氯氰菊酯对模式动物秀丽隐杆线虫生殖能力的损伤作用

目的：应用模式动物秀丽隐杆线虫研究菊酯类农药氯氰菊酯的生殖毒性,并对秀丽隐杆线虫模型在生殖毒理学中应用的可行性进行初步探讨。方法：将L4期野生型秀丽隐杆线虫分别于0.08、0.8和8.0 mg/L的氯氰菊酯中暴露24、48和72 h,每组10条,以K溶液为阴性对照,分别在体视显微镜和光镜下计数后代数目、子宫内受精卵数目、卵母细胞数目并观察形态,体外排受精卵速率。结果：L4期野生型秀丽隐杆线虫暴露于氯氰菊酯24 h后,各观察终点均无显著性变化;暴露48 h后,8.0 m/L浓度染毒组发生后代数目降低,0.8和8.0 m/L染毒组纳精囊旁侧第2位卵母细胞相对长度减小且子宫内受精卵数目降低,0.08、0.8和8.0mg/L染毒组体外排受精卵速率均下降,与对照组相比,差异均具有统计学意义（P〈0.05）;暴露72 h后,0.8和8.0 m/L染毒组后代数目降低,纳精囊旁侧第2位卵母细胞相对长度减小,与对照组相比,差异均具有统计学意义（P〈0.05）。结论：模式动物秀丽隐杆线虫生殖系统对氯氰菊酯具有一定敏感性,在生殖毒理学研究中具有潜在应用价值。     

Reduction of reproductive capacity of model organism Caenorhabditis elegans induced by cypermethrin exposure

目的:应用模式动物秀丽隐杆线虫研究菊酯类农药氯氰菊酯的生殖毒性,并对秀丽隐杆线虫模型在生殖毒理学中应用的可行性进行初步探讨.方法:将L4期野生型秀丽隐杆线虫分别于0.08、0.8和8.0 mg/L的氯氰菊酯中暴露24、48和72 h,每组10条,以K溶液为阴性对照,分别在体视显微镜和光镜下计数后代数目、子宫内受精卵数目、卵母细胞数目并观察形态,体外排受精卵速率.结果:L4期野生型秀丽隐杆线虫暴露于氯氰菊酯24h后,各观察终点均无显著性变化；暴露48 h后,8.0 mg/L浓度染毒组发生后代数目降低,0.8和8.0 mg/L染毒组纳精囊旁侧第2位卵母细胞相对长度减小且子宫内受精卵数目降低,0.08、0.8和8.0mg/L染毒组体外排受精卵速率均下降,与对照组相比,差异均具有统计学意义(P＜0.05)；暴露72 h后,0.8和8.0 mg/L染毒组后代数目降低,纳精囊旁侧第2位卵母细胞相对长度减小,与对照组相比,差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论:模式动物秀丽隐杆线虫生殖系统对氯氰菊酯具有一定敏感性,在生殖毒理学研究中具有潜在应用价值.     

邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯对秀丽线虫生殖能力的影响

目的：探讨邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯（DEHP）对秀丽线虫生殖能力的影响。方法：设置对照组（K溶液）和DEHP低（0.1 mg/L）、中（1.0 mg/L）、高（10.0 mg/L）3个剂量的染毒组,20℃下恒温培养染毒48 h,观察DEHP对秀丽线虫后代数目、世代时间以及瞬时产卵量的影响;利用二脒基苯基吲哚（DAPI）染色,观察并计数线虫有丝分裂区、减数分裂区的生殖细胞数;利用MD701突变株,在荧光显微镜下观察粗线期细胞的凋亡情况。结果：与对照组相比,L4期线虫暴露DEHP 48 h后,秀丽线虫的后代数目在1.0和10.0 mg/L剂量组显著下降（P < 0.05）,但对世代时间无明显影响（P>0.05）。随着DEHP暴露剂量的增加,线虫的瞬时产卵量下降（P < 0.05）。与对照组相比,在DEHP 1.0和10.0 mg/L的暴露剂量下,秀丽线虫总生殖细胞数和有丝分裂区生殖细胞数均显著下降（P < 0.01）,在10.0 mg/L暴露剂量下减数分裂区生殖细胞显著减少（P < 0.01）。随着染毒剂量的升高,粗线期生殖细胞凋亡数明显增加（P < 0.01）。结论：DEHP可以导致秀丽线虫有丝分裂区增殖阻滞以及减数分裂区生殖细胞数减少,这种作用可能和DEHP导致秀丽线虫粗线期凋亡数目增多有关。     

