慢性浅表性胃炎脾胃湿热证与细胞凋亡、Bcl-2蛋白表达的关系

目的 探讨慢性浅表性胃炎脾胃湿热证与细胞凋亡、Bcl-2蛋白表达的关系.方法 采用“病证结合”方法,选择慢性浅表性胃炎脾胃湿热证、脾虚证与正常对照组,取胃窦粘膜组织,分别采用W-S染色与RUT检测HP、常规HE染色、TUNE法检细胞凋亡、SABC法检测Bcl-2蛋白表达.结果 脾胃湿热证与脾虚证在显微镜下炎性细胞浸润程度均强于正常对照组(P＜0.01),且它们之间亦有明显差异(P＜0.05).凋亡细胞见于上皮细胞、壁细胞、主细胞;Bcl-2蛋白表达于壁细胞、主细胞、上皮细胞的胞浆中.脾虚证组、脾胃湿热证组的细胞凋亡指数明显高于正常组(P＜0.05);脾虚证组的细胞凋亡指数高于脾胃湿热证组(P＜0.05).Bcl-2蛋白表达在脾虚证组、脾胃湿热证组强于正常组(P＜0.05);脾虚证组Bcl-2蛋白表达低于脾胃湿热证组(P＜0.05).脾胃湿热证组、脾虚组HP阳性感染率高于正常对照组(P＜0.05);脾胃湿热证组的HP阳性感染率显著高于脾胃气虚组(P＜0.05).炎症程度与HP感染呈正相关(P＜0.05).结论 细胞凋亡、Bcl-2可能是形成脾胃湿热证的细胞分子生物学机理之一.     

慢性胃炎脾胃湿热证患者胃粘膜细胞凋亡及相关蛋白的研究

目的：探讨脾胃湿热证患者胃粘膜细胞凋亡及其基因调控。方法：慢性浅表性胃炎脾胃湿热证患者76例，分别与同病脾胃气虚证患者41例和健康人10名对照。在辩证基础上，检测胃粘膜细胞凋亡指数（AI）、凋亡基因相关蛋白p53、Bcl-2、Fas等指标。结果：（1）脾胃湿热组和脾胃气虚组胃粘膜AI增加；（2）脾胃湿热组和脾胃气虚组p53、Bcl-2表达显著高于健康人组，脾胃湿热组Fas表达显著高于健康人组。结论：胃粘膜从正常→实证→虚证的变化过程中，细胞凋亡逐步增多。p53、Bcl-2、Fas表达参与细胞凋亡的调控与证侯形成的复杂性有关。     

王氏连朴饮对脾胃湿热证大鼠胃黏膜细胞凋亡调控基因蛋白的影响

目的：观察脾胃湿热证大鼠胃黏膜细胞凋亡指数（AI）及凋亡调控基因蛋白Bcl-2、P53变化规律,探讨王氏连朴饮治疗脾胃湿热证的作用机制。方法：采用TUNEL法检测胃黏膜组织AI及SABC法N步检测胃黏膜上皮细胞凋亡基因相关蛋白Bcl-2、P53。结果：模型组胃黏膜细胞促凋亡基因相关蛋白过度表达,明显高于正常组及王氏连朴饮各剂量组（P〈0．05）,正常组与王氏连朴饮各剂量组之间无显著性差异。结论：脾胃湿热证模型组大鼠AI升高,Bcl-2、P53表达增强。王氏连朴饮有抑制胃黏膜细胞凋亡调控基因蛋白Bcl-2及P53过度表达、修复胃黏膜的作用,从而调节细胞凋亡趋于正常。     

