消化道肿瘤环氧合酶-2表达与凋亡抑制蛋白及化疗药敏性的关系

目的 探讨消化道肿瘤环氧合酶(COX)-2表达与凋亡抑制蛋白及体外化疗药敏性的关系.方法 对84例胃癌、大肠癌标本进行噻唑蓝(MTT)比色法体外化疗药物敏感性实验,并进行COX-2、p53、Survivin、bel-2免疫组织化学染色.结果 肿瘤组织COX-2、p53、Survivin、bel-2表达率分别为70.3%、64.3%、89.3%、60.7%;COX-2与Survivin、bcl-2表达呈正相关(r=0.5072、0.3783,均P<0.01).在肿瘤COX-2强表达组,紫杉醇(PTX)、表阿霉素(eADM)、羟基喜树碱(OPT)对肿瘤细胞抑制率明显低于弱表达组(均P<0.05);p53强表达与PTX、顺铂(DDP)对肿瘤细胞的抑制率明显降低有关(均P<0.05);Survivin强表达时,长春新碱(VCR)、DDP对肿瘤细胞抑制率明显降低(均P<0.05);bcl-2强表达时,5-氟尿嘧啶(5-Fu)、VCR、eADM、奥沙利铂(OXA)对肿瘤细胞抑制率明显低于弱表达组(均P<0.05).结论 消化道肿瘤COX-2通过抑制肿瘤细胞凋亡参与了肿瘤的多药耐药.     

胃癌凋亡相关蛋白Survivin、B淋巴细胞/白血病-2、bax表达与肿瘤细胞体外化疗药敏性的关系

目的 探讨胃癌凋亡相关蛋白表达与体外化疗药敏性的关系. 方法 对64例胃癌标本进行Survivin、R淋巴细胞/白血病-2(bcl-2)、bax免疫组织化学染色,并以噻唑蓝(MTT)比色法检测体外化疗药物敏感性.结果 肿瘤Survivin、bcl-2、bax阳性表达率分别为90.6％、75.0％、68.8％;Survivin与bax、bcl-2与bax 间表达强度均呈负相关(r=-0.45044、-0.414 03,P＜0.01).在耐药因子表达程度与药物对肿瘤细胞抑制率的关系中,Survivin强表达时,表阿霉素(eADM)、顺铂(DDP)对肿瘤细胞的抑制率明显降低(P＜0.05),但奥沙利铂(L-OHP)对肿瘤细胞的抑制率明显增加(P＜0.05);bcl-2强表达时,5-氟尿嘧啶(5-Fu)、紫杉醇(PTX)、eADM对肿瘤细胞的抑制率明显低于弱表达组(P＜0.05);bax强表达组中,5-Fu、eADM、L-OHP和甲氨喋呤(MTX)对肿瘤细胞的抑制率明显高于弱表达组(P＜0.05).结论 胃癌凋亡相关蛋白表达与部分化疗药物敏感性有关.     

消化道肿瘤淋巴结转移灶P-糖蛋白、谷胱甘肽S转移酶-π和凋亡抑制蛋白的表达特点

目的 探讨消化道肿瘤淋巴结转移灶多药耐药相关因子P-糖蛋白(P-gp)、谷胱甘肽S转移酶-π(GST-π)、p53、survivin、bcl-2的表达特点及临床意义.方法 对54例胃癌和大肠癌的转移淋巴结、原发灶中上述5种多药耐药相关因子行免疫组织化学染色,对比其表达的差异.结果 转移灶与原发灶相比,P-gp、GST-π在二者间表达的差异具有统计学意义(P均<0.05);p53、bcl-2表达在二者之间具有明显相关性(r=0.7248、0.5524;P均<0.05).在转移淋巴结,P-gP分别与GST-π及survivin表达呈正相关(r=0.4062、0.6169,P均<0.05),GST-π与survivin表达呈正相关(r=0.4027,P<0.05);而在原发灶,bel-2与P-gP及survivin表达呈正相关(r=0.3986、0.2937,P均<0.05)、GST-π与survivin表达呈正相关(r=0.4481,P<0.01),仅GST-π与survivin正相关表达同时出现在转移灶和原发灶内.结论 消化道肿瘤淋巴结转移灶存在多药耐药相关因子表达的异质性,肿瘤切除术后辅助化疗的靶目标应针对淋巴结转移灶.     

