矿化液诱导人前磨牙牙髓干细胞向成骨细胞样细胞的分化

目的:探讨矿化液诱导人前磨牙牙髓干细胞(HDPSCs)向成骨细胞样细胞分化的潜力.方法:矿化液诱导前磨牙HDPSCs 28d,于诱导的第7、28天时,应用酶化学染色检测碱性磷酸酶(ALP)表达;第14、21、28天时,应用茜素红染色观察细胞矿化情况;于诱导的第0、3、5、7、14、21、28天时,采用RT-PCR法检测其ALP、牙本质涎磷蛋白(DSPP)、骨涎蛋白(BSP)和骨钙素(OCN)的基因表达;Western印迹分析、免疫细胞化学染色检测BSP及OCN蛋白的表达.结果:经矿化液诱导后,前磨牙HDPSCs ALP染色阳性,形成钙结节.诱导第3天,细胞ALP mRNA呈高表达;DSPP始终不表达;BSP、OCN mRNA于第5天开始表达,并随时间延长而表达增高;BSP蛋白表达趋势与其RT-PCR结果一致;第5天时OCN染色阳性.结论:前磨牙牙髓干细胞具有向成骨细胞样细胞分化的潜能,有望成为骨组织工程的种子细胞.     

牙髓干细胞向成牙本质样细胞分化过程中基因表达研究

目的：分离培养来源于人成体牙髓组织的干细胞(dental pulp stem cells，DPSC)，分析研究其在未分化状态及在矿化诱导液中基因表型的变化：方法：采用胶原酶消化法获得人牙髓组织的单细胞悬液，14 d后挑取细胞克隆，分别在普通培养基和矿化诱导培养基中进行培养，利用RT-PCR，图像分析检测细胞基因表型变化。结果。未诱导的DPSC不表达牙本质特异性蛋白(dentin phosphprotein,DSPP)及骨涎蛋白(Bone sialoprotein，BSP)，表达部分成骨(osteocalcin,OCN alkaline phsphatase,ALP)相关表型，低表达转录因子核心结合因子(Cbfa-1)；与末诱导的DPSCs相比较，在成骨诱导中DPSCs表达DSPP和BSP，骨相关基因表达也相应上调。结论：DPsCs在矿化诱导液的作用下向成牙本质样细胞分化，其过程有可能是通过谱系特异表犁的表达或表达上调实现的。     

骨桥蛋白与矿化液诱导牙髓干细胞向成骨细胞分化的对比研究

目的:比较骨桥蛋白(OPN)和矿化液对牙髓干细胞(DPSCs)向成骨细胞分化的作用。方法:矿化液培养DPSCs作为矿化液组,添加适宜浓度OPN作为OPN组,茜素红染色法检测矿化结节的形成;RT-RCR检测骨涎蛋白(BSP)、Runt相关转录因子2(Runx-2)、骨钙蛋白(OCN)、Ⅰ型胶原(Col-1)等骨源性基因表达情况。结果:茜素红染色显示诱导培养28 d后2组出现的矿化结节数量相近(P>0.05)。OPN诱导培养7 d后2组DPSCs骨源性基因表达均成阳性,其中OPN组BSP基因表达水平高于矿化液组(分别为0.864±0.112和0.514±0.068,P<0.05);OPN组Runx-2基因表达水平低于矿化液组(分别为0.186±0.017和0.324±0.058,P<0.05);Col-1及OCN基因表达水平相近(P>0.05)。结论:OPN和矿化液对DPSCs的诱导能力相近。     

人恒牙牙髓干细胞体外定向诱导分化为成骨细胞的研究

目的:研究人恒牙牙髓组织来源的牙髓干细胞在体外分化为成骨细胞的能力,探讨其作为骨组织工程种子细胞的可行性.方法:从正畸治疗减数拔除的恒前磨牙中分离牙髓组织,应用酶消化法获得牙髓细胞.单抗Stro-1标记、免疫磁珠阳性分选系统分选获得牙髓干细胞,第3代牙髓干细胞用成骨向诱导培养基向成骨细胞诱导分化.用碱性磷酸酶染色和Vo...     

