C、D组逐渐升高,差异有统计学意义(P＜0.01),且以D组较为明显(C组比A组P＜0.01);D组明显抑制移植物局部Th1型细胞因子IL-2、IL-12的产生,显著提高Th2型细胞因子IL-4、10的水平;与对照组比较,各治疗组受体T淋巴细胞在MLR中表现对供体淋巴细胞特异性低反应性,能有效抑制T细胞对同种异体抗原的反应.结论 共刺激阻断剂PD-L1.Ig联合1,25(OH)2D3可有效抑制细胞免疫应答,干预急性排斥反应,显著延长大鼠移植胰腺存活时间.     

角膜新生淋巴管和新生血管在高危角膜移植免疫排斥中的作用比较

目的 比较角膜新生淋巴管和血管在高危角膜移植免疫排斥反应中的作用. 方法 选取30只SD大鼠为正常对照组(A组),将90只角膜碱烧伤大鼠随机分为3组,分别于碱烧伤后第2周(B组)、5周(C组)、8周(D组)行穿透性角膜移植.比较各组角膜植片的平均存活时间;角膜移植术后第3、7 、10天,对各组大鼠角膜植片做组织学检查,并运用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测角膜中γ-IFN、IL-2的蛋白变化,CD31全角膜免疫荧光标记角膜中的新生血管. 结果 角膜移植后A、B、C、D组的植片平均存活时间(MST)分别为(13.33±1.37)d、(5.00±0.63)d、(9.50±1.05)d、(10.00±0.89)d.与其余各组相比,B组MST显著性缩短(P＜0.05),但C、D两组相比MST差异无统计学意义(P＞0.05).角膜移植后各时间段C、D两组角膜中γ-IFN、IL-2蛋白含量、血管面积的差异均无统计学意义(均为P＞0.05). 结论 角膜新生血管和淋巴管均加速高危移植后的免疫排斥反应.相比新生血管,角膜新生淋巴管起着更为重要的作用.     

1,25-(OH)2 D3在大鼠肾移植急性排斥反应中的作用

目的 观察1,25-(OH)2D3在大鼠肾移植急性排斥反应中的作用,探讨其在免疫调节中的机制.方法 行Wistar为供体,SD大鼠为受体的肾移植术,24只SD大鼠随机分为4组,检测血清中尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、Ca2+、P3+、白细胞介素(IL)-2、干扰素(IFN)-γ的水平及移植肾的病理变化.结果 Ⅰ组大鼠肾移植后5 d血清中BUN、Cr、IL-2、IFN-γ水平分别明显高于Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组(P＜0.05),Ⅱ、Ⅲ组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05),但分别与Ⅳ组比较均明显增高(P＜0.05).各组Ca2+、P3+比较差异无统计学意义(P＞0.05).病理结果 显示,Ⅰ组大鼠移植后肾脏排斥反应最重,其余组与之比较均有所减轻,以Ⅳ组最明显.结论 1,25-(OH)2D3通过减少IL-2、IFN-γ的产生,减少排斥反应的发生,改善移植肾的功能.     

不同免疫治疗方案诱导大鼠原位肝移植免疫耐受的实验研究

目的 观察抗CD-40L单抗加小剂量CsA联合免疫治疗对肝移植大鼠受体免疫耐受诱导的作用.方法 在建立稳定大鼠肝移植模型的基础上,将肝移植模型分为5组.A组为SD→SD对照组;B组为SD→Wistar对照组,A,B组术后不用任何治疗措施;C组为SD→Wistar,术后用CsA1～5 d;D组为SD→Wistar,术后用CsA 1～5 d加抗CD-40L(CD-154)单抗0～2d;E组为D组+术前供体特异性输血(DSBT).观察受体存活时间、移植肝病理改变以及术后外周血中细胞因子的变化.结果 A,D,E组受体大鼠存活时点(均>60 d)均明显长于B组和C组.D,E组移植肝急性排斥反应明显减轻.B组IL-2和IFN-γ的血清水平显著高于其余各组(P＜0.05).B,C,D,E 4组IL-4和IL-10较A组均有明显增加,尤其D,E组的IL-10表达较B组显著增高(P＜0.05). 结论 抗CD-40L单抗加小剂量CsA(伴或不伴DSBT)联合免疫治疗,可有效延长肝移植大鼠受体生存时间、减轻急性排斥反应并诱导Th2类细胞因子的高水平表达,有助于受体和移植肝的长期存活.     

