自体骨髓单个核细胞心肌移植对猪慢性缺血心肌心功能的影响

目的：探讨自体骨髓单个核细胞心肌移植对猪慢性缺血心肌心功能的改善作用。方法：实验于2005-01／2005—10在香港大学动物实验中心进行。①取健康巴马小型猪17只，开胸后在左回旋支起始部放置Ameroid环。②将存活的16只巴马小型猪随机分成2组，自体骨髓单个核细胞移植组9只，对照组7只。术后4周在C型臂X射线机的引导下心肌定位注射导管进入左心室，移植组猪于心肌缺血部位1注射自体骨髓单个核细胞，将细胞总数为1．5&;#215;10^8的细胞悬液1．5mL进行15个点的注射，每个点注射0．10mL。对照组按照同样的方法注射相同数量的生理盐水。③移植后4周进行心脏超声检查，检测心脏功能。结果：17只猪中1只因肺部感染于术后21d死亡，其余16只均进入结果分析。①猪第1次手术后1月左右冠状动脉造影显示左冠状动脉回旋支均闭塞，左前降支通畅。②心脏M型超声检查显示移植组左室侧后壁运动较对照组明显增强，二维超声心动图检查显示移植组较对照组室壁明显增厚、运动度增强。移植组较对照组的心功能有明显改善。结论：自体骨髓单个核细胞心肌移植可改善慢性缺血心肌的心功能，可用于缺血性心脏病的治疗。     

心肌及冠状动脉内移植骨髓单个核细胞对猪缺血心肌侧支血管的生成

背景:目前有研究表明,心肌内直接注射骨髓单个核细胞可以使心肌梗死瘢痕区血管新生,改善缺血心肌血供。目的:观察心肌内及冠状动脉内移植自体骨髓单个核细胞对猪急性心肌梗死后缺血心肌侧支血管生成的作用。方法:22只小型猪制备急性心肌梗死模型后分为4组:心肌内移植组造模后即刻在缺血心肌内注射自体骨髓单个核细胞悬液;心肌内对照组同样方法即刻心肌内注射Hank’s平衡盐溶液;冠状动脉内移植组在造模后1周,左冠状动脉内注射自体骨髓单个核细胞悬液;冠状动脉对照组在造模后1周,同样方法左冠状动脉内注射Hank’s平衡盐溶液。结果与结论:心肌内及冠状动脉内移植骨髓单个核细胞后1周,血清碱性成纤维细胞生长因子及血管内皮细胞生长因子水平差异无显著性意义,但明显高于各自对照组(P<0.01);移植后4周,心肌内移植组与冠状动脉内移植组小血管密度差异无显著性意义,但明显高于各自对照组(P<0.01);左室舒张末压差异无显著性意义,但明显低于各组对照组(P<0.01)。提示心肌内及冠状动脉内移植骨髓单个核细胞均有助于促进猪缺血心肌血管新生及侧支循环形成。     

经冠状动脉移植自体骨髓单个核细胞修复犬梗死心肌

背景:细胞移植治疗心肌梗死为重建受损心肌带来希望,但移植后的细胞分化以及细胞移植能否长期持久地改善心脏功能等问题均不明确.目的:观察骨髓单个核细胞经冠状动脉移植入犬梗死心肌后,在心肌组织的分布、分化情况以及对心功能的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-07/2008-03在泰达国际心血管病医院完成.材料:成年杂种犬16只,随机分为细胞移植组10只、模型对照组6只.方法:细胞移植组于髂前上嵴或髂后上棘穿刺抽取骨髓,经Ficoll密度梯度离心法分离获取骨髓单个核细胞,行CM-Dil标记.两组犬均结扎冠状动脉前降支建立急性心肌梗死模型,于心肌梗死后2 h,细胞移植组向心肌梗死区注射骨髓单个核细胞悬液1 mL(3×107～1×108个细胞),模型对照组注射等量生理盐水.主要观察指标:血流动力学指标及超声心动图指标的变化,免疫荧光染色观察骨髓单个核细胞在心脏的迁移、分布及分化.结果:与模型对照组比较,细胞移植后6周细胞移植组血流动力学指标左室舒张末压显著降低(P<0.01),心排出量明显升高(P<0.05);超声心动图指标左室收缩末容积、左室舒张末容积均得到显著改善(P<0.01),射血分数、每搏输出量亦明显改善(P<0.05).自体骨髓单个核细胞经冠状动脉移植后,可分布于心肌梗死区及梗死周边区,并表达肌球蛋白重链、连接蛋白43.结论:自体骨鼬单个核细胞经冠状动脉移植后可分化为心肌样细胞,改善急性心肌梗死后的心功能.     

