复方芪参提取物对瘢痕疙瘩成纤维细胞迁移侵袭和周期的影响

目的：探讨复方芪参提取物对瘢痕疙瘩成纤维细胞迁移侵袭和周期的影响。方法：对瘢痕疙瘩成纤维细胞进行培养,使用不同浓度的复方芪参提取物(10 mg/L、20 mg/L、40 mg/L)处理瘢痕疙瘩成纤维细胞48 h,将瘢痕疙瘩成纤维细胞分为对照组与实验组,实验组分为：低浓度组,中浓度组及高浓度组,对照组不用复方芪参提取物处理。通过MTT检测复方芪参提取物对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响;Transwell检测复方芪参提取物对瘢痕疙瘩成纤维细胞迁移、侵袭的影响;流式细胞术检测复方芪参提取物对瘢痕疙瘩成纤维细胞细胞周期的影响;Western Blot检测复方芪参提取物对瘢痕疙瘩成纤维细胞VEGF、MMP9、Cyclin D1、p53蛋白表达的影响。结果：复方芪参提取物处理瘢痕疙瘩成纤维细胞48 h后,随着复方芪参提取物浓度的增加,低、中及高浓度组细胞的增殖抑制率逐渐升高,迁移数及侵袭数逐渐降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,低、中及高浓度组在G0/G1及G2/M期的阻滞率明显上升,S期的阻滞率明显下降;且低、中及高浓度组瘢痕疙瘩成纤维细胞VEGF、MMP9、Cyclin ...     

雷帕霉素对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的通过体外细胞培养实验,观察雷帕霉素对瘢痕疙瘩及正常皮肤成纤维细胞增殖、迁移和凋亡的影响,探讨雷帕霉素用于治疗瘢痕疙瘩的可能性及有效性。方法在无菌条件下切取人瘢痕疙瘩和正常皮肤组织,分离培养其成纤维细胞;实验分为不同浓度雷帕霉素(2.5、5.0、7.5、10.0μmol/L)处理组和DMSO溶剂对照组。分别采用MTS法、划痕法和Annexin V-PI染色检测不同浓度雷帕霉素对两种成纤维细胞增殖、迁移和凋亡的影响。结果雷帕霉素能够抑制两种成纤维细胞的增殖,且对正常皮肤成纤维细胞增殖的抑制作用更强,其浓度越高抑制效率越高;能够显著抑制两种成纤维细胞的迁移,并明显诱导正常皮肤成纤维细胞的凋亡,且高浓度(10.0μmol/L)雷帕霉素处理组的凋亡率最高,但对瘢痕疙瘩成纤维细胞的凋亡作用不明显。结论雷帕霉素可以抑制两种成纤维细胞的增殖和迁移,诱导成纤维细胞的凋亡;雷帕霉素对成纤维细胞的影响,可能成为预防瘢痕疙瘩等纤维化疾病的有效药物。     

五倍子、蜈蚣对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的探讨五倍子、蜈蚣对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原合成的影响及意义.方法用MTT法和3H-脯氨酸掺入法检测不同药物浓度、作用时间的五倍子和蜈蚣对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原蛋白合成的影响;用光镜和电镜观察五倍子、蜈蚣作用后瘢痕成纤维细胞的形态及细胞器超微结构变化.结果五倍子和蜈蚣能抑制瘢痕成纤维细胞的增殖及胶原蛋白的合成(P＜0.01),其抑制作用与剂量和时间有关.最佳浓度为10μg/ml,五倍子在作用后72h,蜈蚣在作用后48h,抑制作用最强,抑制率分别为89%和92%.五倍子、蜈蚣能明显影响成纤维细胞形态和超微结构(细胞核、线粒体、粗面内质网等).结论五倍子、蜈蚣能明显抑制瘢痕成纤维细胞增殖和胶原蛋白的合成.为临床应用中草药治疗增生性瘢痕提供了理论依据.     