联合免疫治疗对肝移植大鼠移植肝组织学和外周血Th1/Th2细胞因子的影响

目的用抗CD-40L单抗加小剂量CsA联合免疫治疗肝移植大鼠受体,观察其生存时间?移植肝组织学和Th1/Th2细胞因子谱的变化。方法建立大鼠肝移植模型后,将动物随机分为4组。A组为同基因移植组,SD→SD;B组为同种异体移植组,SD→Wistar,不用任何免疫抑制治疗措施;C组,SD→Wistar,采用CsA处理;D组,SD→Wistar,采用CsA加抗CD-40L(CD-154)单抗处理。观察各组肝移植受体生存期和移植肝病理变化;用ELISA法检测外周血细胞因子水平。结果A,D组均可长期存活,B,C组生存时间分别为(13.8±2.4)d,(29.8±4.1)d;B,C组病理组织切片见中/重度急性排斥反应,D组移植肝组织损伤程度显著减轻,A组基本无排斥反应。B组血清IL-2和IFN-γ高于其余各组(P<0.05),C,D组IL-4,IL-10水平较B组有所升高(但P>0.05),尤其D组IL-10表达水平显著高于B组(P<0.05)。结论联合免疫治疗可有效抑制其急性排斥反应,延长大鼠肝移植受体的生存时间。Th2类细胞因子IL-4和IL-10的高水平表达与诱导移植耐受、抑制排斥反应有重要关系,它有助于大鼠肝移植受体和移植肝的长期存活。     

早期肠内肠外营养支持对肝硬化大鼠肝切除术后的影响

目的 观察早期肠内肠外营养支持对肝硬化大鼠肝部分切除术后的影响.方法 采用24只雄性SD大鼠随机分为3组:A组正常大鼠肠内营养;B组肝硬化大鼠肠内营养;C组肝硬化大鼠肠外营养.3组大鼠行肝部分切除术后1 d分别进行等热量[690 kJ/(kg·d)]等氮量[1.22g/(kg·d)]营养支持,共5 d.术后6 d测定大鼠体质量、肝功能、前白蛋白、转铁蛋白、肝组织白蛋白(ALB)mRNA的表达及细胞增殖核抗原(Ki-67)蛋白表达水平.结果 与术前比较,术后A组大鼠体质量增加,B、C组体质量减轻,差异有统计学意义[A:(6.16±3.28)g;B:(5.46±2.59)g;C:(6.13±3.21)g,P＜0.05).术后B、C组大鼠肝功能与A组比较,血清AST、ALT、ALP升高,ALB降低,差异均有统计学意义(P＜0.05);B组与C组比较,ALP升高,差异有统计学意义[B:(209±81)IU/L;C:(271:±92)IU/L,P＜0.05).术后B、C组大鼠血清前白蛋白和转铁蛋白与A组比较均降低,差异有统计学意义(P＜0.05);C组与B组比较,血清前白蛋白降低,差异有统计学意义[B:(161±37)mg/L;C:(133±29)mg/L,P＜0.05].术后B、C组肝组织ALB mRNA表达水平比A组下降,差异有统计学意义(A:1.46±0.12;B:1. 07±0.14;C:0.84±0.18,P＜0.05);B组与C组比较,C组肝组织ALB mRNA表达水平降低,差异有统计学意义(P＜0.05).术后A组肝组织Ki-67蛋白表达指数比B、C组高,差异有统计学意义(A:8.90±0.45;B:5.60±0.34;C:3.80±0.21,P＜0.05);而B组Ki-67指数比C组高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 肝硬化大鼠肝部分切除术后存在明显的肝功能不全和肝再生能力下降,虽经过积极的肠内或肠外营养支持,其术后各项指标的恢复均明显差于无肝硬化的大鼠.肠内营养较肠外营养更能促进肝硬化大鼠肝部分切除术后肝脏蛋白质的合成代谢和肝再生,肠内营养途径可进一步降低与肠外营养相关的胆汁淤积并发症的发生.     

