羊膜对兔角膜上皮细胞影响的实验研究

目的 :观察羊膜对在其上皮面培养的兔角膜上皮细胞增生的影响。方法 :将兔角膜上皮细胞原代培养后 ,接种于羊膜上皮面 ,并用MTT自动比色法分别于接种后 1、3、5、7天检测羊膜对兔角膜上皮细胞增生的影响。结果 :接种后 1 ,3,5天 ,羊膜对兔角膜上皮细胞有明显的促增生作用 (P <0 0 5)。结论 :羊膜有促进兔角膜上皮细胞增生的作用 ,可用做角膜表面结构重建的理想材料。     

羊膜在兔眼小梁切除术中应用的实验研究

目的:探讨羊膜在实验动物兔抗青光眼手术中的抗纤维化作用。方法:选择纯种新西兰白兔24只,随机分为3组:小梁切除加羊膜移植术组,小梁切除加丝裂霉素组,单纯小梁切除术组。分别于手术后第1、2、3、7、14、28、60d观察眼压、滤过泡、前房反应、并发症情况,术后1、2、3、4周和2个月处死相应组兔子,摘除眼球作病理切片检查,观察羊膜降解时间,进行成纤维细胞计数和炎症细胞计数。结果:眼压值在各观察点除术后第一天差异有显著性外(P=0.041,P=0.021),其余时间3组间差异无显著性(P值均>0.05);羊膜组术后并发症与另两组比较未见增多;滤过泡存留时间约1个月;羊膜降解时间约3～4周。成纤维细胞计数羊膜组[(0.0205±0.01235)个/单位面积],与小梁切除术组[(0.0673±0.03830)个/单位面积]比较差异有显著性(P=0.017<0.05),与丝裂霉素组[(0.0292±0.01085)个/单位面积]比较差异无显著性(P=0.222>0.05);而炎症细胞数羊膜组[(0.4402±0.1708)单位面积]与小梁切除术组[(0.2944±0.08876)个/单位面积]和丝裂霉素组[(0.041±0.02131)个/单位面积]比较差异均有显著性(t=5.67,P=0.002<0.05;t=4.81,P=0.004<0.05)。结论:羊膜在小梁切除术中应用其降解时间约3～4周,具有抑制成纤维细胞作用,可以提高降压效果且并发症较少。其手术区炎症反应重可能为种属间的排斥反应。     

羊膜移植治疗兔眼角膜急性期碱烧伤的实验研究

眼部化学烧伤和热烧伤的治疗比较复杂，但目前仍没有一种理想的治疗方法。羊膜移植已广泛用于治疗翼状胬肉、睑球粘连、角膜溃疡等眼表疾病。本实验试图研究羊膜移植用于角膜急性期碱烧伤的治疗效果，并探讨手术时机的选择。     

羊膜泪道支架预防去势雄兔干眼症的实验研究

目的 探究羊膜泪道支架对雄兔干眼症的预防效果.方法 选取36只健康雄兔,剪除第三眼睑并抗感染处理,随机分为3组(每组12只),制作去势雄兔模型,其中A组为阴性对照组,B组为干眼模型组,C组为泪道羊膜预防组,并在植入羊膜泪道支架前、植入后2周、4周及6周行角膜荧光素(fluores-cent,FL)染色、Schirmer I试验、Western blot、免疫荧光染色及角膜共聚焦显微镜检查.结果 三组不同时间点间的泪液分泌量及FL有明显改变(F =7.126,P=0.009;F=9.658,P=0.016),三组间泪液分泌量及FL有明显改变(F=12.582,P=0.005;F=13.187,P=0.013),三组的泪液分泌量及FL变化趋势也有明显改变(F=8.531,P=0.007;F=10.652,P=0.019).A、B、C三组植入后6周上皮基底细胞分别(3811±414)个细胞、(3820±314)个细胞、(2789±353)个细胞,炎症细胞密度分别为(266±28)个细胞、(266±29)个细胞、(67±13)个细胞;A、B、C三组植入后6周上皮基底细胞(F=13.442,P=0.012)和炎症细胞密度(F=9.231,P=O.021)比较,差异均有统计学意义.泪道上皮K16染色均为阴性,植入羊膜泪道支架后各时间点A、B、C三组兔泪小管组织中α-SMA表达无明显改变,差异有统计学意义(F=14.681,P=0.002).结论 植入羊膜泪道支架对雄兔干眼症的预防有一定的效果.     

