三氧化二砷通过抑制IKK/NF-κB信号通路活化发挥促乳腺癌细胞凋亡效应

目的探讨IKK/NF-κB信号通路在三氧化二砷(As2O3)诱导乳腺癌细胞凋亡反应中的作用。方法以乳腺癌细胞MCF7为靶细胞,以As2O3为刺激源,锥虫蓝(台盼蓝)拒染方法检测死亡细胞比率;双荧光素酶报告基因法检测MCF7细胞中NF-κB的活化状态;Western印迹方法检测IKK/NF-κB途径各信号分子的表达水平和活化状态;RT-PCR方法检测IKK/NF-κB途径下游靶基因的表达水平。结果 As2O3可显著诱导MCF7细胞凋亡;同时NF-κB的转录活化水平及其下游凋亡反应相关靶基因的表达水平也明显下降。在此过程中,I-κB的表达水平和NF-κB关键组成亚基(p65、p50)的核浆分布状态没有改变,但IKK激酶的两个催化亚基IKKα和IKKβ的表达水平明显下调。一过性高表达IKKα和IKKβ不仅能够恢复NF-κB的活化状态,而且能够拮抗As2O3诱导的乳腺癌细胞凋亡反应。结论 As2O3可通过在蛋白激酶水平抑制IKK/NF-κB信号通路活化从而发挥促乳腺癌细胞凋亡效应。     

三氧化二砷通过抑制IKK/NF-κB信号通路活化发挥促乳腺癌细胞凋亡效应

目的探讨IKK/NF-κB信号通路在三氧化二砷（As2O3）诱导乳腺癌细胞凋亡反应中的作用。方法以乳腺癌细胞MCF7为靶细胞,以As2O3为刺激源,锥虫蓝（台盼蓝）拒染方法检测死亡细胞比率;双荧光素酶报告基因法检测MCF7细胞中NF-κB的活化状态;Western印迹方法检测IKK/NF-κB途径各信号分子的表达水平和活化状态;RT-PCR方法检测IKK/NF-κB途径下游靶基因的表达水平。结果 As2O3可显著诱导MCF7细胞凋亡;同时NF-κB的转录活化水平及其下游凋亡反应相关靶基因的表达水平也明显下降。在此过程中,I-κB的表达水平和NF-κB关键组成亚基（p65、p50）的核浆分布状态没有改变,但IKK激酶的两个催化亚基IKKα和IKKβ的表达水平明显下调。一过性高表达IKKα和IKKβ不仅能够恢复NF-κB的活化状态,而且能够拮抗As2O3诱导的乳腺癌细胞凋亡反应。结论 As2O3可通过在蛋白激酶水平抑制IKK/NF-κB信号通路活化从而发挥促乳腺癌细胞凋亡效应。     

NF-κB不同二聚体的活化与辐射诱导凋亡的关系

转录因子κ基因结合核因子(NF-κB)一直被看作是细胞的存活因子,对辐射诱导的细胞凋亡起强烈的抵抗作用。然而,近来的研究逐渐表明,NF-κB不同亚基的组合可能有着不同、甚至完全相反的作用。对这方面课题的深入研究,无疑对理解中、高剂量辐射免疫抑制效应的机制可提供有意义的理论依据,并对临床肿瘤的放疗将提供新的有价值的资料。     

核因子κB与修复细胞间的生物学关系

核因子KB(NF-KB)是一种重要的二聚体核转录因子，存在于多种细胞，参与细胞的黏附、炎性细胞的趋化、增殖等多种生理、病理过程的基因转录，具有重要的生理和病理意义。近年来的研究表明，NF-KB在修复细胞的生理或是病理性修复中可以起到枢纽性作用。     