脱落乳牙牙髓干细胞聚合体再生牙髓实验研究

目的    利用动物实验模型证明使用小型猪脱落乳牙牙髓干细胞（stem cells from minipig exfoliated deciduous teeth, SPED）聚合体进行原位牙髓再生的可行性。方法    分离和培养SPED,检测和分析其细胞生物学行为,进而诱导制备SPED聚合体;建立年轻恒牙牙髓坏死的小型猪动物模型,设置SPED聚合体再生组和传统根尖诱导成形治疗组;术后4个月进行常规组织学取材,利用HE、免疫荧光染色等方法观察牙髓再生和牙根尖形成情况。结果    SPED聚合体再生组受试牙齿组织学HE染色检测发现,牙根继续发育并形成正常的根尖形态,此外全长根管内可见类牙髓结构的再生组织,免疫荧光染色可见组织中CGRP、TRPV1、TRPM8表达阳性细胞的规则分布;而传统根尖诱导成形治疗组受试牙齿仅在根管内形成不规则的钙化组织,未见牙髓组织形成。结论    SPED聚合体在小型猪体内可以实现牙髓再生,同时再生牙髓具有正常组织学形态,而且具有牙本质形成和诱导根尖形成的生理功能。     

人牙髓干细胞体外成骨向分化的实验研究

目的：探讨人牙髓干细胞在体外成骨向分化潜能。方法：用免疫磁珠法分选人牙髓干细胞并检测其干细胞表面标志物Stro-1、CD29、CD34、CD44、CD45、CD90、CD105的表达。体外诱导人牙髓干细胞向成骨细胞分化,通过碱性磷酸酶染色和茜素红染色观察成骨诱导后细胞的成骨活性和矿化结节形成情况,通过real-time PCR分析成骨相关基因ALP、col I、RunX2、OC的表达,未成骨诱导细胞作为对照。结果：人牙髓干细胞阳性表达间充质干细胞表面标志物Stro-1、CD29、CD44、CD90、CD105,阴性表达造血干细胞表面标志物CD34、CD45。成骨诱导5d、7d、14d ALP染色阳性,21d茜素红染色仅诱导组可见明显钙结节形成,对照组为阴性。成骨相关基因ALP、RunX2和Col I mRNA在成骨诱导早期高表达,OC mRNA在成骨诱导14d表达开始逐渐升高。结论：经磁珠分选纯化的人牙髓干细胞在成骨诱导条件下可向成骨细胞分化,形成钙盐沉积和矿化结节,ALP、col I、RunX2、OC参与了成骨向分化的过程。     

人乳牙牙髓干细胞在干细胞治疗中的应用

乳牙牙髓干细胞（SHED）是牙源性干细胞的一种,属外胚间充质干细胞。作为一种理想的干细胞来源,SHED在干细胞治疗中有良好的应用前景。本文阐述了SHED的生物学特征及其在干细胞治疗中的优势,探讨了SHED在组织再生和修复中发挥的多向分化潜能、细胞分泌功能和免疫调节功能等方面的功能作用。此外,本文还介绍了SHED在各系统、器官疾病治疗中的临床应用,重点阐述了用SHED进行干细胞移植在牙髓—牙本质再生、颌骨再生、神经系统疾病治疗和免疫系统疾病治疗方面的研究进展。     

乳牙牙髓干细胞体外诱导成骨细胞的实验研究

目的:体外分离、培养人乳牙牙髓干细胞,并向成骨细胞诱导.方法:采用酶消化法分离获得人乳牙牙髓干细胞,有限稀释法分离纯化,测定细胞克隆形成率,细胞计数法测定生长曲线,细胞爬片行HE染色,抗波形蛋白(Vimentin)、CD44和STRO-1免疫组化染色,并向成骨细胞诱导,行HE染色、碱性磷酸酶染色、Von Kossa染色、Van Gieson染色和抗骨钙素免疫组化染色进行鉴定.结果:通过有限稀释法获得了人乳牙牙髓干细胞,并诱导成成骨细胞,表现出与典型成骨细胞相似的形态特征和生物学特征.结论:成功从人乳牙牙髓中分离出牙髓干细胞,并诱导为成骨细胞.     

人牙髓干细胞向成牙本质细胞分化的诱导及鉴定

牙髓干细胞向成牙本质细胞的分化受多种细胞分化信号的调控。其中 ,骨形成蛋白、β-甘油磷酸钠、抗坏血酸、多种生长因子被认为在诱导其分化中起关键作用 ;而碱性磷酸酶、牙本质涎磷蛋白和牙本质基质蛋白 - 1常被用作鉴定其分化的特异性指标     

Functional and molecular characterization of transmembrane intracellular pH regulators in human dental pulp stem cells