兔骨髓单个核细胞自体移植对缺血心肌修复重建及心功能的改善

目的:观察兔骨髓单个核细胞自体移植至缺血心肌后的修复重建能力,以及心功能的改善状况。方法:实验于2005-07/2006-04在安徽省干细胞研究和治疗中心完成。①选取清洁级健康雄性新西兰白兔20只,随机数字表法分为心肌梗死模型组、骨髓单个核细胞组,10只/组。②两组兔均于左心耳下缘结扎前降支冠状动脉左前降支建立心肌梗死模型,心电图出现S-T段弓背样抬高为结扎成功。③2周后于股骨处行骨髓穿刺取5mL骨髓,分离纯化骨髓单个核细胞。骨髓单个核细胞组将Dil标记的含2.5×107细胞数目的细胞悬液400μL注射至心肌梗死周边区域,心肌梗死模型组仅注射等量L-DMEM培养基。③两组分别于造模前、细胞移植前及细胞移植后2,4周行多普勒心脏超声心动图检查,计算左室射血分数、左室短轴短缩率,进行心功能评价。④细胞移植8周后处死全部动物,制备组织冰冻切片,病理学检查移植细胞在梗死区的生长状况,镜下见有Dil标记阳性的细胞认为是存活的移植细胞。普通光学显微镜200倍视野下计数毛细血管数量。结果:骨髓单个核细胞组10只均进入结果分析;心肌梗死模型组因造模死亡4只,6只兔完成整个实验过程。①不同时相点心功能指标超声心动图检查结果:两组造模前、细胞移植前、细胞移植后2周左室射血分数、左室短轴短缩率均基本相似(P>0.05);移植后4周,骨髓单个核细胞组左室射血分数、左室短轴短缩率均明显高于心肌梗死模型组犤(69.1±5.3)%,(62.4±7.8)%;(34.3±8.4)%,(27.2±5.3)%;P均<0.05犦。②骨髓单个核细胞在梗死心肌中的存活情况:荧光显微镜下,骨髓单个核细胞组梗死灶边缘有Dil标记的细胞存活,免疫组化结果显示Dil阳性细胞表达心肌细胞特异性标志α-sarcomericactin。两组均未见炎性细胞浸润,但骨髓单个核细胞组新生毛细血管密度明显高于心肌梗死模型组犤(38.5±2.0)mm-2,(21.4±3.9)mm-2,P<0.05犦。结论:兔骨髓单个核细胞自体移植8周后存活于梗死心肌中,并表达心肌细胞特异性标志,移植后可明显改善左室收缩功能,增加毛细血管密度,但短期内未减轻心室重构的进程。     

超声造影评价自体骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死的实验研究

目的超声造影评价兔骨髓间充质干细胞(MSCs)移植于缺血心肌后缺血心肌细胞的修复重建能力,比较3种体外不同处理方式的MSCs自体移植治疗梗死后心脏的心功能改善效果。方法新西兰白兔40只结扎冠状动脉左前降支建立心肌梗死模型后随机分为4组,2周后分别将自体骨髓间充质干细胞(MSCs组10只)、经5-aza诱导24 h的MSCs(诱导组10只)、新鲜分离的骨髓单个核细胞(BMMNs组10只),1,1-二十八烷基-3,3,3,3-四甲基吲哚羰花青高氯酸盐(1,1-dioctadecyl-3,3,3,3-tetramethyl indocarbocyanine perchlorate,Dil)标记后用微量注射器注射于兔缺血心肌内,并以无血清培养基注射动物为对照组(正常对照组10只)。分别在造模前、后、细胞移植后2周、4周超声心动图测量左室收缩、舒张末内径(LVESD、LVEDD),计算左室射血分数(LVEF)及短轴缩短率(FS),同时用心肌声学造影(MCE)评价缺血区的血流灌注。细胞移植后8周处死实验动物,病理学检测梗死区毛细血管生长状况。结果细胞移植术后8周,各细胞移植组毛细血管密度均较对照组增多,MCE见细胞移植后显著改善梗死区血流灌注。M型超声心动图检查,细胞移植后2周、4周均见MSCs组和诱导组LVEF、FS值比对照组升高(P0.05),而BMMNCs组仅在移植后4周明显改善(P0.05);LVESD、LVEDD细胞移植组与对照组比较无差异(P0.05)。结论体外培养纯化后的MSCs、5-aza诱导24 h的MSCs以及BMMNs自体移植可改善左室收缩功能,增加毛细血管密度,改善局部血流灌注。     

