抗原致敏树突细胞增强细胞因子诱导杀伤细胞抗胃癌的效应

目的 观察抗原致敏树突细胞(DC)与细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)共培养体内外抗胃癌(SCC-7901)的效应.方法 取健康供者外周血体外诱导培养DC和CIK,应用噻唑蓝(MTT)法测定比较(每组n=3)单纯CIK(CIK组)、DC诱导CIK(DC-CIK组)和经胃癌抗原致敏的DC诱导CIK(抗原-DC-CIK组)体外对SGC-7901的杀伤活性,并利用SGC-7901建立胃癌裸鼠模型,设立PBS对照组,比较各组(每组n=5)瘤体体积、抑瘤率和肿瘤坏死面积评分.结果 成熟DC与CIK共培养第7天时,DC-CIK扩增倍数为17.8±2.0,约为单纯CIK扩增倍数(10.9±1.8)的1.63倍(P＜0.05);抗原-DC-CIK组、DC-CIK组、CIK组,体外实验中效靶比为20:1时对SGC-7901的杀伤活性分别为:(72.3±0.5)%、(53.9±0.7)%、(46.4±0.4)%(P均＜0.01);体内动物实验中抑瘤率分别为30.02%、18.11%、15.94%(P均＜0.01).结论 SGC-7901抗原致敏DC能增加CIK的扩增数量,增强CIK对SGC-7901的杀伤作用.     

胆管癌全抗原致敏树突状细胞和细胞因子诱导杀伤细胞共培养体外抑瘤活性研究

目的通过胆管癌全抗原致敏树突状细胞(DC)联合细胞因子诱导杀伤细胞(CIK),探讨DC-CIK细胞的形态改变及增殖情况,检测抗原致敏DC-CIK细胞的抗肿瘤活性。方法分离人外周血单个核细胞(PBMC)后取贴壁细胞作为前体DC,悬浮细胞用于CIK培养;经rhGM-CSF、rhIL-4、rhTNF-α诱导DC成熟;成熟DC中加入胆管癌细胞株RBE肿瘤抗原进行致敏,作为抗原致敏DC组;经rhIL-2、IL-1β诱导CIK成熟;按DC CIK=1:10、1:20、1:40的比例进行混合培养;流式细胞术检测DC表面标记(CD86、CD83、CD40、HLA-DR、CD1α、CD80);流式细胞术检测CIK、未致敏DC-CIK、致敏DC-CIK共培养细胞表面标记(CD3、CD8、CD56);采用萤火虫萤光素酶法检测CIK、未致敏DC-CIK、致敏DC-CIK抑瘤率;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法对细胞因子IL-12、IFN-γ的表达水平进行检测。结果 DC-CIK细胞共培养,流式细胞学技术检测表型发现抗原致敏DC-CIK组的CD3~+CD8~+和CD3~+CD56~+细胞亚型表达均为最高,其次为未致敏DC-CIK组,最低为CIK组。效靶比为20:1和40:1时,致敏DC-CIK组的抑瘤率明显高于未致敏DC-CIK组和CIK组(P0.05),而效靶比为10:1时,CIK组、未致敏DC-CIK组、致敏DC-CIK组的抑瘤率差异无统计学意义。抗原致敏DC较抗原未致敏DC及诱导前DC细胞状态好,生长增殖迅速。在抗原致敏后,致敏DC-CIK组的细胞因子IL-12、IFN-γ表达水平明显高于未致敏DC-CIK组和CIK组(P0.05)。结论体外异体胆管癌全抗原可有效致敏健康人体DC细胞分化成熟,表型及增殖能力提高。使用体外致敏DC-CIK共培养作为效应细胞,具有较高的增殖率,在效靶比相同的情况下,抗原致敏DC-CIK对RBE有更强的杀伤性活性。     

