安氏隐孢子虫卵囊分离纯化方法研究

目的 建立获取纯净的安氏隐孢子虫卵囊外培养模型。方法研究改进分离纯化安氏隐孢子虫卵囊的方法,采用蒸馏水稀释Sheather’s蔗糖溶液配制不同密度的蔗糖溶液,比较不同稀释比的Sheather’s蔗糖溶液漂浮卵囊的效果,并首次比较了蒸馏水和PBS稀释的Sheather’s蔗糖溶液分离纯化卵囊的活性,将两种方法分离纯化的卵囊37℃水浴1h进行脱囊率比较。结果2：1蔗糖溶液（2体积Sheather’s蔗糖溶液与1体积的蒸馏水）分离奶牛粪样中卵囊效果最好。漂浮三次即可获得大量卵囊,回收率为83．70％,三次漂浮的卵囊总数较Sheather’s蔗糖溶液高57．53％。蔗糖溶液多梯度密度纯化法纯化后的卵囊杂质较少,回收率为47．52％。蒸馏水稀释的蔗糖溶液分离纯化卵囊脱囊率为87．87％,PBS稀释的蔗糖溶液分离纯化卵囊的脱囊率为84．71％,差异无统计学意义P〉0.05）。结论2：1蔗糖溶液适用于分离安氏隐孢子虫卵囊,且用蒸馏水代替PBS稀释Sheather’s蔗糖溶分离纯化隐孢子虫卵囊其活性不受影响。可用于体外培养研究。     

犬隐孢子虫和隐孢子虫病的研究进展

隐孢子虫病(Cryptosporidiosis)是由隐孢子虫(Cryptosporidium)引起的一种重要的人畜共患病。近年来,隐孢子虫病的检出率逐年增高,已被列为世界最常见的6种腹泻病之一。犬隐孢子虫病世界各地均有报道,严重威胁着人类和动物的健康。本文对犬隐孢子虫病的病原分类、虫体形态和寄生部位、流行病学特点、诊断、防治等方面研究状况进行了综述,为犬隐孢子虫病的有效防制提供参考。     

伯氏疟原虫的浓集和纯化

在进行疟原虫生物化学、免疫学及分子生物学研究时,疟原虫样品中宿主成分的污染常会影响实验结果。因此需要分离纯净的疟原虫作为实验材料。分离的方法有聚蔗糖、泛影葡胺及明胶溶液法。近年认为Percoll溶液是首选的分离介质,然而该液昂贵,需进口。作者选用国产成品试剂淋巴     

保存10余年的隐孢子虫卵囊粪渣涂片染色技术探讨

隐孢子虫是机会致病原虫也是一种重要的腹泻病原 ,近些年逐渐引起人门的注意。隐孢子虫病的诊断目前主要是从粪便中查到卵囊来确诊。理想的制片对学生认识及掌握隐孢子虫的形态有很大的帮助 ,为解决目前教学中标本来源的困难 ,作者对 10年前科研所保存下来的粪渣进行了涂片及染色的研究。1　材料与方法1.1　阳性粪便的来源　 1990年我室在山东邹县农村进行隐孢子虫感染调查时取得的阳性粪便 ,于室温下一直存放在青霉素小瓶内用10 %福尔马林固定。1.2　染色液的配制 (改良抗酸染色法 )第 1液　石炭酸复红染色液 :95 %酒精 2 0ｍｌ,石炭酸 8ｍ…     

