羟喜树碱对人胰腺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的：研究羟喜树碱（ＨＣＰＴ）体外抑制人胰腺癌细胞株ＳＷ－１９９０增殖并诱导其凋亡的作用。方法：体外培养的胰腺癌细胞经不同质量浓度（１．５６２．５,３．１２５,６．２５,１２．５,２５．５０,１００μｇ／ｍｌ）的ＨＣＰＴ处理２０￣２４ｈ后,用ＭＴＴ法测定细胞增殖情况,再分别以Ａｎｎｅｘｉｎ Ⅴ早期凋亡检测试剂盒、电子显微镜、流式细胞术和ＴＵＮＥＬ标记以及ｂｃｌ－２免疫细胞化学标记检测细胞凋亡情况。     

靶向封闭CapG基因对胰腺癌细胞运动侵袭能力的影响

目的观察靶向封闭CapG基因对胰腺癌细胞株BxPC3运动侵袭能力的影响。方法设计并体外合成靶向CapG的小干扰RNA,将其转染到BxPC3细胞中,蛋白质印迹法检测转染前后细胞中CapG蛋白的表达,采用Transwell小室检测转染前后细胞运动侵袭能力的改变。结果CapGsiRNA能有效降低BxPC3细胞中CapG的表达,CapG在蛋白质水平的表达抑制率达80％左右。抑制BxPC3细胞中CapG的表达后,BxPC3细胞的运动侵袭能力明显下降,穿过人工基底膜的细胞数显著低于阴性对照组和空白对照组（P〈0．05）。结论封闭CapG表达能明显抑制胰腺癌细胞BxPC3在体外的运动侵袭能力。     

RNA干扰survivin基因对人肝癌HepG2细胞增殖影响

目的 探讨RNA干扰技术抑制survivin基因表达对人肝癌细胞株HepG2细胞增殖的影响.方法 构建针对人肝癌HepG2细胞 survivin基因3个不同靶序列的 shRNA真核表达载体pshRNA-survivin-323/387/52,用Lipofectamine 2000脂质体介导转染法转染质粒, 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测survivin 基因mRNA表达水平.选择对survivin基因表达抑制作用最强的shRNA载体转染HepG2细胞后, 免疫细胞化学法(ICC)检测HepG2细胞survivin蛋白的表达情况,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞的增殖情况.结果 与对照组比较,构建的3个shRNA质粒中pshRNA-survivin-387转染组survivin mRNA水平下调,差异有显著性(F=18.64,q=4.293～4.925,P<0.05),而pshRNA-survivin-323/52质粒对survivin的表达及mRNA水平的影响差异无显著性(q=0.631～0.126,P>0.05).转染pshRNA-survivin-387质粒的HepG2细胞survivin蛋白表达较对照组明显下调(F=68.39,q=13.71、14.37,P<0.01),其增殖能力较对照组显著下降(F=20.06～47.65,q=11.186、 12.601,P<0.01).结论 构建的针对人survivin基因387位靶序列的shRNA表达载体pshRNA-survivin-387可显著抑制survivin的表达及HepG2细胞增殖.     

RNA干扰沉默STAT3基因表达对人胰腺癌细胞SW1990侵袭能力的影响

目的：观察信号转导与转录因子3（STAT3）siRNA表达载体对胰腺癌细胞侵袭能
力的影响,并探讨其机制。方法：实验分为空白对照组、阴性对照组及STAT3 siRNA组。以人
胰腺癌细胞株SW1990作为研究对象,将合成的STAT3 siRNA转染SW1990细胞后,采用RT-PCR及
Western blotting检测转染前后STAT3 mRNA及蛋白的表达变化,Transwell法检测其对胰腺癌
细胞侵袭能力的影响,RT-PCR及Western blotting检测其对胰腺癌细胞MMP-2和MMP-9表达
的影响。结果：STAT3 siRNA转染胰腺癌细胞72 h后,STAT3 mRNA和蛋白表达水平均明显降低,
与空白对照组及阴性对照组比较,差异有统计学意义（P<0.05）;转染后胰腺癌细
胞的侵袭细胞数及MMP-2和MMP-9的表达显著减小,与阴性对照组及空白对照组比较,差异有统
计学意义（P<0.05）。结论：STAT3 siRNA能特异地阻断胰腺癌细胞中STAT3信号的活
化,并进一步通过下调MMP-2和MMP-9的表达从而抑制胰腺癌细胞的侵袭能力。     