树突状细胞与细胞因子诱导杀伤细胞共培养体外抗肾癌的效应

细胞因子诱导杀伤细胞（CIK）为非特异性杀伤免疫效应细胞，杀伤活性有待提高。树突状细胞（DC）是目前发现的功能最强的专职抗原提呈细胞（APC），可诱发抗原特异性免疫应答。本研究旨在探讨肾癌（RCC）肿瘤冻融抗原致敏的DC与CIK共培养后能否提高DC-CIK细胞对RCC的特异性杀伤活性。     

K-ras突变多肽负载的DC细胞增强CIK细胞对胰腺癌细胞的杀伤作用

目的：观察经K-ras（12-Val）突变多肽负载的树突状细胞（DC）与细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）共培养以后对胰腺癌PANC-1细胞的杀伤作用。 方法：取健康人外周血体外诱导分别扩增出DC和CIK;用K-ras突变体抗原表位肽负载DC（K-ras-DC）,将单纯DC或K-ras-DC与CIK共培养,获得DC-CIK或K-ras-DC-CIK。比较CIK与K-ras-DC-CIK的增殖活性;分别分析DC与K-ras-DC以及CIK与K-ras-DC-CIK的免疫表型差异;检测CIK、DC-CIK、K-ras-DC-CIK上清液中IFN-γ、IL-12的水平;检测K-ras-DC-CIK、DC-CIK、CIK对PANC-1细胞的体外杀伤力。 结果：K-ras-DC-CIK的增殖能力明显强于单纯CIK（P<0.05）;K-ras-DC的成熟表面分子CD1a、CD80、CD83、HLA-DR的表达明显高于单纯DC,而K-ras-DC-CIK细胞群的CD3+CD8+、CD3+CD56+表达率明显高于单纯CIK细胞群（均P<0.05）;上清液中IFN-γ、IL-12的水平以及对PANC-1细胞的杀伤力由高到低均依次为K-ras-DC-CIK、DC-CIK、单纯CIK（均P<0.05）。 结论：K-ras突变多肽负载后能促进DC的成熟,负载K-ras突变多肽后的DC能增加CIK的增殖及对胰腺癌细胞的杀伤作用。     

异源骨髓间充质干细胞抑制树突状细胞活化杀伤细胞的增殖

目的 通过共培养异源的人骨髓间充质干细胞和树突状细胞活化的细胞因子激活的杀伤细胞(DC-CIK细胞),观察DC-CIK细胞的细胞周期,初步探讨骨髓间充质干细胞的免疫调节机制.方法 采用Ficoll密度梯度离心法分离、培养健康骨髓间充质干细胞和外周血单个核细胞,用多种细胞因子诱导培养外周血单个核细胞中贴壁和悬浮细胞分别为树突状细胞和杀伤细胞.将骨髓间充质干细胞与DC-CIK细胞以1∶5,1∶10,1∶20共培养4 d,采用流式细胞术检测DC-CIK细胞的细胞周期.结果 骨髓间充质干细胞呈长梭形,表达CD+29CD+444双阳性的细胞为93.6%,实验选用第三代后的细胞.在培养第9天树突状细胞表达CD1α人类白细胞Ⅱ类抗原(HLA-DR+)]双阳性细胞数为98.5%.DC-CIK细胞表达CD+3CD+56的细胞数为(29.2±12.2)%.骨髓间充质干细胞使DC-CIK细胞滞留在G0/G1期,且与细胞比例呈正相关.以1∶5,1∶10,1∶20的比例共培养4 d的DC-CIK细胞的G0/G1期和S期分别为(91.0±3.3)%和(2.8±0.6)%,(88.7±3.0)%和(5.1±2.8)%,(83.7±1.7)%和(8.7±3.4)%.对照组(同步化DC-CIK细胞)为(73.4±1.0)%和(17.4±0.6)%.结论 骨髓间充质干细胞可通过抑制DC-CIK细胞的细胞周期而发挥免疫调节作用.     