抗CD-40L单抗加小剂量、短程CsA对肝移植大鼠生存期和Th1/Th2平衡偏移的影响

目的 采用抗CD-40L单抗加小剂量CsA的联合免疫治疗,观察其对大鼠肝移植受体生存时间和Th1/Th2细胞因子谱变化的影响.方法 在建立稳定大鼠肝移植模型的基础上,将整个实验分为4组.A组(同基因对照组):SD→SD;B组(同种异体基因免疫排斥组):SD→Wistar,不用任何治疗措施;C组:SD→Wistar,CsA应用d1～d5;D组:SD→Wistar,CsA应用d1～d5加抗CD-40L(CD-154)单抗应用d0、d2.观察各组大鼠肝移植受体生存时间,移植后第7天用ELISA法检测外周血细胞因子水平.结果 A组、D组受体大鼠均可长期存活,B组生存时间仅为(13.8±2.4)d.IL-2、IFN-γ在B组的血清水平显著高于其余各组(P＜0.05),TNF-α在B组的表达水平高于不同免疫抑制组,但差异无显著统计学意义.IL-4、IL10较A组均有所增加,尤其D组的IL-10表达水平较B组显著增高(P＜0.05).结论 抗CD-40L单抗加小剂量CsA(伴或不伴DSBT)联合免疫治疗,可有效延长大鼠肝移植受体的生存时间,Th2类细胞因子的高水平表达与诱导移植耐受、抑制排斥反应有重要关联,有助于大鼠肝移植受体和移植肝的长期存活.     

CD4+CD25+T细胞联合CD154单抗抑制大鼠肝移植急性排斥反应的研究

目的探讨CD4 CD25 T细胞联合应用CD154单抗在抑制大鼠肝移植急性排斥反应中的作用。方法分离Lewis大鼠脾脏CD4 _CD25 T细胞后与DA大鼠脾细胞单向混合淋巴细胞反应行体外激活。用"二袖套法"行DA到Lewis的原位肝移植48例。A组为对照组;B、C组单独术前回输体外激活的CD4 CD25 T细胞或术后腹腔注射抗CD154单抗;D组联合应用CD4 CD25 T细胞和CD154单抗。每组大鼠12对。术后7 d各组处死6只受体,检测移植肝内T细胞亚群和细胞因子水平。余大鼠观察生存情况,死亡大鼠观察移植肝病理变化。结果D组受体生存期(52.00±10.64)d明显长于B、C组(P<0.01);移植肝内CD4 CD25 T细胞比例(16.43±4.28)%明显高于B、C组(P<0.05、P<0.01),而淋巴细胞浸润数量[(3.47±1.21)%×106]和(CD8 T细胞百分比(14.19±3.02)%明显低于B、C组(P<0.05、P<0.01);移植肝内白细胞介素- 2(IL-2)水平(6.44±1.83)ng/L低于B、C组(P<0.05),IL-10(43.72±7.55)ng/L和转化生长因子-β1(TGF-β1)(270.06±46.91)ng/L明显高于B、C组(P<0.05、P<0.01)。结论联合应用CD154单抗能明显增强CD4 CD25 调节性T细胞对大鼠肝移植急性排斥反应的抑制作用。     

妊娠大鼠来源脂肪干细胞在急性肝损伤中的修复作用

目的评估妊娠大鼠来源脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)在急性肝损伤中的修复作用。方法取18周龄妊娠SD大鼠分离培养ADSCs并鉴定。另取SD大鼠20只随机分为A、B、C、D 4组(n=5),A组大鼠不作处理,作为正常对照;B~D组大鼠腹腔注射CCl4制备急性肝损伤模型。造模后2 h,A组于大鼠脾脏注射DPBS,B组不注射任何试剂,C、D组分别于大鼠脾脏注射0.1 mL正常大鼠来源和妊娠大鼠来源ADSCs(2×10~6个/mL)。注射后7 d处死动物,取眼球血检测血清中总胆红素(total bilirubin,TBIL)、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartic acid transaminase,AST)、白蛋白(albumin,ALB)和肝功能总蛋白(total protein,TP)含量;取肝组织切片行HE染色检测损伤肝组织形态学变化;免疫组织化学染色检测肝组织中Ki67、甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)和ALB的表达情况。结果 B组血清中TBIL、ALT、AST含量显著高于A、C、D组,ALB、TP含量显著低于A、C、D组,差异均有统计学意义(P0.05)。C、D组血清中TBIL、ALT、AST含量显著高于A组,C组高于D组,差异均有统计学意义(P0.05);A、C、D组血清中ALB含量差异无统计学意义(P0.05);C、D组血清中TP含量显著低于A组(P0.05),C、D组间比较差异无统计学意义(P0.05)。HE染色示:A组大鼠肝组织结构清晰,细胞排列整齐,大小均匀;B组大鼠肝细胞明显出现水肿,细胞排列紊乱,可见肝小叶内点状坏死,组织出现弥漫性炎性细胞浸润;C、D组大鼠肝组织炎症和肝细胞坏死程度较B组明显减轻,同时由线粒体和粗面内质网扩张造成的空泡数量降低,其中D组肝损伤改善程度较C组更显著。免疫组织化学染色示:C、D组Ki67阳性细胞率显著高于A、B组,B组高于A组,D组高于C组,差异均有统计学意义(P0.05)。A、B组AFP均无表达,而C、D组阳性表达,D组AFP阳性细胞率显著高于C组(t=3.006,P=0.017)。C、D组ALB表达均显著高于A、B组,D组高于C组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论与正常大鼠来源ADSCs移植比较,妊娠大鼠来源ADSCs移植后,肝损伤大鼠肝功能改善程度更显著。     

