与MHC相关和无关基因在人体对疟原虫抗原免疫反应中…

人体是否易于感染疟疾，发病和死亡受宿主基因型，寄生虫毒杀力和周围因素包括疟关特异免疫力的影响，免疫应答本身在又取决于宿主于基因和环境作用的配合，宿主基因型替在免疫反应谱的限制程度可能影响感染的结果并发对疫苗设计的有一定意义，本文综述了主要组织相容性复合物（ＭＨＣ）相关和无关基因与人对轻症，或重症疟疾易感性，疟原虫抗原免疫应答的调控以及疫苗的研制等方面所起的作用。     

同种移植大鼠心脏Ⅱ类主要组织相容性抗原表达及其机制探讨

目的　探讨同种移植心脏术后Ⅱ类主要组织相容性 (MHC)抗原表达及其影响机制。方法　建立大鼠颈部心脏移植模型 ,以同基因移植和无移植动物作为对照 ,采用免疫组化、逆转录PCR等技术测定异基因大鼠移植心脏Ⅱ类MHC抗原表达和心肌IL 2、IL 4mRNA的水平变化。结果移植心脏Ⅱ类MHC抗原表达与心肌急性免疫排斥病理学改变明显相关 (P <0 0 1 ) ,排斥早期其阳性表达细胞位于小血管内皮及周围 ,随着急性免疫排斥病变发展心肌IL 2、IL 4mRNA水平与Ⅱ类MHC抗原表达存在相关变化 (P <0 0 1 )。结论　移植心脏Ⅱ类MHC抗原表达是术后急性免疫排斥识别和效应时相的重要环节 ,急性免疫排斥早期移植心脏功能改变可能与微血管内皮损伤有关 ,受体细胞因子网络对供体Ⅱ类MHC抗原表达有调节作用     

主要组织相容性复合物Ⅱ类转录激活因子在五种人类恶性血液病细胞系中的表达

目的 探讨5种血液病细胞株的主要组织相容性复合物(MHC)—Ⅱ类抗原表达及对干扰素(IFN)—γ诱导MHC分子表达的反应性与MHCⅡ类分子转录激活因子(CⅡTA)表达的关系。方法 采用Western blot、免疫组化和(或)流式细胞术检测肿瘤细胞CⅡTA蛋白及MHC分子表达,逆转录PCR检测肿瘤细胞CⅡTA基因表达。混合淋巴细胞反应检测肿瘤细胞刺激外周血T细胞反应的能力。结果 肿瘤细胞MHCⅡ类分子表达与CⅡTA表达一致;诱导型表达CⅡTA的Jurkat细胞,经IFN—γ作用后其MHCⅠ、Ⅱ类抗原表达增高(分别为20％、42％);IFN—γ诱导后仍不表达CⅡTA的肿瘤细胞,其对IFN—γ促MHCⅡ表达的作用不反应。Jurkat诱导后刺激T细胞表达高水平的白细胞介素-2 mRNA(是未诱导时的51倍)。结论 某些恶性血液病细胞株对IFN-γ不能诱导MHC分子表达与CⅡTA诱导性表达缺陷有关,表明CⅡTA参与调控肿瘤细胞MHCⅠ、Ⅱ类抗原表达,可能在肿瘤免疫逃逸中起重要作用。     