胃癌肿瘤裂解物修饰的树突状细胞体外诱导抗原特异性细胞毒T淋巴细胞

目的　利用树突状细胞呈递肿瘤抗原的特性提高细胞毒T淋巴细胞 (CTLs)对胃癌细胞的杀伤活性。方法　胃细胞癌患者外周血来源的有核细胞体外经GM -CSF和IL -4诱导产生树突状细胞 ,负载肿瘤裂解物后诱导自体CTLs产生。用细胞毒试验检测CTLs杀伤活性 ,和用ELISA测定细胞因子的分泌。结果　胃癌患者自体来源的DC裂解物能诱导产生的CTLs对自体胃癌细胞具有高杀伤率 ,可达 83 % ;致敏的DC组中IL -12与TNF -α的浓度 ( 1161± 2 3 9pg/ml,10 44± 3 12 pg/ml)显著高于未致敏的DC组 ( P <0 .0 5 )。结论　DC能呈递胃癌裂解物 ,诱导产生抗原特异性CTLs。     

抗原致敏白细胞介素-2基因修饰的树突状细胞对肿瘤术后自发性肺转移的抑制作用

目的探讨主要组织相容性复合物(MHC I)类肿瘤抗原多肽体外致敏、白细胞介素(IL)-2基因修饰的树突状细胞(DC)对小鼠恶性肿瘤切除术后自发性肺转移的体内抑制效果及相关免疫机制.方法用小鼠Lewis肺癌3LL细胞株MHC Ⅰ类肿瘤抗原八肽Mut1致敏IL-2基因修饰的DC(DC-IL-2-Mut1)2×106/ml免疫小鼠,用3LL细胞每只5×106/ml皮下荷瘤,观察免疫保护情况;并用抗CD4+、CD8+和NK1.1+单克隆抗体体内阻断免疫细胞亚群,探讨DC-IL-2-Mut1在小鼠体内诱导的特异性抗肿瘤机理.用DC-IL-2-Mut1给小鼠肿瘤自发性肺转移模型尾静脉注射,观察对肺转移的抑制效果.结果免疫小鼠荷瘤后第20天,磷酸盐缓冲液(PBS)对照组肿瘤直径为(20.0±2.0)mm,DC-IL-2-Mut1免疫组未见肿瘤生长.抗CD8+单克隆抗体能部分阻断其免疫保护作用,而抗CD4+和CD8+单抗联合应用,能完全阻断DC-IL-2-Mut1在小鼠体内诱导的特异性免疫效应,抗CD4+和抗NK+细胞单抗有一定的阻断效果.荷瘤截肢术后20 d,对照组小鼠肺重量为(1 105.0±113.0)mg,肺表面转移结节为(48.8±4.5)个;DC-IL-2-Mut1组肺重为(213.0±28.5)mg,肺表面肉眼未能看到转移结节,生存期较其他各组明显延长.结论IL-2基因修饰能显著增强MHC I类肿瘤抗原多肽致敏的DC体内免疫后诱导小鼠特异性抗肿瘤免疫应答,抑制恶性肿瘤术后的肺转移,CD8+T细胞在诱导过程中起重要作用.     

