抗人肝癌细胞膜单克隆抗体HCMP－1的制备及其生物学特性的初步鉴定

用超选择免疫法，诱导ＢＡＬＢ／ｃ小鼠对正常人肝细胞抗原产生选择性低免疫反应后，二步腹腔注射人肝癌细胞悬液，２～４周后用人肝癌细胞作强化免疫动物１次，取出脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞用ＰＥＧ法融合制备杂交瘤。采用细胞抗原ＥＬＩＳＡ法，同时测定培养上清对肝癌细胞及正常肝细胞的免疫反应，筛出一株能稳定分泌抗人肝癌细胞膜抗原的单克隆抗体（ＨＣＭＰ－１ＭＡｂ）的杂交瘤细胞株。ＨＣＭＰ－１ＭＡｂ是一种ＩｇＧ２ａ亚型的单抗，它与ＨＢｓＡｇ、ＨＢｃＡｇ、ＨＢｅＡｇ等乙型肝炎病毒相关抗原无交叉免疫反应，与ＡＦＰ－亦无阳性反应。免疫萤光法证实ＨＣＭＰ－１ＭＡｂ对ＱＧＹ－７７０３、ＢＥＬ－７４０２及ＳＭＭＣ－７７２１等人肝癌细胞株呈阳性反应。改良ＡＢＣ免疫组织化学证明ＨＣＭＰ－１ＭＡｂ与肝细胞癌组织呈阳性反应。说明ＨＣＭＰ－１ＭＡｂ对肝癌反应的阳性率较高，特导性较好。超选择免疫法，先联合应用免疫抑制药物使动物对正常肝细胞抗原产生低免疫反应性。再以肝癌细胞免疫时，有利于动物免疫系统对肿瘤相关抗原的识别及特异性抗体的产生。从而提高了杂交瘤制备的成功率。我们认为这一方法在单抗制备方面有较高的应用价值。     

抗人肝癌细胞膜单克隆抗体HCMP—1的制备及其生物学特性的初步鉴定

用超选择免疫法，诱导ＢＡＬＢ／ｃ小鼠对正常人肝细胞抗原产生选择性低兔疫反应后，二步腹腔注射人肝癌细胞悬液，２－４周后用人肝癌细胞作强化免疫动物１次，取出脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞用ＰＥＧ法融合制备杂交瘤。采用细胞抗原ＥＬＩＳＡ法，同时测定培养上清对肝癌细胞及正常肝细胞的免疫反应，筛出一株能稳定分泌抗人肝癌细胞膜抗原的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，ＨＣＭＰ－１ＭＡｂ是一种ＩｇＧ２亚型的单抗，它与ＨＢｓ     

抗人肺腺鳞癌单克隆抗体的研制

将人肺腺癌细胞ＳＰＣ、Ａ５４９、Ａ４２７序贯免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞ＳＰ２／０融合。获得一株稳定分泌抗肺腺鳞癌单克隆抗体的杂交瘤细胞株──Ｓ５Ａ１０─２，制备了小鼠腹水抗体并进行了纯化，腹水效价为１．０２×１０７，亚型测定为ＩｇＧ１．免疫组化分析ｓ５Ａ１０－２单抗与肺腺、鳞癌和肺鳞癌有较好的选择反应性，与正常组织无交叉反应，ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ测定Ｓ５Ａｌ０─２在ＳＰＣ细胞膜上的抗原分子量为４０Ｋｄ、５０Ｋｄ和８０Ｋｄ，在Ａ５４９，细胞膜上的抗原分子量为４３Ｋｄ，而与Ａ４２７细胞膜蛋白无明显反应。该抗体的亲和常数为８．４３×１０１０Ｍ－１，Ｓ５Ａ１０－２杂交瘤细胞株，经液氮冻存后复苏，其分泌抗体能力不受影响。     

Lectin在单克隆抗体相应抗原研究中的应用

外源性凝集素作为肿瘤碳水化合物抗原研究的理想工具已引起人们的重视。本研究用外源性凝集素对４株胃癌单克隆抗体相应抗原进行了分离、鉴定和检测。首先用刀豆凝集素亲和层析分离胃癌组织Ｎ－糖苷型糖蛋白，并用单抗检测证实单抗ＭＧｄ１，ＭＧ７、ＭＧｂ１、ＭＧｃ１相应抗原均能被刀豆凝集素识别，其中ＭＧｄ１、ＭＧ７也可被ＰＨＡ－Ｅ所识别。Ｌｅｃｔｉｎ－ＭＧ夹心ＥＬＩＳＡ法检测提示四种单抗抗原在肿瘤患者血清中均有分布     