Shc1在肝癌组织中的表达及对肝癌SMMC-7721细胞增殖迁移能力的影响

目的 研究Shc1在肝癌组织中的表达情况及其对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、迁移能力的影响。 方法 采用实时定量RT-PCR(Real-time polymerase chain reaction)、蛋白质印迹法（Western Blot）、免疫组织化学法检测33例肝癌及33例对应的癌旁组织中Shc1的表达情况,并分析Shc1蛋白表达量与临床特征间的关系;培养肝癌SMMC-7721细胞,siRNA干扰Shc1的表达,采用MTT法检测细胞增殖活力,细胞划痕试验检测迁移能力。结果 Shc1在33对样本中,肝癌组织中的表达高于癌旁组织（P＜0.05）;Shc1表达于肝细胞癌的胞浆上;无肝硬化的患者Shc1阳性率（100%）高于伴肝硬化者（54.2%）;术前Child-Pugh分级A级的患者Shc1阳性率（75.9%）高于B级或C级的患者（0%）;术前检测血中AFP阳性患者Shc1阳性率（79.2%）高于AFP阴性患者（33.3%）;术后病理EdmondsonⅢ、Ⅳ级患者Shc1阳性率（79.2%）高于Ⅰ、Ⅱ级的患者（42.9%）;差异均有统计学意义（P＜0.05）。干扰Shc1表达后,随时间延长, SMMC-7721细胞增殖、迁移明显受到抑制（P＜0.05）。 结论 Shc1在肝癌组织中高表达,且Shc1的阳性率与肝硬化、Child-Pugh分级、术前AFP、病理Edmondson分级相关;干扰Shc1的表达可抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖、迁移能力。     

HDAC2 siRNA转染对人胰腺癌细胞增殖及凋亡的影响

［摘要］目的: 探讨RNA干扰沉默组蛋白去乙酰化酶2(histone deacetylase 2,HDAC2)基因表达对人胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法: 培养人胰腺癌PaTu8988细胞株,并将其随机分为5组:空白对照组,20 nmol／L HDAC2 siRNA阴性组,40 nmol／L HDAC2 siRNA阴性组,20 nmol／L HDAC2 siRNA组,40 nmol／L HDAC2 siRNA组。合成针对HDAC2基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),利用阳离子脂质体将HDAC2 siRNA瞬时转染人胰腺癌PaTu8988细胞,分别采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹法检测HDAC2基因及蛋白的表达;MTT比色法检测细胞的增殖率;流式细胞术测定细胞凋亡率。结果: 与空白对照组和阴性siRNA 组对比,HDAC2 siRNA组的HDAC2基因和蛋白的表达水平均明显下降(P均<0.05),细胞增殖率减慢(P<0.01),凋亡率明显升高(P<0.01)。结论: 采用RNA干扰沉默人胰腺癌细胞HDAC2基因表达,可抑制癌细胞增殖和诱导其凋亡。     

