辐射诱导白血病细胞凋亡的时程、剂量效应及zVAD.fmk对凋亡的抑制作用

目的　探讨γ 射线辐射诱导白血病细胞凋亡的时程、剂量效应及其凋亡的发生机制。方法　将对数生长的p5 3基因突变的Jurkat细胞经 5、10、2 0Gy的γ 射线照射 ,其中一组在 10Gy照射前加入Caspase抑制剂zVAD .fmk。照射后继续培养 6、12、3 6、48h ,收获细胞 ,用AnnexinV标定、流式细胞术 (FCM)定量分析细胞凋亡百分率。结果　随培养时间的延长和照射剂量的增大 ,凋亡细胞数也增多。zVAD .fmk能抑制辐射诱导的细胞凋亡。结论　凋亡细胞数量与照射后细胞培养时间及γ 射线的照射剂量呈线性关系 ,γ 射线诱导细胞凋亡可独立于p5 3基因 ,而Caspase在γ 射线诱导细胞凋亡中发挥重要作用。     

电离辐射对Jurkat T细胞凋亡与坏死的影响

目的：研究电离辐射诱导Jurkat T细胞凋亡与细胞坏死的变化规律,探讨电离辐射作用后细胞的死亡模式与机理。方法：采用Annexin V-EGFP和PI 双染、流式细胞术(FCM)检测不同剂量（0.075、0.500、1.000、2.000、4.000和6.000 Gy）X射线照射后Jurkat T细胞凋亡与细胞坏死的时间-效应关系和剂量-效应关系。结果：时间-效应关系,2.000 Gy X射线照射后,与假照组比较,Jurkat细胞凋亡百分率在照射后18 h显著增加,至24 h始终维持在较高水平（P＜0.001）;细胞坏死百分率于照射后4 h显著增加,12 h 达峰值,至48 h始终维持在较高水平（P＜0.001）。剂量-效应关系,0.075Gy X射线照射后18 h,Jurkat T细胞凋亡百分率和细胞坏死百分率与假照组相比较未见明显变化（P＞0.05）。2.000~6.000 Gy较大剂量X射线照射后18 h,细胞凋亡百分率和细胞坏死百分率与假照组比较均呈剂量依赖性增加（P＜0.001）。结论：2.000 Gy以上剂量X射线可以诱导Jurkat T细胞发生凋亡和坏死,细胞坏死比细胞凋亡出现时间更早,持续时间更长。     

电离辐射对Jurkat细胞γ-H2AX蛋白表达的影响

目的：探讨电离辐射诱导Jurkat细胞γ-H2AX蛋白表达的影响。方法：采用流式细胞术（FCM）分别检测2.0 Gy X线照射后不同时间点（0、0.5、1.0、4.0、8.0、16.0及24.0 h）和0.5、1.0、2.0、4.0及6.0 Gy不同剂量X线照射后Jurkat细胞γ-H2AX表达变化,并于量效实验同时进行Jurkat细胞凋亡率检测。结果：与假照组比较,2.0 Gy X线照射后Jurkat细胞γ-H2AX表达水平于1.0 h内达最大值,1.0 h后开始呈时间依赖性下降,16.0 h仍高于假照水平（P<0.01）,24.0 h降至与对照无明显差异;不同剂量X线照射后1.0 h,Jurkat细胞γ-H2AX的表达水平在0.5 Gy以内没有明显变化,0.5 Gy以后呈剂量依赖性升高,4.0 Gy时达最高水平（P<0.01）,6.0 Gy时表达略下降;不同剂量X线照射后8.0 h,γ-H2AX表达在0～4.0 Gy范围内随剂量增大而逐渐升高,4.0 Gy时达到最高水平（P<0.01）,6.0 Gy时表达有所下降。结论：X射线能诱导Jurkat细胞γ-H2AX表达增高,在一定范围内存在时间和剂量依赖关系。     

γ射线诱导下PUMA基因在人前列腺癌细胞中的作用

目的研究在γ射线诱导下PUMA基因(p53 up-regulated modulator of apoptosis)在人前列腺癌细胞(p53野生型LNCaP细胞、p53变异型PC-3细胞)中的作用效果。方法采用MTT方法检测在3、5、8Gy照射剂量的γ射线诱导下人前列腺癌细胞的抑制率;采用RT-PCR的方法检测在3、5、8Gy照射剂量的γ射线诱导下PUMA基因的表达情况。结果在γ射线诱导下LNCaP细胞抑制率较PC-3细胞抑制率高(P<0.01);随γ射线照射剂量的增加,LNCaP细胞中PUMA-mRNA的表达越明显(P<0.05)。结论γ射线诱导下PUMA基因可促使人前列腺癌LNCaP细胞凋亡。     