五倍子、蜈蚣对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的　探讨五倍子、蜈蚣对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原合成的影响及意义。方法　用MTT法和3 H-脯氨酸掺入法检测不同药物浓度、作用时间的五倍子和蜈蚣对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原蛋白合成的影响 ;用光镜和电镜观察五倍子、蜈蚣作用后瘢痕成纤维细胞的形态及细胞器超微结构变化。结果　五倍子和蜈蚣能抑制瘢痕成纤维细胞的增殖及胶原蛋白的合成 (P <0 .0 1) ,其抑制作用与剂量和时间有关。最佳浓度为 10μg/ml,五倍子在作用后 72h ,蜈蚣在作用后 4 8h ,抑制作用最强 ,抑制率分别为 89%和 92 %。五倍子、蜈蚣能明显影响成纤维细胞形态和超微结构 (细胞核、线粒体、粗面内质网等 )。结论　五倍子、蜈蚣能明显抑制瘢痕成纤维细胞增殖和胶原蛋白的合成。为临床应用中草药治疗增生性瘢痕提供了理论依据     

姜黄素对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的:观察姜黄素对体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原合成的作用,以寻找治疗人瘢痕疙瘩的有效药物。方法:体外培养人瘢痕疙瘩成纤维细胞,分别应用MTT比色法和羟脯氨酸比色法检测姜黄素作用后细胞增殖及胶原合成的变化。结果:和对照组相比,姜黄素能够显著抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖及胶原合成(P<0.01)。结论:姜黄素具有体外抗瘢痕疙瘩的作用,可能成为治疗瘢痕疙瘩的有效药物。     

大黄素对人增生性瘢痕成纤维细胞的增殖及细胞周期作用的实验研究

目的观察大黄素对体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及细胞周期的作用,以寻找治疗人增生性瘢痕的有效药物。方法将切取于增生性瘢痕患者的瘢痕组织标本分成A（对照组）、B、C、D四组,每组6个标本,行体外成纤维细胞培养,采用0、50、100、200μg/ml的大黄素依次对A、B、C、D组的成纤维细胞进行干预,应用MTT比色法和流式细胞仪检测细胞增殖和细胞周期的变化。结果B、C、D组标本中成纤维细胞的增殖受到抑制,抑制于G0/G1期（P〈0.05）,与A组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。而且大黄素在50～200μg/ml的范围内,对成纤维细胞增殖的抑制有浓度的依赖性。结论大黄素具有体外抗纤维化作用,可能成为治疗人增生性瘢痕的有效药物。     

姜黄素体外抗人增生性瘢痕纤维化的实验研究

目的:观察姜黄素对体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及胶原合成的作用,以寻找治疗人增生性瘢痕的有效药物。方法:体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞,分别应用MTT比色法和3H-脯氨酸掺入法检测姜黄素作用后细胞增殖及胶原合成的变化。结果:和对照组相比,姜黄素能够显著抑制成纤维细胞增殖及胶原合成(P<0.05)。结论:姜黄素具有体外抗瘢痕纤维化的作用,可能成为治疗增生性瘢痕的有效药物。     

RNA干扰Survivin基因表达对瘢痕疙瘩中成纤维细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨RNA干扰Survivin基因表达对癜痕疙瘩成纤维细胞增殖与凋亡的影响,为瘢痕疙瘩的基因治疗提供实验依据.方法 构建靶向Survivin的siRNA表达质粒,利用Lipofectamine TM 2000转染体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞;采用RT-PCR、Western blot技术检测成纤维细胞中Survivin基因的被干扰情况及Caspase-3基因的表达情况;利用MTT法、流式细胞仪检测成纤维细胞的增殖与凋亡情况.结果 靶向Survivin的序列特异件的siRNA对成纤维细胞中Survivin基因表达的抑制率:在mRNA水平为59.86%和82.57%,在蛋白质水平分别为48.76%和72.53%.Caspase-3基因的表达和活性显著增加(P＜0.01).转染靶向Survivin的RNAi表达质粒对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的抑制较显著(P＜0.05).Annexin V-FITC/P1双染法显示,干扰Survivin基因表达后成纤维细胞的调亡率高于对照组(56.36%,P＜0.05).结论 所构建的靶向Survivin的RNAi质粒可有效地抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞中Survivin基因的表达,通过Survivin基因表达的下调激活Caspas-3基因活性,可显著抑制成纤维细胞的增殖并诱导其凋亡,为瘢痕疙瘩的基因治疗开辟一新途径.     