清浊安中汤对慢性胃炎脾胃湿热证大鼠模型细胞凋亡及Bcl-2的影响

目的:探讨清浊安中汤治疗脾胃湿热证作用机制及脾胃湿热证大鼠模型建立.方法:50只大鼠随机分为正常对照组、胃炎脾虚证组、胃炎脾胃湿热证组、清浊安中汤高、低剂量组,以2％水杨酸钠、番泻叶100％水煎液10 mL·kg-1 ·d-1灌胃,连续20 d,复制胃炎脾虚证.采用“病证结合”方法,以2％水杨酸钠(10 mL·kg-1 ·d-1灌胃)+高脂(20％蜂蜜水)高糖(10g·kg-1·d-1)+人工气候箱复制脾胃湿热证大鼠模型并用清浊安中汤(2,1 g·kg-1·d-1)对脾胃湿热证大鼠模型防治,常规HE胃黏膜病理组织染色、TUNEL(原位末端标记法)检测细胞凋亡、SABC(免疫组化)法检测Bcl-2蛋白表达.结果:脾胃湿热证组10只大鼠均有轻-重度炎症,细胞凋亡指数0.236±0.021,Bcl-2蛋白表达0.247±0.041;脾胃湿热证大鼠模型表现出症状、体征与临床相符,胃黏膜炎症较正常组重而与脾虚证组无差异,细胞凋亡较脾虚组轻而Bcl-2蛋白表达大于脾虚组(P＜0.05),清浊安中汤防治组对此有改善治疗作用.结论:大鼠模型符合脾胃湿热证属性,调节细胞凋亡和Bcl-2蛋白表达可能是清浊安中汤治疗脾胃湿热证作用机制之一.     

慢性浅表性胃炎中医证候与幽门螺杆菌及抗凋亡蛋白的相关性研究

目的:探讨慢性浅表性胃炎不同中医证型与幽门螺杆菌感染和抗凋亡蛋白Bcl-2表达的关系.方法:选择慢性浅表性胃炎患者150例,其中脾胃湿热证93例,脾胃气虚证57例,正常对照组10例.快速尿素酶试验和Warthin-Starry银染色检测Hp;免疫组化S-P法检测Bcl-2基因蛋白的表达.结果:脾胃湿热组Hp感染率显著高于脾胃气虚组和正常对照组,有显著性差异(P<0.01);Bcl-2在脾胃气虚组的表达率略高于脾胃湿热组,二者无显著性差异,但与正常对照组相比差异显著(P<0.05).结论:慢性浅表性胃炎不同中医证型中,Hp感染和抗凋亡蛋白Bcl-2表达存在差异,二者与证候的形成有关.     

王氏连朴饮对脾胃湿热证模型大鼠胃黏膜P53、Bcl-2和COX-2蛋白表达的影响

目的 观察王氏连朴饮对脾胃湿热证模型大鼠胃黏膜增殖与凋亡相关P53、Bcl-2和COX-2蛋白表达的影响,探讨该方治疗脾胃湿热证获效的可能作用机制。方法 取SD大鼠50只,随机分为正常对照组,模型组,王氏连朴饮高、中、低剂量组（1.94,0.97,0.48 g·mL-1）,共5组,每组10只。除正常组饲以普通饲料外,其余4组均以湿热环境加高脂高糖饮食和白酒综合法复制脾胃湿热证模型,连续灌胃给药7 d,观察该方对模型大鼠胃黏膜P53、Bcl-2及COX-2蛋白表达的影响。结果 本实验P53、Bcl-2、COX-2基因蛋白表达定位于胞质,模型组大鼠表达明显升高,与正常对照组比较,有显著性差异（P＜ 0.01）。王氏连朴饮高、中、低剂量组P53、Bcl-2及COX-2蛋白表达有一定程度下调,与模型组比较,具有显著性差异（P＜ 0.01）,尤以中剂量组作用最明显。结论 王氏连朴饮可能通过下调脾胃湿热模型大鼠胃黏膜P53、Bcl-2及COX-2蛋白水平的表达,在一定程度上调节其胃黏膜细胞增殖与凋亡的失衡,进而达到对胃黏膜损伤的修复作用。     

慢性胃炎脾气虚证与胃粘膜细胞凋亡调控基因的相关性研究

目的:研究探讨细胞凋亡调控基因蛋白Bax、Fas、p16在慢性胃炎脾气虚证患者胃粘膜的表达及其表达特征.方法:胃镜病理确诊和辨证设慢性胃炎脾气虚证、胃阴虚证、脾胃湿热证3组和正常对照组.胃粘膜病理切片,免疫组化法检测Bax、Fas、p16表达水平.结果:脾气虚证等3组Bax、Fas的表达率均高于正常对照组,p16的表达率均低于正常对照组,差异有显著性;脾气虚证组与胃阴虚证组和脾胃湿热证组比较差异有显著性.标记指数结果亦与其相符.结论:慢性胃炎脾气虚证胃粘膜细胞增殖与凋亡平衡紊乱,细胞凋亡相对亢进,Bax、Fas、p16与慢性胃炎脾气虚证有很强的相关性.     