NF-κB信号通路介导结肠癌多细胞耐药的作用研究

目的 探讨NF-kB信号通路在结肠癌HT-29细胞多细胞耐药中的作用及可能机制.方法 采用液体重叠培养系统和常规贴壁法对HT-29细胞进行三维(3D)和单层(2D)培养.采用倒置相差显微镜、扫描电镜观察3D培养的HT-29细胞形态,并采用免疫组化法检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.电泳迁移率改变测定法(EMSA)测定3D和2D培养细胞中NF-kB的活性差异.将3D培养细胞分为两组:3D组(培养液中不加干扰因素)和3D SN50组(培养液中加入50μg/ml SN50处理24h),采用EMSA测定两组NF-kB活性差异.TUNEL法检测细胞凋亡,Western blotting检测凋亡相关蛋白(Caspase-3、Bcl-2和Bax)的表达并对蛋白条带的光密度值进行半定量分析,外生半径测定法测定3D培养细胞对氟尿嘧啶的敏感性.结果 3D培养的HT-29细胞悬浮生长,细胞相互聚集增殖形成多细胞球,中心为坏死区,周围由多层异型性细胞组成,外围细胞PCNA阳性染色明显.与2D培养细胞相比,3D细胞中NF-kB活性条带颜色较深.EMSA显示3D SNS0组NF-kB活性较3D组低,TUNEL法显示3D组细胞凋亡率(8.71%±0.73%)较3D SN50组(15.75%±1.02%)明显降低(P<0.01).3D SN50组和3D组中,Caspsse-3活化片段光密度值分别为126.79±13.48和87.24±10.68(P<0.01),Pax蛋白为129.73±15.28和89.26±14.31(P<0.01),Bcl-2蛋白为97.27±12.63和131.24±14.53(P<0.01).结论 NF-kB活性升高是导致结肠癌HT-29细胞多细胞耐药的重要原因之一,其机制可能与凋亡相关蛋白的表达调控有关.     

He-Ne激光照射对HeLa细胞Fas、bcl-2、NF-κB基因表达的作用

目的探讨He-Ne激光对HeLa细胞Fas、bcl-2、NF-κB基因表达的作用。方法将HeLa细胞接种于小鼠背部脾区皮下,24 h后采用24 mW He-Ne激光器照射小鼠脾区（瘤区）,然后采用免疫组化方法观测Fas、bcl-2、NF-κB的表达。结果激光照射组瘤块重量、bcl-2、NF-κB表达明显低于非激光照射组,而Fas表达明显高于非激光照射组,组间比较,差异有显著意义（P〈0．05）。结论He-Ne激光具有促进HeLa细胞调亡信号形成,从而发挥抗肿瘤免疫效应。     

MS-275与姜黄素联用阻断细胞生存信号通路诱导前列腺癌细胞凋亡

目的探讨小剂量姜黄素和组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275联用诱导前列腺癌细胞系DU145凋亡的作用机制。方法 DU145细胞分为对照组,MS-275组(分别用1、2、4、8μmol/L的MS-275单独处理细胞24、48h)、姜黄素组(分别用10、20、40、80μmol/L的姜黄素处理细胞24、48h)、MS-275+姜黄素组(1μmol/LMS-275+20μmol/L姜黄素处理细胞24、48h)。采用MTT比色法测定药物单用或联用对细胞的杀伤效应,流式细胞术分析细胞周期的改变,Westernblotting检测细胞内蛋白表达水平的变化。结果 MS-275和姜黄素单用都能够呈剂量和时间依赖性地杀伤DU145细胞;小剂量MS-275(1μmol/L)+姜黄素(20μmol/L)联用时能够协同杀伤细胞,两种药物联合处理细胞48h后,细胞的生存率仅为45.9%;细胞周期检测表明MS-275和姜黄素联用导致细胞出现明显的亚G1峰,提示DU145细胞被诱导凋亡;Western blotting结果证实联合用药48h后,细胞内生存信号蛋白激酶Akt和ERK的磷酸化水平下降,同时凋亡标志蛋白PARP发生剪切。结论 MS-275和姜黄素联用可以协同杀伤DU145细胞,并通过抑制细胞内Akt和ERK生存信号通路的活性来诱导细胞凋亡。     