微囊藻毒素-LR对秀丽线虫精子形成的毒性作用

目的： 探讨微囊藻毒素-LR(MC-LR)对模式生物秀丽隐杆线虫精子形成的毒性作用。 方法：L4期him-5雄虫分别暴露于0.1、1、10和100 μg/L的MC-LR中,染毒48 h。通过测定精细胞大小和体外活化率分别观察MC-LR对精子竞争力和活化能力的影响,并利用实时荧光定量PCR测定相关基因表达水平,用杂交试验验证MC-LR对雄虫生育力的影响。 结果：暴露48 h后,100 μg/L 组秀丽隐杆线虫精细胞与对照组相比周长和面积均显著减小(P均<0.01);10和100 μg/L染毒组精细胞体外活化率显著下降(P均<0.01);spe-10和spe-15基因在染毒组出现了表达水平下调的现象;各染毒组后代数目与对照组相比差异均无统计意义(P均＞0.05)。 结论：MC-LR对秀丽隐杆线虫精子形成过程具有一定的毒性作用。     

戊唑醇对秀丽线虫的生殖毒性作用

目的：探讨戊唑醇对模式生物秀丽线虫的生殖毒性作用。方法：L2期的N2、him-5（e1490）雄虫分别暴露于0.1、1.0和10.0 μg/L浓度的戊唑醇中到L4期。通过测定野生型N2线虫的后代数目与世代时间判断戊唑醇是否存在生殖毒性,通过突变体him-5（e1490）与fog-2（q71）杂交的后代数目判断是否具有雄性生殖毒性;通过检测him-5（e1490）雄虫有丝分裂区细胞、减数分裂区细胞、精细胞数目以及相关基因的表达水平研究戊唑醇对精子发生过程的影响;通过对him-5（e1490）雄虫精子细胞的形态、畸形率、活化能力以及相关基因表达水平的检测研究戊唑醇对精子形成过程的影响。相关基因表达水平用实时荧光定量PCR进行测定。结果：与对照组比较,暴露后的L4期秀丽隐杆线虫在戊唑醇剂量为10.0 μg/L时后代数目显著降低（P < 0.05）;1.0和10.0 μg/L戊唑醇剂量组可以使him-5（e1490）与fog-2（q71）的杂交后代数目降低（P均 < 0.05）,并可致秀丽线虫的有丝分裂区细胞数、减数分裂区细胞数、总生殖细胞数以及精细胞数目降低（P均 < 0.05）,daf-2、akt-1、daf-16 mRNA在1.0和10.0 μg/L剂量组的表达量均上升（P均 < 0.05）;age-1 mRNA在0.1~10.0 μg/L染毒剂量组表达量均明显下降（P < 0.05或P < 0.01）;与对照组相比,0.1、1.0、10.0 μg/L剂量组精细胞的直径与精子横截面积均明显减小（P均 < 0.05）,1.0、10.0 μg/L剂量组精细胞的活化能力均明显降低（P均 < 0.05）;try-5,spe-4,spe-6,fer-1 mRNA的表达量均明显上升（P < 0.05或P < 0.01）,swm-1 mRNA在1.0 μg/L剂量组基因的表达量上升（P < 0.01）。结论：戊唑醇通过影响秀丽线虫精子的发生以及精子的形成过程产生生殖毒性。     