结肠癌HCT-116细胞增殖及细胞周期的影响

目的：探讨结肠癌组织中SLP-2基因的表达情况,及 SLP-2蛋白对结肠癌 HCT-116细胞增殖和细胞周期的影响。方法采用免疫组织化学法检测50例结肠癌及对应癌旁正常结肠组织中 SLP-2蛋白的表达,分析结肠癌病例临床病理特征与SLP-2蛋白表达的关系,将 SLP-2小干扰 RNA（siRNA）转染 HCT-116细胞,采用逆转录（RT）-PCR及 Western blot检测转染SLP-2 siRNA后 HCT-116细胞中基因及蛋白的表达情况,MTT法和流式细胞术分别检测转染 SLP-2 siRNA后 HCT-116细胞生长状况及细胞周期。结果癌旁正常结肠组织及结肠癌组织中 SLP-2的高表达率分别为22％和70％,差异有统计学意义（P＜0．05）;SLP-2表达情况与结肠癌分期及淋巴结转移情况相关（P＜0．05）。转染 SLP-2 siRNA后,HCT-116细胞中 SLP-2 mRNA和蛋白的表达均下降（P＜0．05）,HCT-116细胞 G1期增高,S期减少,细胞生长变慢（P＜0．05）。结论 SLP-2在结肠癌中高表达,并参与结肠癌的发生发展。     

胰腺癌中microRNA的研究新进展与新发现

胰腺癌起病隐匿,早期多无特征性表现,不易诊断,其恶性程度高,手术治疗困难,预后极差,是名副其实的癌中之王,成为多年以来医学界肿瘤疾病治疗中的一座顽固的堡垒。近年来,胰腺癌的发病率不断上升,成为世界范围内第二常见的消化系统恶性肿瘤,在国外已超过胃癌位居肿瘤死亡人数的第4位,在我国居肿瘤发病率的第7位[1]。胰腺癌的临床症状一般不典型,大多数患者发现时已处于晚期,5年生存率小于10%[2];故胰腺癌发     

JNK1基因沉默对肺成纤维细胞增殖的影响

目的 研究C-Jun氨基末端激酶1(JNK1)基因表达沉默对肺成纤维细胞MRC-5增殖的影响.方法 设计针对JNK1基因的小RNA分子(siRNA),以脂质体转染法将双链siRNA转入MRC-5细胞后,采用流式细胞术检测最佳转染浓度,RT-PCR检测JNK1 mRNA表达变化,Western blot检测总JNK、磷酸化JNK(P-JNK)蛋白表达,用CCK-8法检测siRNA对MRC-5细胞增殖的影响.结果 siRNA转染MRC-5细胞的最佳浓度为50nmol/L;设计的两个靶位点siRNA,均可有效降低JNK1 mRNA表达,其中siRNA1抑制效果较siRNA2明显;siRNA1降低总JNK及P-JNK蛋白表达,有效抑制MRC-5细胞的增殖.结论 体外合成的siRNA可降低MRC-5细胞中JNK1基因的表达,降低JNK磷酸化水平,明显抑制细胞增殖.     

MicroRNA-137抑制胰腺癌细胞侵袭和迁移能力

目的:探讨microRNA-137(miR-137)对胰腺癌细胞侵袭和迁移能力的影响。方法:构建miR-137慢病毒表达载体(LV-miR-137)及空载体,将细胞分为3组:LV-miR-137感染组(实验组)、空载体组(阴性对照组)及空白组;LV-miR-137感染胰腺癌PANC-1和MIAPaCa2细胞后72h,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测感染效率,Transwell小室侵袭实验及细胞划痕实验检测miR-137对PANC-1和MIAPaCa2细胞株侵袭和迁移能力的影响。结果:LV-miR-137感染胰腺癌细胞株PANC-1和MIAPaCa2后miR-137表达水平量明显升高,Transwell小室细胞侵袭实验发现:实验组PANC-1和MIAPaCa2细胞迁移能力明显受到抑制,细胞迁移数目(58.2±1.1,37.5±1.8)较空白对照组(141.7±7.9,74.2±2.4)和阴性对照组(151.7±5.8,72.2±2.9)明显减少,P<0.05,差异有统计学意义;PANC-1细胞的侵袭能力也明显受到抑制,细胞侵袭数目(44.0±1.5)较空白对照组(110.9±6.4)和阴性对照组(117.2±1.9)明显减少,P<0.05,差异有统计学意义;细胞划痕实验检测发现,24h后实验组胰腺癌MIAPaCa-2、PANC-1细胞的迁移距离明显比阴性对照组及空白组短,P<0.05,差异有统计学意义。结论:MiR-137能抑制胰腺癌细胞的侵袭和迁移能力,有望成为胰腺癌基因治疗的新靶点。     