NF-κB抑制与X射线诱导的人非霍奇金淋巴瘤细胞凋亡的研究

目的 探讨NF-κB p65对X射线诱导人非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma, NHL)细胞凋亡的作用及其调控机制。方法 以NF-κB p65抑制剂quinazoline(QNZ)处理人NHL细胞。将NHL细胞株Namalwa、Ramos和 Raji细胞分为空白对照组、单纯照射组(IR)和X射线+QNZ实验组(IR+QNZ),采用Annexin-Ⅴ染色方法检测肿瘤细胞凋亡水平的变化,采用Western blot方法检测各细胞株中Survivin及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Cleaved Caspase-3的表达水平;应用实时定量PCR方法检测Survivin mRNA水平。结果 应用流式细胞仪检测凋亡细胞百分比,结果显示,QNZ处理后进行照射与单纯照射组相比凋亡细胞明显增加,且具有药物浓度依赖性(t=2.93~12.52, P<0.05),Western blot法检测结果显示,电离辐射可显著增加人NHL细胞中Survivin蛋白的表达。而应用1、10和50 nmol/L QNZ处理人NHL细胞24 h后进行照射,可显著下调电离辐射所诱导的NHL细胞中的Survivin蛋白表达。随药物浓度增加其作用更为明显(t=3.29~16.72,P<0.05)。同时凋亡相关蛋白Bcl-2表达减低,而Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达增加,Bcl-2/Bax比值明显降低,与单纯照射组相比,差异有统计学意义(t=6.20~9.91, P<0.05)。预处理QNZ后射线诱导的3种NHL 细胞Survivin mRNA均不同程度下降。结论 抑制NF-κB能够增加X射线诱导的NHL细胞凋亡,其机制可能与下调Survivin蛋白表达水平及对凋亡相关蛋白Bcl-2家族的调节有关。     

血管生成素通过ERK信号通路促进HeLa细胞的增殖

目的通过细胞外信号调节激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)通路及NF-кB信号途径探讨血管生成素(angiogenin,Ang)对HeLa细胞的促增殖及抗凋亡作用机制。方法用不同浓度的重组人Ang刺激HeLa细胞,MTT法分析Ang对HeLa细胞的促增殖作用,蛋白质印迹实验检测ERK信号通路相关分子的表达情况。U0126抑制ERK信号通路,检测Ang诱导的ERK1/2的磷酸化及c-myc的表达情况,同时检测Ang对细胞增殖的影响。敲低Ang的表达,检测细胞的凋亡情况。双荧光素酶报告基因检测Ang对NF-κB报告基因的激活。蛋白水平检测Ang刺激的HeLa细胞后,NF-κB通路相关分子的表达。结果 Ang能促进HeLa细胞增殖,ERK1/2的磷酸化水平及c-myc的表达随重组人Ang浓度的升高而增加。U0126能抑制Ang诱导的ERK1/2的磷酸化、c-myc的上调及细胞的增殖。Ang的低表达促进HeLa细胞的凋亡,但不影响NF-κB报告基因的激活及NF-κB通路上相关分子的表达。结论 Ang能够促进HeLa细胞增殖,并通过活化ERK通路促进细胞的增殖,但其抑凋亡作用与NF-κB通路无关。     

抑制NF-κB激活的策略

NF-κB是一个广泛存在于哺乳动物细胞中的转录因子。它可以参与机体的炎症反应、免疫反应、细胞分化与凋亡及其他应激反应。NF-κB启动基因的表达涉及到IKK的激活、IκB磷酸化和泛素化、IκB裂解、NF-κB向核内的迁移、NF-κB与DNA的结合等过程。NF-κB的过度激活会引起一系列的疾病，如哮喘、类风湿性关节炎、肠炎等，利用药物或通过转基因方法来抑制以NF-κB为核心的信号转导途径可能会成为防治某些疾病的途径。     

低氧对紫杉醇抑制乳腺癌细胞MCF-7生长的影响

肿瘤所处微环境乏氧能使肿瘤对放化疗的抗拒性增加,从而降低其治疗疗效.因此,深入研究低氧在乳腺癌化疗诱导凋亡中的作用和机制,从新的视角阐明乳腺癌化疗耐药的可能机制,可为乳腺癌临床化疗增敏提供参考依据.     