氧化苦参碱对病理性瘢痕成纤维细胞增殖凋亡的影响

目的观察氧化苦参碱（oxymatrine,OM）对人病理性瘢痕成纤维细胞增殖、凋亡、细胞周期及细胞外信号调节激酶1（ERK1）的影响,并且与瘢痕治疗常规药物氢化可的松（hydrocortisone,HC）的作用进行比较。方法原代的瘢痕疙瘩、增生性瘢痕和正常皮肤的成纤维细胞（KFb、HFb、NFb）采用组织块培养法培养,将氧化苦参碱（2×10-6mol/L）、氢化可的松（5.5×10-9mol/L）分别作用于KFb、HFb、NFb,用四甲基偶氮唑蓝微量酶反应比色法（MTT）检测细胞增殖活力,流式细胞仪检测细胞凋亡、细胞周期、ERK1的变化。结果 OM能明显抑制KFb、HFb和NFb的增殖活性（抑制率分别为12%,14%,10%）,促进KFb的凋亡（增加72%）。HC明显抑制KFb、HFb、NFb的增殖（抑制率分别为21%,21%,15%）,并促进其凋亡（分别增加184%、121%和148%）。上述改变均有统计学意义。OM、HC对三种细胞的细胞周期及ERK1表达无显著作用。结论类似氢化可的松,氧化苦参碱通过抑制瘢痕疙瘩、增生性瘢痕、正常皮肤成纤维细胞的增殖和促进瘢痕疙瘩成纤维细胞的凋亡作用而可能应用于瘢痕疙瘩和增生性瘢痕的治疗。     

MTT法检测国产PGA支架对人成纤维细胞增殖的影响

目的 检测国产PGA支架对瘢痕、皮肤和肌腱成纤维细胞增殖的影响.方法 体外培养人瘢痕、皮肤和肌腱成纤维细胞,取第二代细胞接种到96 孔板,以不同浓度的国产PGA支架浸提液培养,用MTT法检测成纤维细胞在国产PGA上的增殖情况.结果 不同浸提液培养的瘢痕、皮肤和肌腱成纤维细胞的生长曲线均无明显差异.结论 国产PGA支架对瘢痕、皮肤和肌腱成纤维细胞的增殖无明显影响,该材料可以用于以成纤维细胞为种子的组织构建.     

不同程度缺氧对体外培养的瘢痕成纤维细胞增殖的影响

目的探讨不同程度缺氧对瘢痕成纤维细胞增殖的影响.方法取体外培养的皮肤瘢痕成纤维细胞,分别在20%、10%、5%和1.5%四种氧浓度条件下培养24 h后,进行细胞计数、PCNA免疫组织化学检测.结果随着氧浓度的降低,皮肤瘢痕成纤维细胞数目逐渐增加,PCNA的表达强度逐渐增强.结论缺氧可促进皮肤瘢痕成纤维细胞增殖,减轻缺氧可能有助于预防瘢痕增生.     

不同程度缺氧对体外培养的瘢痕成纤维细胞增殖的影响

目的探讨不同程度缺氧对瘢痕成纤维细胞增殖的影响。方法取体外培养的皮肤瘢痕成纤维细胞,分别在20%、10%、5%和1.5%四种氧浓度条件下培养24h后,进行细胞计数、PCNA免疫组织化学检测。结果随着氧浓度的降低,皮肤瘢痕成纤维细胞数目逐渐增加,PCNA的表达强度逐渐增强。结论缺氧可促进皮肤瘢痕成纤维细胞增殖,减轻缺氧可能有助于预防瘢痕增生。     

消瘢醑对瘢痕疙瘩成纤维细胞I、III型胶原蛋白的影响

目的研究复方中药制剂消瘢醑对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞(Keloid fibroblast,KFB)I、III型胶原蛋白的影响. 方法 6例瘢痕疙瘩成纤维细胞为实验组,6例正常皮肤成纤维细胞(Normal fibroblast,NFB)为对照组,采用成纤维细胞体外培养、ABC免疫细胞化学染色技术及积分光密度(IOD)分析,观察在10μg/ml消瘢醑浓度作用下,瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞I、III型胶原蛋白的表达. 结果瘢痕疙瘩成纤维细胞I、III型胶原阳性染色表达强度均显著高于正常皮肤成纤维细胞(11113.1±1304.9 vs 3519.6±236.0与11157.7±1300.3 vs 2626.5±426.3,t值分别为14.42和13.47,P值分别为0.00003和0.00004).10μg/ml浓度的消瘢醑作用48小时后:1.瘢痕疙瘩成纤维细胞I、III型胶原阳性染色表达强度均显著高于正常皮肤成纤维细胞(7675.4±825.5 vs 2305.2±320.4与10595.2±1311.5 vs 2434.8±356.9,t值分别为13.37和12.66,P值分别为0.00004和0.00005);2.瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞呈阳性表达的I、III型胶原染色强度明显下降,与未经药物处理的相应空白对照相比具有显著性差异(7675.4±825.5 vs 11113.1±1304.9与10595.2±1311.5 vs 11157.7±1300.3,t值分别为10.31和4.68,P值分别为0.0001和0.0054).瘢痕疙瘩组I型胶原蛋白合成抑制率30.7%,III型胶原蛋白合成抑制率为5.1%. 结论在I、III型胶原蛋白表达方面,体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞明显高于正常皮肤成纤维细胞;"消瘢醑"能显著抑制体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞和正常皮肤成纤维细胞I、III型胶原蛋白的表达,并以抑制I型胶原表达为主.     