经冠状动脉移植自体骨髓单个核细胞治疗犬急性心肌梗死

背景:近年的研究表明,细胞移植可以修复受损的心肌组织,促进缺血区域新生血管的形成,改善缺血心肌的灌注和收缩功能.目的:观察白体骨髓单个核细胞经冠状动脉移植至犬心肌梗死模型后在体内的分化及对心功能的影响.设计、时间及地点:随机列照动物实验,于2006-09/2008-04在天津泰达国际心血管病医院动物实验室完成.材料:成年杂种犬16只,体质量15～25 kg,通过结扎冠状动脉前降支中段建立急性心肌梗死模型.方法:16只杂种犬投币法随机分为移植组(n=10)和对照组(n=6),移植组于心肌梗死后2 h经冠状动脉内移植CM-Dil标记的骨髓单个核细胞:对照组注射等量生理盐水.冠状动脉结扎后2 h及6周时行超声心动图检查,移植后6周处死所有动物于梗死区及其邻近部位取材.主要观察指标:①心肌梗死后6局两组心功能指标比较.②荧光显微镜下观察骨髓单个核细胞在心肌组织中的分化情况.③透射电镜观察移植组梗死区心肌组织的变化.结果:纳入杂种犬16只,全部存活.左前降支结扎2 h后可见结扎点远端心肌组织变紫,室壁活动减弱,心电图出现ST段弓背样抬高.①对照组心肌梗死后6周和心肌梗死后2 h相比各项指标均无显著改善(P0.05).移植组术后6周时左心室射血分数、左心室收缩期末内径及左心室短轴缩短率均较心肌梗死后2 h有明显改善(P<0.01),其中左心室射血分数与对照组相比亦有明显改善(P<0.05),移植组射血分数较对照组提高7%左右.②荧光显微镜下可见移植组自体骨髓单个核细胞经冠状动脉移植后可分布于梗死区及梗死周边区.并表达肌球蛋白重链:正常心肌组织及对照组心肌组织内未见移植细胞.③透射电镜下可见移植组分化完全的血管内皮细胞及类心肌样细胞.结论:骨髓单个核细胞可在梗死区梗死周边区存活并逐渐分化成心肌样细胞,促进缺血心肌血管新生,改善心功能.     

骨髓单个核细胞移植后心肌梗死区的血管生成及细胞因子分泌

背景：干细胞移植为治疗心肌梗死带来新的希望,但研究结果不一致,存在争议。细胞移植能否长期持久地改善心脏功能、改善缺血心功能的机制这些问题均不明确。目的：观察经冠状动脉自体骨髓单个核细胞移植对急性心肌梗死犬心功能、血管生成和细胞因子分泌的影响。方法：杂种犬分为骨髓单个核细胞组（n=10）和生理盐水组（n=6）,前上嵴或髂后上棘穿刺分离得到骨髓单个核细胞,结扎冠状动脉前降支建立急性心肌梗死模型,于心肌梗死后2h分别经冠状动脉内移植骨髓单个核细胞和生理盐水,心肌梗死后2h及6周时分别测定超声心动图指标,骨髓单个核细胞移植后6周vWF免疫组化染色检测心肌组织的毛细血管密度,RT-PCR检测血管内皮生长因子（血管内皮生长因子188、血管内皮生长因子164）、碱性成纤维细胞生长因子、基质金属蛋白酶9mRNA的表达。结果与结论：经冠状动脉自体骨髓单个核细胞移植后6周,超声心动图显示,骨髓单个核细胞组射血分数和每搏输出量比生理盐水组显著升高;梗死边缘区新生血管数量明显高于生理盐水组。骨髓单个核细胞组梗死区血管内皮生长因子188、血管内皮生长因子164和碱性成纤维细胞生长因子mRNA表达水平显著高于生理盐水组。骨髓单个核细胞组梗死区基质金属蛋白酶9mRNA表达水平显著低于生理盐水组。结果说明自体骨髓单个核细胞经冠状动脉内注射移植,改善急性心肌梗死后心功能,促进梗死边缘区血管生成,提高促血管生长因子血管内皮生长因子188、血管内皮生长因子164和碱性成纤维细胞生长因子的mRNA表达水平,减少基质金属蛋白酶9mRNA表达水平。     