不同剂量60 Co γ射线照射对大鼠颌下腺凋亡的影响

目的 探讨不同剂量60Coγ射线照射对大鼠颌下腺凋亡及相关因子表达的影响.方法 将Wistar大鼠随机分4组：（1）正常对照组;（2）放疗7.5Gy组;（3）放疗15 Gy组;（4）放疗22.5 Gy组.放疗组大鼠给予一次性γ射线辐射,每只辐射量按分组设定的剂量（7.5、15、22.5 Cy）给予.对照组未予照射.采用免疫组织化学法检测P53、Caspase-3表达情况以及原位切口末端标记（TUNEL）法检测细胞凋亡.结果 与对照组比较,放疗组P53与Caspase-3的表达增强.Tunel染色显示的细胞凋亡主要见于导管细胞,随着放疗剂量增加,凋亡愈明显.结论 60Co γ射线照射可引起大鼠颌下腺早期细胞凋亡.60Co γ射线（7.5、15、22.5 Gy）照射诱导的颌下腺细胞凋亡有剂量-效应关系.     

电离辐射对Jurkat T细胞周期进程的影响

目的：探讨电离辐射诱导Jurkat T细胞损伤过程中细胞周期进程的变化规律。方法：采用流式细胞术 (FCM) 检测低剂量（0.075 Gy）和较大剂量（0.5、1.0、2.0、4.0及6.0 Gy）X射线照射后Jurkat T细胞周期进程变化的时间-效应关系和剂量-效应关系。结果：时间-效应关系研究发现,2.0 Gy X射线照射后Jurkat T细胞相继发生S期延迟和G₂期阻滞,S期细胞百分率于照射后立即增加(P<0.001),而G₂+M期细胞百分率照射后8 h开始显著增加（P<0.001）。剂量-效应关系研究发现,75 mGy低剂量X射线照射即可诱导Jurkat T细胞发生S期延迟（P<0.001）和G₂期阻滞（P<0.05）;0.5~6.0 Gy较大剂量X射线照射后,Jurkat T细胞发生S期延迟和G₂期阻滞。与假照组相比较,G₀/G₁期细胞百分率显著降低（P<0.001）,在0.5~6.0 Gy内具有剂量依赖性,而S期和G₂+M期细胞百分率显著升高（P<0.05或P<0.001）。结论：X射线照射可以改变Jurkat T细胞周期进程,诱导其相继发生S期延迟和G₂期阻滞,在0.5~6.0 Gy内具有剂量依赖性。     

辐射对淋巴瘤EL-4细胞p21基因转录及蛋白表达的影响

目的观察辐射对淋巴瘤EL-4细胞P21蛋白表达及基因转录的影响。方法应用RT-PCR方法检测经辐射诱导的淋巴瘤EL-4细胞中p21基因转录的时程和量效变化,采用流式细胞术检测P21蛋白表达的时程和量效变化。结果 4.0Gy X射线照射后p21基因转录水平立即增高,至照射后4 h达峰值,持续至照射后24 h。4.0 Gy X射线照射后8 h EL-4细胞p21蛋白表达开始增高,24 h达峰值,持续至照后72 h(<0.01)。0.5～6.0 Gy X射线照射后4 h,EL-4细胞p21基因转录水平均高于对照组,其中以4.0 Gy X射线照射后基因转录水平最高,1.0～6.0Gy X射线照射后,EL-4细胞p21蛋白表达均明显增高(<0.05)。结论辐射可诱导淋巴瘤EL-4细胞P21蛋白表达及基因转录,并呈时间和剂量依赖关系。     

p38和ERK信号途径在UVB导致细胞凋亡中的作用

目的 探讨p38和ERK信号途径在紫外辐射B(UVB)导致细胞凋亡中的作用.方法 以HaCat细胞为实验村料,"MTT"法观察细胞存活率;Hoechst33258染色后以荧光显微镜观察凋亡细胞的形态:免疫印迹观察此过程中的可能信号转导通路.结果 UVB照射剂量不同,培养时间相同时,随剂量增加,HaCat细胞存活率逐渐减少;照射剂量相同,培养时间不同时,随时间延长,细胞存活率下降到最低值后开始恢复;UVB照射5 min组的凋亡最高,并且5 min照射组在照后培养12h时.凋亡率最高;UVB照射后p38及其下游的p53表达,而P44/42无改变.结论 UVB照射,能引起HaCat细胞的生长抑制和凋亡且呈剂量依赖和时间依赖性;UVB导致细胞凋亡可能是通过p38信号途径,而不是ERK信号途径.     