MHC Ⅱ类转激活因子基因的重组腺病毒载体的构建

目的 构建含有主要组织相容性复合物(major histocompatibility complex,MHC)Ⅱ类分子激活物(CⅡTA)基因的重组腺病毒载体.方法 回收CⅡTA的PCR产物插人pUC57中,用EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切,U-Gene凝胶回收纯化3300bp目的基因片段.用EcoR Ⅰ和sal Ⅰ双酶切质粒载体pShuttle-GFP-CMV,用T4DNA连接酶将上述目的基因片段与pShuttle-GFP-CMV片段连接,得到穿梭质粒pShuttle-GFP-CMV-C Ⅱ TA,并经Kpn Ⅰ单酶切及测序鉴定.Ⅰ-Ceu Ⅰ/Ⅰ-See Ⅰ双酶切处理,回收目的片段,将pAdxsi载体片段和插入片段进行酶连接,得到腺病毒质粒pAdxsi-GFP-C Ⅱ TA,经Xho Ⅰ酶切鉴定后转染HEK293细胞并培养出毒.扩增、纯化重组腺病毒AdCⅡTA,并测定病毒滴度.结果 重组穿梭质粒pShuttle-GFP-CMV-C ⅡTA经Kpn Ⅰ单酶切及测序分析,证实与GeneBank中公布的小鼠CⅡTA(NM_007575)序列完全相符.重组腺病毒pAdxsi-GFP-C Ⅱ TA构建成功后在HEK293细胞中包装产生的重组腺病毒AdC Ⅱ TA对HEK293细胞有致病作用.经多次重复感染并纯化后,病毒滴度达2.0×10~(11)PFU/ml.结论 含小鼠CⅡTA基因的重组腺病毒已成功构建.     

MHCⅡ类转激活因子基因的重组腺病毒载体的构建

目的构建含有主要组织相容性复合物（major histocompatibility complex,MHC）Ⅱ类分子激活物（CⅡTA）基因的重组腺病毒载体。方法回收CⅡTA的PCR产物插入pUC57中,用EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切,U—Gene凝胶回收纯化3300bp目的基因片段。用EcoRⅠ和SalⅠ双酶切质粒载体pShuttle—GFP—CMV,用T4DNA连接酶将上述目的基因片段与pShunle—GFP—CMV片段连接,得到穿梭质粒pShuttle—GFP—CMV—CⅡTA,并经KpnⅠ单酶切及测序鉴定。Ⅰ—CeuⅠ／Ⅰ—SceⅠ双酶切处理,回收目的片段,将pAdxsi载体片段和插入片段进行酶连接,得到腺病毒质粒pAdxsi—GFP—CⅡTA,经XhoⅠ酶切鉴定后转染HEK293细胞并培养出毒。扩增、纯化重组腺病毒AdCⅡTA,并测定病毒滴度。结果重组穿梭质粒pShuttle—GFP—CMV—CⅡTA经KpnⅠ单酶切及测序分析,证实与GeneBank中公布的小鼠CⅡTA（NM_007575）序列完全相符。重组腺病毒pAdxsi—GFP—CⅡTA构建成功后在HEK293细胞中包装产生的重组腺病毒AdCⅡTA对HEK293细胞有致病作用。经多次重复感染并纯化后,病毒滴度达2．0×10^11PFU／ml。结论含小鼠CⅡTA基因的重组腺病毒已成功构建。     

脱氧氮杂胞苷诱导HepG2细胞表达主要组织相容性复合体Ⅰ类分子A

目的 观察主要组织相容性复合体Ⅰ类分子A(MICA)在HepG2与L02细胞株中表达的差异及脱氧氮杂胞苷(5-aza-dC)对HepG2细胞株MICA表达的影响,探讨毛细血管扩张性共济失调突变蛋白(ATM)依赖的DNA损伤途径与5-aza-dC调节MICA表达的关系. 方法同时接种并培养L02和HepG2细胞,在同一时间点收取细胞,流式细胞仪检测细胞膜MICA蛋白表达水平;不同浓度5-aza-dC(0.1,1.0,5.0mmol/L)作用于HepG2细胞不同时间(24、48、72、96h)后,定量PCR检测MICA mRNA水平以寻找5-aza-dC最佳作用浓度和时间;ATM特异性抑制剂咖啡因或RNA干扰技术干扰ATM表达,定量PCR检测细胞mRNA水平,流式细胞术检测细胞膜MICA蛋白表达水平.结果 数据比较采用Kruskal-Wallis和Mean-Whitney U方差分析.结果 流式细胞结果显示,HepG2细胞高水平表达MICA,而正常肝细胞L02几乎不表达MICA;5-aza-dC处理可上调HepG2细胞MICA的表达(X2=7.20,P＜0.05),这种上调作用可被ATM特异性阻滞剂咖啡因和ATM特异的小分子干扰RNA所阻断(U=0.00,P＜0.05).结论 MICA在正常肝细胞株中无表达,在肝癌细胞株中高表达;5-aza-dC可诱导HepG2细胞MICA的表达,其机制可能与5-aza-dC引起的ATM依赖的DNA损伤途径有关.     