糖皮质激素抑制辐射诱导P388细胞NF-κB活化

目的 研究糖皮质激素对辐射诱导P388白血病细胞凋亡与NF－κB活化的影响。方法 采用TdT介导的dUTP缺口末端标记技术（TUNEL）检测细胞凋亡；采用电泳迁移率变动分析（EMSA）检测P388细胞NF－κB活化水平。结果 2，4，6和8Gy辐射诱导P388细胞凋亡，同时使NF－κB活化。地塞米松（DXM）增强由2，4，6和8Gy辐射诱导的P388细胞凋亡，抑制由2，4，6和8Gy辐射诱导的P388细胞NF－κB活化，凋亡增加率分别为60％，100％，129％和67％，NF－κB活化抑制率分别为25％，45％，52％和40％。结论 辐射诱导P388白血病细胞凋亡的同时激活NF－κB；糖皮质激素可通过抑制NF－κB活化，增强其诱导白血病细胞凋亡的作用。     

抗凋亡蛋白BFL1/hA1研究进展

在细胞凋亡的调控过程中，Bcl-2家族蛋白发挥了关键作用。BFL1／hA1是Bcl-2家族中分子结构、作用途径和转录调控研究得比较深入的一个分子。BFL1／hA1通过与Bcl-2家族促凋亡成员Bid的功能形式tBid的BH3结构域紧密结合，阻止了tBid与促凋亡蛋白Bak和Bax相互作用，从而阻止了细胞色素C向胞质中释放，抑制细胞凋亡的发生。佛波酯（phobol ester）和炎症细胞因子如肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）等可以有效地诱导BFL1／hA1的表达。包括NF-κB在内的多种转录因子通过蛋白质和蛋白质及蛋白质和DNA相互作用形成一个大的转录调控复合物——增强体结合到BFL1／hA1基因的5’调控区，促进其转录水平的上调。     

青蒿琥酯对乳腺癌细胞的生长抑制作用及其机制

目的探讨青蒿琥酯对乳腺癌细胞MDA-MB-231的生长抑制作用及其可能机制。方法利用CCK-8法检测青蒿琥酯对MDA-MB-231细胞的生长抑制作用,并计算IC₅₀值。根据IC₅₀值选择后续实验的青蒿琥酯浓度(0、25、50、100 μg/ml),0 μg/ml青蒿琥酯组作为对照组。采用不同浓度(0、25、50、100 μg/ml)的青蒿琥酯干预MDA-MB-231细胞24 h,利用流式细胞术检测细胞凋亡情况及线粒体膜电位;0、25 μg/ml青蒿琥酯干预MDA-MB-231细胞24 h,利用细胞划痕试验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果青蒿琥酯对MDA-MB-231细胞具有增殖抑制作用,且呈浓度依赖性,对MDA-MB-231细胞的IC₅₀为54.24μg/ml。不同浓度的青蒿琥酯干预MDA-MB-231细胞24 h,MDA-MB-231细胞凋亡率显著增高(P<0.01);与对照组相比,青蒿琥酯组细胞线粒体膜电位显著降低(P<0.01),且呈浓度依赖性。细胞划痕实验结果显示,青蒿琥...     

NF-κB在放射性损伤中的表达改变及作用机制的研究进展

随着肿瘤发病率的升高,需要接受放射治疗的人数也越来越多;而且由于放射治疗技术的不断发展,患者的长期生存期也在不断延长。因此,在长期生存的患者中防止放射性损伤的发生就尤为重要。NF-κB在各种基因转录的过程中承担着重要作用,并与放射性损伤的发生有着密切关系。笔者就NF-κB的结构、激活、功能作一介绍,并对放射性脑损伤及放射性肺损伤中NF-κB的表达变化、调节机制,以及NF-κB抑制剂的研究进展作一综述。     

转录因子NF-κB在肝纤维化中的作用

核因子-κB(Nuclear factor-kappa B,NF-κB)是近年来研究极为广泛的转录调控因子,作为一种转录刺激因子,最初是在1986年由Sen和Baltimore首先报道的.NF-κB可因一些细胞因子、氧化剂、蛋白激酶、脂多糖等的刺激而激活,而活化的NF-κB又可诱导细胞因子、趋化因子、免疫因子受体和转录因子等多种物质的表达,在炎症反应、肿瘤及血液性疾病的病理生理过程中发挥重要作用[1].目前对NF-κB在肝纤维化中的作用报道较少,为此,笔者就转录因子NF-κB在肝纤维化形成过程中的相关作用作一综述.     