预防性葛根素抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡

目的探讨预防性葛根素对UVB诱导的HaCa T细胞凋亡的影响。方法 HaCa T细胞与0.49、1.0mg.mL-1葛根素孵育1h后,以30mJ.cm-2UVB直接照射细胞,24h后收集细胞测定细胞凋亡率和p53蛋白。结果葛根素预处理HaCa T细胞的凋亡率下降,同时细胞表达的p53蛋白减少。结论预防性葛根素抑制UVB诱导的HaCa T细胞凋亡,可能与下调p53蛋白有关。     

不同剂量电离辐射对大肠癌HCT-8细胞凋亡的影响

目的:本研究通过检测不同剂量电离辐射对大肠癌细胞凋亡的影响,探讨逆转肿瘤多药耐药的方法.方法:采用流式细胞术检测大肠癌多药耐药HCT-8细胞凋亡的变化.结果:与假照射组相比,2Gy大剂量照射后HCT-8细胞凋亡小体百分率明显增加(P<0.01),先给予低剂量照射(50mGy,100mGy,200mGy)后,再给予大剂量照射,HCT-8细胞凋亡小体百分率进一步增加(P<0.01),其中以100mGy 2Gy组增加明显,与单纯2Gy大剂量照射组比较,无统计学意义.结论:结果表明大剂量辐射可以明显诱导大肠癌多药耐药HCT-8细胞凋亡.     

Effect of Ionizing Radiation on the Expression of p16, CyclinDI and CDK4 in Mouse Thymocytes and Splenocytes

Objective To investigate the effect of ionizing radiation on the expression of p16, CyclinDl, and CDK4 in mouse thymocytes and splenocytes. Methods Fluorescent staining and flow cytometry analysis were employed for the measurement of protein expression. Results In time course experiments, it was found that the expression of p16 protein was significantly increased at 8, 24, and 48 h for thymocytes (P<0.05, P<0.01, and P<0.05, respectively) and at 24 h for splenocytes (P<0.05) after whole body irradiation (WBI) with 2.0 Gy X-rays. However, the expression of CDK4 protein was significantly decreased from 8 h to 24 h for thymocytes (P<0.05,P<0.01) and from 8 h to 72 h for splenocytes (P<0.05-P<0.01). In dose effect experiments, it was found that the expression of p16 protein in thymocytes and splenocytes was significantly increased at 24 h after WBI with 1.0, 2.0, and 4.0 Gy (P<0.05-P<0.01), whereas the expression of CDK4 protein was significantly decreased with 2.0Gy for thymocytes (P<0.05) and 0.5-6.0 Gy f     

低剂量电离辐射对松果腺细胞凋亡的影响

目的：通过低剂量辐射兴奋效应的动物模型,进一步探讨低剂量X射线全身照射对小鼠松果腺细胞凋亡的影响。方法：采用0．075Gy X射线全身照射后不同时间间隔取松果腺,采用流式细胞术（FCM）检测照射后不同时间松果腺细胞凋亡百分率的时程变化。结果：低剂量电离辐射全身照射12h、24h、48h后松果腺细胞凋亡百分率降低（P〈0．01）。结论：低剂量辐射可抑制松果腺细胞的凋亡。     

G1 Arrest and Relative Protein Expressions in Mouse Thymocytes Induced by Whole Body X-Ray Irradiation G1 Arrest and Relative Protein Expressions in Mouse Thymocytes Induced by Whole Body X-Ray Irradiation

Objective　To investigate the molecular regulation of G1 arrest of mouse thymocytes induced by ionizing radiation. Methods　Cell cycle was analyzed by flow cytometry (FCM) following staining of cells with proidium iodide. Fluorescent staining and flow cytometry analysis were employed for measurement of protein expression. Results　It was demonstrated that G1 phase of mouse thymocytes increased significantly at 12h after whole body irradiation (WBI) with the doses of 0.5, 1.0 and 2.0 Gy, and at 24h following 2.0Gy exposure, measured by FCM. In the time course experiment, it was found that G1 phase of thymocytes increased significantly at 4h, reached a peak level at 24h and came down toward 48h after WBI with 2.0Gy X-rays. The results also showed that after 2.0Gy exposure, the expression of proteins in mouse thymocytes increased significantlty from 1h to 8h for p53, for p21 from 4h to 48h, and for MDM2 at 4h and 8h, measured by FCM. But no change was found for GADD45 protein expression. Conclusion　These results suggest that G1 arrest could be induced by a single dose of 0.5 Gy, 1.0Gy or 2.0Gy, and its molecular control might be established through the p53-p21 pathway.     