脱氧氮杂胞苷诱导HepG2细胞表达主要组织相容性复合体Ⅰ类分子A

Objective Major histocompatibility complex class I Crelated molecules A and B(MICA and MICB) are innate immune system ligands for the NKG2D receptor expressed by natural killer cells and activated CD8(+)T cells.Our previous study showed that 5-aza-2'-deoxycytidine(5-aza-dC),a DNA methyltransferase inhibitor,can induce the expression of MICB and sensitized cells to NKL-cell-mediated cytolysis.The aim of this study was to determine the expression level of MICA in HepG2 cells(an HCC cell line)and L02 cells(a normal liver cell),and to investigate the effect of 5-aza-dC on MICA expression in HepG2 cells.Methods Cells were treated with 5-aza-dC,caffeine and ATM-specific siRNA.The cell surface MICA protein on HepG2 cells and L02 cells was determined using flow cytometry.The mRNA level was detected using realtimeRT-PCR.Result MICA was undetectable on the surface of L02 cells,but was highly expressed on HepG2 cells.MICA expression was upregulated in response to 5-aza-dC treatment(P＜0.05),and the upregulation of MICA was partially prevented by pharmacological or genetic inhibition of ataxia telangiectasia mutated(ATM)kinase(P＜0.05).Conclusion Our data suggest that 5-aza-dC induces the expression of MICA by a DNA damage-dependent mechanism.     

大肠癌组织组织相容性复合物Ⅰ、Ⅱ类抗原表达及其与转移的关系

本研究应用流式细胞术 (ＦＣＭ)对 4 0例结直肠癌标本癌组织和癌旁组织的组织相容性复合物 (ＭＨＣ)Ⅰ、Ⅱ类抗原的表达进行检测 ,结合临床病理进行分析 ,旨在探讨结直肠癌发生和转移的机制 ,为临床防治提供一定的理论依据。一、材料与方法1.病例选择 :收集山东大学齐鲁医院腹部外科初诊住院大肠癌患者手术切除标本共 4 0例 ,患者平均年龄为 5 4岁 ,男 2 9例 ,女 11例 ,每例均收集大肠癌组织、癌旁组织和周围淋巴结。癌旁组织取自距癌组织 5ｃｍ的肠组织 ,手术切除后送检。标本均经病理诊断 ,其中高分化腺癌 3例 ,中分化 15例 ,低分化 19例 …     

主要组织相容性复合物Ⅰ类链相关基因在肠组织中的表达及与溃疡性结肠炎的关系

目的 探讨主要组织相容性复合物Ⅰ类链相关基因(MIC)在溃疡性结肠炎(UC)发病中所起的作用.方法 采用荧光定量实时-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测34例UC患者和17例正常人肠黏膜组织中MICA和MICB及其受体NKG2D mRNA表达水平的差异.采用激光共聚焦显微镜观察肠黏膜组织中MICA分子的表达定位.结果 UC组MICA、MICB及NKG2DmRNA水平的表达量(分别为3.5408±2.6658、8.9879±3.2893和2.4395±0.8147)均显著高于正常对照组(分别为1.0477±0.7201、4.6293±1.2616和1.1624±0.3954,P值分别=0.0053、0.0039和0.0078).免疫荧光共聚焦显微镜观察显示,MICA分子在肠上皮细胞胞膜中表达.结论 UC患者肠黏膜组织中MICA、MICB及其受体NKG2D的mRNA表达水平均增高,提示MIC基.因在UC局部起重要作用.     

