超声造影剂联合高强度聚焦超声损伤兔肝VX2移植瘤的可行性研究

目的研究超声造影剂作为一种增效剂,增强高强度聚焦超声的生物学效应,损伤兔肝VX2移植瘤的可行性.方法 30只荷瘤兔随机分为二组,单纯高强度聚焦超声辐照组和联合辐照组,超声造影剂剂量为0.05 ml/kg.结果联合辐照组的辐照时间明显缩短（P＜0.05）,损伤肿瘤体积大大增加（P＜0.01）,损伤效率高于单纯高强度聚焦超声辐照组（P＜0.01）.结论超声造影剂可以提高高强度聚焦超声损伤效率,靶区组织的声学特性、组织结构或者功能状态可以影响高强度聚焦超声治疗剂量.     

高强度聚焦超声联合超声造影剂消融兔肝后细胞凋亡和增殖细胞核抗原表达的研究

目的：探讨高强度聚焦超声（HIFU）联合超声造影剂消融技术对兔肝组织细胞凋亡和增殖细胞核抗原（PCNA）表达的影响。方法：40只新西兰纯种大白兔分为A、B组，A组兔肝接受HIFU辐照前，经耳缘静脉注射生理盐水；B组接受辐照前注射超声造影剂SonoVue。A、B组均在辐照后5min、1d、3d、7d、14d分别处死4只动物，将肝取出体外观察，取靶区及周围组织（距靶区边缘5mm以内），HE染色观察组织病理学改变，原位末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡，免疫组织化学方法检测细胞PCNA表达。结果：HIFU辐照后3d、7d、14dB组辐照区域边缘纤维包裹带宽度大于A组（P〈0．05）。HIFU辐照后1d、3d、7d、14dB组靶区周围组织（距靶区边缘5mm以内）凋亡细胞数和PCNA阳性细胞指数较A组增高（P〈0．05）。结论：与单纯HIFU相比，HIFU联合超声造影剂促进了消融后坏死区域机化包裹，增加了HIFU靶区周围细胞凋亡，提高了细胞增殖能力，为进一步增强HIFU消融作用提供了实验数据。     

非致死剂量高强度聚焦超声逆转K562／AO2细胞多药耐药的实验研究

目的探讨非致死剂量高强度聚焦超声（HIFU）逆转K562／AO2细胞多药耐药（MDR）的效能及其作用机制。方法（1）固定辐照时间或超声声强，应用不同声强或辐照时间的HIFU辐照K562、K562／AO2细胞株，观察HIFU的剂量-效应关系；（2）将K562／AO2细胞株分组为：阿霉素组（ADM组）、ADM加HIFU辐照组（HIFU组）、ADM加维拉帕米组（VRP组），分别观察各组细胞内的ADM浓度、细胞的抑制率和细胞凋亡情况；（3）检测HIFU干预前后K562／A02细胞的P—gP、PDCD5表达情况。结果（1）当辐照时间一定时（5s）声强越高肿瘤细胞存活率越低，当HIFU声强一定时（400w／cm^2）细胞存活率随HIFU辐照时间延长而下降；（2）在K562／AO2细胞株中HIFU、VRP干预均能提高细胞内ADM浓度，HIFU组、VRP组与ADM组比较P均〈0．01，HIFU组与VRP组比较P〉0．05；HIFU组、VRP组、ADM组均能抑制K562／AO2细胞的增殖和促使K562／AO2细胞发生凋亡。HIFU组、VRP组与ADM组比较P均〈0．01，HIFU组与VRP组比较P〉0．05；（3）HIFU辐照K562／AO2细胞后P—gP表达明显降低，PDCD5表达升高。结论非致死剂量HIFU辐照K562／AO2细胞能够提高耐药肿瘤细胞内的化疗药物浓度，增加耐药肿瘤细胞的抑制率和凋亡率。非致死剂量HIFU逆转MDR的可能机理是下调耐药细胞的P—gP表达和上调PDCD5表达。     

