H2O2对平滑肌细胞凋亡及p38MAPK活性的影响

目的：了解H2O2对兔血管平滑肌细胞（VSMC）p38蛋白激酶（p38MAPK)磷酸化的影响及其与细胞凋亡的关系。方法：取兔主动脉血管平浮雕肌细胞培养，加或不加H2O2孵育，用四甲基偶氮唑盐微量酶反应（MTT）法检测平滑肌细胞活性。以Western杂交检测p38MAPK磷酸化。结果：（1）随着H2O2浓度增加，VSMC活性呈剂量依赖性降低；（2）磷酸化p38MAPK的表达随H2O2浓度的增高而增加，且磷酸化的p38MAPK在H2O2作用后15min时达到峰值。（3）加用特异性的p38MAPK抑制剂SB203580后可显著降低p38MAPK的活化，并能逆转H2O2诱导细胞凋亡的作用。结论：H2O2通过激活p38MAPK而使平滑肌细胞凋亡增加，这也许是糖尿病患者更易患心血管疾病的原因之一。     

UV通过p38MAPK促进大鼠胶质瘤C6细胞凋亡

目的：探讨p38MAPK在紫外线损伤刺激细胞中的特异性信号转导作用。方法：流式细胞仪检测紫外线照射30min后1，2及4h的C6细胞周期变化和是否有凋亡发生；应用免疫细胞化学技术观察紫外线刺激前后p38MAPK在C6细胞中的表达强度和分布特征。结果：细胞周期结果显示1，2和4h后C1期细胞数分数各增多0．12，0．21和0．19，而S期细胞数分数减少0．10，0．14和0．15；各组的凋亡率分别是12％，49％和34％；未受刺激的细胞中，p38MAPK在胞质和胞核表达较弱；紫外线损伤作用2h后，细胞核区的染色强度即明显增强，而胞质区域的染色强度相对降低。结论：C6细胞受紫外线损伤后可通过p38MAPK通路发生凋亡。     

p38MAPK在细胞凋亡中的作用

丝裂素活化的蛋白激酶(mitogen-activated pro-tein kinase,MAPK)级联是细胞内重要的信号转导系统,参与细胞的生长、发育、分化和凋亡等一系列生理病理过程。在哺乳动物中,细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated protein kinase,ERK)亚族最先被发现和克隆,并已进行了比较详细的研究。近年来又鉴定了c—Jun氨基末端激酶(c—Jun N—ter-minal kinase,JNK),ERK5/大丝裂素活化蛋白激酶 l     

p38MAPK基因诱导胶质瘤细胞凋亡

目的 研究p38MAPK基因转染大鼠胶质瘤细胞系C6后对其生物学特性的影响。方法 利用脂质体介导法将p38MAPK基因导入大鼠胶质瘤细胞系C6中,用免疫细胞化学染色检测其在细胞转染前后的表达情况,用HE染色、流式细胞仪等方法研究其对细胞形态、粘着状况和生长周期的影响。结果 转染pCMV5-P38MAPK质粒组p38MAPK蛋白表达阳性,细胞形态发生变化,贴壁性降低,出现大量凋亡细胞。结论 转染p38MAPK基因可诱导胶质瘤细胞凋亡。     

高氧对幼鼠肺组织细胞凋亡及p38 MAPK丝裂原活化蛋白激酶的影响

目的 探讨高氧对幼鼠肺组织细胞凋亡及p38 MAPK丝裂原活化蛋白激酶表达的影响.方法 幼年Wistar大鼠90%氧气暴露建立高氧肺损伤模型,行肺组织病理学检查,应用TUNEL法检测肺组织的细胞凋亡,Western blot法检测p38 MAPK表达.结果 高氧暴露3 d可见肺组织水肿、出血、炎症细胞浸润等急性肺损伤改变.高氧3 d组的肺凋亡指数较空气对照组明显增加,凋亡发生的主要部位为肺泡、支气管上皮及血管内皮细胞.Westem blot结果显示高氧暴露1 d,肺组织的p38MAPK活性迅速升高,于第2天达到高峰,第3天活性有所下降,但仍高于空气对照组.结论 高氧暴露可以诱导肺组织发生细胞凋亡;高氧可以激活p38MAPK通路,参与高氧性肺损伤的调控;活化的p38MAPK可能参与了高氧诱导的肺组织细胞凋亡的调控.     