MicroRNA-141靶向致癌基因Bmi-1抑制胰腺癌细胞增殖的研究

目的: 探讨miR-141调控胰腺癌细胞增殖的机制。方法: 采用qRT-PCR检测正常胰腺细胞和4种胰腺癌细胞株中miR-141的表达。从Gene Expression Omnibus（GEO）下载包含36例胰腺癌样本和16例正常样本的GSE71533的MiR-141表达文件。通过CCK8,平板克隆形成检测miR-141对细胞增殖能力的影响。萤光素酶报告基因检测检测到Bmi-1为miR-141的直接靶基因。结果: qRT-PCR显示与正常胰腺细胞HPDE6c7细胞相比,miR-141在胰腺癌细胞（BxPc-3,ASPC-1,SW1990和PANC-1）中表达下调。通过分析GSE71533数据,MiR-141在胰腺癌组织中下调。使用生物信息学工具将Bmi-1鉴定为miR-141的潜在靶基因。 Western印迹分析结果表明Bmi-1表达与胰腺癌中miR-141的表达呈负相关。双荧光素酶测定表明miR-141锚定在Bmi-1的3''UTR。上调miR-141可以降低Bmi-1的蛋白质表达水平,从而抑制胰腺癌细胞中细胞增殖。结论: 通过靶向Bmi-1,MiR-141在胰腺癌中起着肿瘤抑制剂的作用。这些结果揭示了miR-141在胰腺癌治疗中的潜在功能。     

RNA干扰技术抑制HPV16 E6基因表达对宫颈癌细胞株CaSki增殖的影响

目的观察HPV16 E6小干扰RNA(siRNA)能否抑制宫颈癌细胞生长,并探讨其作用机理。方法化学合成针对HPV16 E6的siRNA,借脂质体转染宫颈癌CaSki细胞,应用细胞计数的方法测定细胞生长曲线、活细胞率及细胞生长抑制率。运用实时荧光定量RT-PCR、流式细胞术检测转染后不同时间点细胞周期、HPV16 E6、p53、p21 mRNA及蛋白表达的变化。结果转染HPV16 E6 siRNA后,细胞生长明显受到抑制。流式细胞术结果显示并未将细胞阻滞在G1期。实时荧光定量RT-PCR显示,转染24h,E6 mRNA的表达比空白组降低了20.11倍(P<0.05),而p53、p21 mRNA的表达无明显变化。转染48h,E6蛋白表达明显下调,Pp53、P21蛋白表达相应地升高。结论HPV16 E6 siRNA可通过特异、高效地沉默宫颈癌细胞E6mRNA的表达,减少对野生型p53的降解,恢复P53蛋白的功能活性而发挥抑制宫颈癌细胞生长的作用。     

RNA干扰沉默S100A2和E-cadherin基因后对胃癌细胞增殖和侵袭力的影响

 目的研究RNA干扰沉默S100A2和E-cadherin基因后对胃癌细胞增殖和侵袭力的影响。方法采用RNA干扰技术,在E-cadherin和S100A2表达阳性的MNK45细胞同时沉默E-cadherin和S100A2基因表达,逆转录聚合酶链反应和Western blot检测干涉效果,MTT 和Transwell检测细胞生长和侵袭力的变化。结果小干扰RNA明显抑制MKN45 细胞E-cadherin和S100A2 的表达;干涉第11天,E-cadherin和S100A2蛋白表达下降,细胞生长速度和细胞侵袭力明显增加。结论E-cadherin和S100A2蛋白具有抑制细胞增殖和侵袭的功能,可作为抑癌因子参与胃癌的发生与转移。     