人羊膜上皮细胞混悬液治疗兔急性角膜碱烧伤的实验研究

目的:结合体外细胞实验和在体动物实验研究羊膜上皮细胞(amnion epithelial cell,AEC)混悬液对兔角膜上皮细胞(cornea epithelial cell,CEC)生物学行为的影响及对急性角膜碱烧伤的治疗作用.方法:细胞实验:实验组将AEC及CEC于Transwell小室中培养,上室为AEC混悬液,下室接种CEC,对照组上室仅为培养基,于不同时间点行CCK-8法检测CEC的增殖活性;免疫细胞化学法检测PCNA表达;细胞划痕法观察细胞迁移能力.动物实验:采用改良的兔角膜碱烧伤模型制备方法:将10 mm直径环钻轻置于角膜中央,向环钻中央加入NaOH溶液,1 min后去环钻迅速冲洗兔眼,随机分三组(空白对照、AEC混悬液滴眼液治疗组、结膜下注射治疗组),于术后每周行裂隙灯显微镜及荧光素钠染色观察角膜情况.第28 d摘除眼球并固定行HE染色,免疫组织化学法检测角膜VEGF、mcp-1的表达.结果:CCK-8法示AEC混悬液作用后的CEC增殖活性增强(P<0.05);免疫细胞化学法显示PCNA阳性表达增强(P<0.05);划痕试验示AEC干预后CEC迁移加快.动物实验表明,滴眼液组和结膜下注射组的角膜恢复时间明显缩短,CNV面积均少于对照组(P<0.05),滴眼液组和结膜下注射组之间差异无统计学意义(P>0.05);HE染色示治疗组角膜组织炎症细胞浸润更少,组织排列更规则;免疫组化显示组织中VEGF、mcp-1表达更低(P<0.05),而滴眼液组和结膜下注射组之间差异无统计学意义(P>0.05).结论:AEC混悬液促进CEC增殖和迁移,影响CEC生物学行为变化.经AEC混悬液点眼及结膜下注射治疗兔眼碱烧伤后角膜修复加快,且两种方法抑制炎症反应及CNV形成,有望成为治疗急性角膜碱烧伤的新方法.     

羊膜泪道修复支架对兔泪小管损伤后愈合过程的影响

目的　探讨羊膜泪道修复支架对兔泪小管损伤后愈合过程的影响。方法　选择新西兰大白兔４０只（８０眼）,其中３１只兔制作兔泪小管损伤模型,４只造模失败,将造模成功的２７只兔（５４眼）随机分为３组,泪道羊膜组（Ａ组）:将兔双侧泪小管进行羊膜泪道修复支架植入;硅胶组（Ｂ组）:进行双侧泪小管兔泪道硅胶支架植入;造模组（Ｃ组）:造模后不作任何处理。剩余９只正常兔作为空白对照,分别于术后１周、２周、４周三个不同时间点观察兔泪小管的组织学变化情况。结果　术后３组均可见兔泪小管组织上皮层细胞数量不同程度减少,伴大量炎症细胞浸润,３组各时间点炎症细胞数比较,Ａ组＜Ｂ组＜Ｃ组,以术后４周最为明显,Ａ组（３．０±１．７）个、Ｂ组（８．０±２．５）个、Ｃ组（１０．０±３．６）个,３组间两两比较差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。正常兔泪小管组织中黏蛋白Ｍｕｃ５ＡＣ表达阴性;术后３组间各时间点比较,α-平滑肌蛋白的积分光密度值差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。结论　兔泪小管上皮缺乏杯状细胞,羊膜作为泪道生物性的修复支架材料,能减轻炎症反应程度和抑制受损兔泪小管的基质纤维化水平,用于重建修复受损泪道黏膜及抑制泪道瘢痕性狭窄具有较大的潜力。     