H_2O_2通过上调P38的活性而诱导PC12细胞凋亡

目的:探讨H2O2是否通过调节P38MAPK的活性而诱导PC12细胞凋亡。方法:碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡;Western-Blot测定磷酸化ERK1/2蛋白和磷酸化p38蛋白的表达。结果:作用PC12细胞24h后,20～80μmol/L的H2O2可呈浓度依赖性地诱导PC12细胞凋亡并增加PC12细胞P38磷酸化的水平;P38特异性抑制剂SB203580(10或20μmol/L)预处理30min可显著减轻40μmol/LH2O2对PC12细胞凋亡的诱导作用。结论:H2O2通过上调P38的活性而诱导PC12细胞凋亡。     

莱菔硫烷诱导人肝癌 HepG-2 细胞凋亡的 p38MAPK 途径研究

目的：探讨莱菔硫烷（sulforaphane, SFN）诱导人肝癌 HepG-2 细胞凋亡过程中,p38MAPK 途径的作用。方法：流式细胞仪检测 SFN 对 HepG-2 细胞凋亡率的影响,Western Blotting 方法检测细胞内 p38 及 p-p38 蛋白表达。结果：SFN可明显诱导 HepG-2 细胞凋亡,10、20、40 μmol/L SFN 作用 48 h 后,对 HepG-2 细胞的抑制率分别达到 27.42 %、46.53 %、58.92 %;10、20、40 μmol/L 的 SFN 可上调 HepG-2 细胞内 p-p38 蛋白的表达,而对 p38 的表达无明显影响。结论：SFN 可诱导 HepG-2细胞的凋亡,而且这一过程与阻断 p38MAPK 途径有关。     

丹参酮ⅡA对高糖培养的大鼠血管平滑肌细胞p38MAPK信号通路的影响

目的:观察丹参酮ⅡA对高糖诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响,分析该作用与氧化应激以及丝裂原活化蛋白激酶p38(p38 mitogen-activated protein kinases,p38 MAPK)信号通路的关系。方法:取第3代原代培养的大鼠血管平滑肌细胞建立高糖诱导细胞增殖模型,实验分为正常对照组、高糖组和丹参酮ⅡA组,BrdU掺入法测定血管平滑肌细胞的DNA合成水平;黄嘌呤氧化酶法、硫代巴比妥酸法分别测定细胞培养上清中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量;免疫印迹法(Westernblot)检测磷酸化p38MAPK蛋白表达。结果:高糖诱导的血管平滑肌细胞呈快速增殖状态,在10~25 mmol.L-1间增殖效应呈剂量依赖性;丹参酮ⅡA能抑制高糖诱导的血管平滑肌细胞增殖,提高高糖培养的细胞中SOD水平,降低MDA含量,减少p-p38MAPK蛋白的表达。结论:丹参酮ⅡA抑制高糖诱导的血管平滑肌细胞增殖,这可能与其能减少血管平滑肌细胞中的氧自由基,抑制p38MAPK信号通路有关。     

丹皮酚抑制脂多糖诱导的血管内皮细胞TNF-α释放对共培养体系中血管平滑肌细胞凋亡及p38 MAPK信号通路的影响

目的 观察丹皮酚（Paeonol,Pae）对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）损伤的大鼠血管内皮细胞（vascular endothelial cells,VECs）炎性因子释放及对血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）凋亡的影响,阐明Pae抑制VSMCs凋亡是否通过影响VECs释放的炎性因子调控p38 MAPK信号通路。方法 组织块预消化贴壁法原代培养VECs和VSMCs;Transwell小室建立VSMCs和VECs共培养体系;LPS诱导VECs损伤;MTT方法检测细胞存活率;ELISA检测VECs分泌肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-alpha, TNF-α）的水平;流式细胞仪检测VSMCs凋亡率;Western blotting检测VSMCs中p38 MAPK信号通路及凋亡相关蛋白表达。结果 与正常对照组比较,LPS可显著提高VECs分泌的TNF-α水平（P＜0.05）,明显升高共培养体系中VSMCs p38 MAPK信号通路蛋白及凋亡相关蛋白（p-MKK3/6、p-p38、p53和Cleaved caspase-3）水平（P<0.05）,显著提高VSMCs凋亡率（P<0.05）;与LPS刺激组比较,Pae可显著抑制VECs分泌的TNF-α（P＜0.05）,明显降低共培养体系中VSMCs p38 MAPK信号通路蛋白及凋亡相关蛋白（p-MKK3/6、p-p38、p53和Cleaved caspase-3）水平（P＜0.05）,显著降低VSMCs凋亡率（P＜0.05）。结论 Pae可抑制VECs释放TNF-α,从而抑制p38 MAPK信号通路,进而减少VSMCs凋亡。     