紫草素诱导自噬抑制胰腺癌细胞增殖的实验研究 张

目的：探讨紫草素是否通过诱导自噬来抑制胰腺癌细胞增殖。方法：采用噻唑蓝比色法 （MTT法）研究紫草素对胰腺癌细胞Bxpc-3的增殖抑制作用     

增强miR-146b-3p表达对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨增强miR-146b-3p表达对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 Real time PCR检测miR-146b-3p在6种人胰腺癌细胞系(MIA PaCa-2、BxPC-3、AsPC-1、PANC-1、SW1990、PC-3)和手术切除的12对胰腺癌/癌旁组织中的表达.将Pre-miR-hsa-miR-146b-3p Precursor 转染MIA PaCa-2 细胞,Real time PCR检测转染后miR-146b-3p的表达变化,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-8的表达变化.结果 与正常胰腺组织相比,miR-146b-3p在6种胰腺癌细胞系中均呈低表达,以MIA PaCa-2细胞最为明显;12对胰腺组织中,癌组织miR-146b-3p表达水平均低于癌旁组织.同阴性对照组比较,转染前体组的MIA PaCa-2细胞,miR-146b-3p表达增强383.25倍,细胞增殖能力下降,细胞凋亡率增加,蛋白Bcl-2表达降低(50.0%),Bax表达升高(4.29倍).结论 miR-146b-3p在胰腺癌细胞系和癌组织中低表达;上调胰腺癌细胞MIA PaCa-2中 miR-146b-3p的表达,能够抑制增殖和诱导细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2表达,上调Bax的表达有关.     

转酮醇酶1在人结肠癌细胞株LoVo增殖中的作用

目的 探讨转酮醇酶1(TKTL1)在体外培养的人类结肠癌细胞株(LoVo)生长增殖中的作用.方法 构建针对TKTL1 mRNA 的小干扰RNA(siRNA)质粒,将该质粒转染LoVo细胞;采用实时定量RT-PCR检测转染前后LoVo细胞转酮醇酶基因家族中转酮醇酶(TKT)、TKTL1、转酮醇酶2(TKTL2) mRNA表达水平的变化,通过流式细胞术和MTT法检测转染前后LoVo细胞周期和细胞增殖的改变.结果 转染组(携带有pEGFP-C1-U6/TKTL1)、质粒对照组(携带有pEGFP-C1-U6/UC)和未转染组(未转染细胞)中TKT和TKTL2 mRNA的表达水平差异无显著性意义(P>0.05).转染组细胞中TKTL1的表达水平与质粒对照组和未转染组相比,明显下调,且转染组LoVo细胞总转酮醇酶活性明显下降,细胞增殖明显被抑制,LoVo细胞被阻滞在G0/G1期.结论 TKTL1在人类结肠癌细胞(LoVo细胞系)的生长增殖中起重要作用,TKTL1可能成为肿瘤治疗的新靶点.     

S100A7表达下调对胃癌SGC-7901细胞增殖和迁移能力的影响

目的 研究S100A7表达下调对胃癌SGC-7901细胞增殖和迁移的影响,并探讨其可能的分子机制.方法 将胃癌SGC-7901细胞分为3组:未转染组、对照siRNA组和S100A7 siRNA组,后两组分别转染对照siRNA和S100A7 siRNA.利用实时荧光定量RT-PCR和蛋白质印迹分析检测各组胃癌SGC-7901细胞中S100A7 mRNA和蛋白的表达;采用CCK-8和Boyden小室分别检测各组细胞增殖和细胞迁移能力的变化.最后采用蛋白质印迹分析法检测3组胃癌细胞中cyclin D1、Cdk2和MMP-2蛋白的表达.结果 S100A7 siRNA能下调胃癌SGC-7901细胞中S100A7 mRNA和蛋白的表达.S100A7 mRNA和蛋白表达下调抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖和迁移,并降低cyclin D1、Cdk2和MMP-2蛋白的表达.结论 S100A7表达下调介导的胃癌细胞增殖抑制和迁移降低可能与cyclin D1、Cdk2和MMP-2表达的下调密切相关.     