兔骨髓单个核细胞自体移植对缺血心肌修复重建及心功能的改善

目的：观察兔骨髓单个核细胞自体移植至缺血心肌后的修复重建能力，以及心功能的改善状况。 方法：实验于2005—07／2006—04在安徽省干细胞研究和治疗中心完成。①选取清洁级健康雄性新西兰白兔20只，随机数字表法分为心肌梗死模型组、骨髓单个核细胞组，10只／组。②两组兔均于左心耳下缘结扎前降支冠状动脉左前降支建立心肌梗死模型，心电图出现S—T段弓背样抬高为结扎成功。③2周后于股骨处行骨髓穿刺取5mL骨髓，分离纯化骨髓单个核细胞。骨髓单个核细胞组将Dil标记的含2．5&;#215;10^7细胞数目的细胞悬液400αL注射至心肌梗死周边区域，心肌梗死模型组仅注射等量L—DMEM培养基。（函两组分别于造模前、细胞移植前及细胞移植后2，4周行多普勒心脏超声心动图检查，计算左室射血分数、左室短轴短缩率，进行心功能评价。④细胞移植8周后处死全部动物，制备组织冰冻切片，病理学检查移植细胞在梗死区的生长状况，镜下见有Dil标记阳性的细胞认为是存活的移植细胞。普通光学显微镜200倍视野下计数毛细血管数量。 结果：骨髓单个核细胞组10只均进入结果分析；心肌梗死模型组因造模死亡4只，6只兔完成整个实验过程。①不同时相点心功能指标超声心动图检查结果：两组造模前、细胞移植前、细胞移植后2周左室射血分数、左室短轴短缩率均基本相似（P〉0.05）；移植后4周，骨髓单个核细胞组左室射血分数、左室短轴短缩率均明显高于心肌梗死模型组[（69．1&;#177;5.3）％，（62.4&;#177;7.8）％；（34．3&;#177;8.4）％，（27．2&;#177;5.3）％；P均〈0.05]。②骨髓单个核细胞在梗死心肌中的存活情况：荧光显微镜下，骨髓单个核细胞组梗死灶边缘有Dil标记的细胞存活，免疫组化结果显示Dil阳性细胞表达心肌细胞特异性标志α—sarcomericactin。两组均未见炎性细胞浸润，但骨髓单个核细胞组新生毛细血管密度明显高于心肌梗死模型组[（38．5&;#177;2．0）mm^-2．（21．4&;#177;3．9）mm^-2，P〈0．05]。 结论：兔骨髓单个核细胞自体移植8周后存活于梗死心肌中，并表达心肌细胞特异性标志，移植后可明显改善左室收缩功能，增加毛细血管密度，但短期内未减轻心室重构的进程。     