水体中隐孢子虫分子生物学检测方法进展

近年来,世界范围内水源性隐孢子虫病不断爆发。隐孢子虫卵囊壁对外界环境具有较强抵抗力,感染人的剂量较低,免疫力低下人群感染后症状较重,而临床上又无特效治疗药物。因此,及时检出水体中隐孢子虫卵囊的含量、种类及活力成为控制其大流行的首要任务。目前国际上推荐的隐孢子虫检测方法为美国EPA的1622或1623方法,但该方法造价高、过程繁琐且无法判断卵囊的种类及活力。各种PCR方法、LAMP方法、NASBA方法和核酸杂交等分子生物学方法则普遍具有速度快、灵敏度高、特异性好、费用低等特点,成为检测水体中隐孢子虫的重要手段和传统方法的有益补充。特别是分子生物学方法在卵囊类型判定和卵囊的活性有无的鉴别上普遍具有优势,因此还可以应用于隐孢子虫感染源的追踪溯源和污染环境的危害评估。其中,LAMP技术因其具有快速、特异性强、灵敏度高、成本低等优点,最具应用前景。     

三种隐孢子虫卵囊改良抗酸染色的形态学观察

目的观察3种隐孢子虫卵囊改良抗酸染色的形态特点。方法细胞图象分析系统观察改良抗酸染色后的牛隐孢子虫(C.bovis)、安氏隐孢子虫(C.andersoni)、隐孢子虫猪基因型Ⅱ(Cryptosporidium sp.pig genotypeⅡ)三种隐孢子虫卵囊的形态特点,测定卵囊长径和短径,计算卵囊指数。结果卵囊呈玫瑰红色,圆形或卵圆形,囊壁不着色,囊内子孢子的排列不规则且多形态,可见暗黑色颗粒状残留物。三种隐孢子虫卵囊中安氏隐孢子虫卵囊明显较其他两种卵囊大,但油镜下无法区分三种隐孢子虫卵囊形态。标本中常存在有大小不等、染色均匀、无内部结构的非特异性抗酸颗粒。结论改良抗酸染色法是较好的临床隐孢子虫卵囊检测方法,但需要与非特异性抗酸颗粒鉴别。     

隐孢子虫感染动物排卵囊规律的研究

用牛粪中隐孢子虫卵囊感染小鼠和豚鼠，人粪中虫体卵囊感染犬，３种动物隐孢子虫感染模型均获成功。感染后７－１０ｄ粪便中卵囊增至一高峰值，此后数量逐渐减少；小鼠４周后、犬６周后，豚鼠７周粪便中卵囊全部转阴。临床病例采用检验粪便中卵囊转阴指标来评价某药物疗效，尚须进一步探讨。     

隐孢子虫病的治疗进展

隐孢子虫病的治疗进展史长松综述姚福宝审校（儿科研究室）关键词隐孢子虫隐孢子虫病治疗中图法分类号Ｒ５３１隐孢子虫病（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｏｓｉｓ）是由隐孢虫（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ，ＣＰＳ）引起的一种世界范围性人兽共患寄生虫病，其最常见的...     

数字图像处理技术对人源隐孢子虫卵囊形态学参数的测定

目的建立并分析人源隐孢子虫卵囊的形态学参数,明确其形态学变化特点。方法收集一名严重腹泻儿童的粪便,涂片经改良抗酸染色法检测隐孢子虫卵囊。应用奥林巴斯(Olympus)BX50万能生物显微镜(日本)摄像系统采集1439个隐孢子虫卵囊的图像,利用计算机数字图像分析系统测定其长径(L)、短径(W)、周长、面积,用SPSS数据处理软件(12.0版本)分析,计算其卵形指数(L/W)等一系列形态学参数。结果计算机数字图像分析技术测定人源1439个隐孢子虫卵囊长径均值为4.78μm,95%可信区间为4.73～4.82;卵囊短径均值为4.35μm,95%可信区间为4.33～4.37;卵囊周长、面积和卵形指数均值分别为15.63μm、15.22μm2和1.10。计算机数字图像分析技术测定的人、狗和小鼠源隐孢子虫卵囊的形态学参数,经方差分析F值在10.7374～68.8776,P<0.01。结论利用计算机数字图像分析系统和SPSS数据处理软件,获得人源隐孢子虫卵囊长径、短径、周长、面积、卵形指数的累加和、均值、中值、最大值、最小值、标准差及95%可信区间等一系列形态学参数。获得的资料是精确的,为鉴别人源隐孢子虫提供了科学信息。     