全氟辛烷磺酸和全氟辛酸对秀丽隐杆线虫的生殖毒性

目的：探讨全氟辛烷磺酸（PFOS）和全氟辛酸（PFOA）对秀丽隐杆线虫的生殖毒性，寻找评价PFOS和PFOA生殖毒性的替代模型。方法：PFOS和PFOA分别设高、中、低3个染毒剂量（0.1、0.01、0.001 mmol/L）组和空白对照组，同步化后L4期幼虫在24孔板里染毒24 h，L1期幼虫染毒48 h，测定后代数目和世代时间。结果：L4期幼虫染毒24 h后，与对照组比较，PFOS高、中剂量组后代数目差异具有统计学意义（P<0.05），PFOA的3个剂量组后代数目差异均有统计学意义（P<0.05）；PFOS和PFOA各剂量组世代时间差异均无统计学意义（P>0.05）。L1期幼虫染毒48 h后，与对照组比较，PFOS和PFOA高、中剂量组后代数目差异具有统计学意义（P<0.05）；PFOS 3个剂量组的世代时间差异均具有统计学意义（P均<0.05）。结论：后代数目是PFOS和PFOA生殖毒性的敏感指标，L1期幼虫的世代时间对PFOS暴露比L4期幼虫更敏感，但PFOA不影响线虫的世代时间。线虫可能成为评价PFOS和PFOA生殖毒性的替代模型。     

秀丽隐杆线虫在化学品毒性评估中的研究进展

化学品毒性评估的传统经典方法是啮齿类动物毒性实验。随着世界各地新化学品的合成数量增多,传统的毒性检测评估模式和测试速度已经远远不能满足市场和人群的健康需求。模式生物秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)因其独特的生物学优势正逐渐地被应用到化学品的毒性评估研究中。本文将从秀丽隐杆线虫的生物学优势、化学品毒性评估时线虫基因型的选择、染毒方式、评估指标、高通量筛选技术等方面进行综述,并简要介绍线虫毒性评估的研究专利。最后,对秀丽隐杆线虫的化学品毒性评估应用前景进行讨论和展望。     

硫酸铍对人胚肺成纤维细胞的细胞毒性和遗传毒性

背景与目的： 探讨硫酸铍对体外培养的人胚肺成纤维细胞(HEL-I)的细胞毒性和遗传毒性。 材料与方法： 用不同浓度的硫酸铍(0.2、2.0、20.0、100.0、200.0 μmol/L)作用HEL-I细胞24 h,采用MTT法测定细胞存活情况,用单细胞凝胶电泳(SCGE)和微核实验测定硫酸铍对HEL-I细胞遗传损伤的情况。结果： 随着硫酸铍浓度的增加,HEL-I细胞的存活率呈下降趋势,硫酸铍浓度为100.0 μmol/L和200.0 μmol/L时,存活细胞数低于空白对照组(P<0.05);在2.0～100.0 μmol/L浓度范围内,硫酸铍均可诱发HEL-I细胞出现DNA损伤和微核率升高(P<0.05)。 结论： 硫酸铍对HEL-I细胞具有明显细胞毒性和遗传毒性。     

纳米银对中国仓鼠肺成纤维细胞的细胞毒性和遗传毒性

目的： 研究纳米银对中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL)的细胞毒性和遗传毒性并探讨其作用机制。方法：以梯度浓度(2.5、5.0、10.0、20.0、40.0和80.0 μg/mL)纳米银染毒CHL细胞,MTT比色法计算IC50以评估纳米银的细胞毒性水平。利用PI染色分析细胞周期变化并计算细胞增殖指数;Annexin V-FITC和PI双染检测细胞凋亡和坏死发生率,同时观察细胞染毒后的形态变化,记录前向角散射(FSC)和侧向角散射(SSC)信号;Giemsa染色中期分裂相涂片分析染色体畸变发生率。结果：纳米银毒性水平与纳米银浓度呈正相关(r=0.804,P<0.05),IC50为21.68 μg/mL。22.0 μg/mL纳米银与CHL细胞接触24 h后,细胞形态发生明显改变;细胞群SSC信号显著增强,为细胞摄入纳米银提供间接证据;细胞周期在G2/M期被捕获,对G0/G1期、S期以及细胞增殖指数变化情况影响显著(P<0.01);22.0 μg/mL纳米银染毒CHL 24 h后凋亡发生率与对照组差异明显(P<0.01);各浓度纳米银诱导染色体结构畸变率均大于5%(P<0.01),中高浓度四倍体发生率达到溶剂对照组的10倍以上(P<0.01)。结论：纳米银对CHL细胞有显著的细胞毒性和遗传毒性,线粒体功能受损、细胞凋亡在纳米银的细胞毒性和遗传毒性中起到重要作用。     