免疫聚合酶链反应技术的建立及其对胃癌细胞上MG_7－Ag的检测

作者首次报道将聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术用于检测非核酸物质－胃癌相关抗原，建立了免疫－ＰＣＲ技术。首先制备胃癌单抗及重组ＤＮＡ的嵌合体即ＭＧ７—ｐＸＪ１９，以将抗原抗体反应的专一性同ＰＣＲ技术的高敏感性相结合，构建一种集ＡＢＣ及ＰＣＲ一体的双重放大系统。利用这种技术检测胃印戒细胞癌株ＫＡＴＯⅢ肿瘤相关抗原，并与ＥＬＩＳＡ法比较其敏感性。结果表明应用免疫－ＩＣＲ技术ＫＡＴＯⅢ细胞数目在２０个时即可出现阳性结果，敏感性较ＥＬＩＳＡ法高出１０４倍。若以０．２５％戊二醛固定相同数量（２×１０６／ｍｌ）ＫＡＴＯⅢ细胞后加入不同浓度的ＭＧ７－ｐＸＪ１９嵌合体，则免疫－ＰＣＲ检测结果呈阳性时所需ＭＧ７－ｐＸＪ１９为３．８×１Ｏ－１４ｍｏｌ，而ＥＬＩＳＡ法需３．０×１０－１１ｍｏｌ。研究结果表明，免疫－ＰＣＲ技术可用于肿瘤相关抗原的检测，具有高敏感性，高特异性，结果稳定且重复性满意。     

6种肿瘤细胞株细胞B7.1分子的表达及其意义

目的：观察肿瘤细胞株细胞共刺激分子Ｂ７．１的表达情况，并为进一步进行体外研究Ｂ７．１分子功能提供模型。方法：用ＳＡＢＣ免疫细胞化学方法研究６种肿瘤细胞株细胞Ｂ７．１的表达。结果：ＢＬＺ２２１（人膀胱癌细胞株）、Ａ３７５（人黑色素瘤细胞株）阴性外，其余四株细胞－７７２１（人肝癌细胞株）、ＢＬＳ２１１（人膀胱癌细胞株）、ＧＲＣ１（人肾癌细胞株）、ＭＧＣ（人胃癌细胞株）均呈阳性染色反应，阳性细胞胞膜被染成棕黄色。结论：本研究中的大多数肿瘤细胞株细胞表达Ｂ７．１分子；Ｂ７．１阳性细胞株细胞可用于体外研究Ｂ７．１分子功能。     

食管癌转移淋巴结放免显像定位的研究

目的：为放射免疫显像在诊断食管癌淋巴结转移中的应用,提供基础研究支持。方法：（１）免疫组化（ＬＳＡＢ法）测定不同组织冷冻切片和抗人食管鳞癌单抗Ｇ９的反应;（２）＾１２５Ｉ标记Ｇ９,形成标记化合物,在荷食管癌裸鼠腹腔注射＾１２５Ｉ－Ｇ９后的连续３天内,测定各主要组织、器官的放射性。结果：（１）ＩＳＡＢ显示,食管癌原发灶和转移淋巴结呈阳性反应,正常食管和无转移淋巴结阴性。（２）＾１２５Ｉ－Ｇ９在裸鼠体     

抗末端脱氧核苷酰转移酶单克隆抗体的制备及其生物学特性的初…

本文用提纯的小牛胸腺末端脱氧核苷酰转移酶为免疫原，经一次融合，建立了３株能稳定分泌抗小牛胸腺ＴｄＴ单克隆抗体的杂交瘤细胞株。３株单抗均为ＩｇＧ１抗体；抗体相加试验证明抗ＴｄＴ２和抗ＴｄＴ３识别ＴｄＴ的同一表位，而抗ＴｄＴ１则识别另一表位；３株单抗识别的抗原分子量均为５８．８ｋＤ；与人白血病细胞株及各型白血病细胞的反应谱３株单抗和进口抗ＴｄＴ单抗基本一致。提示这３株单抗有可能替代进口抗ＴｄＴ单抗，供     