Th1/Th2细胞因子变化在大鼠肝移植免疫耐受中的作用

目的:研究大鼠肝移植术后移植肝和外周血中细胞因子的表达,并分析其在急性排异反应和耐受诱导中的作用。方法:Kamada法建立大鼠肝移植模型,并随机分为4组,每组8只。A组:同品系组;B组:免疫排异组;C组:B组+免疫抑制剂;D组:C组+骨髓输注。RT-PCR和ELISA技术分别检测移植肝和外周血中细胞因子IL-2、INF-γ、IL-4、IL-10、TGF-β1的表达,并观察受体存活率。结果:在B组中Th1型细胞因子(IL-2、INF-γ)表达高于A、C和D组(P<0.05);而Th2型细胞因子(IL-4、IL-10)和TGF-β1表达低于C和D组(P<0.05);细胞因子在C组与D组大鼠中的表达无统计学差异。A、C、D组大鼠术后近、远期存活率明显优于B组。结论:Th1型细胞因子(IL-2、INF-γ)参与肝移植急性排异反应的发生,Th2型细胞因子(IL-4、IL-10)和TGF-β1可能参与移植物免疫耐受的诱导,延长移植物存活。     

肝移植患者外周血辅助性T 17细胞的变化及意义

目的探讨肝移植术后患者外周血辅助性T(Th)17细胞(CD4+IL-17+T淋巴细胞)与急性排斥反应的关系。方法本文研究对象为2008年6月至2012年12月在首都医科大学附属北京朝阳医院肝胆胰脾外科因良性终末期肝病行原位肝移植术的76例患者。根据患者术后有否发生急性排斥反应,分为排斥组(17例)和非排斥组(59例)。所有患者均按常规定期随访。记录患者排斥反应发生情况及治疗经过。排斥组患者发生急性排斥反应时给予肝穿刺活组织检查确定排斥反应严重程度。所有患者分别于肝移植术前、出院后1年内定期(间隔3~6个月)、或急性排斥反应治疗前和缓解后(3~6个月),检测外周血CD4+IL-17+T淋巴细胞占CD4+T淋巴细胞百分比(CD4+IL-17+T%)。比较两组患者各时间点的CD4+IL-17+T%。分析CD4+IL-17+T%与排斥活动指数(RAI)、免疫抑制剂血药浓度的相关性。结果急性排斥反应发生在术后0.7~12.0个月,中位数2.5个月。肝移植术后,与非排斥组比较,排斥组患者CD4+IL-17+T%明显升高[(1.79±0.44)%比(2.56±0.43)%,P0.001]。排斥组患者发生急性排斥反应时,CD4+IL-17+T%均较未发生急性排斥反应时明显升高[(2.56±0.43)%比(1.50±0.25)%,P0.001)]。非排斥组患者不同时间点的CD4+IL-17+T%变化不明显(P0.05)。排斥组患者发生急性排斥反应时的CD4+IL-17+T%与RAI呈正相关(r=0.72,P=0.001)。排斥组和非排斥组患者他克莫司、环孢素血药浓度与CD4+IL-17+T%无明显相关性(r=0.21,-0.13;均为P0.05)。结论外周血CD4+IL-17+T%可作为诊断和评估肝移植术后急性排斥反应严重程度的监测指标,外周血CD4+IL-17+T%升高提示急性排斥反应严重。     

Gemcitabine does not prevent acute rejection of the transplanted liver in rats

Our study was designed to determine effect of gemcitabine on acute rejection of liver in rats. Liver transplantation was performed in rats of the Dark Agouti (DA) and Lewis (LEW) strains. Recipients were divided into three groups: A, DA-to-LEW without immunosuppression; B, DA-to-LEW, treated with cyclosporine A; C, DA-to-LEW, treated with gemcitabine. Immunosuppressants were subcutaneously injected for seven consecutive days after transplantation. On day 7, blood samples and liver graft tissue specimens were harvested. Group A showed severe rejection changes (RAI 8/9); in group B no rejection changes were present (RAI 0/9), and in group C moderate rejection changes were observed (RAI 6/9). Differences were significant between B vs C and A vs C groups; P<0.05. Serum creatinine and urea levels in the gemcitabine group were significantly lower than those in the cyclosporine A group. We did not confirm gemcitabine ability to prevent liver allograft rejection.     