羊膜泪小管支架治疗去势雄兔干眼症的实验研究

目的：探究羊膜泪小管支架对手术阉割雄兔干眼症的影响。

方法：将36只成年雄性兔分组,其中A组行假阉割手术,B组假植入泪小管支架,C组植入泪小管支架。分别于植入前和植入后2、4、6wk行角膜荧光素染色(FL)和泪液分泌试验(SⅠt)检查,共聚焦显微镜观察角膜神经变化。

结果：A组角膜光滑、清晰,FL染色不明显; B组角膜粗糙,角膜上皮见点染色斑点; C组角膜较假手术组更为光滑、清晰,无明显点状染色。各组植入后2、4、6wk时FL染色评分和SⅠt比较,差异有统计学意义(均P<0.05)。共聚焦显微镜下可见A组为相对直的神经丛,量多,清晰可见; B组角膜上皮细胞下神经可见弯曲,数量有所减少; C组角膜上皮下神经相对直,与正常雄兔角膜上皮下神经相比,数量略有减少。

结论：羊膜泪小管支架可显著改善阉割去势雄兔干眼症的症状和体征,具有治疗作用。     

羊膜移植联合鸡角膜缘上皮移植治疗兔全角膜表层损伤的组织学改变

目的：研究羊膜移植术和联合鸡角膜缘上皮移植（联合移植）术治疗兔全角膜表层损伤的组织学改变。方法：兔39只分为3组，每组13只。对照组，将角膜及角膜缘外3mm的表层组织去除；羊膜移植组，在去除表层组织的创面上移植羊膜；联合移植组，在羊膜移植片表面角膜缘区移植鸡角膜缘上皮。手术当天各组处死1只兔，7、28、90、105天各组处死3只兔，摘除眼球分别进行光镜、免疫组化，透射电镜及扫描电镜检查。结果：对照组：角膜紊乱，表面不平，上皮表面微绒毛稀少，基质纤维血管化。羊膜移植组及联合移植组：羊膜结构逐渐被基质胶元纤维取代和改建，基质纤维平行排列，角膜表面光滑，上皮表面微绒毛丰富，细胞之间可见桥粒连接。结论：羊膜移植术和联合鸡角膜缘移植术治疗兔角膜广泛损伤，能抑制新生血管和纤维组织向角膜生长，较快促进眼表重建。     

羊膜、结膜及Tenon's膜移植在兔结膜重建中的实验研究

目的比较羊膜移植(amniotic membrane transplantation,AMT)、自体结膜移植(autologous conjunctival transplantation,ACT)、自体Tenon's膜移植(autologous Tenon's fasiatransplantation,ATFT)在结膜重建中的作用.方法新西兰大白兔24只随机分组:对照8眼不作任何处理,滴bFGF眼药水8眼;AMT组16眼,ACT组8眼,ATFT组8眼.于第2,3,4,6周时杀死兔各2只,HE及透射电镜观察.结果AMT组3w时结膜上皮移行至羊膜表面,6w时再生上皮的超微结构接近正常,但杯状细胞较正常少.ACT组从一开始就保持了上皮的完整性且杯状细胞丰富.ATFT组上皮再生与AMT组接近但有轻度结膜下纤维化.结论AMT可有效地修复结膜表面,抑制炎症和瘢痕化.ATFT可改善眼表的基质和血供.ACT是修复结膜缺损的最有效方法.     

自制全结膜囊羊膜固定器在重症眼表烧伤中应用

目的观察自制全结膜囊羊膜固定器在重症眼表烧伤行羊膜遮盖手术中应用效果。方法在11例（13眼）眼部重症烫伤患者治疗中采用自制全结膜囊羊膜固定器将羊膜固定于眼表及眼睑皮肤面。根据病情需要更换羊膜,随访3月至3年。结果患者平均手术时间为（8．0±3．0）分钟;眼表组织上皮化时间（13．2±11．3）天。重复手术次数3．5次,患者手术依从性良好,观察病例无角膜穿孔,无睑球粘连。结膜囊狭窄5例,角膜斑翳5例,角膜血管化2例。结论采用自制全结膜囊羊膜固定器手术,缩短手术时间,无创伤,重症烧伤患者可多次重复手术,特别适合重症眼表烧伤早期治疗,减少晚期严重并发症的发生。     