抗HBx单抗应用于肝癌导向治疗的实验研究

本研究应用基因工程技术制备的１７ＫＤ乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）Ｘ蛋白（ＨＢｘＡｇ）免疫动物，成功地制备了抗－ＨＢｘ单克隆抗体，以此抗体对原发性肝癌（ＨＣＣ）组织行相应抗原检测，并同时进行乙型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）及乙型肝炎病毒核心抗原（ＨＢｃＡｇ）的检测。在ＨＣＣ标本中，ＨＢｘＡｇ在癌内及癌周肝组织中的阳性率分别为５６％及４８％，ＨＢｓＡｇ为１６％，及７４％。ＨＢｃＡｇ仅见于癌周，阳性率仅为１８％。结果显示：ＨＢｘＡｇ在ＨＣＣ标本中的表达是ＨＢＶ标志物中最活跃的。在此基础上还进行了１３１Ｉ－ＨＢｘ单抗在荷人肝癌裸鼠体内的放射分布研究，给药后第７天瘤／血比值为１．５，瘤／肝比值为４．５，而对照组为０．４４及１．０４，表明１３１Ｉ－ＨＢｘ单抗对肝癌组织有较强的特异性亲和力，有可能成为新的载体用于肝癌的导向治疗     

抗末端脱氧核苷酰转移酶单克隆抗体的制备及其生物学特性的初步鉴定

本文用提纯的小牛胸腺末端脱氧核苷酰转移酶（ＴｄＴ）为免疫原，经一次融合，建立了３株能稳定分泌抗小牛胸腺ＴｄＴ单克隆抗体（单抗）的杂交瘤细胞株（命名为抗ＴｄＴ１、ＴｄＴ２和ＴｄＴ３）。３株单抗均为ＩｇＧ１抗体；抗体相加试验证明抗ＴｄＴ２和抗ＴｄＴ３识别ＴｄＴ的同一表位，而抗ＴｄＴ１则识别另一表位；３株单抗识别的抗原分子量均为５８．８ｋＤ；与人白血病细胞株及各型白血病细胞的反应谱３株单抗和进口抗ＴｄＴ单抗基本一致。提示这３株单抗有可能替代进口抗ＴｄＴ单抗，供国内使用。     

谷胱甘肽S转移酶在进展期胃癌中的表达及意义

谷胱甘肽Ｓ转移酶（ＧＳＴ）是第二相药物代谢酶与癌的发生发展以及耐药性的产生密切相关。在３５例进展期胃癌中用ＬＳＡＢ法同时检测（ＧＳＴ－π、Ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白和Ｋｉ６７抗原并分析其相互关系，观察了ＧＳＴ－π表达和胃癌病理形态改变的关系。结果表明胃癌组织中ＧＳＴ－π阳性率为５７．１％与Ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白，Ｋｉ６７抗原表达相关，同时ＧＳＴ－π阳性表达的胃癌大部分表现为浸润型生长累及浆膜并伴淋巴结转移     

应用银染端粒重复序列扩增法检测人肝癌细胞系端粒酶活性的研究

观察人肝癌细胞的端粒酶活性。应用非放射同位素银染的端粒重复序列扩增法（ＴＲＡＰ），检测６株人肝癌细胞株（ＢＥＬ－７４０２，ＨｅｐＧ２，ＱＧＹ－７７０１，ＱＧＹ－７７０３，ＳＭＭＣ－７７２１，ＰＬＣ／ＰＲＦ／５）的端粒酶活性，同时检测ＲＮａｓｅ处理的阴性标本。６株人肝癌细胞的端粒酶均为阳性。人肝癌细胞系的端粒酶常呈阳性     

基因工程改造鼠源性抗人脑胶质瘤单克隆抗体的初步报告

为了提高人脑胶质瘤导向诊治中单抗载体的临床实用价值，必须把鼠源性大分子单抗改造成人源化、小分子单抗。采用ＲＴ－ＰＣＲ法，从人脑胶质瘤单抗杂交瘤细胞系ＳＺ３９中克隆出３４８ｂｐ的重链可变区（ＶＨ）和３１８ｂｐ的轻链可变区（ＶＬ）ｃＤＮＡ片断。又采用重组ＤＮＡ技术，将ＶＨ和ＶＬ与人免疫球蛋白ＩｇＧ１重链ＣＨ１和轻链κ恒定区基因拼接，或将ＶＨ和ＶＬ以通用Ｌｉｎｋｅｒ直接连接，分别构建表达载体ｐＨＥＮ１－ＳＺ３９Ｆａｂ／Ｈｕ（嵌合抗体）和ｐＨＥＮ１－ＳＺ３９ＳｃＦｖ（单链抗体）。而后将此二载体转染至非抑制性大肠杆菌ＨＢ２１５１中表达。结果表明，两者的表达产物均为可溶性，以ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔ－ｅｒｎｂｌｏｔ法检测，均与人脑胶质瘤体外细胞系ＳＨＧ４４细胞膜表面抗原发生特异结合，与亲本抗体ＳＺ３９特异识别１８００００膜抗原的条带相一致。该结果显示，基因工程改造的人源化、小分子单抗为今后的临床应用展示了美好的前景。     