川芎嗪对成纤维细胞增殖及TGF-β_1和bFGF表达的影响

目的:研究川芎嗪对体外培养大鼠成纤维细胞增殖及碱性成纤维细胞因子(Basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)、转化生长因子β_1(Transforminggrowthfactorβ_1,TGF-β_1)表达的影响,从而探讨川芎嗪抑制瘢痕形成的作用机制。方法:体外分离培养大鼠皮肤成纤维细胞,采取MTT法及荧光染色检测不同浓度的川芎嗪对大鼠成纤维细胞增殖能力的影响,ELISA法测定大鼠皮肤瘢痕成纤维细胞TGF-β_1和bFGF的表达量。结果:在三种川芎嗪浓度条件下(1mg/ml,10mg/ml,50mg/ml),大鼠皮肤成纤维细胞增殖能力有不同程度的抑制作用,抑制作用与川芎嗪浓度成正比,在50mg/ml浓度时,抑制作用最为明显。采用ELISA法测定培养上清TGF-β_1和bFGF的分泌量,发现实验组两者含量均明显低于对照组,其中浓度为50mg/ml时,含量最低(P0.05)。结论:川芎嗪能够明显抑制体外培养的大鼠皮肤成纤维细胞的增殖能力,降低TGF-β_1和bFGF的表达量,从而在一定程度上抑制大鼠皮肤成纤维细胞的活性。     

异泽兰黄素通过PDGFβ/ERK信号通路抑制增生性瘢痕生长的机制探讨

目的:探讨异泽兰黄素(Eupatilin)介导PDGFβ对增生性瘢痕成纤维细胞增殖抑制作用的分子机制。方法:应用组织贴壁法从增生性瘢痕和正常皮肤组织中分离增生性瘢痕和正常皮肤成纤维细胞,Westernblot法检测PDGFβ在增生性瘢痕和正常皮肤成纤维细胞中的表达,通过脂质体转染pcDNA3.1-PDGFβ构建PDGFβ过表达增生性瘢痕成纤维细胞,CCK8法检测过表达PDGFβ对异泽兰黄素抑制增生性瘢痕成纤维细胞活力的影响,流式细胞仪检测过表达PDGFβ对异泽兰黄素促进增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的影响,Westernblot法检测过表达PDGFβ对异泽兰黄素调控细胞内p-ERK、Bcl2和Bax蛋白表达的影响。结果:免疫组化和Westernblot结果表明,与正常皮肤组织和成纤维细胞比较,增生性瘢痕组织和成纤维细胞中PDGFβ高表达;CCK8结果显示,与空载对照组(pcDNA31-control)比较,PDGFβ过表达组瘢痕成纤维细胞活力显著升高(P0.05);流式细胞术检测结果表明,与对照组pcDNA3.1-control+Eupatilin比较,pcDNA3.1-PDGFβ+Eupatilin组增生性瘢痕成纤维细胞凋亡率显著降低(P0.05);Westernblot结果显示,PDGFβ过表达能显著促进p-ERK和Bcl2的表达增加,抑制Bax蛋白表达(P0.05),与对照组相比具有显著统计学差异。结论:异泽兰黄素可抑制增生性瘢痕PDGFβ蛋白的表达,通过抑制PDGFβ/ERK通路诱导细胞凋亡。     