Gemcitabine does not prevent acute rejection of the transplanted liver in rats

Abstract Our study was designed to determine effect of gemcitabine on acute rejection of liver in rats. Liver transplantation was performed in rats of the Dark Agouti (DA) and Lewis (LEW) strains. Recipients were divided into three groups: A, DA-to-LEW without immunosuppression; B, DA-to-LEW, treated with cyclosporine A; C, DA-to-LEW, treated with gemcitabine. Immunosuppressants were subcutaneously injected for seven consecutive days after transplantation. On day 7, blood samples and liver graft tissue specimens were harvested. Group A showed severe rejection changes (RAI 8/9); in group B no rejection changes were present (RAI 0/9), and in group C moderate rejection changes were observed (RAI 6/9). Differences were significant between B vs C and A vs C groups; P >0.05. Serum creatinine and urea levels in the gemcitabine group were significantly lower than those in the cyclosporine A group. We did not confirm gemcitabine ability to prevent liver allograft rejection.     

芳香烃受体的激活在大鼠肝移植免疫应答中的作用及机制研究

目的芳香烃受体（AhR）是一种配体激活性转录因子，可以影响T细胞分化，在多种免疫性疾病中发挥作用，本研究主要探索AhR在大鼠肝移植免疫应答中的作用以及机制。 方法建立大鼠肝移植同基因耐受模型和异基因排斥模型，术后1、3、7、14 d检测各组AhR和程序性死亡（PD-1）表达量。对肝移植排斥模型进行不同处理并分组。A组：对照组，腹腔注射（i.p.）羧甲基纤维素钠（CMC-Na） 1 ml；B组：200 mg·kg^-1·d^-1的3,4-DAA（i.p.）；C组：10 mg·kg^-1·d^-1的CH223191（i.p.）；D组：200 mg·kg^-1·d^-1的3,4-DAA和10 mg·kg^-1·d^-1的CH223191（i.p.）。7 d后采集受体外周血检测肝功能指标及CD4⁺Foxp3⁺T细胞和CD4⁺PD-1⁺T细胞占比，收集大鼠移植肝组织进行病理学检查，采用Banff分级评估排斥活动指数（RAI），并通过免疫印迹法、qPCR检测移植肝组织AhR、PD-1的变化。 结果在肝移植排斥模型中AhR和PD-1表达量随着时间逐渐降低，在肝移植耐受模型中逐渐增加。与A组相比，B组受体大鼠RAI降低，存活时间延长，移植排斥减轻；而C组肝功能指标明显上调，RAI升高，移植排斥反应加重；D组与A组差异不明显。AhR和PD-1表达以及CD4⁺Foxp3⁺T细胞、CD4⁺PD-1⁺T细胞占比在受体中呈现相同的趋势。 结论随着肝移植排斥反应的加重，AhR和PD-1表达降低，反之亦然。AhR激活可通过增加调节性T细胞的比例和PD-1的表达，有效降低大鼠肝移植排斥反应的发生。AhR有可能成为临床肝移植术后排斥治疗的新靶点。     