奥沙利铂对不同p53状态肝癌细胞中DNA损伤修复基因GADD45β的诱导差异及调控机制

目的 探索奥沙利铂对不同p53状态肝癌细胞的DNA损伤修复基因(GADD45β)诱导差异及可能调控机制.方法 转染p53全序列建立Hep3B+p53.体外合成GADD45β近端启动子序列群(-618至-314),构建荧光素表达质粒,转染肝癌细胞株HepG2、Hep3B和Hep3B+p53.以实时荧光定量PCR比较奥沙利铂对GADD45β表达诱导及其近端启动子活性影响差异;比较对DNA合成和细胞克隆形成能力抑制差异;通过Caspase-3的表达变化测定凋亡的发生和发展.结果 奥沙利铂对Hep3B中GADD45β诱导并不明显.转染p53全基因序列后,Hep3B+p53对奥沙利铂的敏感性明显增加,并呈现出剂量-效应的正相关关系.荧光素分析提示奥沙利铂作用Hep3B+p53后的启动子NF-κB(-618/+6)和E2F-1(-470/+6)活性较Hep3B明显增强约1.5倍和0.8倍.奥沙利铂能够更加明显地抑制Hep3B+p53的DNA合成能力和细胞克隆形成能力,100 μmol/L奥沙利铂作用后Hep3B+p53DNA合成率为30.41％,对细胞克隆形成能力的抑制率则达到75.60％,与Hep3B相比差异显著.奥沙利铂作用后Hep3B+p53的Caspase-3能够迅速地启动凋亡的发生和发展.结论 p53对铂类化疗药物对肝癌细胞的GADD45β诱导具有重要作用,增强转录调节因子的表达水平是其可能的作用机制.     

胃癌淋巴结转移灶中COX-2和Bcl-2的表达及其与体外化疗敏感性的关系

目的 探讨胃癌淋巴结转移灶中环氧合酶-2(COX-2)和Bcl-2的表达及其与体外化疗敏感性的关系. 方法对40例胃癌新鲜肿瘤组织及转移淋巴结进行肿瘤细胞体外培养化疗药敏性实验,并对原发灶和转移灶行COX-2和Bcl-2免疫组化染色. 结果原发灶中COX-2和Bcl-2强表达率分别为52%和45%,转移灶中分别为72%和60%.COX-2在转移灶中的表达明显高于原发灶(χ~2=4,P<0.05),而Bcl-2在转移灶与原发灶中表达强度相比差异无统计学意义(χ~2=3,P>0.05).在原发灶与转移淋巴结之间COX-2和Bcl-2表达均具有明显相关性(r=0.3403,0.4560,均P<0.05);在原发灶及转移灶中,COX-2与Bcl-2之间表达强度均具有正相关性(r=0.6014,0.5330,均P<0.01).在原发灶中COX-2强表达组的5氟尿嘧啶、长春新碱、表阿霉素对肿瘤细胞的抑制率明显低于弱表达组(t=2.29、2.18、2.41,均P<0.05);Bcl-2强表达时,5氟尿嘧啶、紫杉醇、表阿霉素对肿瘤细胞的抑制率均明显低于弱表达组(t=2.46、2.23、2.22,均P<0.05).在转移淋巴结中,COX-2强表达时长春新碱和甲氨蝶呤对肿瘤细胞的抑制率明显下降(t=2.17、2.35,均P<0.05);Bcl-2强表达组的5氟尿嘧啶、足叶乙甙、紫杉醇和甲氨蝶呤4种药物的抑制率均低于弱表达组(t=2.32、2.29、2.50、2.25,均P<0.05).结论 COX-2和Bcl-2参与了胃癌多药耐药,且在淋巴结转移灶中的表达及化疗药敏性均呈现与原发灶不同的异质性,术后辅助化疗应针对淋巴结转移灶进行.     