自体骨髓单个核细胞移植对急性心肌梗死后雄兔心脏功能的影响

目的:评估未经诱导的自体骨髓单个核细胞移植于兔的心肌梗死区及周边区后对心脏功能的影响,并观察移植后细胞的存活情况。方法:采用结扎日本大耳雄兔左冠状动脉前降支的方法建立急性心肌梗死模型。将40只存活兔随机分为2组:移植组、对照组,每组各20只,其中移植组于术后第7天在梗死区及周边区注射0.7mL含3.41×107个自体骨髓单个核细胞的细胞悬液移植,而对照组仅在相同的部位注射等量的生理盐水。心梗前后以及细胞移植后6周,利用彩色多普勒超声心动仪评价心脏功能的改变,然后收集动物心脏,进行组织学及免疫组织化学检查。结果:心肌梗死前后,移植组与对照组的心脏功能相比较,差异无显著性意义(P>0.05)。细胞移植后,移植组的心脏射血分数、左室短轴缩短率、左室壁运动幅度、左室壁收缩末期厚度及舒张末期厚度、左室壁增厚率明显高于对照组(t=2.98～6.50,P<0.01),心室率犤(249.08±28.52)次/min〗明显低于对照组犤(269.75±5.21)次/min犦(t=2.24,P<0.05)。移植组梗死心肌及周边区内可以观察到移植细胞的存活。结论:自体骨髓单个核细胞移植可以改善发生了急性梗死的心脏功能并在心肌的梗死区及周边区存活。     

不同种类自体骨髓干细胞移植对梗死心肌左室重构的效果比较

背景:骨髓干细胞移植可改善心功能、预防心室重构,目前用于移植的成体骨髓干细胞有骨髓单个核细胞、骨髓间充质干细胞和内皮祖细胞等,不同种类的骨髓干细胞移植后的效果及具体机制尚不清楚。目的:比较自体骨髓单个核细胞、骨髓间充质干细胞冠状动脉移植对急性心肌梗死后心室重构的影响。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2005-03/2006-12在河北省人民医院临床研究中心、河北医科大学电镜室及大连宝生物进行。(basic fibroblast growth factor,bFGF)材料:36只冀中白猪随机分为4组:假手术组6只、模型组10只、骨髓单个核细胞组10只、骨髓间充质干细胞组10只。方法:采用梯度密度离心法分离培养猪自体骨髓单个核细胞,以贴壁法分离培养猪自体骨髓间充质干细胞,移植前均行胶体金标记。除假手术组外,其余3组均以球囊导管压迫冠状动脉前降支的方法建立猪急性心肌梗死模型。造模后90min,经导管由冠状动脉腔内骨髓单个核细胞组移植自体骨髓单个核细胞(6.0±1.3)×107个,骨髓间充质干细胞组移植自体骨髓间充质干细胞(4.5±2.1)×107个,培养28d。主要观察指标:光镜及电镜观察心肌组织病理学改变;超声检查心功能变化;免疫组织化学检测心肌血管数、心肌细胞凋亡、心肌组织核因子κB及肌钙蛋白I阳性表达情况,及其与心功能的关系;RT-PCR法检测心肌血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)mRNA的表达,及其与心功能的关系。结果:①骨髓间充质干细胞组在梗死区、梗死边缘区均可见大量血管增生,冠脉血管周围可见异常细胞团生长,骨髓单个核细胞组有较多的毛细血管"芽生"现象。②细胞移植前各组心功能指标基本相似(F=1.550,P>0.05)。移植后28d与模型组比较,其余3组左心室射血分数均明显降低(F=5.30,P<0.05)。③与模型组比较,骨髓单个核细胞组梗死区及梗死边缘区的血管数明显增加(F=29.56～34.87,P<0.01),骨髓间充质干细胞组无变化;移植细胞两组的梗死区、梗死边缘区心肌细胞凋亡率均显著降低(F=14.31～35.34,P<0.01),肌钙蛋白I阳性率均明显升高(F=19.05,P<0.01);梗死边缘区核因子кB阳性率均明显降低(F=19.05,P<0.01)。④骨髓单个核细胞组梗死边缘区VEGF基因的表达显著高于模型组、骨髓间充质干细胞组(F=49.41,P<0.01)。骨髓间充质干细胞组梗死边缘区bFGF基因的表达显著高于模型组、骨髓单个核细胞组(F=4.71,P<0.01)。⑤左室射血分数与心肌细胞凋亡率、心肌核因子κB呈负相关(r=-0.4411,P<0.05;r=-0.5796,P<0.01);与血管数、VEGF及bFGF表达呈正相关(r=0.775,P<0.01;r=0.5651,P<0.05;r=0.5735,P<0.05)。结论:经冠脉自体骨髓单个核细胞或骨髓间充质干细胞移植均可减轻心肌梗死后左心室重构,心功能的改善与干细胞移植后增加心肌血管数量及心肌VEGF,bFGF表达、减少心肌细胞凋亡及核因子κB水平有关。骨髓单个核细胞移植促心肌血管增生及VEGF的表达均优于骨髓间充质干细胞,而后者促bFGF基因表达的作用优于前者。     