肿瘤组织石蜡切片的P53表达方法探讨

本文应用Ｐ５３单抗以ＤＯ—１在石蜡切片上对７１例各种肿瘤组织进行了免疫组化染色，其中２０例作了ＰＡｂ１８０１单抗、增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）比较、染色，同时观察了五种固定液、三种免疫组化方法对Ｐ５３表达的影响。结果Ｐ５３ＤＯ—１阳性为３３例／７１例。ＰＡｂ１８０１１９／２０例阳性，ＰＡｂ１８０１阳性为高。Ｐ５３高水平的免疫反应与ＰＣＮＡ增高相呼应、在固定液中以常规福尔马林和中性福尔马林为最佳。免疫组化染色首选ＡＢＣ法，它较ＬＳＡＢ法内源色素酶着色少且背景清晰而染色后的切片较ＡＰＡＡＰ法保存长久。上述结果提示：石蜡切片中检测Ｐ５３蛋白时固定液、免疫组化方法、Ｐ５３抗体的不同均直接影响阳性率的检出。     

真核表达载体ｐＩＲＥＳ２-ＥＧＦＰ-ＫＡＩ１的构建及其在胆管癌细胞的表达

目的　构建真核表达载体ｐＩＲＥＳ２-ＥＧＦＰ-ＫＡＩ１,并在胆管癌细胞系ＱＢＣ９３９中进行表达。方法　采用ＲＴ-ＰＣＲ法从人胆管组织中克隆ＫＡＩ１基因,连接Ｔ载体并测序正确后与真核表达载体ｐＩＲＥＳ２-ＥＧＦＰ连接,经ＥｃｏＲⅠ和ＳａｌⅠ双酶切鉴定后通过脂质体法转染ＱＢＣ９３９细胞中,用荧光显微镜检测细胞中增强型绿色荧光蛋白（ＥＧＦＰ）的表达,用免疫组化染色的方法检测细胞中ＫＡＩ１的表达。结果　成功构建真核表达载体ｐＩＲＥＳ２-ＥＧＦＰ-ＫＡＩ１,用脂质体法转染胆管癌细胞ＱＢＣ９３９后,经荧光显微镜和免疫组化染色法检测可见细胞内有ＥＧＦＰ及ＫＡＩ１的表达。结论　真核表达载体ｐＩＲＥＳ２-ＥＧＦＰ-ＫＡＩ１构建成功并在胆管癌细胞ＱＢＣ９３９中得到稳定表达,为研究ＫＡＩ１对肿瘤的生物学作用以及ＫＡＩ１在肿瘤基因治疗中的应用奠定了基础。     

直空负压LSAB和ABC法的应用比较

目的比较真空负压标记链亲和素－生物素（ＬＳＡＢ）法和真空负压亲和素－生物素一过氧化物酶复合物（ＡＢＣ）法在免疫组织化学中的应用价值。方法病理科存档蜡块大肠癌、胃癌、肝癌、乳腺癌等恶性肿瘤共２００例和淋巴结反应增生１０例，同时作真空负压ＬＳＡＢ和真空负压ＡＢＣ两种方法并进行比较。结果前法每种抗体的孵育时间仅５ｍｉｎ，全过程为６０ｍｉｎ，就可达到抗原显示出清晰的棕黄色阳性颗粒。在敏感性方面，前法抗原抗体的结合更加迅速。抗体稀释度，二抗和三抗前法为１：８００，后法为１：６００。结论真空负压ＬＳＡＢ法具有比真空负压ＡＢＣ法需时更少、效果更好、阳性物反应更强等优点。     

基质降解酶u—PA,PAl—1与人肺癌细胞浸润转移的相关关系的研究

观察体外细胞株ＰＧ，ＰＡａ细胞的ｕ－ＰＡ，ＰＡＩ－１活性和抗原表达，结果发现ＰＧ，ＰＡａ细胞均能够产生ＰＡ及ＰＡＩ，免疫细胞化学法定位ＰＡ主要为ｕ－ＰＡ，ＰＡＩ主要为ＰＡＩ－１，在ＰＧ为ｕ－ＰＡ高表达，而ＰＡａ为低ｕ－ＰＡ表达ＰＡＩ－１在ＰＧ，ＰＡａ细胞听高表达，对ＰＧ瘤细胞在ＢＡＬＢ／ＣＡ裸鼠皮下种植性瘤组织的免疫组化结果显示，ｕ－ＰＡ阳性～强阳性表达，ＰＡＩ－１为阴性表达，说明ｕ－ＰＡ是ＰＧ，     