冠心病患者MHC2TA-168A→G多态性与高敏C反应蛋白水平的相关性

目的 探讨冠状动脉粥样硬化性心脏病(CAD)患者Ⅱ类主要组织相容性复合物转录激活子(MHC2TA)5'启动区-168A→G多态性与血清高敏C-反应蛋白(hs-CRP)水平的关系.方法 对185例CAD患者采用错配聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术(mpPCR-RFLP)检测MHC2TA基因-168A→G多态性并免疫比浊法测定hs-CRP水平,分析两者之间的关系.结果 185例CAD患者MHC2TA基因-168A→G多态性:呈从基因型95例(51.35％)、AG基因型78例(42.16％)、GG基因型12例(6.49％);hs-CRP水平:GG基因型患者hs-CRP(4.5±1.8)mg/L及AG基因型患者(3.2±1.2)mg/L与AA基因型患者(2.7±1.1)mg/L比较差异有统计学意义(t=11.06、9.14,均P＜0.05);hs-CRP ＞3.0 mg/L的高危患者GG基因型占(91.7％)及AG基因型(73.4％)与AA基因型高危患者(45.2％)比较,差异有统计学意义(x2=17.75,28.04,均P＜0.05).结论 MHC2TA-168A→G多态性G等位可能是CAD炎症反应的独立影响因素,MHC2TA-168A→G多态性可能与CAD炎症反应有关.     

乙肝疫苗免疫应答与主要组只相容性抗原(MHC)表达关系的研究进展

有资料表明，全球约有3．5亿乙肝病毒携带者和慢性乙型肝炎患者。约25％的乙肝病毒感染者死于与之相关的肝病和肝癌。自1981年乙肝疫苗获准使用后，乙肝感染率较之前明显下降。疫苗的免疫原性、保护性、安全性获得一致认可。但约5％-10％的健康人在按照标准方案实施一个免疫程序的乙肝疫苗接种后，乙肝表面抗体的滴度达不到保护水平（〈10mIU／ml），称为无／低应答者（抗-HBs水平低于2mIU／ml为无应答，低于10mIU／ml为低应答）。健康人群中即使控制了疫苗接种的外部因素（疫苗抗原含量。注射途径，部位等），机体的一般因素（年龄，性别，体重等）和其他因素（如病毒变异）。     

Ⅱ类反式激活因子启动子Ⅳ区C-1350T和G-944C多态性与乙型肝炎肝硬化易感性的关系

目的探讨Ⅱ类反式激活因子（CIITA）启动子Ⅳ区1350和-944位点单核苷酸多态性（SNP）与乙型肝炎肝硬化易感性的关系。方法在191例慢性乙型肝炎、353例乙型肝炎肝硬化与125名无HBV感染的健康献血员人群中，应用序列特异性引物PCR技术对CIITA基因启动子Ⅳ区C1350T和G-944C位点进行基因分型研究。结果慢性乙型肝炎患者CC：37．2％、TG：42．2％、CG：18．9％，肝硬化患者CC：35．3％、TG：34．0％，CG：29．3％，肝硬化患者CC、TG单倍型频率较低，而CG单倍型频率显著升高，差异有统计学意义（CG比CC：x^2=8．274，df=1，P〈0．01；CG比TG：x2=15．027，df=1，P〈0．01）；两组患者间CC与TG单倍型频率比较，x^2=1．231，df=1，P〉0．05，差异无统计学意义。与慢性乙型肝炎患者（CC／CC：12．6％；TG／TG：18．3％；含CG的基因型：33．5％；不含CG的基因型：35．6％）相比，肝硬化人群中CC／CC（1组，19．6％）和含CG的基因型（3组，53．5％）频率显著升高，而TG／TG（2组，11．9％）和不含CG的基因型（4组，15．0％）频率显著降低（1组比2组，X2=7．176，df=1，P〈0．01；1组比4组，x^2=19．818，df=1，P〈0．01；3组比2组，x2=11．423，df=1，P〈0．01；3组比4组，x2=34．226，df=1，P〈0．01；1组比3组，x2=0．009，df=1，P〉0．05；2组比4组，x2=2．176，df=1，P〉0．05）。结论CIITA基因启动子Ⅳ区中1350和-944位点多态性与慢性HBV感染者肝硬化的易感性密切相关，携带含CG单倍型的基因型人群更容易发展为肝硬化。     