慢性胃炎(脾胃湿热证)胃窦黏膜Fhit蛋白的表达及临床意义

目的:探讨慢性胃炎(脾胃湿热证)胃窦黏膜Fhit蛋白的表达及临床意义。方法:选择慢性胃炎中属脾胃湿热证组35例,脾虚气滞证组32例,10例健康体检者作为正常对照组。所有受试者电子胃镜检查时活检取胃窦黏膜,采用免疫组化SP法检测Fhit蛋白的表达。结果:正常对照组、脾虚气滞证组、脾胃湿热证组中Fhit蛋白的表达分别为38.29±10.06、34.52±10.33、23.07±9.44,脾胃湿热证组胃粘膜组织Fhit蛋白表达明显低于正常对照组、脾虚气滞证组,经统计学处理有显著差异(P0.01),正常对照组胃粘膜组织Fhit蛋白表达与脾虚气滞证组差异不显著(P0.05)。结论:慢性胃炎脾胃湿热证组Fhit蛋白表达较正常对照组、脾虚气滞组明显降低,可能部分揭示了慢性胃炎(脾胃湿热证)的本质。     

慢性胃炎不同证候与细胞凋亡调控基因蛋白的相关性研究

目的:观察慢性胃炎不同证候与凋亡调控基因蛋白Bax、Bcl-2和P53表达的相关性,探讨证候的形成机理。方法:对158例慢性胃炎患者辨证分型,采用免疫组化法测定胃黏膜Bax、Bcl-2、和P53的表达。结果:各证型Bcl-2表达的阳性面积和总光密度差异均有显著性意义(P0.05);各证型Bax表达阳性面积、P53平均光密度和总光密度相当,差异均无显著性意义(P0.05);各证型P53阳性面积和总光密度差异均无显著性意义(P0.05),P53表达的平均光密度脾胃湿热型和胃阴不足型显著高于肝胃不和型(P0.05)。结论:慢性胃炎各证候的形成与Bcl-2、P53表达的调控相关。     

电针“夹脊”穴对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡及凋亡调控基因表达的影响

目的:探讨针刺对心肌缺血再灌注损伤的保护机制.方法:将50只Wistar大鼠随机分成5组:假手术组、模型组、电针夹脊组、电针内关组、电针阳陵泉组,每组10只.后4组采用结扎左冠状动脉前降支的方法复制动物模型.假手术组不结扎冠状动脉.各治疗组分别电针刺激双侧“夹脊”“内关”“阳陵泉”穴.每日1次,连续治疗7d.假手术组与模型组不予治疗.采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,免疫组化法检测B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、B细胞淋巴瘤因子相关X蛋白(Bax)表达.结果:(1)电针夹脊组、电针内关组和假手术组中细胞凋亡指数(AI)明显低于模型组;其他各组AI均高于假手术组(P＜0.01);电针夹脊组与电针内关组AI值差异无统计学意义(P＞0.05).(2)电针夹脊组、电针内关组与模型组相比,Bcl-2蛋白表达量显著升高(P＜0.01),而Bax蛋白表达显著下降(P＜0.01);其他各组Bcl-2、Bax蛋白表达量均高于假手术组(P＜0.01);电针夹脊组和电针内关组中的Bcl-2、Bax值差异无统计学意义(P＞0.05).结论:电针夹脊穴、内关穴均对缺血再灌注损伤心肌有明显的保护作用,其机制可能与通过调节Bcl-2、Bax等基因的表达从而抑制细胞凋亡密切相关.     