人胃癌细胞原位移植裸鼠原发灶与肝转移灶体外化疗药敏性差异

目的：比较人胃癌原位移植裸鼠肝转移模型原发灶、肝转移灶肿瘤细胞对化疗药物敏感性。 方法：将裸鼠皮下传代的SGC-7901细胞株实体瘤组织块移植于裸鼠胃壁,建立人胃癌裸鼠原位移植模型,待其发生肝转移后取胃原发灶、肝转移灶肿瘤细胞,SRB法检测肿瘤细胞对氟尿嘧啶（5-FU）,顺铂（CDDP）,奥沙利铂（L-OHP）,表阿霉素（eADM）,丝裂霉素（MMC）,长春新碱（VCR）,氨甲喋呤（MTX）7种化疗药物的体外敏感性。 结果：成功建立裸鼠原位移植胃癌转移模型,肿瘤原位移植成瘤率100%,肝转移率75%;7种药物中L-OHP,VCR对原发灶肿瘤细胞的抑制率高于肝转移灶,而eADM,MMC对肝转移灶肿瘤细胞的抑制率高于原发灶（均P<0.05）;5-FU,L-OHP,MTX对原发灶与肝转移灶的抑制率具正相关性（r=0.5203;0.4424;0.3851,均P<0.05）。 结论：胃癌原位移植动物的原发灶和肝转移灶细胞的对化疗药物药敏性存在差异,以原发灶药敏检测结果指导针对肝转移灶的治疗可能是不准确的。     

As2O3对人乳腺癌中NF-κB p65、survivin和caspase-3的作用及相关性研究

目的探讨As2O3对人乳腺浸润性导管癌裸鼠移植瘤组织中NF-κB p65、survivin及caspase-3表达的影响.方法复制人乳腺浸润性导管癌裸鼠移植瘤模型,共22只,随机分为3组:对照组、顺铂组及不同浓度(1.5、3.0 mg/kg)的As2O3组(简称As2O3组).用原位杂交法检测survivin mRNA的表达;用免疫组化法检测肿瘤组织NF-κB p65、survivin及caspase-3蛋白的表达.结果人乳腺浸润性导管癌裸鼠移植瘤中NF-κB p65蛋白及survivin mRNA和蛋白表达的阳性细胞密度As2O3组明显低于顺铂组和对照组(P＜0.01),顺铂组也低于对照组(P＜0.01);而caspase-3蛋白表达结果则相反(P＜0.01).NF-κB p65蛋白、survivin蛋白及survivin mRNA阳性表达间相互呈正相关,而三者的表达均与caspase-3蛋白表达呈负相关.结论 As2O3可能通过抑制NF-κB p65的活性抑制survivin,从而激活caspase-3,诱导人乳腺浸润性导管癌细胞的凋亡,且呈剂量依赖性.     

genistein联合顺铂控制肝癌切除术后复发转移的实验研究

目的 研究genistein(三羟基异黄酮)增强顺铂对肝癌切除术后复发转移的抑制作用及其机制. 方法建立模拟人肝癌切除术后肿瘤高转移复发的裸鼠模型,分别给予genistein与顺铂腹腔注射,治疗4周后处死,观察裸鼠肝脏复发肿瘤大小和肺转移情况;用金氏公式计算q值研究两药的协同作用;免疫组化及实时荧光定量PCR检测肝脏复发肿瘤MMP-2蛋白及mRNA的表达.结果 gunistein与顺铂联用较单用组裸鼠肝脏肿瘤复发灶体积减小,肺转移数减少;genistein与顺铂联用在体内对裸鼠肝癌切除术后的复发肿瘤具有相加抑制作用,对肺转移具有协同抑制作用;免疫组化检测复发肿瘤MMP-2的蛋白表达,顺铂组比对照组表达增加(t=26.17、P＜0.05),genistein组和联用组表达比对照组降低(t=5.58,13.90,P＜0.05);实时荧光定量PCR检测genistein组MMP-2 mRNA表达是对照组的0.90倍,顺铂组是对照组的2.06倍,联合组是对照组的0.44倍.结论 genistein可增强顺铂防治肝癌切除术后肿瘤复发转移的化疗疗效;其机制可能与genistein能降低顺铂诱导的MMP-2表达增加有关.     