不同剂量微泡造影剂在高强度聚焦超声消融活体羊肝组织中的增效效应

目的 探讨不同剂量超声造影剂对高强度聚焦超声(HIFU)消融活体羊肝组织的增效效应.方法 南疆黄羊20只,随机分为4组.第1组为HIFU联合0.01 ml/kg SonoVue.第2组为HIFU联合0.03 ml/kg SonoVue,第3组为HIFU联合0.05 ml/kg SonoVue,第4组为单纯HIFU组.麻醉状态下,微泡造影剂于HIFU辐照前静脉团注,20 s后开始HIFU辐照.每组采用定点辐照,所用辐照参数为频率0.8 MHz、声强19 100 W/cm2、辐照深度30 mm、辐照时间15 s.HIFU辐照结束后1周处死动物.观察并测量凝同性坏死大小,对凝固性坏死作组织病理分析.结果 在相同声辐照参数下,1、2、3组凝同性坏死区域均大于第4组,差异有统计学意义(P<0.05),且凝固性坏死体积随SonoVue剂量的增加而逐渐增大,差异有统计学意义(P<0.05).组织病理学检查发现凝同性坏死区内无正常组织残留.除实验3组出现消融灶邻近组织和皮肤损伤外,其余各组均未出现明显并发症.结论 微泡造影剂在HIFU消融过程中的增效效应与微泡造影剂的剂量有关,微泡造影剂的剂量越大,所形成的凝固性坏死的体积越大,增效越明显.     

超声造影剂增强HIFU消融作用的病理学研究

目的探讨超声造影剂增强高强度聚焦超声（HIFU）消融生物组织作用的病理学改变。 方法24只新西兰大白兔按体质量配对分为两组，A组肝脏接受单纯HIFU辐照，B组动物接受辐照前经静脉注射超声造影剂SonoVue。辐照后测量组织凝固体积并观察光电镜下组织学及细胞超微结构改变。 结果A组与B组组织凝固体积分别为（0．07±0．02）cm^3和（0．21±0．06）cm^3（P＜0．05）。光镜下两组辐照区肝组织未见凝固性坏死，B组可见部分细胞膜及胞核破坏。电镜下两组辐照区细胞内均未见完整细胞器，均呈现不可逆凝固性坏死，A组辐照区细胞结构较B组清楚。 结论超声造影剂增加HIFU焦域体积并进一步破坏细胞结构，从而增强HIFU消融作用。     

高强度聚焦超声制备肿瘤抗原致敏树突状细胞及其体外诱导T细胞产生IFN-γ的研究

目的 探讨采用高强度聚焦超声（HIFU）辐照肿瘤细胞制备肿瘤抗原致敏树突状细胞（DD）和制备DD肿瘤疫苗的可行性。方法 （1）采用1ng／ml IL-4和10ng/ml GM-CSF联合诱导小鼠骨髓细胞产生DC，并用流式细胞仪检测DC的CD80、CD86、H-2K^d和I-A^d表达情况；（2）固定辐照时间或超声声强，应用不同声强或辐照时间的HIFU辐照CT26细胞株后，用台盼蓝染色、MTT法检测活肿瘤细胞数，同时用台盼蓝染色观察肿瘤细胞的形态学变化，分析HIFU剂量与肿瘤细胞存活率的关系，了解剂量-效应关系；（3）固定辐照时间和超声强度，HIFU辐照CT26细胞悬液，制备肿瘤细胞抗原并致敏DC，致敏DC与T细胞共孵育48h后提取上清液，通过ELISA法检测上清中IL-12、γ干扰素（IFN-γ）的含量，并与冻融组、单纯CT26、对照组进行比较。结果 （1）采用IL-4和GM-CSF联合诱导小鼠骨髓细胞可培养出典型的DC；（2）固定辐照时间，随着HIFU辐照剂量的增加肿瘤细胞的存活率迅速减少，肿瘤细胞的碎片逐渐增多，当声强为1000W／cm^2，辐照30s时，无细胞存活，肿瘤细胞失去正常形态，全部被撕裂成碎片；（3）通过ELISA法检测HIFU、冻融及单纯CT26组上清液中IL-12、IFN-γ的含量显著高于对照组（P均〈0．05），HIFU及冻融组上清液中IL-12、IFN-γ的含量高于单纯CT26组（P均〈0．05），但HIFU、冻融组之间比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 HIFU能灭活肿瘤细胞并能使肿瘤细胞破碎，HIFU制备的肿瘤抗原可体外致敏DC，并可使DC成熟分泌大量IL-12，同时诱导T细胞分泌大量IFN-γ。     