清香散对湿热型肝癌模型大鼠细胞凋亡、肿瘤血管生成的影响

目的 :研究清香散对湿热型肝癌模型大鼠细胞凋亡、肿瘤血管生成的影响。方法 :雄性 Wistar大鼠随机分为正常组 ( 7只 )、造模组 ( 2 8只 ) ,Walker- 2 5 6肿瘤细胞株注射入大鼠皮下 ,长出皮下实体瘤 ,取瘤体周边组织剪成小块 ,造模组大鼠予肝脏手术植入小瘤块 ,予高糖高脂饲料饲养 ,置于高温高湿环境 ,将造模组大鼠分为肝癌模型组、氟脲嘧啶治疗组、清香散治疗组、联合治疗组 ,每组 7只 ,造模后第2 0天处死大鼠 ,取肝癌组织 ,用免疫组化技术检测细胞凋亡率、P5 3、肿瘤微血管密度 ( MVD)、血管内皮细胞生长因子 ( VEGF)。结果 :造模成功后大鼠的细胞凋亡率、P5 3、MVD、VEGF都比正常对照组升高 ( P<0 .0 1 ) ,运用清香散 ,或 5 - FU治疗后细胞凋亡率升高 ,而 P5 3、MVD、VEGF均呈下降趋势 ,联合治疗组比单用清香散或 5 - FU效果更显著 ( P<0 .0 1 )。结论 :清香散能够降低突变型 P5 3表达、提高癌细胞凋亡率 ,抑制 VEGF、阻止肿瘤血管增生 ,与 5 - FU联合起协同作用 ,能够增强疗效     

润肤止痒汤对小鼠慢性湿疹角质形成细胞凋亡及组织病理的影响

目的:探讨"润肤止痒汤"对小鼠慢性湿疹模型角质形成细胞凋亡及组织病理的影响。方法:将80只实验小鼠随机分为4组,每组20只,设为不造模组:正常对照组;造模组:空白对照组、中药治疗组、西药治疗组。造模组60只小鼠耳部应用2,4-二硝基氯苯丙酮溶液小剂量反复刺激制备接触性湿疹模型,中药治疗组:润肤止痒汤汤剂浓煎液,每次灌胃剂量为每只0.75 mg·d-1,日2次,疗程5 d。西药治疗组:盐酸西替利嗪片剂配成水溶液,灌胃剂量为每只0.025 mg·d-1,日1次,疗程5 d。空白对照组给予同等剂量生理盐水灌胃。用免疫组化方法观察各组Bcl-2及Bax蛋白表达情况。结果:小鼠耳部经2,4-二硝基氯苯丙酮溶液最后一次激发后24 h HE病理可见:表皮角化过度,颗粒层细胞轻度增生,棘层细胞增生,上皮角下延,基底层散在液化变性,真皮浅层轻度水肿,间质及血管周围见炎细胞浸润提示造模成功。Bcl-2及Bax蛋白空白对照组表达最明显,中药组与西药组表达低于空白对照组(P0.05),正常对照组表达低(P0.05)。结论:在慢性湿疹模型部位促凋亡蛋白大量表达,经中药灌胃治疗后,可降低凋亡通路中促凋亡蛋白表达,调节局部皮损免疫平衡,使局部皮损改善。     

脾胃湿热证热偏重、湿热并重型大鼠模型血液中胃动素(MTL)、胃泌素(GAS)的变化研究

脾胃湿热证是临床常见病证,相关研究认为其形成与气候、饮食、病原微生物感染以及体质因素有关.为了探讨脾胃湿热证形成的机理,我们对大鼠进行了脾胃湿热证热偏重、湿热并重型造模,并在相应的清香散、苍术白虎汤干预下,分组观察大鼠血浆胃动素、胃泌素的变化情况.结果显示:湿热并重组血浆胃动素增高,热偏重组血浆胃动素降低,与正常对照组及苍术白虎汤组、清香散组比较有显著性差异(P＜0.05);而湿热并重组、热偏重组血浆胃泌素降低,与正常对照组及清香散组、苍术白虎汤组比较有显著性差异(P＜0.05).     