熊果酸抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用及其机制

目的： 研究熊果酸(UA)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的抑制作用,并探讨其对p38MAPK信号通路的影响。 方法： 高糖(葡萄糖,25 mmol/L)诱导VSMC增殖为模型,MTT法检测UA对细胞增殖的影响,Cell-based ELISA 测定UA对p38MAPK磷酸化水平变化,采用SABC免疫组化法测定UA对细胞c-fos蛋白表达水平的影响。 结果： UA(20,40 μmol/L)能抑制高糖诱导的VSMC增殖作用(P<0.05)。UA组p38MAPK的磷酸化水平明显低于葡萄糖模型组(P<0.05),且c-fos 的蛋白表达水平较模型组也明显降低。 结论： UA可以抑制大鼠VSMC增殖,此作用可能与其抑制p38MAPK信号传导通路激活,从而下调c-fos蛋白表达有关。     

p38 MAPK在小鼠睾丸出生后不同发育阶段的表达

目的：探讨p38 MAPK在小鼠睾丸出生后不同发育阶段的表达．方法：应用免疫组织化学SABC法检测1～7周龄小鼠睾丸p38MAPK的表达和定位．结果：在2周龄小鼠睾丸生精小管上皮中即可观察到p38MAPK免疫阳性反应，免疫反应阳性细胞为精原细胞；3，4和5周龄小鼠睾丸仅有个别生精小管上皮可见p38 MAPK免疫阳性反应；6，7周龄小鼠睾丸中p38 MAPK表达较丰富，免疫反应阳性细胞为精原细胞和初级精母细胞，免疫阳性反应物均主要位于细胞核内．在7周龄小鼠睾丸中还可见到部分间质细胞呈p38 MAPK阳性，免疫阳性反应物主要位于细胞质内．结论：p38 MAPK可能对生精细胞的增殖分化以及雄激素的分泌具有调控作用。     

The Relationship between p38MAPK and Apoptosis during Paclitaxei Resistance of Ovarian Cancer Cells

To investigate the relationship between p38 mitogen-activated protein kinase (p38MAPK) and cell apoptosis during the paclitaxel resistance of ovarian carcinoma cell lines, flow cytometry (FCM) and PI staining were employed to determine the effect of p38MAPK inhibitor SB203580 on the apoptosis of A2780/Taxol cells, a drug-resistant human ovarian carcinoma cell line. p38MAPK protein expression in SB203580-treated cells was immunochemically measured. The 50% inhibition concentration (IC(50)) of paclitaxel on A2780/Taxol cells was determined by MTT assay. MDR-1 mRNA, and expression of p38MAPK and phospho-p53 protein were detected by RT-PCR and Western blotting, respectively. The apoptosis rate of A2780/Taxol cells was (19.7+/-1.04)% 24 h after SB203580 treatment. A significant difference in apoptosis rate was found among experiment group, control group and untreated group (P<0.05). The relative reversal rate of A2780/Taxol cells to paclitaxel was (57.18+/-2.01)%. As compared with the control group and the untreated group, p38MAPK protein and MDR-1 mRNA in SB203580-treated cells was substantially decreased. The expression of p53 protein was significantly increased. It is concluded that p38MAPK pathway is related to paclitaxel resistance of ovarian carcinoma, and blockade of this pathway can promote the apoptosis of the drug-resistant cells and reverse the drug-resistance. Moreover, p38MAPK-mediated apoptosis in paclitaxel-resistant ovarian carcinoma cells depends on the activation of p53.     

The relationship between p38MAPK and apoptosis during paclitaxel resistance of ovarian cancer cells

Summary To investigate the relationship between p38 mitogen-activated protein kinase (p38MAPK) and cell apoptosis during the paclitaxel resistance of ovarian carcinoma cell lines, flow cytometry (FCM) and PI staining were employed to determine the effect of p38MAPK inhibitor SB203580 on the apoptosis of A2780/Taxol cells, a drug-resistant human ovarian carcinoma cell line. p38MAPK protein expression in SB203580-treated cells was immunochemically measured. The 50% inhibition concentration (IC₅₀) of paclitaxel on A2780/Taxol cells was determined by MTT assay. MDR-1 mRNA, and expression of p38MAPK and phospho-p53 protein were detected by RT-PCR and Western blotting, respectively. The apoptosis rate of A2780/Taxol cells was (19.7±1.04)% 24 h after SB203580 treatment. A significant difference in apoptosis rate was found among experiment group, control group and untreated group (P<0.05). The relative reversal rate of A2780/Taxol cells to paclitaxel was (57.18±2.01)%. As compared with the control group and the untreated group, p38MAPK protein and MDR-1 mRNA in SB203580-treated cells was substantially decreased. The expression of p53 protein was significantly increased. It is concluded that p38MAPK pathway is related to paclitaxel resistance of ovarian carcinoma, and blockade of this pathway can promote the apoptosis of the drug-resistant cells and reverse the drug-resistance. Moreover, p38MAPK-mediated apoptosis in paclitaxel-resistant ovarian carcinoma cells depends on the activation of p53. This project was supported by a grant from R&D program of Heilongjiang Province (No. GB05C402-11).     