树突状细胞联合细胞因子诱导的杀伤细胞对原发性小肠恶性黑色素瘤生长及肝转移的抑制作用

目的 探讨树突状细胞(DC)与同源细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)共培养后对小肠恶性黑色素瘤生长和肝转移的抑制作用.方法 提取健康献血者、小肠恶性黑色素瘤患者外周血单核细胞,常规诱导出DC细胞与CIK细胞后,按照1∶5比例共培养14 d获得DC-CIK细胞.取原发性小肠恶性黑色素瘤手术切除的肝转移灶新鲜瘤组织块植入裸鼠小肠黏膜层,建立小肠恶性黑色素瘤肝转移模型.将56只裸鼠原位移植人小肠恶性黑色素瘤72 h后,分成7组,每组8只:(1)对照组;(2)丝裂霉素组;(3)健康人CIK细胞组;(4)健康人DC-CIK细胞组;(5)小肠恶性黑色素瘤自体CIK细胞组;(6)小肠恶性黑色素瘤自体DC-CIK细胞组;(7)小肠恶性黑色素瘤自体DC-CIK细胞+丝裂霉素组.对照组裸鼠注射生理盐水,其余各组裸鼠尾静脉注射相应的效应细胞,每只0.3 ml,细胞数为6×107个,丝裂霉素注射剂量为400 μg,每天1次,连续28 d.停药后72 h处死动物,切取肿瘤称质量,并检查肿瘤生长及肝转移情况.多组比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD法,率的比较采用x2检验.结果 成功建立小肠恶性黑色素瘤肝转移模型(HSIM-0603).对照组、丝裂霉素组、健康人CIK细胞组和DC-CIK细胞组、小肠恶性黑色素瘤患者自体CIK细胞组和DC-CIK细胞组及DC-CIK细胞+丝裂霉素组的肿瘤质量分别为(1.18±0.17)、(0.71±0.06)、(0.68±0.15)、(0.43±0.08)、(0.67±0.07)、(0.37±0.08)、(0.20±0.05)g;抑瘤率分别为0、39.82%、42.37%、63.56%、43.22%、68.64%、83.05%;肝转移分别为8、8、5、4、4、3、2只,各组比较,差异有统计学意义(F=152.300,x2=200.538,94.325,P＜0.05).结论 小肠恶性黑色素瘤肝转移模型可用于小肠恶性黑色素瘤的发病机制、侵袭、转移及治疗的研究,DC-CIK细胞治疗能抑制小肠恶性黑色素瘤的生长和肝转移.     

CD4+CD25+Treg细胞对肿瘤特异性CTL杀伤效果的影响

目的 探讨CD4+CD25+Treg细胞对肿瘤特异性细胞毒T细胞(CTL)杀伤效果的影响及机制.方法 将C57BL/6小鼠80只随机分为4组,每组20只.A组:树突状细胞(DC)与T细胞共同培养前删除CD4+CD25+Treg;B组:DC与T细胞共同培养后删除CD4+CD25+Treg;C组:DC与T细胞共同培养时不删除CD4+CD25+Treg;对照组:无DC诱导的T细胞.应用脾脏来源DC细胞诱导T细胞制备CTL,在CTL形成的不同时期采用MACS法删除CD4+CD25+Treg.应用噻唑蓝(MTY)比色法检测不同组别CTL对B16黑色素瘤细胞的杀伤效果.同时应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞培养液中白细胞介素(IL)-2、干扰素(IFN)-γ含量变化.结果 3组实验组CTL杀伤率明显高于对照组(P<0.05).删除CD4+CD25+Treg的A组、B组CTL杀伤率明显高于未删除的C组(P<0.05).但CTL形成的不同时期删除CD4+CD25+Treg对CTL杀伤率的影响无统计学意义(P>0.05).IL-2、IFN-γ含量变化与杀伤率呈现相同的变化趋势.结论 删除CD4+CD25+Treg细胞可明显提高CTL的杀伤效果,是消除肿瘤免疫耐受机制的新途径.     

双特异性单链抗体介导的CIK细胞对结肠癌的体内杀伤作用

目的 观察双特异性单链抗体介导的细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)细胞在体内杀伤结肠癌细胞的作用.方法 将SW1116细胞种植裸鼠后,建立裸鼠结肠癌模型,分为3组分别经尾静脉注入生理盐水、CIK细胞及CIK细胞+双特异性抗体,每周治疗1次,共4周,取出肿瘤组织称重,并计算出各组的抑瘤率.结果 在体内,CIK组和CIK+双抗组均可抑制肿瘤生长,抑瘤率分别为29.70%和65.02%,与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).CIK组和CIK+双抗组的瘤体积、瘤重、抑瘤率比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 CIK细胞本身可以抑制肿瘤细胞的生长,在加入抗CD3抗癌胚抗原(CEA)双特异性单链抗体后抑瘤作用明显增强.