肝灰阶超声造影剂量与效果关系的实验研究

目的 探讨不同超声造影剂剂量对肝灰阶超声造影效果的影响及其变化规律。方法 分别对5只新西兰大白兔在8个剂量水平(剂量范围：0．02～0．16ml／kg)团注超声造影剂，应用低机械指数灰阶超声造影和时间强度曲线定量分析门静脉和肝实质造影增强效果。结果 门静脉和肝实质开始增强时间随造影剂剂量的增加而缩短，均呈指数递减形式；造影剂剂量与门静脉、肝实质峰值增强时间无明确相关性(r=-0．35，0．22)；在0．02～0．10ml／kg范围内，造影剂剂量与门静脉、肝实质峰值信号强度呈直线相关关系(r=0．89，0．92)；门静脉和肝实质的平均渡越时间和曲线下面积均随造影剂剂量的递增而增加，呈指数递增形式。结论 超声造影剂剂量影响肝造影增强各参数。确定剂量和效果的关系及认识其规律是进行超声造影和定量研究的前提条件。0．10ml／kg是兔理想的造影剂量。     

亚微米造影剂在高强度聚焦超声消融兔VX2乳腺肿瘤中的应用研究

目的 在高强度聚焦超声(HIFU)消融兔VX2乳腺肿瘤的过程中加入亚微米造影剂,探讨其对辐照效果的影响.方法 制备亚微米造影剂,检测微泡性质.VX2乳腺肿瘤兔随机分组,在不同辐照剂量(150W、120W)和不同辐照时间(5s、3 s)条件下,记录HIFU辐照前后灰阶变化,辐照后行病理检查.结果 成功制备亚微米造影剂.HIFU+亚微米造影剂组较HIFU+ PBS组能够有效提高HIFU的损伤面积,减少辐照强度,缩短辐照时间.结论 亚微米造影剂不仅在诊断方面有特殊的应用价值,在超声治疗领域也有很好的应用前景.     

微泡造影剂联合超声辐照介导的绿色荧光蛋白质粒转染小鼠肝癌的实验研究

目的探讨微泡造影剂SonoVue联合超声辐照在介导体内基因转染中的作用。方法建立小鼠肝癌皮下移植瘤模型，尾静脉注入绿色荧光蛋白质粒（pEGFP），添加或不添加SonoVue，脉冲多普勒超声辐照（1MHz，2W／cm^2）瘤组织。持续时间1、5、10min，7d后流式细胞仪、荧光显微镜评价pEGFP转染率。HE染色行肿瘤病理学检查。结果SonoVue联合超声辐照组pEGFP的转染率显著高于单纯超声辐照组（P〈0．01）；仅SonoVue与单纯pEGFP2组间转染率无显著差异（P〉0．05）；辐照时间5、10min时pEGFP表达明显高于1min（P〈0．05）。5与10min组间pEGFP表达无显著差异（P〉0．05）。HE染色肿瘤组织无坏死灶出现。结论微泡造影剂联合超声辐照可明显提高基因转染率，且对组织无损害。     

微泡造影剂联合高强度聚焦超声治疗兔肝VX-2肿瘤的声像图监测

目的 探讨微泡造影剂联合高强度聚焦超声治疗兔肝VX-2肿瘤时声像图的变化特征及超声监控能力。 方法 45只荷瘤兔随机分为3组，一组接受单纯高强度聚焦超声治疗，另两组为高强度聚焦超声联合微泡造影剂治疗。 结果 高强度聚焦超声联合微泡造影剂治疗肝肿瘤可以大大缩短治疗时间。各治疗组声像图变化的病理学基础各不相同。联合治疗后10min靶区高回声面积与凝固性坏死面积相关性良好（r=0．986，P〈0．05）。 结论 微泡造影剂增强高强度聚焦超声疗效切实可行，联合治疗的声像图特征性变化能够有效判断治疗效果。     

术中高强度超声治疗晚期实验性肝癌

目的评价术中高强度超声（ＩＨＩＵ）治疗晚期种植性兔肝脏ＶＸ２肿瘤的有效性。方法２６只实验动物分为四组：Ａ组为对照组,Ｂ组接受阿霉素（３ｍｇ／ｋｇ）治疗,Ｃ组接受ＩＨＩＵ治疗,Ｄ组接受ＩＨＩ－Ｕ和阿霉素（３ｍｇ／ｋｇ）治疗。ＩＨＩＵ声强为４５．８６Ｗ／ｃｍ２,频率１０ＭＨｚ,作用时间１２００秒,治疗范围包括肿瘤周围０．２ｃｍ的肝组织。记录各荷瘤兔的生存时间和各组兔的治愈率,定期检查各兔的肝肾功能。结果与对照组比较,各实验组荷瘤兔的生存时间明显延长（Ｐ＜０．０５）;接受ＩＨＩＵ和阿霉素治疗的荷瘤兔（Ｄ组）的生存时间明显长于单独接受阿霉素治疗组（Ｂ组）（Ｐ＜０．０５）。各组荷瘤兔的治愈率分别为Ａ组０、Ｂ组０、Ｃ组１６．６７％、Ｄ组３３．３３％,提示ＩＨＩＵ组、ＩＨＩＵ加化疗组的治愈率有升高趋势。结论ＩＨＩＵ能有效地治疗晚期兔肝ＶＸ２肿瘤,ＩＨＩＵ与阿霉素合用疗效明显增加。ＩＨＩＵ可能成为一种治疗晚期肝癌的新疗法。     