羊膜移植在眼表疾病中的应用

目的：探讨羊膜移植治疗眼表疾病的疗效，寻找有效降低翼状胬肉术后复发率的新方法。方法：对34例翼状胬肉，1例硷烧伤致睑球粘连患者进行保存羊膜移植手术，并在术后3月，6月分别取患眼部位羊膜植片进行组织细胞学检查，随访3－18月，结果：羊膜移植片生长良好，术后复发率为5．7％，无感染现象。细胞学检查表明，羊膜能够在免疫条件下成活后适应生长。结论：羊膜移植可用于治疗多种眼表疾病，尤其可以有效降低翼状胬肉术后复发率，是一种能够重建正常眼表，值得推广的新手术。     

保存人羊膜移植治疗难治性眼表疾病的临床效果

目的　探讨保存人羊膜移植治疗难治性眼表疾病的临床效果。方法　采用保存人羊膜移植治疗 49例 5 6眼难治性眼表疾病 ,其中翼状胬肉 2 6例 3 3眼 ,急性碱烧伤 3例 ,慢性化学性烧伤13例 ,大泡性角膜病变 4例 ,眼表良性肿瘤 3例。结果　术后无一例眼发生感染 ,除一例急性碱烧伤患者于术后第 5天羊膜溶解、脱落外 ,其余患者术后羊膜植片平伏 ,术后 1～ 4周内正常上皮沿羊膜表面生长 ,成功重建眼表。经过平均 11 2± 5 6个月的随访观察 ,翼状胬肉者中 5眼复发 ,手术成功率为 84 8% ,复发率为 15 2 % ,3例急性碱烧伤者出现角膜结膜化 ,未能获得长期稳定的眼表 ,慢性化学性烧伤者角膜新生血管明显减轻 ,睑球粘连松解 ,视力有不同程度改善 ,大泡性角膜病变者主观症状得以改善 ,眼表良性肿瘤者未见复发及并发症发生。结论　保存的人羊膜移植能安全、有效地重建部分难治性眼表疾病患者的眼表 ,但对急性严重碱烧伤患者的远期疗效不理想。     

羊膜移植重建眼表的随访报告

目的：评价羊膜移植重建眼表的远期疗效。方法：对66例（79只眼）不同类型眼表疾病患者行羊膜移植，随访时间8-30月，观察眼表上皮的完整性、充血状态、新生血管、炎症反应、视力等。结果：66例（79只眼）眼表上皮全部愈合。新生血管生长5.06％（4/79）；翼状胬肉复发率4.11％（3/73）；持续性角膜上皮缺损上皮修复良好，无一例复发，感染性角膜溃疡炎症控制；视力提高63.29％（50/79）。结论：羊膜是一种良好的眼表缺损修复材料，较好的结膜替代物，具有抗感染、抑制新生血管、减少疤痕的作用，同时是上皮生长的良好基底膜，远期疗效满意。     

羊膜移植在眼科领域中的合理应用

随着对羊膜特性的深入认识,传统羊膜移植的适应证逐渐扩大,并且出现了各种新型羊膜制品。本文主要对目前羊膜移植在眼科的进展和合理应用做一概述。     

早期生物羊膜移植联合自体血清治疗眼碱烧伤的临床观察

目的 观察生物羊膜移植联合自体血清治疗眼碱烧伤的临床疗效.方法 回顾分析2011年8月至2013年4月收治眼表碱烧伤22例（40眼）.观察早期行生物羊膜移植联合自体血清的治疗后视力、角膜混浊及并发症情况.结果 所有病例术后眼表迅速稳定,术后视力提高、角膜透明性均明显好于术前、并发症少.结论 生物羊膜移植术联合自体血清不失为治疗眼部碱烧伤的一种简单可行、实用有效的方法.     