慢性浅表性胃炎脾胃湿热证与水通道蛋白3基因表达的相关性研究

目的:探讨慢性浅表性胃炎脾胃湿热证与水通道蛋白3(AQP3)基因表达的相关性.方法:随机选取88例慢性浅表性胃炎患者,其中脾胃湿热证75例,脾虚证组13例,另选择健康的本校学生10人作为正常对照组,采用荧光定量PCR法检测患者胃粘膜AQP3表达.结果:正常人与慢性浅表性胃炎患者AQP3阳性表达率差异有显著性(P＜0.01),正常人、脾胃湿热证患者AQP3阳性表达率差异有显著性(P＜0.05),脾胃湿热证、脾虚证患者AQP3阳性表达率差异无显著性(P＞0.05).慢性浅表性胃炎脾胃湿热证中AQP3阳性患者出现口渴少饮、大便溏而不爽的比例要明显高于AQP3阴性患者(P＜0.05或P＜0.01),出现口干口苦、恶心、纳呆、腹胀或痛的比例两组无明显差异(P＞0.05).慢性浅表性胃炎脾胃湿热证中AQP3阳性患者辨证为湿重于热的比例要明显高于AQP3阴性患者(P＜0.05).结论:AQP3与水液代谢关系密切,AQP3在脾胃湿热证发生中起着某种作用.     

麝香乌龙丸对兔骨关节炎软骨细胞凋亡的影响

目的 观察麝香乌龙丸对兔膝骨关节炎软骨细胞凋亡和凋亡调控基因bcl-2及其抑制基因bax的影响,探讨麝香乌龙丸对关节软骨的保护作用是否与抑制细胞凋亡与调节bcl-2及bax的表达有关.方法 选用健康日本大耳白兔30只,随机分成正常对照组、造模组、麝香乌龙丸组.用1.6%木瓜蛋白酶膝关节腔内注射,建立兔膝骨关节炎模型, 4周后处死全部动物,取右膝关节胫骨内侧髁软骨,软骨组织切片用TUNEL法检测软骨细胞凋亡,免疫组化法检测关节软骨中bcl-2、bax的水平.结果 麝香乌龙丸组细胞凋亡率明显低于造模组(P＜0.05),bcl-2在麝香乌龙丸组中的表达高于造模组(P＜0.05),bax的表达低于造模组(P＜0.05).结论 麝香乌龙丸通过上调bcl-2的表达,下调bax的表达,达到抑制兔实验性膝骨关节炎软骨中软骨细胞的过度凋亡,这可能是该药治疗骨性关节炎机制之一.     

清香散对湿热型肝癌模型大鼠IL-2及TGF-α水平的影响

目的:研究清香散对湿热型肝癌模型大鼠IL-2、TGF-α变化的影响.方法:雄性Wistar大鼠随机分为正常组(7只)、造模组(28只).Walker-256肿瘤细胞株注射入大鼠皮下,长出皮下实体瘤,取瘤体周边组织剪成小块,造模组大鼠予肝脏手术植入小瘤块,予高糖高脂饲料饲养,置于高温高湿环境,将造模组大鼠分为肝癌模型对照组、氟脲嘧啶组、清香散组、联合治疗组,每组7只,造模后第20天处死大鼠,采血,用放免法测血清IL-2、TGF-α.结果:造模成功后大鼠的IL-2、TGF-α比正常组升高(P＜0.05),清香散组和5-FU组给药后,大鼠的IL-2增加,TGF-α减少,二药联合治疗组大鼠变化大于单用清香散或5-FU(P＜0.05).结论:清香散可增加湿热型肝癌大鼠血清IL-2含量,降低TGF-α含量.清香散与5-氟脲嘧啶协同调节细胞因子,联合抗癌,效果更好.     

穴位埋线对大鼠癫痫持续状态后海马神经元凋亡及相关基因表达的影响

[目的]观察穴位埋线对大鼠癫痫持续状态(SE)后海马神经元凋亡及凋亡相关基因的影响。[方法]将40只SD大鼠随机分成正常组、造模组、埋线组、针刺组、西药组。用贝美格注射液腹腔注射法诱导大鼠癫痫持续状态。造模成功后48h,采用Tunel法和免疫组化法检测各组神经元凋亡及凋亡相关基因P53和B淋巴细胞-2(Bcl-2)的表达。[结果]与模型组相比,埋线组、针刺组、西药组的细胞凋亡指数及P53降低、Bcl-2增高。[结论]穴位埋线可能通过抑制P53蛋白,提高Bcl-2蛋白的表达,阻止海马神经元细胞凋亡的发生发展,减轻SE发生后对大脑的损害。     