Transmission electron microscopy of VX2 liver tumors after high-intensity focused ultrasound ablation enhanced with SonoVue®

Introduction

The purpose of this study was to observe sequential changes in rabbit VX2 liver tumors using transmission electron microscopy after high-intensity focused ultrasound (HIFU) ablation enhanced with the contrast agent SonoVuer® (Bracco, Milan, Italy).

Methods

Thirty New Zealand rabbits with VX2 liver tumors were randomly divided into two groups. The liver tumors of rabbits in Group A underwent single HIFU ablation; those in Group B were given the ultrasound contrast agent SonoVue 0.2 mL/kg before HIFU exposure. Five rabbits from each of the two groups were killed at 0 hours, 6 days, and 14 days after HIFU ablation. Tissue samples that included targeted and untargeted tissue were observed using transmission electron microscopy.

Results

Using transmission electron microscopy, it was evident that most of the cellular organs in the targeted areas of tumors in Groups A and B had disappeared early after HIFU, but the basic cell structure was seen in Group A. On the sixth day after HIFU ablation, all cells in the targeted areas were disrupted, and fibrous bands were detected in the rims of targeted areas in both groups. In the surrounding areas, cell swelling in Group B was more severe than in Group A, and a greater number of apoptotic bodies were found in Group B.

Conclusion

The use of an ultrasound contrast agent can enhance the effects of HIFU ablation on the destruction of cell ultrastructure and can enlarge the region of HIFU ablation; this provides experimental evidence for the use of contrast agents in controlling the effects of HIFU.

     

Transmission electron microscopy of rabbit liver after high-intensity focused ultrasound ablation combined with ultrasound contrast agents

The purpose of this study was to observe sequential changes in rabbit liver under transmission electron microscopy after high-intensity focused ultrasound (HIFU) ablation. Thirty rabbits were randomly divided into 2 groups. The livers of rabbits in group A underwent single HIFU ablation; those in group B were given the ultrasound contrast agent Sonovue 0.2 mL/kg before HIFU exposure. Five rabbits from each of the 2 groups were killed at 0 h, 6 d, and 14 d after HIFU ablation. Tissue samples that included targeted and untargeted tissues were observed under transmission electron microscopy. Electron microscopy showed that most of the cell organs in targeted areas of groups A and B disappeared early after HIFU, but the basic cell structure was seen in group A. On the sixth day after HIFU ablation in the 2 groups, all cells in the targeted areas were disrupted and fibrous bands were detected in the rims of targeted areas. In surrounding areas, cell swelling in group B was more severe than in group A, and a greater number of apoptotic bodies were found in group B. The use of an ultrasound contrast agent can enhance the effects of HIFU ablation on the destruction of cell ultrastructure and can enlarge the region of HIFU ablation; this provides experimental evidence for control of HIFU effects.     

高强度聚焦超声治疗恶性骨肿瘤的实验研究

目的 探讨高强度聚焦超声（HIFU）治疗恶性骨肿瘤的可行性。方法 12只VX2移植性骨肿瘤兔接受HIFU治疗,采用超声检查、组织病理学方法观察HIFU治疗后移植性骨肿瘤的变化。结果 HIFU治疗后骨内、外肿瘤组织的回声增强,肿瘤组织凝固性坏死。结论 HIFU治疗兔移植性VX2骨肿瘤是可行的。     