Abstract：

Objective To investigate the killing effect of cytokine-induced killer cell (CIK) mediated by bispecific single-chain antibody in vivo on colon cancer cells. Methods The colon cancer model in nude mice was established with SW1116 cells. The mice were divided into 3 groups, which were injected with normal saline, CIK cells and CIK cells + bispecific antibody, respectively, once a week for 4 weeks. The tumors were removed and weighed, and the tumore inhibition rate in each group was calculated. Results The CIK cells and CIK cells with bispecific single-chain antibody could both inhibit tumor growth in vivowith the tumor inhibition rate being 29. 70% and 65.02% respectively ( P ＜ 0. 05 ). There was significant difference in tumor inhibition rate between CIK cells and CIK cells with bispecific single-chain antibody ( P ＜ 0. 05 ). Conclusion CIK cells alone can inhibit tumor cell growth, CIK cells in combination with bispecific single-chain antibody can exert more significant antitumor effect.     

乳腺癌树突状细胞瘤苗对自体CIK细胞生物活性的影响

目的探讨乳腺癌树突状细胞瘤苗（DCs）对自体CIK细胞生物活性的影响。方法取诱导7d的活化DCs瘤苗和诱导7d的自体CIK细胞混合培养（DC—CIK细胞）,同期自体CIK细胞为对照组。检测2、8、14d的DC—CIK细胞CD3与CD56表型、培养上清液IL．12的水平及测定混合培养8d时对乳腺癌细胞MCF．7的细胞毒效应。结果混合培养14d的DC-CIK细胞增殖率显著高于CIK细胞（P〈0．01）,但CD3和CD56表型无显著变化（P〉0．05）。DC—CIK细胞对MCF-7乳腺癌细胞的特异性溶解率和细胞毒活性均高于CIK细胞（P〈0．01）：CIK细胞强烈刺激DCs分泌IL-12．混合培养2d时,DCs的IL-12p40分泌水平达到高峰。结论乳腺癌DCs瘤苗与自体CIK细胞混合培养后（DC—CIK细胞）,进一步促进了DCs的成熟并增强了CIK细胞的细胞毒活性。     

双链蛋白聚糖对胃癌细胞生长作用研究

目的:研究双链蛋白聚糖(biglycan,BGN)对人胃癌细胞系SGC-7901的细胞增殖、周期及凋亡等生长作用影响。方法:构建重组质粒pIRES2-EGFP/BGN,转染胃癌细胞株SGC-7901,获得胃癌稳转细胞株SGC-7901/BGN。通过细胞增殖实验(CCK-8法)、平板克隆实验、流式细胞技术,分别检察BGN过表达对SGC-7901细胞增殖、克隆形成、周期及凋亡的影响。结果:SGC-7901/BGN组胃癌细胞较SGC-7901/空载组生长明显抑制(P<0.01),细胞培养板形成的克隆数明显减少[(209.7±12.6)比(326.0±15.1)];同时过表达BGN可促进胃癌细胞的凋亡[(10.7±1.5)%比(5.3±1.1)%],且将细胞周期阻止在G1期[(55.7±2.1)%比(37.6±1.8)%]。结论:胃癌细胞过表达BGN可抑制胃癌细胞的增殖、克隆形成。BGN可能通过将细胞周期阻滞在G1期、诱导细胞凋亡,从而发挥其生长抑制的生物学效应。     