Utility of cardiac troponin measurement after cardiac surgery

Postoperative cardiac failure due to myocardial necrosis remains a major complication in cardiac surgical procedures and its diagnosis is still difficult. In fact, cardiac enzymes, electrocardiogram and echographic signs are often misleading. The prognostic valve of troponin I after coronary artery bypass or conventional value surgery has been evaluated in 500 adult patients. Postoperative troponin I concentrations after cardiac surgery represent an independent variable associated with mortality (in-hospital death) and morbidity (low cardiac output and acute renal failure).     

心脏介入术中并发急性心脏压塞的抢救与护理

目的研究心脏介入术(CIO)中并发急性心脏压塞(ACT)的抢救与护理。方法将64例患者实施CIO时并发ACT,以数字法随机分成观察组及对照组各32例,2组均实施ACT抢救措施,对照组在此基础上另实施常规护理,而观察组则实施综合护理。对比2组ACT发现率及抢救成功率,2组护理满意情况以及HDL评分情况。结果观察组ACT发现率及抢救成功率均显著高于对照组,差异均有统计学意义(P0.05);观察组的护理满意情况显著优于对照组,差异有统计学意义(P0.05);观察组护理后的焦虑、抑郁评分及总分均显著低于护理前及对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论对CIO并发ACT患者,积极予以抢救措施及综合护理,可明显提升抢救成功率及护理满意率,降低HDL评分,减少医患纠纷。     

注射用复合辅酶预处理对心脏病人非心脏手术的心肌钙蛋白与心肌酶学的影响

目的 观察注射用复合辅酶（贝科能）对心脏病人非心脏手术围手术期的心肌酶谱和心肌钙蛋白的变化,从而研究贝科能的心脏保护作用。方法30例心脏病人非心脏手术即全麻下行单纯胆囊切除术的病人,美国麻醉医师协会（ASA）分级Ⅱ-Ⅲ级,随机双盲分成A、B两组,分别静滴贝科能和生理盐水,然后常规诱导。监测心电图（ECG）,心率（HR）,血压（BP）。分别于入室后（T0）,手术开始1h（T1）,术后8h（T2）,术后24h（T3）采集血液2．5ml,定量测定心肌钙蛋白T（cTnI）,及肌酸激酶（CK）和肌酸激酶同工酶（CK—MB）。结果 A组病人cTnI、CK及CK—MB在术后8h及术后24h结果与入室后结果对比均增高（P〈0．05）有显著差异。B组病人cTnI、CK及CK—MB在术后1h,术后8h及术后4h与入室后结果对比均增高（P〈0．05）,有显著差异,其中cTnI在术后8h及24h的结果与入室后对比有非常显著差异（P〈0．01）。与A组病人对比,术后1 h、8 h及24 h的cTnI与A组比较有非常显著差异（P〈0．01）,CK及CK—MB与A组比较有显著差异（P〈0．05）。结论 贝科能能减轻心肌损害,降低心脏病人术后心肌缺血以致心血管意外的发生率,在围术期应用有一定的临床意义。     

心脏直视手术中心脏复苏困难的处理

目的：为提高心脏直视手术中心脏复苏率。方法：总结２０例心脏直视手术中心脏复苏困难的处理经验。结果：胸内心脏挤压和中等剂量心脏兴奋剂有利于心脏手术中的心脏复苏；心肌出现粗颤即应尽早除颤，不宜片面追求较高的心脏自动复跳率。对复苏困难病例，依其不同情况，在常规复苏方法的基础上，可采用一些特殊复苏措施，包括消除导致复苏困难的原因、长时间心脏挤压和长时间体外循环辅助、采用外科手段等。结论：有多种因素影响心脏直视手术中的心脏复苏，正确分析判断复苏困难的特殊原因，恰当地采用综合性措施（包括外科手段）进行复苏可收到良好效果。