乳腺癌p38表达及临床病理意义

目的 探讨有丝分裂原激活蛋白激酶p38、癌基因C-erbB-2和雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)在乳腺癌中的表达情况及临床意义。方法 采用S-P免疫组化方法对65例乳腺癌组织进行p38、C-erbB-2和ER、PR表达的联合检测。结果 乳腺癌组织中p38过阳性表达率为36．9％；正常乳腺组织不表达p38；淋巴结转移患者p38蛋白的过阳性表达率明显高于淋巴结阴性患者；p38的表达与C-erbB-2表达具有相对的一致性，p38的阳性高表达伴随ER表达降低，但与PR的表达无显著相关性。结论 p38的过表达与乳腺癌的发生、发展相关。p38与C-erbB-2和ER、PR的联合检测有利于指导乳腺癌的化疗和判断预后。     

丹参酮ⅡA对高糖培养的大鼠血管平滑肌细胞p38MAPK信号通路的影响

目的：观察丹参酮ⅡA对高糖诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响，分析该作用与氧化应激以及丝裂原活化蛋白激酶p38（p38 mitogen－activated protein kinases，p38 MAPK）信号通路的关系。方法：取第3代原代培养的大鼠血管平滑肌细胞建立高糖诱导细胞增殖模型，实验分为正常对照组、高糖组和丹参酮ⅡA组，BrdU掺入法测定血管平滑肌细胞的DNA合成水平；黄嘌呤氧化酶法、硫代巴比妥酸法分别测定细胞培养上清中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）含量；免疫印迹法（Western blot）检测磷酸化p38 MAPK蛋白表达。结果：高糖诱导的血管平滑肌细胞呈快速增殖状态，在10～25mmol·L^-1间增殖效应呈剂量依赖性；丹参酮ⅡA能抑制高糖诱导的血管平滑肌细胞增殖，提高高糖培养的细胞中SOD水平，降低MDA含量，减少P-p38MAPK蛋白的表达。结论：丹参酮ⅡA抑制高糖诱导的血管平滑肌细胞增殖，这可能与其能减少血管平滑肌细胞中的氧自由基，抑制p38MAPK信号通路有关。     

五味子乙素通过p38MAPK信号通路对结肠癌SW480细胞凋亡和侵袭的影响

目的: 观察五味子乙素(SchB) 对人结肠癌 SW480 细胞凋亡和侵袭的作用及对p38MAPK信号通路的影响,阐明其作用机制。方法: 将处于对数生长期的SW480细胞分为对照组、SchB低剂量组(20 μmol·L^-1,SchB₁组)、SchB中剂量组(40 μmol·L^-1,SchB₂组)和SchB高剂量组(80 μmol·L^-1,SchB₃组)。用不同剂量SchB处理SW480细胞后,MTT法检测各组细胞增殖抑制率,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Transwell法检测SW480细胞的侵袭情况,Western blotting法检测SW480细胞中p-p38、p38、p-p53和p53蛋白表达水平。结果: 与对照组比较,SchB低、中、高剂量组SW480细胞增殖抑制率和细胞凋亡率明显升高(均P<0.01),SW480细胞的侵袭率及穿膜细胞数明显降低(P<0.01),p-p38和p-p53蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论: SchB可抑制结肠癌SW480细胞的增殖和侵袭,促进细胞的凋亡,p38MAPK信号途径可能参与了SchB对肿瘤细胞的抑制作用。     

p38MAPK gene transfection induced the apoptosis of rat glioma cells C6

Thephosphorylationanddephosphorylationofproteinisoneofthemostimportantmechanismsofcellularsignaltransduction.Theconjugationofphos-phoricacidresiduesandspecificaminoacidresiduesofproteiniscatalyzedbyproteinkinases.Seriesofproteinkinasesandtheirphosphorylationmakeupthecascadereactionofsignaltransduction.Mitogen-activatedproteinkinase(MAPK)signalpathwayisahotpointinrecentyears.Ithasbeenidentifiedthat4signalpathwaysareineukaryoticcells:extracellularsignal-regulatedproteinkinase(ERK)，c-JunN-te…     

p38蛋白激酶(p38 MAPK)在癫疒间大鼠脑内的表达

 目的  观察p38蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)在癫疒间大鼠脑内的表达情况。方法  健康雄性SD大鼠随机分成正常对照组(n=8)和癫疒间组(n=8)。采用戊四氮腹腔注射建立癫疒间模型,大鼠点燃后的惊厥行为按照Racine的标准进行观察评分,采用Western blot和免疫荧光法比较两组大鼠脑内p38 MAPK的表达情况。结果  癫疒间组大鼠脑内p38 MAPK在皮层和海马的表达均显著高于正常对照组(P<0.01)。结论  p38 MAPK在癫疒间大鼠脑内表达上调。