氨甲喋呤对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的:探讨氨甲喋呤对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成的影响。方法:以体外培养的人瘢痕成纤维细胞为实验模型,将氨甲喋呤(10-9mol/L、10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L)加入细胞培养液中进行干预并与空白对照组比较,用乳酸脱氢酶实验检测药物的细胞毒性,并通过MTT实验和羟脯氨酸测定实验分别检测药物对成纤维细胞增殖活性和胶原合成的影响。结果:10-6mol/L、10-5mol/L的氨甲喋呤对成纤维细胞的生长有抑制作用,与对照组比较差异有显著性(P<0.01),10-9mol/L～10-5mol/L的氨甲喋呤对瘢痕成纤维细胞胶原合成具有抑制作用(P<0.01)。结论:氨甲喋呤在体外对瘢痕成纤维细胞细胞增殖和胶原合成具有抑制作用。     

几丁糖对增生性瘢痕和瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的作用

目的:探讨几丁糖对增生性瘢痕和瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的作用。方法:用组织块法进行瘢痕疙瘩、增生性瘢痕及正常皮肤成纤维细胞的体外培养;MTT比色法和流式细胞仪检测法分别检测不同浓度几丁糖对不同来源成纤维细胞生长增殖和细胞周期的影响。结果:各组成纤维细胞增殖明显受抑制,几丁糖的浓度和细胞OD值改变之间存在剂量-效应关系,各组成纤维细胞G_0 G_1期的细胞百分比增多,S期G_2 M期的细胞百分比减少,减少率各组无显著差异(P>0.05),S期G_2 M期的细胞百分比减少率有显著差异(P<0.05)。结论:几丁糖对正常皮肤及增生性瘢痕和瘢痕疙瘩来源的成纤维细胞的生长增殖均有抑制作用,有望在瘢痕的防治中发挥重要作用。     

三羟基异黄酮对增生性瘢痕成纤维细胞增殖与胶原合成作用的影响

目的探讨5,7,4′-三羟基异黄酮对体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及胶原合成作用的影响。方法以不同浓度三羟基异黄酮处理体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞分为25、50、100μmol/L三组,以加DMSO溶剂为对照组,MTT法测定成纤维细胞的增殖,3H-脯氨酸掺入法测定细胞胶原合成情况,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达。结果三羟基异黄酮能有效抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖及胶原合成(P<0.05),且具有剂量-效应关系;100μmol/L浓度组作用后,与对照组相比,差异有显著意义(P<0.01);三羟基异黄酮作用后成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达显著下调(P<0.05)。结论三羟基异黄酮能抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖与活性,可能成为治疗瘢痕及纤维化疾病的有效药物。     

抗转化生长因子β1预防和治疗瘢痕疙瘩的研究

目的探讨anti-TGF-β1在体外及动物模型实验中对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原合成的影响及意义.方法用电镜观察anti-TGF-β1作用后体外培养及动物模型成纤维细胞的形态学变化,用MTT法和3H-脯氨酸掺入等方法,检测anti-TGF-β1对体外培养的成纤维细胞的增殖和胶原蛋白合成的影响;用免疫组化技术观测anti-TGF-β1对动物模型中瘢痕疙瘩Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的影响.结果 anti-TGF-β1能明显影响成纤维细胞的超微结构及抑制其增殖和胶原蛋白的合成(P＜0.01).抑制作用在10 μg/ml时最大,抑制率达72%.对动物模型中瘢痕疙瘩Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白有明显的抑制作用,胶原高表达率实验组为33.3%,对照组为88.9%(P＜0.01).结论在体外及动物模型实验中,anti-TGF-β1均能中和TGF-β1促进成纤维细胞增殖和胶原合成的作用,提示anti-TGF-β1将来可应用在临床预防治疗过度增生的瘢痕.     

消瘢醑对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响

目的探讨复方消瘢醑对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的作用,为中药治疗瘢痕提供实验依据. 方法以氢化可的松为实验对照,在体外培养的6例瘢痕疙瘩和6例正常皮肤成纤维细胞培养液中加入不同剂量的消瘢醑,利用3H-TdR掺入法检测12 h,24 h,48 h瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFB)和正常皮肤成纤维细胞(NFB)增殖活性.结果 10、100、1 000 μg/ml消瘢醑和1×10-7 mol/L氢化可的松在12、24、48 h均可抑制NFB和KFB的增殖,P＜0.05.氢化可的松对KFB的抑制作用与NFB相似.10 μg/ml和100 μg/ml消瘢醑对NFB和KFB增殖的抑制与氢化可的松相似. 结论消瘢醑能抑制成纤维细胞的增殖,可能起到治疗瘢痕过度增生的作用.