浅表性胃炎脾胃湿热证与幽门螺杆菌cagA、vacA抗体及胃上皮细胞增殖、凋亡的关系

目的观察幽门螺杆菌（Hp）感染慢性浅表性胃炎脾胃湿热证患者血清中毒力因子（细胞空泡毒素即vacA。细胞毒素相关蛋白即CagA）的表达及胃粘膜上皮细胞增殖和细胞凋亡情况。方法将80例Hp阳性的慢性浅袁性胃炎患者,分为脾胃湿热证组50例和脾胃气虚证组30例,用免疫组织化学法测定血清中CagA、VacA抗体及胃粘膜组织内增殖细胞核抗原（PCNA）、凋亡细胞。结果脾胃湿热证组血清CagA、VacA抗体阳性率及增殖指数（LI）均显著高于脾胃气虚证组（分别P〈0．01、P〈0．05）,2组中凋亡指数（AI）的差异无显著性意义（P〉0．05）。结论Hp相关慢性浅表性胃炎属脾胃湿热证者,所感染的Hp以高毒菌株占优势,可能有更高的癌变危险。     

清热化湿方对脾胃湿热证患者胃黏膜AQP3、AQP4蛋白表达的影响

目的:探讨脾胃湿热证与胃黏膜水通道蛋白(AQP3)、AQP4表达的关系及中药清热化湿方的作用机制.方法:选择慢性浅表性胃炎患者68例,其中脾胃湿热证53例(湿重于热19例,热重于湿14例,湿热并重20例),脾虚证15例;另选正常健康体检者10例为正常对照组.脾胃湿热证患者予中药清热化湿方,并采用免疫组化方法检测入选者胃黏膜AQP3、AQP4表达情况.结果:AQP3、AQP4在脾胃湿热证组的表达明显强于正常对照组(P＜0.05);脾虚证组与正常组比较差异无显著性(P＞0.05);各亚型之间呈湿重于热＞湿热并重＞热重于湿的趋势,但差异无显著性(P＞0.05).治疗后,脾胃湿热证组AQP3、AQP4表达水平显著下降(P＜0.01),与正常对照组及脾虚证组比较差异无显著性(P＞0.05).结论:AQP3、AQP4的异常表达可能是脾胃湿热证的发生机制之一,中药清热化湿方可能通过影响AQP3、AQP4的表达而发挥治疗作用.     

桃仁对血液循环障碍大鼠内皮细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的:了解桃仁对寒凝血瘀证(寒证)和瘀热互结证(热证)内皮细胞凋亡和相关蛋白表达的影响.方法:80只大鼠随机分为寒证对照组、模型组、桃仁(8 g·kg-1)组、川芎(8 g·kg-1)阳性对照组,以及热证对照组、模型组、桃仁(8 g·kg-1)组、丹参(14 g·kg-1)阳性对照组,每组10只.采用全身低温冷冻和注射角叉菜胶两种方法分别建立寒、热两证模型,造模同时各给药组,每天ig给药1次,连续给药7d,取心、肺、肝、肾、脾,采用HE染色、免疫组化和原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测器官血管内皮细胞生长因子(VEGF)、B淋巴细胞瘤-2基因蛋白(Bcl-2)、肿瘤基因p53蛋白(p53)表达及细胞凋亡情况.结果:①两证模型大鼠均出现寒证和热证相应表征,用药大鼠相应表征均有改善;②桃仁用药后,血管内皮细胞增殖相关蛋白VEGF寒证无明显变化,热证表达明显减弱(P＜0.05);凋亡蛋白Bcl-2寒证无明显变化,热证表达明显增强(P＜0.05);凋亡蛋白p53寒热证均无明显变化;③桃仁用药后,两证血管内皮细胞凋亡数量均无明显变化.结论:桃仁改善寒、热两证大鼠血液循环障碍并抑制内皮细胞凋亡,其机制可能与减弱VEGF表达、增强Bcl-2表达以维持内皮细胞较高凋亡水平有关.