用抗独特型抗体主动免疫增强鼻咽癌放疗病人的免疫功能

针对鼻咽癌细胞膜抗原制备了一株单克隆抗体（Ａｂ１），且又对该（Ａｂ１）可变区制备了一株单抗（Ａｂ２），此Ａｂ２能象鼻咽癌细胞膜抗原一样与Ａｂ１可变区的抗原结合位结合，因此在功能上Ａｂ２能够模拟原抗原，刺激机体的免疫系统。用该Ａｂ２对鼻咽癌放疗病人作主动免疫治疗，并设放疗加生理盐水注射对照组。检测了血清中人抗鼠抗体（ＨＡＭＡ）的产生情况，并检测了治疗前后各项体液免疫指标，包括抗Ａｂ２抗体（Ａｂ３）和抗鼻咽癌细胞抗体（Ａｂ１）水平以及各项细胞免疫指标，包括血清中细胞因子ＴＮＦ－α、ＩＬ－２、ＩＦＮ－γ的水平和外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）ＩＬ－２ｍＲＮＡ的表达。结果表明，与对照组相比，鼻咽癌抗独特型抗体能使鼻咽癌放疗病人的免疫指标上升，有增强免疫功能的作用，可能是一种有益的辅助疗法。     

介导多种胃癌杀伤效应的双功能抗体

作者设计了一种带有“通用接头”的ｂｓＭＡｂ，即制备抗胃癌及抗半抗原ＴＮＰ的ｂｓＭＡｂ，它可介导多种经ＴＮＰ化的肿瘤杀伤因子。采用分泌抗胃癌单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤变异株３Ｈ１１—ＨＡＴｓ与经ＫＬＩ－ＴＮＰ免疫的Ｂａ１ｂ／ｃ小鼠脾细胞进行融合，经筛选及克隆化共获得１０株二次杂交瘤，它们均能分泌与胃癌靶细胞ＢＧＣ８２３及ＢＳＡ－ＴＮＰ呈双阳性反应的抗体。但桥联法测定表明，只有二次杂交瘤１Ｇ７（γ２ｂ，γ２ｂ）及６Ａ３（γ２ｂ，μ）分泌ｂｓＭＡｂ。实验表明，ｂｓＭＡｂ６Ａ３和１Ｇ７可介导不同性质的经ＴＮＰ化的肿瘤杀伤剂，如蓖麻毒素、人血清白蛋白与丝裂霉素的偶联物，及牛血清白蛋白与阿霉素的偶联物。研究结果还表明，桥联法在确认ｂｓＭＡｂ中具有重要意义。分泌双特异性抗体的二次杂交瘤上清中不一定含有ｂｓＭＡｂ。一般认为γ链与μ链不可能组合形成ｂｓＭＡｂ，但本研究通过亚类分析、桥联法测定及体外细胞毒试验证实，二次杂交瘤６Ａ３分泌的ｂｓＭＡｂ确是由μ链与γ２ｂ链组合而成，这是一个新的发现。     

噬菌体抗体库的构建及抗肿瘤单抗的筛选

鼠源抗肿瘤单抗通常用杂交瘤技术制备。作者首次尝试以噬菌体抗体库技术替代杂交瘤方法制备抗肿瘤鼠单抗。以ＲＴ－ＰＣＲ方法直接从免疫Ｂａ１Ｂ／ｃ小鼠脾脏淋巴细胞扩增出全套免疫球蛋白重链Ｆｄ段及轻链基因，克隆到原核表达载体并将抗体片断Ｆａｂ表达于线状噬菌体表面，构建了噬菌体抗体库（１．０×１０￣７）。以人乳腺癌细胞系Ｂｃａｐ３７活细胞为靶抗原对噬菌体抗体库进行的４轮亲和筛选显示了噬菌体抗体的特异性富集。从第４轮筛选后选取１８２个克隆进行ＥＬＩＳＡ检测发现１７４个具有与肿瘤细胞结合活性。用１２种人肿瘤细胞系及人淋巴细胞和成纤维细胞对所获克隆进行了进一步鉴定。我们所应用的方法为抗肿瘤单抗的制备提供了一条更为有效的新途径。