乳腺癌p53，ki-67和bcl-2的表达与新辅助化疗的关系

目的 研究乳腺癌p53,ki-67和bcl-2基因蛋白表达与新辅助化疗临床效果的关系,以寻找指导治疗、判断预后的生物学指标.方法 采用免疫组化SABC法测定118例可手术的乳腺癌标本的p53,ki-67和bcl-2的蛋白表达,并分析其与新辅助化疗疗效的关系.结果 术前辅助化疗有效率为68.6%.p5 3表达阳性,化疗效果差（P＜0.05）;而ki-67阳性表达者有效率明显高于ki-67不表达者（P＜0.05）;bcl-2表达与疗效无明显关系.p53蛋白阳性表达者bcl-2表达下降.p53与ki-67蛋白表达有明显关系.结论 p53和ki-67蛋白表达可作为指导新辅助化疗及预后判断的分子生物学指标.     

重组人p53腺病毒与常用化疗药物对大肠癌-174细胞株生长抑制的对比

目的:对比了解重组人p53腺病毒注射液对大肠癌-174细胞株的体外抑制效应及其半数致死量(IC50),更好地指导临床应用。方法:通过体外细胞培养、利用MTT法对比检测重组人p53腺病毒注射液与5-氟尿嘧啶、替加氟、顺铂、奥沙利铂、丝裂霉素以及紫杉醇等大肠癌常用化疗药物的IC50和残存肿瘤细胞存活率(Imax%),明确重组人p53腺病毒注射液体外抑瘤的活性。结果:rAdp53的IC50为5.73×1011VP/ml,具剂量、时间依赖性抑瘤效应,但与常用化疗药物相比抑瘤效应较弱;5-氟脲嘧啶、紫杉醇、丝裂霉素单用时抑瘤效应最强;紫杉醇、5-氟脲嘧啶体外抑瘤效应敏感性最好。结论:重组人p53腺病毒注射液具有良好的体外抑瘤效应,IC50为5.73×1011VP,且有剂量和时间依赖性;但其单用时体外抑制大肠癌-174细胞株的作用远逊于经典的化疗药物,如丝裂霉素、5-氟尿嘧啶和顺铂。     

消化道肿瘤转移淋巴结中P糖蛋白和谷胱甘肽S转移酶π的表达与肿瘤化疗药物敏感性的关系

目的 探讨消化道肿瘤淋巴结转移灶中P糖蛋白(P-gp)和谷胱甘肽S转移酶π(GST-π)的表达与化疗药物敏感性的关系及其临床意义.方法 对54例胃癌和大肠癌新鲜肿瘤组织及转移淋巴结进行肿瘤细胞培养化疗药敏性实验,行原发灶和转移灶P-gP和GST-π免疫组化染色.结果 ①肿瘤原发灶和淋巴结转移灶中P-gp和GST-π表达一致率较低,分别为22%(k=-0.0133,P=0.8698)和50%(k=0.1137,P=0.1496);淋巴结转移灶中P-gP和GST-π表达强度均明显高于原发灶(Z=-3.0448,P=0.0023;Z=-2.1178,P=0.0034).②VCR、OPT、OXA、DDP、MTX对淋巴结转移灶肿瘤细胞抑制率明显低于原发灶(均P<0.05),仅VP-16对原发灶的抑制率明显低于转移灶(P=0.0406).③原发灶中P-gp表达程度与5-FU、VCR和PTX对肿瘤细胞抑制率呈负相关(r=-0.4142～-0.5712,均P<0.05),GST-π表达程度与5-FU、VCR、OPT和PTX的抑制率呈负相关(r=-0.3927～-0.4951,均P<0.05);转移灶中P-gP表达程度与VP-16、PTX和eADM对肿瘤细胞抑制率呈负相关(r=-0.3802～-0.4624,均P<0.05),GST-π表达程度与5-FU、VCR、DDP的抑制率呈负相关(r=-0.3996～-0.5345,均P<0.05).结论 消化道肿瘤淋巴结转移灶中P-gP和GST-π的表达以及对化疗药物的敏感性均存在与原发灶不同的异质性,淋巴结转移灶具有更强的耐药倾向.术后辅助化疗的靶目标应针对淋巴结转移灶.     