索拉非尼联合树突状细胞与细胞因子诱导的杀伤细胞对肝癌生长与侵袭转移的作用

目的探讨索拉非尼联合树突状细胞（DC）与细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）对肝癌生长与侵袭转移的作用。方法采集健康自愿者外周血50mL,体外培养健康成人细胞因子诱导的DC和CIK。160只雄性ICR小鼠建立H22肝癌细胞小鼠原位肝癌模型,采用随机数字表法分为4组：（1）生理盐水组：仅经胃灌注与索拉非尼组同等的生理盐水;（2）索拉非尼组：经胃灌注索拉非尼100μg/g,1次/d;（3）DC—CIK细胞组：经腹腔注射DC—CIK共培养细胞,1×10^7／只,1次／3d;（4）索拉非尼联合DC—CIK细胞组：经胃灌注索拉非尼,同时腹腔注射DC—CIK共培养细胞,剂量同前。每组40只,治疗3周。各组取20只处死,获取外周血和肝脏肿瘤组织。采用ELISA法检测AFP水平,HE染色检测肿瘤坏死程度,免疫组织化学染色分别检测肿瘤组织Ki-67和CD34表达。各组余下20只小鼠,观察生存时间。多组比较采用单因素方差分析,组问比较采用LSD检验。结果DC和CIK诱导、培养成功。生理盐水组、索拉非尼组、DC—CIK组和索拉非尼联合DC—CIK组AFP分别为（0．675±0．177）ng／L、（0．379±0．052）ng／L、（0．415±0．028）ng／L和（0．288±0．012）ng／L,4组比较,差异有统计学意义（F=0．415,P〈0．05）。生理盐水组肝内和腹腔转移数目分别为（21．2±1．3）个和（29．7±7．6）个,索拉非尼组分别为（16．4±1．6）个和（17．4±1．8）个,DC—CIK组分别为（20．2±1．7）个和（26．4±1．7）个,索拉非尼联合DC—CIK组分别为（15．2±1．3）个和（15．2±1．3）个,4组比较,差异有统计学意义（F=2．137,3．271,（P〈0．05）。生理盐水组、索拉非尼组、DC—CIK组和索拉非尼联合DC—CIK组抑瘤率分别为0、21％±3％、9％4-3％和24％±5％,4组比较,差异有统计学意义（F=3．715,P〈0．05）。生理盐水组、索拉非尼组、DC—CIK组和索拉非尼联合DC—CIK组生存时间分别为（18．2±2．5）d、（21．6±2．1）d、（24．3±2．8）d和（25．4±1．4）d,4组比较,差异有统计学意义（F=6．247,P〈0．05）。结论索拉非尼联合DC与CIK免疫治疗能够显著延长肝癌荷瘤小鼠生存时间,抑制肝肿瘤生长和转移。     

miR-622在胃癌细胞中的表达及其功能的研究

目的 研究miR-622在胃癌细胞中的表达,探讨miR-622在胃癌中的生物学功能.方法 采用实时荧光定量PCR检测miR-622在胃癌细胞中的表达,以胃癌细胞SGC-7901和NCI-N87为模型瞬时转染miR-622寡核苷酸前体或抑制体,通过克隆形成、侵袭和划痕实验验证其在胃癌细胞中的功能.结果 荧光定量PCR实验结果表明:miR-622在胃癌细胞SGC-7901中相对表达量为1.29±0.58,而在NCI-N87细胞中相对表达量为10.96±1.02.在SGC-7901细胞中转染了miR-622 寡核苷酸前体,克隆形成率为76％.划痕试验中愈合能力为(11±7)μm,胃癌细胞侵袭能力为(732±3)个,与对照组相比差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 miR-622能够促进胃癌细胞克隆形成、迁移和侵袭.     

腺病毒载体介导的早幼粒细胞白血病基因生长抑制因子诱导胃癌细胞凋亡的机制研究

目的 探讨腺病毒载体介导的早幼粒细胞白血病基因（PML）生长抑制因子诱导胃癌细胞凋亡作用的机制。方法 将人PML全长cDNA插入穿梭质粒pSGCMV，再与腺病毒骨架质粒pPE3共转染293细胞后获得重组病毒。用重组病毒感染胃癌细胞系SGC-7901，采用噻唑蓝比色法、流式细胞术以及免疫细胞化学法对p53和bcl-2在肿瘤细胞内的表达以及细胞凋亡的定性与定量指标进行检测。结果 经腺病毒介导的PML处理的SGC-7901细胞生长受到明显抑制，凋亡细胞发生率升高，且与MOI值呈正相关，MOI值由5增加到20，细胞的生长抑制率从22．4％增加到38．5％，而细胞凋亡率从37．2％增加到49．8％。经腺病毒介导的PML处理的SGC-7901细胞内p53蛋白表达较对照组明显增加，bel-2蛋白的表达则无明显变化。结论 腺病毒介导的PML对胃癌细胞的杀伤主要是通过诱导细胞凋亡，p53蛋白高表达为其诱发胃癌细胞凋亡的机制之一。     