人CⅡTA基因不同单倍型cDNA真核表达载体的构建

目的 构建人MHCⅡ类反式激活因子（CⅡTA）基因3种不同单倍型cDNA的真核表达载体。方法 以野生型重组质粒EBS-NPL-CⅡTA cDNA为模板,用重叠延伸PCR定点突变技术对CⅡTA基因编码区的两个非同义单个核苷酸多态性（SNP）位点进行突变,制备CⅡTA基因另外3种单倍型CDNA的部分片段。将其分别克隆至EBS-NPL-CⅡTA酶切后的线性化载体上,通过菌落PCR及酶切鉴定获得阳性克隆,并对其进行测序鉴定。然后将4种单倍型的真核表达载体和空载体EBS-NPL分别转染至HepG2细胞,用间接细胞免疫荧光技术检测其HLA-DR分子的表达。结果 成功制备人CⅡTA基因3种单倍型CDNA的部分片段,并获得含有CⅡTA基因3种不同单倍型cDNA完整序列的真核表达载体。证实未经转染和转染空载体的HepG2细胞无HLA-DR分子的表达,转染4种真核表达载体的HepG2细胞均可表达HLA-DR分子。结论 成功构建人CⅡTA基因不同单倍型的真核表达载体,为研究CⅡTA基因不同单倍型功能之间的差异奠定基础。     

主要组织相容性复合物在特发性炎性肌病中的表达及临床应用价值

目的 研究多发性肌炎(PM)和皮肌炎(DM)患者骨骼肌组织中的主要组织相容性复合物(MHC)的表达,探讨它们在特发性炎性肌病(IIM)发病机制中的作用及临床应用价值.方法 选取我院1986-2007年风湿免疫科收住的IIM患者骨骼肌组织标本45例(PM 19例,DM 26例),以性别、年龄相匹配的外伤患者骨骼肌标本30例作为对照.用免疫组织化学方法检测人类白细胞抗原(HIA)-A/B/C(即MHC-Ⅰ分子)和HLA-DR(即MHC-Ⅱ分子)在PM/DM患者及对照组肌组织中的表达.结果 HLA-A/B/C在18例PM、24例DM和3例对照组肌组织中有表达,阳性率分别为95%、92%和10%;HLA-DR在PM组、DM组和对照组肌组织中的阳性表达率分别为84%、81%和13%.HLA-A/B/C和HLA-DR在PM/DM患者肌组织中的表达量均较正常对照组明显升高(P均<0.05),但在PM组和DM组间差异无统计学意义(P均>0.05).根据组织病理学特点把PM/DM患者分为病变程度不同的3组,HLA-A/B/C和HLA-DR在PM/DM患者肌组织中的表达量与肌纤维变性、坏死、炎症浸润的程度和各项临床及实验室指标无明显关联(P均>0.05).结论 MHC-Ⅰ和Ⅱ类分子在PM/DM患者肌肉组织中表达增高,在无明显炎症浸润和肌纤维坏死的患者中也可见到这种表达的上调,检测肌组织中MHC-Ⅰ和Ⅱ类分子的表达可用于PM/DM的诊断.     

慢性乙型肝炎肝细胞MHC抗原表达的免疫组化和免疫电镜的研究

应用单克隆抗体和免疫组化技术，对２２例血清ＨＢｅＡｇ阳性的慢性乙型肝炎患者的肝内ＭＨＣ抗原的表达进行了研究。ＭＨＣ－Ⅰ类抗原在２４例ＣＰＨ和１８例ＣＡＨ患者的肝细胞膜上表达。阳性的肝细胞主要分布在碎屑样、桥样和灶性坏死区。ＭＨＣ－Ⅰ类抗原在肝细胞的表达程度和ＣＤ８＋Ｔ淋巴细胞的肝内浸润和肝病变程度有相关关系。免疫电镜显示，表达ＭＨＣ－Ｉ类抗原的肝细胞和穿过血窦的淋巴细胞密切接触。ＭＨＣ－Ⅱ类（ＨＬＡ－ＤＲ）抗原在１１／１８例的ＣＡＨ患者的肝细胞中表达。阳性的肝细胞呈灶性分布，其表达程度低于ＭＨＣ－Ｉ类抗原。上述结果提示，ＭＨＣ抗原在肝细胞的表达可能在乙型肝炎的发病机制中起重要作用。     