姜黄素对小鼠肾脏再灌注损伤的保护作用及其机制研究

目的 探讨姜黄素对小鼠肾脏缺血再灌注(IR)损伤的保护作用及其可能机制.方法 选择健康雄性C57BL/6小鼠20只,随机均分为4组.假手术(SO)组小鼠仅接受腹中线开腹、游离双侧肾蒂及关腹操作;对照组小鼠制成肾脏IR模型,并于肾脏缺血同时经尾静脉注射生理盐水;姜黄素低剂量(CM-L)及高剂量(CM-H)组小鼠建立肾脏IR模型,并经尾静脉分别注射5mg/kg及20mg/kg姜黄素.再灌注6h后检测各组血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平,观察肾脏组织形态学变化;Western blotting检测肾脏组织内Toll样受体4(TLR-4)、高迁移率族蛋白BI(HMGBI)、透明质烷(HA)蛋白的表达,实时荧光定量RT-PCR检测透明质烷合成酶(HAS)1、HAS2、HAS3以及白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA的表达;免疫组化检测肾组织内巨噬细胞浸润情况;同时采用ELISA法检测血清IL-6、TNF-α水平.结果 与对照组相比,CM-L及CM-H组小鼠再灌注6h血清Scr、BUN水平明显降低(Scr:对照组235.4±28.7μmol/L,CM-L组167.8±17.2μmol/L,CM-H组125.8±13.3μmol/L; BUN:对照组21.6±2.7mmol/L,CM-L组18.1±2.4mmol/L,CM-H组12.5±1.7mmol/L; P＜0.05或P＜0.01),肾小管上皮细胞损伤情况明显改善(Jablonski评分:对照组2.15±0.28分,CM-L组1.72±0.21分,CM-H组1.42±0.15分,P＜0.01);肾脏组织内TLR-4、HMGB1的mRNA及蛋白水平,HA、HAS1、HAS2、HAS3以及IL-6、TNF-α mRNA水平均明显降低(P＜0.05或P＜0.01);巨噬细胞浸润减轻(对照组32.4±4.2个/高倍视野,CM-L组24.8±3.6个/高倍视野,CM-H组18.9±3.1个/高倍视野,P＜0.01);血清IL-6、TNF-α含量亦显著降低(IL-6:对照组1411.2±150.6pg/ml,CM-L组918.7±113.4pg/ml,CM-H组809.6±108.3pg/ml;TNF-α:对照组154.7±21.1pg/ml,CM-L组135.8±15.2pg/ml,CM-H组125.6±14.6pg/ml; P＜0.05或P＜0.01).结论 姜黄素对小鼠肾脏IR损伤具有明显的保护作用,其机制可能与抑制肾脏再灌注后TLR-4信号活化有关.     

晚期糖基化终末产物对表皮角质形成细胞功能的影响及其机制

目的研究晚期糖基化终末产物（AGEs）对表皮角质形成细胞（KCs）功能的影响及其生物学机制。方法分离培养正常SD大鼠KCs，加入不同浓度AGEs干预48h，选择细胞反应敏感，差异显著的100μg／ml AGEs干预组进行以下实验：用二甲基噻唑二苯基四唑溴盐（MTT）法测定细胞增殖速度；检测KCs周期和凋亡，观察细胞核中NF—κB的活化状态；检测KCs迁移能力。结果100μg／ml AGEs可以明显抑制KCs的增殖和分裂；诱导细胞进入早期凋亡状态；促进KCs迁移。抑制NF—κB的活性后，部分恢复细胞的增殖能力；逆转细胞的早期凋亡；使细胞的迁移能力趋于正常。结论AGEs可以通过NF—κB途径影响KCs迁移、增殖和凋亡。     

放射抑制再狭窄的细胞及分子机制

放射抑制再狭窄的机制是多方面的。它既可诱导血管平滑肌细胞有丝分裂周期阻滞，抑制平滑细胞分裂及增殖，又可直接诱导平滑肌细胞凋亡，还可抑制单核／巨噬细胞及各种生长因子，阻止再狭窄过程听起始因素。血管内放射导致细胞死亡的主要形式凋亡，电离辐射预防再狭窄的主要机制是平滑肌细脑的增殖抑制。