4-羟苯基维甲酰胺对膀胱癌细胞的放疗增敏性研究

目的:观察N-(4-羟苯基)维甲酰胺(4-HPR)联合γ-射线对人膀胱移行细胞癌的生长抑制和诱导凋亡作用,分析两者之间是否存在协同作用.方法:应用四甲基偶氮蓝比色(MTT)法检测4-HPR对膀胱癌细胞株T24的细胞毒性作用、半数抑瘤率及起效浓度和时间.应用流式细胞仪检测4-HPR、γ-射线及两者联合应用时对T24细胞生长抑制作用.结果:2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L的4-HPR作用T24细胞5天的凋亡率分别为6.2%、28.0%和26.0%,死亡率分别为0.3%、12.5%和26.7%.联合作用组细胞分别加入2.5μmol/L、5μmol/L的4-HPR,100cgy的γ-射线照射一次,3天后T24细胞的凋亡率分别为20.0%、26.0%,细胞的死亡率均在5.0%以下.5天后T24细胞的凋亡率分别为38.0%、35.0%,而细胞的死亡率分别为12.4%、21.1%.结论:小剂量的4-HPR可以诱导T24细胞凋亡,大剂量的4-HPR主要导致T24细胞死亡.小剂量的4-HPR联合小剂量的γ-射线对T24细胞凋亡有明显的协同作用.     

汞、镉对小鼠离体骨髓细胞和睾丸生殖细胞的DNA损伤作用

背景与目的: 研究氯化汞、氯化镉对小鼠离体骨髓细胞和睾丸生殖细胞的DNA损伤作用,比较两种细胞DNA损伤的敏感性差异。材料与方法: 分别以0、0.01、0.1、1 mmol/L剂量氯化汞和0、0.04、0.2、1、5 mmol/L剂量氯化镉处理离体小鼠骨髓细胞和睾丸生殖细胞1h,应用单细胞凝胶电泳(single cell gel electrophoresis, SCGE)技术检测氯化汞和氯化镉对细胞DNA的损伤率和细胞DNA迁移距离的影响。结果： 氯化汞、氯化镉处理组两种细胞DNA损伤率增高, DNA迁移距离增加。DNA损伤率和迁移距离存在明显的剂量效应关系。0.01 mmol/L剂量氯化汞、1 mmol/L氯化镉及以下剂量处理两种细胞引起睾丸生殖细胞DNA的损伤率高于骨髓细胞的DNA损伤率。结论： 氯化汞和氯化镉可引起小鼠骨髓细胞和睾丸生殖细胞DNA损伤,且睾丸生殖细胞DNA受氯化汞和氯化镉损伤更敏感。     