食品和水源微小隐孢子虫18S rRNA鉴定方法研究

目的了解生蔬食品及相关水源微小隐孢子虫污染情况,并研究其卵囊分离及18S rRNA鉴定的方法. 方法采用分步离心富集法从78份生蔬食品和相关水源中分离出微小隐孢子虫卵囊并提取DNA模板,利用微小隐孢子虫18S rRNA 的基因序列设计特异性引物（446bp）进行多聚酶链反应扩增,扩增产物经回收克隆后进行PCR鉴定、酶切鉴定及序列同源性分析. 结果从78 份样品中检出4份特异性条带样品.限性样品的重组克隆经PCR鉴定可重现446bp的特异性条带,其酶切产物亦与目的基因PCR产物位置相同.重组菌液的测序结果与Geabank数据库中微小隐孢子虫18S rRNA基因序列的同源性为99%. 结论建立了一种监测生蔬食品及相关水源中微小隐孢子虫污染的基因检测方法.     

The survey of Cryptosporidium infection among young children in kindergartens in Anhui province

Objective：To study the Cryptosporidium infection among young children in Anhui province, and to explore the best way to diagnose the disease. Methods： Stool specimens of 1 204 children were collected; oocysts of Cryptosporidium were identified with auramine O- modified staining, acid-fast staining, safranine T and methylene blue staining, and auramine O-modified acid-fast staining. Results： The detectable rate of Cryptosporidium in four stainings were respectively 2.46%, 1.50%, 1.98% and 3.46%, and there was a higher significant difference in the rate between auramine O-modified acid-fast staining and the others（P 〈 0.005）. The detectable rate was significantly lower in urban children（2.14%, 15/684） than in rural ones（5,19%, 27/520）. Boys and girls had similar detectable rate （1.99%, 24/1 204 vs. 1.50%, 18/1 204）. Cryptosporidium infection was usually subclinical, and its major clinical features included benign diarrhea, mild abdominal pain and nausea. Conclusion：Cryptosporidium infection was relatively common in kindergartens and a higher infection rate was found in rural children. As the majority of the Cryptosporidium infections were subclinical, diagnosis is important although difficult.     

饮用水中隐孢子虫与贾第氏鞭毛虫的检测

目的 对宝安区3个水厂的出厂水与水源水进行检测，以了解深圳市宝安区饮用水中隐孢子虫和贾第氏鞭毛虫的污染。方法参考美国EPA1623标准方法检测。结果出厂水未发现病原虫，水源水中检出病原虫。结论以该方法检测宝安区饮用水源水中存在隐孢子虫和贾第氐鞭毛虫的污染，应引起相关部门的关注。     

实时荧光PCR检测蓝氏贾第鞭毛虫和隐孢子虫方法的建立

目的 建立贾第鞭毛虫和隐孢子虫的基因检测方法.方法 根据GenBank中贾第鞭毛虫和隐孢子虫相对保守序列,设计引物及其相应的Taqman探针.通过对引物和探针浓度、Taq酶以及反应条件等优化筛选后,建立检测贾第鞭毛虫和隐孢子虫的荧光PCR方法.结果 贾第鞭毛虫和隐孢子虫的检测结果为阳性,对其它DNA样本如日本血吸虫、刚地弓形虫、溶组织内阿米巴、旋毛虫和阴道毛滴虫的检测均为阴性.本法的敏感性高,可检测到10～102copies/μl的DNA浓度.结论 建立的基因检测方法,对贾第鞭毛虫和隐孢子虫的检测具有高度的特异性和敏感性,可用于饮用水和临床样本等的快速检测.     