ObjectiveHomeostasis of intracellular pH (pH_i) plays vital roles in many cell functions, such as proliferation, apoptosis, differentiation and metastasis. Thus far, Na⁺-H⁺ exchanger (NHE), Na⁺-HCO₃⁻ co-transporter (NBC), Cl⁻/HCO₃⁻ exchanger (AE) and Cl⁻/OH⁻ exchanger (CHE) have been identified to co-regulate pH_i homeostasis. However, functional and biological pH_i-regulators in human dental pulp stem cells (hDPSCs) have yet to be identified.DesignMicrospectrofluorimetry technique with pH-sensitive fluorescent dye, BCECF, was used to detect pH_i changes. NH₄Cl and Na⁺-acetate pre-pulse were used to induce intracellular acidosis and alkalosis, respectively. Isoforms of pH_i-regulators were detected by Western blot technique.ResultsThe resting pH_i was no significant difference between that in HEPES-buffered (nominal HCO₃⁻-free) solution or CO₂/HCO₃-buffered system (7.42 and 7.46, respectively). The pH_i recovery following the induced-intracellular acidosis was blocked completely by removing [Na⁺]_o, while only slowed (−63%) by adding HOE694 (a NHE1 specific inhibitor) in HEPES-buffered solution. The pH_i recovery was inhibited entirely by removing [Na⁺]_o, while adding HOE 694 pulse DIDS (an anion-transporter inhibitor) only slowed (−55%) the acid extrusion. Both in HEPES-buffered and CO₂/HCO₃-buffered system solution, the pH_i recovery after induced-intracellular alkalosis was entirely blocked by removing [Cl⁻]_o. Western blot analysis showed the isoforms of pH_i regulators, including NHE1/2, NBCe1/n1, AE1/2/3/4 and CHE in the hDPSCs.ConclusionsWe demonstrate for the first time that resting pH_i is significantly higher than 7.2 and meditates functionally by two Na⁺-dependent acid extruders (NHE and NBC), two Cl⁻-dependent acid loaders (CHE and AE) and one Na⁺-independent acid extruder(s) in hDPSCs. These findings provide novel insight for basic and clinical treatment of dentistry.     

人恒牙牙髓干细胞分化为脂肪细胞的体外实验研究

目的验证人恒牙牙髓组织来源的牙髓干细胞在体外向脂肪细胞的定向分化,并对分化后的细胞进行鉴定。方法从正畸治疗减数拔除的恒前磨牙中分离牙髓组织,应用酶消化法获得牙髓细胞。单抗Stro-1标记、免疫磁珠阳性分选系统分选获得牙髓干细胞,第3代牙髓干细胞用成脂肪向诱导培养基向脂肪细胞诱导分化。用油红O染色鉴定成脂肪向分化,RT-PCR检测脂肪细胞的特异相关或标志基因。以同期培养的未诱导的普通培养基培养的DPSCs做阴性对照;以同期培养的骨髓间充质干细胞成脂肪向分化的结果做阳性对照。结果人恒牙牙髓干细胞经成脂肪向培养基诱导后表现出脂肪细胞特性,油红O染色结果为阳性,RT-PCR检测成脂肪向分化相关基因过氧化物酶增殖物激活受体γ2、脂肪酶结合蛋白aP2和脂蛋白脂酶均有阳性表达。结论人恒牙牙髓干细胞在体外具有分化为脂肪细胞的潜能。     

牙髓干细胞向神经细胞方向的诱导分化实验

目的探讨克隆化培养分离的人牙髓干细胞是否具有向神经细胞方向分化的潜能,并确定其诱导条件。方法克隆化培养的人牙髓干细胞预诱导24 h,然后换含一定浓度二甲基亚砜（DMSO）、丁羟基茴香醚（BHA）、forskolin、β- 巯基乙醇（β-ME）和氢化可的松（hydrocortisone）的联合诱导液连续诱导4 d,对诱导细胞进行形态学观察,神经胶质酸性蛋白（GFAP）、非特异性酯酶（NSE）免疫组化染色和GFAP mRNA RT- PCR检测。同时,以未诱导细胞为对照。结果诱导12 h时细胞形态开始改变,24 h时分化为较为典型的神经细胞样细胞,继续诱导分化细胞数量增多;诱导细胞表达神经元细胞特异性标志NSE和GFAP蛋白;RT- PCR检测诱导细胞表达GFAP mRNA,而未诱导细胞均无上述改变和表达。结论人牙髓干细胞在一定的诱导条件下可横向分化为神经元样细胞。     

牙髓干细胞的研究

牙髓干细胞是存在于牙髓组织中的一种成体干细胞，具有高度增殖、自我更新的能力和多向分化的潜能。牙髓干细胞的研究对牙组织工程和牙齿的再生将产生重要的意义。本文就牙髓干细胞的研究现状作一综述，并对其应用前景以及目前存在的问题进行讨论。     