FasL、B7-1联合基因修饰的胃癌细胞诱导抗胃癌主动免疫的研究

目的 探讨FasL、B7-1联合基因转移是否具有协同的抗肿瘤效应。方法 采用重组腺病毒载体将FasL、B7-1基因导入人胃癌细胞SGC-7901,G418阳性克隆筛选,流式细胞分析,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),显示FasL和B7-1的表达,并且通过Hoechst33342染色检测胃癌细胞凋亡;将携带 FasL和 B7-1基因的胃癌细胞(命名为 SGC-7901/FB-11)接种于 C57BL/6小鼠背部皮下,观测其致瘤性能;SGC-7901/FB-11致敏的小鼠对野生型瘤细胞是否具有免疫保护作用;用SGC-7901和 SGC-7901/FB-11细胞分别经腹腔免疫小鼠,得到腹腔浸润淋巴细胞及致敏脾细胞,MTT法检测其体外杀伤实验。结果 FasL和B7-1基因在胃癌细胞中获得高表达并可诱导胃癌细胞的凋亡,双基因转染的胃癌细胞的致瘤性明显下降;SGC-7901/FB-11诱导的细胞毒T淋巴细胞(CTL)对SGC-7901的杀伤活性显著高于野生型SGC-7901诱导的CTL对相同靶细胞的杀伤活性(P<0.05);SGC-7901/FB-11诱导的 CTL对 SGC-7901/FB-11的杀伤率显著高于对野生型 SGC-7901的杀伤率(P<0.05)。结论 FasL促进胃癌细胞凋亡,B7-1促进抗胃癌CTL的增殖、活化,在效应阶段两基因发挥着重要的协同作用。     

腺病毒介导的靶向蛋白激酶B1和环氧合酶2短发夹RNA抑制人胃腺癌细胞的侵袭和转移

目的 构建靶向性蛋白激酶B1(Aktl)和环氧合酶2(COX-2)短发夹RNA(shRNA)腺病毒载体,研究其对SGC-7901人胃腺癌细胞侵袭和转移的抑制效果.方法 构建腺病毒载体pGSadeno-Aktl+COX-2(rAd5-A+C)并体外转染SGC-7901人胃癌细胞株后,用实时定量PCR和蛋白印迹分别检测对照组SGC-7901、空载组rAd5-HK和治疗组rAd5-A+C中Aktl、COX-2 mRNA和蛋白质的表达,其中以对照组SGC-7901、空载组rAd5-HK作为阴性对照.用ELISA法分别检测它们的MMP-2和MMP-9含量;用Transwell法分析它们的侵袭和转移能力.结果 构建的rAd5-A+C重组腺病毒载体在转染SGC-7901细胞48 h后可显著抑制Aktl和COX-2 mRNA的表达,而治疗组rAd5-A+C的Aktl和COX-2蛋白表达量与对照组和空载组相比分别下调68.4%和60.2%(均P<0.01);rAd5-A+C组中MMP-2和MMP-9含量分别为(39.7±1.7)ng/ml(31.3±3.6)ng/ml,明显低于对照组SGC-7901(278.4±15.5)ng/ml(225.4±15.1)ng/ml和卒载组rAd5-HK(275.5±2.1)ng/ml、(226.0±23.3)ng/ml(P=0.01、P=0.021).结论 腺病毒介导的靶向性Aktl和COX-2shRNA可抑制人胃腺癌细胞的侵袭和转移.