超声造影剂在诊断超声辐射下对兔睾丸生精细胞的影响

目的 探讨超声造影剂SonoVue在诊断超声不同剂量、不同成像模式条件下对兔睾丸生精细胞的影响.方法 选用大白兔33只,随机分组.对照组3只,双侧睾丸接受灰阶超声辐射3 min.常规造影组18只,分为A1、B1、C1、A2、B2、C2共6个小组,每组各3只,经兔耳缘静脉团注SonoVue,其中A1、A2组分别单次注射0.1 ml/kg;B1、B2组每次均注射0.1 ml/kg,间隔15 min重复2次;C1、C2组单次注射1 ml/kg.造影剂爆破组12只,分为D1、D2、E1、E2组,每组各3只,当造影剂刚充满整个睾丸实质时,单次触发爆破,其中D1、D2组注射0.1 ml/kg,E1、E2组注射1 ml/kg.A1、B1、C1、D1、E1各组于实验结束后立即取材,A2、B2、C2、D2、E2各组于实验结束常规饲养24 h后取材.应用光镜、电镜观察各组睾丸组织学变化.结果 造影剂爆破组的凋亡细胞总数较对照组、常规造影组显著增多(P＜0.001),常规造影组与对照组的差异无统计学意义(P＞0.05).电镜下,常规造影组中除C1组睾丸内局部细胞间隙增宽、线粒体肿胀外,其他各小组均未见明显改变.造影剂爆破组的睾丸实质均可见细胞间隙增宽、线粒体空泡,其中D1组、E1组睾丸组织还存在点状坏死灶.结论 常规造影组常规剂量对生精细胞无明显影响,大剂量可造成生精细胞的短暂的可逆性损伤.造影剂爆破可造成生精细胞不可逆的损伤.     

载10-羟基喜树碱靶向相变纳米粒联合高强度聚焦超声治疗裸鼠肝癌移植瘤

目的探讨叶酸受体靶向的载10-羟基喜树碱(10-HCPT)相变纳米粒(FR-HCPT-PNPCA)造影剂联合高强度聚焦超声(HIFU)对裸鼠肝癌移植瘤的治疗效果。方法采用皮下注射人肝癌7721细胞的方法制备荷瘤裸鼠模型120只,随机分为4组,每组30只,HIFU治疗前1 d分别通过尾静脉注射药物或生理盐水200μl,其中A组注射生理盐水+HIFU辐照,B组注射HCPT+HIFU辐照,C组注射靶向非载药相变纳米粒(FR-PNPCA)+HIFU辐照,D组注射FRHCPT-PNPCA+HIFU辐照。辐照后即刻应用超声观察各组裸鼠肿瘤内灰度变化。2 h后每组处死10只裸鼠,取肿瘤组织行TTC染色观察大体病理并进行组织切片,HE染色后于显微镜下观察肿瘤细胞坏死情况,然后行组织匀浆检查瘤内HCPT浓度。48 h后每组再处死10只裸鼠,取肿瘤组织切片行PCNA和TUNEL染色观察各组肿瘤细胞增殖和凋亡情况。2周后处死各组剩余裸鼠,测量肿瘤大小,并取主要脏器观察肿瘤转移情况。结果辐照后即刻超声显示A、B组辐照区域几乎无灰度变化,C、D组辐照前后灰度变化面积和变化值与A、B组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。辐照后2h,B、D组瘤内均可检测到HCPT,且D组瘤内HCPT浓度高于B组,差异有统计学意义(P<0.05);A、B组均未见明显凝固性坏死,C、D组肿瘤内均可见明显凝固性坏死,坏死范围与A、B组比较差异均有统计学意义(均P<0.01)。辐照后48 h,D组细胞增殖率最低,细胞凋亡率最高,与A、B、C组比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。辐照后2周,D组肿瘤几乎消失,转移灶最少,与A、B、C组比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论FR-HCPT-PNPCA联合HIFU不仅能实时监控肿瘤HIFU消融并增强消融效果,且释放的药物能辅助治疗肿瘤,有望为肿瘤治疗提供一种精准、高效的方法。     

超声造影剂增强HIFU消融兔肝组织的电镜观察

目的探讨高强度聚焦超声(HIFU)联合超声造影剂消融后兔肝细胞超微结构变化。方法30只动物分为两组,A组单纯HIFU辐照,B组辐照前注射超声造影剂。辐照后1h、6d、14d电镜观察。结果辐照后两组靶区细胞坏死,辐照后早期A组靶区可见细胞轮廓。辐照后6d两组靶区细胞崩解,边缘见纤维包裹带,靶区周围细胞浊肿,B组较A组严重,B组靶区周围凋亡小体多于A组。结论超声造影剂增强HIFU消融作用,进一步破坏组织超微结构。