人牙髓干细胞培养及其细胞表型的分析研究

目的 :分离培养来源于人体牙髓组织的干细胞并对其细胞表型进行分析。方法 :采用胶原酶消化法获得人牙髓组织的单细胞悬液 ,14d后挑取细胞克隆传代培养 ,随机选取 2株细胞克隆扩大培养 ,以骨髓间充质干细胞为参照 ,利用免疫组化方法通过与外胚间充质干细胞的比较对其表型进行分析。结果 :人的牙髓干细胞呈集落状生长 ,有细胞克隆形成 ,细胞表达多种细胞表面标志。结论 :人牙髓组织中存在有呈克隆样生长的成体干细胞 ,细胞表型呈现多样性。     

人牙髓细胞条件培养液对人牙囊细胞成骨分化作用的体外研究

目的:探索人牙髓细胞条件培养液(HDPSCs-CM)对人牙囊细胞(HDFSCs)向成骨分化的作用.方法:利用胶原酶消化法获得HDFSCs,经纯化鉴定后培养于HDPSCs-CM中;CCK-8检测HDFSCs增殖活性,观察细胞形态改变;碱性磷酸酶(ALP)染色、茜素红S染色定性分析细胞成骨能力的改变.qRT-PCR检测HDFSCs中骨膜蛋白(POSTN)、Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、碱性磷酸酶(ALP)、骨涎蛋白(BSP)以及骨桥蛋白(OPN)的mRNA表达情况.结果:经HDPSCs-CM诱导后,HDFSCs形态发生成牙骨质或成骨样改变;诱导组HDFSCs增殖活性受到明显抑制(P<0.05或P<0.01);诱导组ALP染色强于对照组,茜素红S染色矿化结节多于对照组;诱导组POSTN、Col-Ⅰ、ALP、BSP、OPN的表达量明显增高(P<0.05或P<0.01).结论:HDPSCs-CM能促进HDFSCs成骨分化.     

干细胞表面标志物在牙髓干细胞中的表达

目的:探讨磁珠分选后培养的人牙髓干细胞的表面标记抗原随培养代数增加的变化情况。方法:改良组织块法培养的人牙髓细胞,至第2代（P2）时,用磁珠方法分选出STRO-1阳性细胞,用流式细胞术分别检测P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8代的干细胞表面标志物CD73、CD90、CD105、 CD166、STRO-1。取P3代细胞,分别进行成骨诱导和成脂诱导。21 d后,分别行茜素红染色和油红O染色,观察矿化物形成情况和脂滴形成情况,同时以未诱导细胞为对照。结果:STRO-1在牙髓干细胞表面随代数增加而下降,CD73、CD90、CD105、 CD166的表达比较稳定,茜素红染色可见矿化结节形成,油红O染色显示形成大量脂滴。结论:STRO-1在牙髓干细胞表面随代数增加而下降,其他干细胞标志物比较稳定。     

miR-103对牙髓干细胞增殖及其向成牙本质细胞分化的影响

目的:探讨miR-103对牙髓干细胞向成牙本质细胞分化的影响.方法:从即刻拔除的成入第三磨牙中分离培养人牙髓干细胞,将培养的细胞分为对照组、miRNA阴性对照组、miR-103过表达组和miR-103降低表达组,利用CCK-8法检测人牙髓细胞的增殖能力变化,利用q-PCR和Western Bolt技术检测人牙髓细胞中R...     

人牙源性多能干细胞重编程前后微小RNAs差异表达谱系分析

目的 对比研究两种人牙源性多能干细胞重编程前后微小RNAs（miRNAs）差异表达,交集分析、筛选特异性miRNAs。方法 利用仙台病毒将人牙髓干细胞（DPSCs）和根尖乳头干细胞（SCAP）重编程为诱导性多潜能干细胞（iPSCs）,提取总RNA,miRNAs标记、杂交,扫描芯片、读取图像,筛选差异表达miRNAs,交集分析。结果 人DPSCs和SCAP均可重编程为iPSCs。miRNAs芯片分析结果显示人DPSCs重编程后有68个差异表达miRNAs（倍数>10）,其中37个表达上调,31个表达下调;人SCAP重编程后有107个差异表达miRNAs（倍数>10）,其中68个表达上调,39个表达下调。二者取交集,均上调的有miR-302e,下调的有miR-29b-3p、miR-181b-5p、miR-4328、miR-22-5p、miR-145-5p、miR-4324、let-7b-5p、miR-181a-5p、miR-27b-3p（倍数>10）。结论 人DPSCs和SCAP重编程为iPSCs过程中有多种miRNAs参与,多数与细胞周期、上皮-间充质转化、转化生长因子β信号通路等相关。