survivin和p53表达水平对直肠癌分级和预后影响分析

目的探讨survivin和p53表达水平对直肠癌分级和预后影响分析。方法选取2010年1月到2015年10月住院治疗的经组织病理确诊的直肠癌患者83例,比较患者不同病理分化程度、TNM分期、DUKEs临床分期的survivin和p53阳性表达率的差异;以及不同survivin和p53表达结果的生存时间分析。用SPSS16.0软件进行统计分析数据,survivin和p53阳性表达率用(%)表示,采用卡方检验;二者阳性表达率与直肠癌不同分期的相关性分析用Spearman法;不同survivin和p53表达结果的生存时间分析用kaplan-Meier法,P0.05表示差异具有统计学意义。结果 83例患者中survivin表达阳性49例,阴性34例,阳性率为59.04%;p53表达阳性57例,阴性26例,阳性率为68.67%。survivin和p53在病理分化程度高、TNM分期高的患者中阳性表达率较高,病理分化程度、TNM分期与survivin和p53表达阳性率呈正相关。survivin阳性表达的患者5年随访期中位生存时间44个月显著的低于survivin阴性表达的患者的48个月(log-rankχ~2=10.955,P=0.001);p53阳性表达的患者5年随访期中位生存时间42个月显著低于p53阴性表达的患者的46个月(log-rankχ~2=6.128,P=0.013)。结论 survivin和p53的阳性表达与直肠癌分级和生存时间密切相关。     

生存素反义寡核苷酸联合 P53基因抑制胃癌细胞的生长作用

目的 研究生存素（survivin）反义寡核苷酸联合抑癌基因P53对人胃癌细胞系HS-746T的抑制作用及机制。方法 用P53基因和设计合成的survivin反义寡核苷酸（ASODN）对胃癌细胞系HS-746T进行处理，分空白对照组、反义survivin转染组，P53基因组，反义survivin加P53共转染组。采用细胞计数和四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖能力及细胞生长速度，用RT-PCR技术和Western印迹法分析survivin mRNA及蛋白质的表达情况，末端原位标记染色法（TUNEL）分析细胞凋亡指数。结果 不同时间反义survivin转染组、P53基因组和共转染组均对胃癌细胞的生长有抑制作用，且能够下凋胃癌细胞survivin mRNA和蛋白质的表达，共转染组较单独用药组效应明显增强，共转染组胃癌细胞凋亡指数高于另外两组。结论 Survivin反义寡核苷酸联合P53基因抑制人胃癌细胞的生长及诱导凋亡的作用大于单独应用一种药物。     

Tumour grade, proliferation, apoptosis, microvessel density, p53, and bcl-2 in prostate cancers: differences between tumours located in the transition zone and in the peripheral zone

OBJECTIVES: Transition zone (TZ) carcinomas of the prostate are thought to have less malignant potential than tumours that arise in the peripheral zone (PZ). It is unclear, however, whether this can be put down to anatomical reasons alone, or if there are further differences between tumours of both zones. METHODS: We examined Gleason scores, proliferation and apoptosis rates, microvessel density (MVD), p53 expression and bcl-2 expression in 76 paraffin-embedded radical prostatectomy specimens, containing 54 tumour foci in the TZ and 58 tumour foci in the PZ, matched for volume. The terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP-biotin nick end labelling (TUNEL) method was applied to detect apoptotic cells. Proliferation, MVD, p53, and bcl-2 were investigated by immunohistochemistry. RESULTS: There were significant differences between TZ tumours and PZ tumours in terms of the median Gleason scores (5 versus 7; P < 0.0001), the proliferation rate (3.2% versus 5.2%; P = 0.0003), and the MVD (68.5 versus 104; P = 0.0002), but the median apoptosis rate was quite similar (0.8% versus 0.9%). The p53 and bcl-2 expression were more frequent in PZ cancers as compared to TZ carcinomas (11% versus 2% and 27% versus 6%, respectively). CONCLUSION: There is evidence for lower Gleason scores as well as lower expression of markers related to tumour growth in TZ carcinomas of the prostate, which might contribute to a less malignant clinical behaviour as compared to PZ cancers.     