X射线全身照射对小鼠胸腺细胞p53、p21、GADD45及MDM2蛋白表达的影响

目的：观察电离辐射全身照射对小鼠胸腺细胞ｐ５３、ｐ２１、ＧＡＤＤ４５ 及ＭＤＭ２ 蛋白表达的影响。方法：采用间接免疫荧光标记,流式细胞术检测蛋白表达的变化。结果：２ Ｇｙ Ｘ射线照射后１～８ ｈ ｐ５３ 蛋白表达显著增高;照射后４～４８ ｈ ｐ２１ 蛋白表达显著增高;ＭＤＭ２ 蛋白在照后４ ｈ 及８ ｈ 显著增高;而ＧＡＤＤ４５ 蛋白表达在照后１～４８ ｈ 内无明显变化。结论：电离辐射可诱导胸腺细胞ｐ５３、ｐ２１ 及ＭＤＭ２ 蛋白表达增高。此结果将对辐射诱导胸腺细胞Ｇ１ 期阻滞的分子通路研究有重要意义。     

G1 Arrest and Relative Protein Expressions in Mouse Thymocytes Induced by Whole Body X—Ray Irradiation

Objective:To investigate the molecular regulation of G1 arrest of mouse thymocytes induced by ionizing radiation.Methods:Cell cycle was analyzed by flow cytomtry(FCM)following staining of cells with proidium iodide.Fluorescent staining and flow cytometry analysis were employed for measurement of protein expression.Results:it was demonstrated that G1 phase of mouse thymocytes increased significantly at 12h after whole body irradiation(WBI)with the doses of 0.5,1.0 and 2.0Gy,and at 24h following 2.0Gy exposure,measured by FCM.In the time course experiment,it was found that G1 phase of thymocytes increased significantly at 4h,reached a peak level at 24h and came down toward 48h after WBI with 2.0Gy X-rays.The results also showed that after 2.0Gy exposure,the expression of proteins in mouse thymocytes increased significantlty from 1h to 8h for p53,for p21 from 4h to 48h ,and for MDM2 at 4h and 8h.measured by FCM,But no change was found for GADD45 protein expression.Conclusion;These results suggest that G1 arrest could be induced by a single dose of 0.5Gy,1.0Gy or 2.0Gy,and its molecular control might be established through the p53-p21 pathway.     

miR-34a在辐射损伤时对细胞周期的调控作用

目的探讨60Coγ射线诱发大鼠肝脏BRL细胞辐射损伤时p53激活诱导的miR-34a改变对细胞周期的调控作用。方法以大鼠BRL肝细胞为研究对象,予4 Gy60Coγ射线照射后,分别培养4、12、24、48 h。采用流式细胞技术检测各组BRL细胞周期的变化,实时定量PCR检测各组细胞中miR-34a mRNA和c-myc mRNA表达水平的变化,Western blot方法检测各组细胞中p53蛋白和Myc蛋白的表达。结果 60Coγ射线4 Gy照射后4 h即出现G2期阻滞（P〈0.05）,至照射后24 h,G2期阻滞恢复;照射后12 h起,S期细胞减少（P〈0.05）,出现G1阻滞,48 h仍未恢复。照射后4 h p53蛋白和miR-34a mRNA表达增加（P〈0.05）,12 h均有下降（P〈0.05）,24 h和48 h已基本回至正常水平,而c-myc在照射后4 h开始呈持续降低趋势,48 h有所恢复。结论细胞在电离辐射引起DNA损伤后,早期即激活了p53蛋白,p53蛋白调节miR-34a表达,可能再经由miR-34a的靶基因c-myc介导,使细胞阻滞于G1和（或）G2期进行DNA修复。     

唐古特大黄多糖组分1对小肠上皮细胞辐射损伤的保护作用

目的探讨唐古特大黄多糖组分1（RTP1）对电离辐射所致肠上皮细胞损伤的保护作用。方法采用大鼠空肠上皮细胞（IEC-6细胞株）,共分为5组,正常对照组（normal control,NC）、辐射对照组（irradiation control,IC）以及RTP1低剂量组（10μg/mL）、中剂量组（30μg/mL）和高剂量组（100μg/mL）,以6.0 Gy 60Coγ射线一次性照射损伤细胞,损伤前用RTP1预处理细胞48 h。采用MTT比色法测定细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡情况并对细胞周期进行检测。结果与IC组比较,RTP1可显著提高IEC-6细胞的增殖能力,减少受照射细胞的凋亡和坏死,降低G1期细胞数量,增加S期细胞数量。结论 RTP1对辐射损伤的肠上皮细胞具有一定的保护作用。