非小细胞肺癌中人乳头瘤病毒感染与细胞增殖及凋亡的关系

目的探讨人乳头瘤病毒（HPV）16、18型感染与原发性非小细胞肺癌（NSCLC）组织中细胞增殖及凋亡的关系及其意义。方法应用PCR、TUNEL和免疫组化SP法分别检测76例NSCLC及13例肺良性病变中HPV16、18型DNA、细胞凋亡和增殖细胞核抗原（PCNA）的表达，并分别计算增殖指数（MI）和凋亡指数（AI）。结果NSCLC中HPV16、18型总阳性率为40．8％（31／76），而肺良性病变组阳性率为7．7％（1／13），差异有显著性意义（P〈0．05）。HPV感染在不同组织学类型及有无淋巴结转移间差异无显著性意义，而在不同组织分化程度间差异有显著性意义（P〈0．05）。NSCLC中HPV阳性组与阴性组之间MI及AI差异均有显著性意义（均P〈0．05）。结论HPV16、18型感染在NSCLC发生中可能有病因学意义，其致癌机制之一可能通过减少癌变细胞凋亡和促进细胞异常增殖而导致细胞癌变。     

敲低造血前B细胞白血病转录因子相互作用蛋白对胰腺癌细胞增殖、周期和凋亡的影响

目的 探讨造血前B细胞白血病转录因子相互作用蛋白(HPIP)对胰腺癌细胞增殖、周期及凋亡的影响。方法 采用免疫组织化学染色方法检测胰腺癌组织及对应癌旁组织中HPIP的表达水平,小干扰RNA瞬时转染的方法敲低胰腺癌细胞中HPIP的表达水平,细胞计数试剂盒-8实验、克隆形成实验、流式细胞术检测敲低HPIP对细胞增殖、周期及凋亡的影响,免疫印迹法检测敲低HPIP对于cyclin D1、caspase 7和cleaved caspase 7表达水平的影响。结果 胰腺癌组织中HPIP的表达明显高于癌旁组织(Z=-2.060,P=0.039)。敲低HPIP表达水平后,在24 h起MIA PaCa-2和BxPC-3细胞的生长受到抑制(P均<0.05);MIA PaCa-2(t=4.706,P=0.009)和BxPC-3细胞(t=9.514,P=0.000)形成的阳性克隆数明显减少;MIA PaCa-2(t=7.642,P=0.001)及BxPC-3细胞(t=2.714,P=0.051)中S期细胞比例明显降低,G₀/G₁ 期细胞比例明显增加(t=3.244,P=0.031;t=6.095,P=0.003);MIA PaCa-2(t=24.58,P=0.000;t=29.43,P=0.000)和BxPC-3细胞(t=36.45,P=0.000;t=43.52,P=0.000)中的晚期凋亡率和总凋亡率均明显上升;MIA PaCa-2(t=6.705,P=0.002)和BxPC-3细胞(t=6.238,P=0.003)的cyclin D1表达水平明显下降,caspase 7表达水平变化无统计学意义(t=0.711,P=0.516;t=0.027,P=0.979),cleaved caspase 7表达水平明显上升(t=3.991,P=0.016;t=6.536,P=0.002)。结论 与癌旁组织相比,HPIP在胰腺癌中表达水平较高。敲低HPIP可导致胰腺癌细胞生长受到抑制,细胞周期由G₀/G₁期向S期转化受阻,并促进胰腺癌细胞凋亡。HPIP可能在胰腺癌中发挥癌基因作用。