紫杉醇对p53缺失型肺癌细胞株H1299的生长抑制作用

背景与目的:评价紫杉醇对p53缺失型肺癌细胞株H1299的生长抑制作用.材料与方法:分别以体外药物敏感试验(Mir法)、流式细胞术观察紫杉醇不同作用浓度、不同作用时间处理H1299细胞后,其生长抑制情况以及细胞周期、细胞凋亡等指标的变化,并以荧光显微镜观察细胞核形态的改变.结果:紫杉醇对H1299细胞毒性呈时间依赖性(P＜0.05);在紫杉醇1 nmol/L以上各浓度组,随着紫杉醇浓度的增加,H1299细胞的存活率降低,与对照组间差异具有统计学意义(P＜0.05);各实验组H1299细胞的生长被阻滞于Gz/M期,在0.1～1 000 nmol/L浓度范围内呈浓度依赖性(P＜0.05),其细胞凋亡比例在0.1～10 nmol/L浓度范围内随浓度的增加而增高(P＜0.05);在时间依赖性试验中,10 nmol/L作用时,G2/M期的阻滞于12 h达高峰;1 000 nmol/L作用时于24 h达高峰,延长1 000 nmol/L作用时间,H1299出现异常多倍体现象;凋亡发生呈时间依赖性,但高浓度诱导的凋亡较低浓度出现的时间晚.紫杉醇诱导的凋亡和G2/M期阻滞无相关性(P＞0.05).荧光显微镜下可见细胞凋亡与细胞死亡共存现象.结论:紫杉醇可以同时诱导H1299细胞凋亡和死亡,对其生长抑制作用呈时间和浓度依赖性.     

Anticancer Effects of Curcuma C20-Dialdehyde against Colon and Cervical Cancer Cell Lines

Background: Recent attention on chemotherapeutic intervention against cancer has been focused ondiscovering and developing phytochemicals as anticancer agents with improved efficacy, low drug resistanceand toxicity, low cost and limited adverse side effects. In this study, we investigated the effects of CurcumaC20-dialdehyde on growth, apoptosis and cell cycle arrest in colon and cervical cancer cell lines. Materials andMethods: Antiproliferative, apoptosis induction, and cell cycle arrest activities of Curcuma C20-dialdehydewere determined by WST cell proliferation assay, flow cytometric Alexa fluor 488-annexin V/propidium iodide(PI) staining and PI staining, respectively. Results: Curcuma C20 dialdehyde suppressed the proliferation ofHCT116, HT29 and HeLa cells, with IC50 values of 65.4±1.74 μg/ml, 58.4±5.20 μg/ml and 72.0±0.03 μg/ml,respectively, with 72 h exposure. Flow cytometric analysis revealed that percentages of early apoptotic cellsincreased in a dose-dependent manner upon exposure to Curcuma C20-dialdehyde. Furthermore, exposure tolower concentrations of this compound significantly induced cell cycle arrest at G1 phase for both HCT116 andHT29 cells, while higher concentrations increased sub-G1 populations. However, the concentrations used in thisstudy could not induce cell cycle arrest but rather induced apoptotic cell death in HeLa cells. Conclusions: Ourfindings suggest that the phytochemical Curcuma C20-dialdehyde may be a potential antineoplastic agent forcolon and cervical cancer chemotherapy and/or chemoprevention. Further studies are needed to characterizethe drug target or mode of action of the Curcuma C20-dialdehyde as an anticancer agent.     

Combined antitumor effect of ursolic acid and 5-fluorouracil on human esophageal carcinoma cell Eca-109 <Emphasis Type="Italic">in vitro</Emphasis>

Objective:To study the combined antitumor effect and possible mechanisms of ursolic acid with 5-fluorouracil (5-FU) on human esophageal carcinoma cell Eca-109 in vitro. Methods:Eca-109 cells were treated with ursolic acid (10-50 μmol/L) and/or 5-fluorouracil (48.0-768.8 μmol/L) for 48 h in vitro. And then cell proliferation was determined by MTT assay. Cell cycle and apoptosis rate were analyzed by flow cytometry (FCM). The morphological changes of apoptosis were observed by fluorescent microscopy. At last ...     