供体骨髓间充质干细胞抑制肝移植大鼠免疫排斥的研究

目的 探讨供体骨髓间充质干细胞(MSCs)抑制肝移植大鼠免疫排斥的作用.方法 实验按照随机数字表法分为3组,每组14对雌性大鼠,建立Wistar-SD大鼠原位肝移植模型.A组:肝移植术中输注生理盐水;B组:肝移植术后隔天一次给予他克莫司(0.25 mg/kg)灌胃2周;C组:肝移植术中输注与A组同剂量的雄性Wistar大鼠的MSCs.观察术后第10天肝功能的变化、病理改变、TGF-β1与IL-10的表达、Y染色体定位及受体存活时间.采用完全随机化设计多组比较方差分析AST、ALT值,LSD法分析组间差异;病理分级采用ridit法分析;Kaplan-Meier法计算存活率,Log-rank检验进行生存分析.结果 肝移植术后第10天A、B、C组ALT分别为(756±104)、(197±49)、(103±31)U/L,AST分别为(635±134)、(331±78)、(150±38)U/L,3组ALT和AST比较差异均有统计学意义(F=158,265,P<0.05);两两比较发现,B组及C组均优于A组,且C组优于B组.A组ridit均值为0.8333,为重度排斥,B、C两组ridit均值分别为0.4583、0.2083,排斥反应较A组显著减轻,且C组较B组级别更低.A、B、C组TGF-β1阳性表达率分别为18%±5%、69%±20%及85%±24%,3组比较差异有统计学意义(F=191,P<0.01).A、B、C组IL-10阳性表达率分别为21%±5%、75%±14%及91%±21%,3组比较差异有统计学意义(F=672,P<0.01);B、C两组TGF-β1和IL-10呈强阳性表达且C组比B组更明显,而A组则为弱阳性表达.原位杂交检测发现,C组含有带Y染色体的雄性MSCs,主要在汇管区聚集.A、B、C组大鼠50 d存活率分别为0、10%、90%,3组大鼠存活率比较差异有统计学意义(χ~2=36,P<0.01),C组中位存活时间为63 d,较A组11 d延长,且C组长于B组.结论 肝移植同时向供体输注MSCs能够抑制受体对移植肝的免疫排斥.     

促红细胞生成素对大鼠移植肾缺血-再灌注损伤的防护作用

目的探讨促红细胞生成素（erythropoietin,EPO）对大鼠移植肾缺血-再灌注损伤（ischemia—reperfusion injury,IRI）的保护作用。方法采用BN大鼠和Lewis大鼠,分别随机分为实验组和对照组,每组各15只。BN大鼠作为供体,Lewis大鼠为受体,建立单侧原位大鼠肾移植模型。实验组受体大鼠术后立即腹腔注射重组人促红细胞生成素（recombinant human erythropoietin,rhEPO）1000U／kg,对照组大鼠同样予腹腔注射等量生理盐水。两组受体大鼠在术后5d剪尾取血,检测血清肌酐（Scr）水平。同时将移植肾取出,肾组织行病理切片苏木素-伊红（HE）染色、过碘酸-雪夫（periodic acid Schiff,PAS）染色、马松（Masson）染色和过碘酸六胺银（periodic acid—silver methenamine,PASM）染色,观察肾组织病理学改变情况。结果实验组受体大鼠术后Scr水平为（102±3）μmol／L,对照组为（369±7）μmol／L,两者比较差异有统计学意义（P〈0．05）。两组受体大鼠移植肾均出现肾小管坏死改变。对照组移植肾组织病理切片主要表现为大片肾组织坏死,提示出现严重的急性排斥反应、肾小管坏死及动脉损伤;实验组肾组织病理切片主要表现为肾被膜下小灶性肾组织凝固性坏死;与对照组相比,实验组肾组织坏死面积较小,提示急性排斥反应程度较轻。结论肾移植术后早期使用EPO进行预处理可抑制肾脏IRI炎症反应,减少细胞凋亡,缓解移植后IRI。     

紫杉醇在大鼠原位肝移植中的作用及其对细胞毒性T淋巴细胞实验的影响

目的观察紫杉醇在大鼠原位肝移植中的作用及其对细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的影响。方法建立Wistar→SD大鼠肝移植的急性排斥模型。将大鼠分为对照组(阻断全肝血流)、急排组(Wistar→SD肝移植)、紫杉醇组(Wistar→SD肝移植,紫杉醇腹腔注射0.75mg·kg-1·d-1,观察生存时间、病理改变、生化指标及CTL、T淋巴细胞凋亡情况。结果紫杉醇组大鼠的术后存活时间高于急排组,[(18.2±1.5)dvs(8.8±1.9)d,P0.01)。急排组的HE评分(Banff)高于紫杉醇组(7.80±0.83vs4.80±0.82,P0.01)。紫杉醇组的白蛋白水平高于急排组(P=0.003);紫杉醇组的谷丙转氨酶水平低于急排组(t=25.23,P0.01)。CTL检测中,急排组的特异性杀伤靶细胞的百分率均高于紫杉醇组(P0.01)。急排组的T淋巴细胞的凋亡率低于紫杉醇组[(7.16±1.56)%vs(16.47±2.51)%,P0.01]。结论紫杉醇在大鼠肝移植中具有免疫抑制作用,可能通过诱导T淋巴细胞凋亡来抑制T淋巴细胞的活化发挥作用。