热疗诱导人肝癌细胞HepG2凋亡及机制的研究

目的探讨不同温度热疗对人肝癌细胞Hep G2的凋亡作用。方法人肝癌Hep G2细胞常规方法培养,采用水浴加热法对实验组(41℃,42℃,43℃)和对照组(37℃)细胞进行加温(0.5 h)处理,处理后继续培养24 h。采用流式细胞术检测细胞的凋亡情况,免疫组织化学技术检测细胞凋亡相关蛋白P53的水平,实时荧光定量PCR法检测热疗作用后生存素(Survivin),caspase-9基因mRNA的表达变化。应用SPSS16.0软件进行统计学分析。凋亡率、P53蛋白值、caspase-9 mRNA表达水平等计量资料采用均数±标准差表示,组间比较采用t检验或方差分析。P0.05差异有统计学意义。结果在37℃,41℃,42℃,43℃,细胞凋亡率分别为(9.58±1.22)%、(16.47±3.41)%、(20.07±1.85)%和(23.42±1.93)%;P53蛋白表达OD值分别为(0.083±0.015)、(0.145±0.024)、(0.267±0.031)、(0.389±0.019)。与对照组比较,survivin基因mRNA的表达量下降(P0.05),caspase-9基因mRNA的表达显著增加(P0.05)。不同温度热疗后,随着加热温度的增高,细胞凋亡率增加,促进了基因p53及caspase-9的表达,凋亡抑制基因survivin的表达量下降。结论通过热疗可以增加p53及caspase-9基因的表达,抑制survivin基因的表达,从而诱导肝癌Hep G2细胞凋亡。     

p53、bcl-2和nm23基因在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的　研究胃癌组织中bcl 2、p5 3和nm2 3基因的表达及其与临床病理的关系 ,探讨bcl 2、p5 3和nm2 3基因与胃癌生物学行为的相关性。方法　采用免疫组化方法对 80例胃癌组织、3 7例不典型增生癌旁组织及 2 0例正常胃粘膜组织中的bcl 2、p5 3和nm 2 3基因的表达情况进行检测。 结果　bcl 2蛋白在胃癌癌旁轻、中、重度不典型增生组织中的表达阳性率分别为 7.1%、18.1%和 2 5 .0 % ,其在各组间表达的差异无统计学意义 (P>0 .0 5 ) ,bcl 2蛋白在高分化胃癌组织中的表达阳性率为 78.2 % ,明显高于在低分化胃癌组织中的表达 (4 8.5 % ,P<0 .0 5 )。p5 3在高分化胃癌组织中的表达阳性率为 72 .5 % ,明显低于低分化胃癌组织的 86.2 % (P<0 .0 5 )。nm 2 3在高分化胃癌组织中的表达阳性率为84.3 % ,明显高于低分化胃癌组织的 17.2 % (P<0 .0 5 )。伴有淋巴结转移的胃癌组织中nm 2 3的表达阳性率为 5 4.5 % ,低于无淋巴结转移者的表达阳性率 (85 .7% ,P<0 .0 5 )。p5 3与bcl 2在胃癌组织中的表达呈明显负相关。结论　bcl 2、p5 3和nm 2 3的表达与胃癌细胞的分化程度密切相关 ,对患者预后有重要参考价值。     

联合评估survivin和p53在胃癌组织中表达的临床意义及对预后的影响

目的 研究胃癌原发灶中survivin和p53的表达与临床病理特征,恶性潜能及预后的影响。方法 免疫组化法检测125例行根治切除胃癌组织中survivin和p53表达情况,采用单因素和多因素分析比较survivin和p53表达及其共同表达与临床病理特征和预后关系。结果 survivin和p53表达阳性率各自为57．6％（72例／125例）和59．2％（74例／125例）。survivin阳性表达率在弥漫型和组织分化差（均P〈0．01）、肿瘤浸润更深、有淋巴结转移、淋巴管浸润及进展期（P〈0．05）胃癌组织中显著增高。p53表达与淋巴结转移和淋巴管浸润（P〈0．037）相关。单因素分析显示,survivin和p53表达阳性分别与5年生存率有关（P=0．0050和P=0．0025）。多因素分析显示,survivin和p53共同表达患者预后更差（P=0．001）。结论 survivin和p53在胃癌组织中均有较高的表达率,survivin阳性表达和p53阳性表达分别提示预后不良,survivin和p53共同表达为胃癌根治术后独立的预后因子。