隐孢子虫PCR检测体系的建立及其应用

目的建立快速检测隐孢子虫卵囊的PCR检测体系,以期在人群和食品及其饮用水腹泻原虫监测中推广应用。方法以隐孢子虫小亚基SSU r RNA和卵囊壁蛋白(COWP)为靶基因,设计巢式PCR和荧光PCR的引物和探针;以分离纯化后的微小隐孢子虫卵囊基因组DNA为模板进行扩增,分别进行两种检测方法的敏感性和特异性试验;再用某水牛养殖场采集的58份牛粪样考核检测体系的应用价值。结果设计的巢式PCR引物和荧光PCR引物探针特异性都很高,巢式PCR对隐孢子虫DNA的检测最低OD阈值为2 pg隐孢子虫DNA;实时荧光PCR显示最低检测阈值为200 fg隐孢子虫DNA,灵敏性都比较高,实时荧光PCR的灵敏性比巢式PCR高1个数量级(10倍);58份检测样本中,有一份为阳性样本,PCR产物经序列分析显示为微小隐孢子虫。结论巢式PCR和实时荧光PCR检测隐孢子虫的特异性和灵敏性均高,操作简便,能为隐孢子虫感染的诊治和预防提供有效的技术手段和方法依据。奶牛感染人兽共患微小隐孢子虫基因亚型,具有人兽共患传播的可能性。     

潍坊南部山区儿童隐孢子虫病感染的流行病学调查

目的：调查隐孢子虫病在潍坊南部山区儿童中的感染和流行情况。方法：随机抽样收集1943份儿童和部分患者家的家畜粪便样品,用金胺-酚染色法及改良抗酸复染法染色,检查隐孢子虫卵囊。结果：样本儿童隐孢子虫阳性率为2.83%,低年龄儿童感染率较高。秋季为儿童的感染高发季节,感染儿童家中饲养的家畜感染率明显高于正常儿童家中的家畜。结论：潍坊南部山区儿童隐孢子虫的感染以夏秋季为高发季节,低龄儿童感染率较高的主要原因可能与不良的卫生习惯及机体免疫功能不健全有关;病畜可能为本病的主要传染源。     

潍坊地区动物稳孢子虫病的流行情况调查

目的：调查潍坊地区动物稳孢子虫病的流行情况。方法：采集犊牛和其它家畜粪便标本,用金胺-酚染色法及改良抗酸复染法检查隐孢子虫卵囊。结果：犊牛的感染率为37.3%(194/520),4周龄内小牛的感染率为55.4%（102/184）。从患者和健康者家中采集的家畜粪便卵囊阳性率分别为18.03%(11/61)和3.23%(2/62),二者之间差异有显著性。结论：潍坊地区奶牛有较高的感染率,病畜可能为本质的传染源,且夏秋季为感染的高峰期。     

肿瘤患者隐孢子虫感染情况及感染因素的分析

目的调查恶性肿瘤患者中隐孢子虫的感染情况、感染因素及流行特点，为防治隐孢子虫病在肿瘤患者中的感染提供依据。方法从山东省肿瘤医院采集恶性肿瘤病患者粪便标本共108份，采用金胺-酚＋改良抗酸染色法检查隐孢子虫卵囊。结果隐孢子虫感染阳性率为66．67％，明显高于正常人。男性患者与女性患者隐孢子虫的感染率分别为69．70％和61．90％，差异无显著性（P〉0．05）；化疗、放疗、放疗＋化疗患者隐孢子虫的感染率分别为80．00％，50．00％和69．57％，差异有显著性（P〈0．05），化疗组高于其他治疗组；不同类别的肿瘤患者隐孢子虫感染率是：呼吸系统为52．38％，消化系统为77．14％，乳腺为62．50％，其他（包括脑瘤、肾上腺瘤、甲状腺瘤等）为86．67％，差异有显著性（P〈0．05）。结论恶性肿瘤患者的隐孢子虫感染率明显高于正常人，可能与其机体的免疫功能下降有关。