纳米载体介导的抗转录激活因子核酶对血管内皮细胞表面主要组织相容性复合物Ⅱ分子的抑制

移植血管病(GVD)仍是心脏移植成功与否的关键因素。尽管GVD的发病机制尚不十分清楚,但Labarrere等[1]证实内皮细胞表面主要组织相容性复合物(MHC)Ⅱ分子与GVD密切相关。MHCⅡ分子转录激活因子(CⅡTA)是MHCⅡ结构及诱导性表达最关键的总调节因子,只在MHCⅡ阳性细胞中出现[2 ,3 ] 。本文以抗CⅡTA的核酶抑制血管内皮细胞系表面MHCⅡ抗原的表达,为心脏移植排斥问题的解决开辟了一条新途径。一、方法和结果1.ECV30 4细胞株中MHCⅡ抗原的表达:用流式细胞仪检测内皮细胞系ECV30 4细胞株中MHCⅡ抗原的表达,其表面HLA DR、DP、…     

加味小柴胡汤对乙型肝炎病毒转基因小鼠MHC分子表达的影响

[目的]观察加味小柴胡汤对乙型肝炎病毒（HBV）转基因小鼠主要组织相容抗原复合物（MHC）分子表达的影响。[方法]36只经筛选HBV-DNA阳性的转基因小鼠随机分为3组,每组12只,中药组给予加味小柴胡汤水煎剂,西药组给予拉米夫定,空白对照组给予0.85%氯化钠。分别检测其给药后组织MHCⅠ和巨噬细胞MHCⅡ分子的表达。[结果]中药组分别与空白对照组、西药组比较,其MHCⅠ、MHCⅡ表达均显著升高（P〈0.01,〈0.05）。[结论]加味小柴胡汤能显著提高HBV转基因小鼠MHC抗原分子表达。     

重组腺病毒载体介导HOSM 基因对胰腺癌细胞PC3体外增殖的抑制作用

目的构建了含人抑瘤素M（HOSM）基因的复制缺陷型重组腺病毒载体AD-HOSM,观察其对人胰腺癌细胞株PC3在体外生长抑制情况。方法通过同源重组方法构建含HOSM基因的缺陷型腺病毒载体AD-HOSM,报告基因AD-GFP检测腺病毒的对胰腺癌细胞系的转染效率;人胰腺癌细胞株PC3转染含HOSM基因的缺陷型腺病毒载体AD-HOSM后,用RT-PCR法检测外源HOSM基因在其中的表达;台盼兰染色、细胞计数法检测AD-HOSM对PC3的体外增殖抑制情况。结果成功构建了重组腺病毒载体AD-HOSM,AD-HOSM对胰腺癌细胞PC3有较高的转染效率,HOSM基因在转染细胞能有效的表达。体外试验示AD-HOSM明显抑制PC3的的生长。结论重组腺病毒介导HOSM表达能有效抑制PC3在体外的增殖,提示重组腺病毒介导的HOSM基因治疗可能成为胰腺癌治疗的候选方案。     

胰腺导管腺癌microRNA表达谱的研究

目的 应用microRNA( miRNA)高通量生物芯片筛选胰腺导管腺癌及癌旁组织差异表达的miRNA,分析其相关的靶基因.方法 收集9例新鲜的胰腺导管腺癌和3例癌旁组织,运用标记713个miRNA的Agilent miRNA生物芯片筛选胰腺导管腺癌差异表达的miRNA,应用荧光实时定量PCR方法验证表达上调的miRNA.采用TargetScan 5.1和miRandaV5分析软件分析差异表达miRNAs的靶基因.结果 miRNA芯片筛选出11个胰腺导管腺癌相关的差异表达的miRNA,其中miR-194*、miR-192*、miR-602、miR-194表达上调,miR-139-3p、miR-513a-5p、miR-630、miR-30c-1*、miR-887、miR-508-5p、miR-516a-5p表达下调.miR-192、miR-194及其同源体的表达在31例胰腺癌组织中得到验证.经软件分析,miR.192靶基因有ZEB2、CXCL-2、EEF1A1、ERCC3,miR-192*靶基因有DCC、SMAD4、FAS,miR-194靶基因有DACH1、IGSF11、PTPN2、RBBP4,miR-194*靶基因有CD40LG、CIDEB、FHL1.结论胰腺导管腺癌存在11个表达差异的miRNA,这些miRNA可能与胰腺导管腺癌的发生、发展有关.