柴胡皂苷D通过诱导C2-M期阻滞抑制结直肠癌SW480细胞的增殖

目的:观察柴胡皂苷D（SSD）对于结直肠癌肿瘤细胞增殖的影响并初步探索其潜在的分子机制。方法:运用MTT、细胞计数试验及克隆形成试验观察SSD对细胞增殖的影响。流式细胞仪检测SSD对细胞凋亡及周期分布情况的影响。RT-PCR和Western-blot技术检测G2-M周期阻滞关键调控因子在SW480细胞中的表达。结果:MTT试验发现SSD能够显著抑制结直肠癌肿瘤细胞SW480的增殖,而对正常结直肠细胞FHC的增殖无明显影响。细胞计数试验和克隆形成试验进一步验证了SSD对于SW480细胞增殖的影响(P<0.05)。流式细胞术检测发现SSD不影响细胞的凋亡(P>0.05),但却显著诱导G2-M周期阻滞(P<0.05)。SSD在mRNA水平下调了G2-M周期调控因子CCNA1、CCNA2、CCNB1和CCNB2的表达(P<0.05);在蛋白水平,CCNA2、CCNB1和p34/cdc2明显被下调,p-H3S10上调,p21WAF1/CIP1被明显上调。结论:SSD可以通过上调p21WAF1/CIP1的表达诱导G2-M周期阻滞来抑制结直肠肿瘤细胞SW480的增殖。     

蛋白酶体抑制剂MG132诱导HL-60细胞凋亡前G2/M期阻滞及机制

背景和目的:蛋白酶体(proteasome)抑制剂能够诱导多种肿瘤细胞凋亡,是一种潜在的有应用前景的抗肿瘤剂.本研究旨在探讨蛋白酶体抑制剂MGl32(Z-Leu-Leu-Leu-CHO)诱导白血病细胞HL-60凋亡和C2/M期阻滞的机制.方法:采用荧光显微镜观察、流式细胞术和免疫印迹研究测定MG132诱导HL-60细胞凋亡和周期阻滞及机制.结果:2μmol/L的MG132能够有效地诱导HL-60细胞凋亡,用药后24 h就显现有细胞凋亡;在MG132诱导HL-60细胞凋亡出现之前有一个明显的G2/M期阻滞,加MG132后12 h时G2/M期时相百分比为63.42±2.02;24 h时加MG132组细胞凋亡为16.67±1.48,与对照组G2/M期时相百分比为7.29±3.01及细胞凋亡为0相比,两者之间有显著性差别(P＜0.01);咖啡因CAF能够减少MG132诱导HL-60细胞出现的G2/M期阻滞,同时也减少凋亡细胞的比例;细胞周期检查点的负调控因子p21waf/cip1蛋白在加MG132处理后3 h有明显的表达,但并未能检测到p53和p27蛋白.结论:MG132诱导HL-60细胞凋亡之前有一个明显的G2/M期阻滞,p21蛋白表达明显上调提示:是p21waf/cip1而不是p53或其同源蛋白参与了其中的调控.     

土槿皮乙酸诱导大鼠神经胶质瘤C6细胞株凋亡

目的:研究土槿皮乙酸诱导大鼠神经胶质瘤C6细胞株凋亡及其机制.方法:采用MTT法检测0、0.625、1.25、2.5、5、10、20、40、80 μmol/L不同终浓度PAB对C6细胞增殖能力的影响,激光扫描共聚焦显微镜观察AO/EB荧光染色后细胞的凋亡情况,流式细胞术检测碘化丙啶(PI)染色后细胞周期的变化,免疫组化法测定C6细胞的凋亡相关蛋白Bcl-2的表达.结果:MTT结果显示,PAB呈时间剂量依赖性抑制C6细胞的生长.PAB处理24、48和72 h后,对C6细胞的半效致死剂量(IC50)分别为39.811、23.306和7.360 μmol/L.5.0、10.0、20.0 μmol/L PAB作用C6细胞72 h后的凋亡率分别为(50.5±0.7)%、(63.5±2.3)%和(80.0±1.2)%,与对照组(12.0±1.6)%比较均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05).流式细胞仪检测结果显示5.0、10.0、20.0 μmol/L不同浓度PAB作用C6细胞72小时后,随着浓度的增加,G2/M期细胞逐渐增多,分别为(29.84±6.215)%,(34.58±1.187)%和(70.23±6.325)%,与对照组(7.79±0.570)%相比,后两组差异有统计学意义(P<0.05).C6细胞中Bcl-2蛋白阳性表达率随药物剂量的增大而减小.结论:PAB可抑制大鼠神经胶质瘤C6细胞增殖,阻滞细胞周期于G2/M期、下调Bcl-2表达为其可能的作用机制.