羊膜移植对家兔PRK术后伤口愈合作用的研究

目的：观察羊膜对家兔PRK术后角膜伤口愈合反应的影响。方法：对30只家兔常规施行双眼PRK手术（－8．0D切削程序），即行羊膜移植，观察术后早期角膜切削区炎性细胞的浸润和角膜上皮愈合情况，晚期角膜成纤维细胞增生和上皮增生情况，观察haze并评分；早期测量角膜SOD活力和MDA含量，对结果进行统计学分析。结果：早期移植相炎性细胞的数目比对照组少，上皮愈合时间较短，晚期上皮增生较轻，晚期移植组成纤维细胞数目较少；移植组haze评分较低；早期移植组自由基反应产物MDA的含量较低，而SOD含量较高，差异均具有显著性。结论：羊膜能促进术后上皮愈合，减轻炎性反应和自由基反应，减少成纤维细胞增生，减轻haze的形成。     

羊膜移植联合羊膜覆盖治疗真菌性角膜炎分析

目的 探讨角膜清创联合羊膜移植羊膜覆盖治疗真菌性角膜炎的手术适应证的选择和临床效果.方法 2008年3月至2009年11月就诊的17例真菌性角膜炎患者,视力为FC/50cm～0.2,经角膜刮片法10%KOH溶液处理后查见菌丝,常规全身、局部抗真菌治疗3周至2个月后,患者病情迁延不愈,角膜涂片仍见菌丝.手术适应证为感染深度小于1/3角膜厚度,感染范围小于1/3角膜面积.手术方式:在局麻下行角膜清创,至角膜植床无明显感染迹象.溃疡面行羊膜小植片移植,角膜表面行羊膜大植片覆盖.术后结膜下注射0.2%氟康唑注射液0.5ml.结果 16例患者术后视力为0.5～1.0,感染得到控制.羊膜小植片与角膜融合,可见角膜组织内云翳形成.1例患者术后感染灶融解,改行板层角膜移植术后治愈.结论 角膜清创联合羊膜移植羊膜覆盖可以有效治疗药物难以治愈的表浅真菌性角膜炎.良好的手术适应证的选择不仅可以治愈真菌性角膜炎,而且可以获得良好的术后视力.真菌复发和角膜融解是手术后的危险因素.     

羊膜移植联合亲水性软性角膜接触镜治疗早期眼烧伤

目的 观察羊膜移植联合亲水角膜接触镜治疗早期眼烧伤的临床疗效.方法 21例（21眼）早期眼烧伤患者,采用羊膜移植并佩戴亲水性软性角膜接触镜治疗,术后随访3月.结果 所有患眼术后症状均有不同程度缓解;20例眼表基本稳定,视力不同程度提高;2例角膜云翳;l例眼结膜表层重建,但发生角膜斑翳.无严重眼部并发症发生.结论 羊膜移植联合亲水性角膜接触镜治疗各种早期眼烧伤安全、有效,值得在临床上广泛推广使用.     

谈羊膜移植在角膜和眼表疾病应用中的问题

由于羊膜具有抗炎、抗纤维化、抗新生血管生成、促进角膜修复的作用,羊膜已经成为治疗角膜和眼表疾病的理想材料.随着羊膜广泛应用于角膜和眼表疾病,在某种程度上改变了一些角膜及眼表疾病传统的治疗方式,但随之而来的临床问题也逐渐显露,主要体现在：适应证如何把握;手术如何进行个体化设计;如何观察术后并发症和术后规范用药等问题.在此,谈些个人的经验和看法,以期使羊膜移植手术能在临床治疗角膜和眼表疾病中发挥更好的作用.     

Fungal keratitis following amniotic membrane transplantation

Purpose To report a case of fungal keratitis following amniotic membrane (AM) transplantation for pseudophakic bullous keratopathy. Method A 55-year-old female underwent amniotic membrane transplantation (AMT) with epithelial debridement and anterior stromal puncture in the left eye for symptomatic bullous keratopathy. She developed fungal keratitis after 4 weeks. Result Aspergillus sp. was isolated from the corneal scraping. The patient was treated with systemic and topical antifungal medication. Conclusion Although AMT is safe, there is a risk of microbial infection after the procedure especially in poor ocular surfaces.