MTT法和CCK-8法检测悬浮细胞增殖的比较

在细胞学实验中,MTT比色法和1H-TDR掺入法常用于细胞毒性、细胞活性和细胞增殖的检测。因MTT法具有简便、经济、安全等特点,而被广泛使用,但其操作较繁琐,需加入DMSO溶解甲躜颗粒,且往往因溶解不全而对实验结果造成影响;而。H-TDR掺入法虽然灵敏度高、特异性强、稳定性好,但由于操作步骤多、存在放射性危害等限制了其使用。近年来,国外研发出了一种新型的检测方法CCK-8（cell counting kit-8）,其原理为活细胞线粒体脱氢酶转化的黄色结晶为高度水溶性,不需要裂解细胞,可直接进行比色。该法步骤简便,且准确性得到提高。     

止血用ZSM-5沸石的细胞毒性评价

目的：对ZSM-5沸石进行细胞毒性评价，探讨其作为急救止血材料的安全性。方法：参照我国医疗器械生物学评价标准：①采用L929细胞经沸石浸提液培养后，MTT法测定其相对增值率；②将L929细胞与沸石直接接触培养，不同时间观察细胞生长状态及细胞计数；③将L929细胞种植于沸石表面，扫描电镜观察其生长情况。结果：ZSM-5沸石性质稳定，细胞毒性程度为0～1级，符合我国医疗器械生物学评价标准。L929细胞与沸石直接接触培养生长良好，形态学无明显改变。结论：ZSM-5沸石细胞相容性好，符合我国医疗器械生物学评价标准。     

烤瓷合金细胞毒性的研究

由于烤瓷冠修复体美观、逼真、机械性能好、制作工艺简单，在临床上应用广泛。但是烤瓷合金与口腔黏膜组织、牙体组织、口腔微生物等长期接触，在口腔酸性环境共同作用下，对烤瓷合金产生腐蚀作用。现有瓷熔附基底冠金属合金材料存在一些金属元素易引起生物体致敏、突变和致癌等问题，近年来国内外学者对牙科铸造合金的生物相容性进行了大量研究，     

双歧杆菌纯化黏附素对ETEC和EPEC黏附肠上皮细胞的竞争抑制作用

目的 观察双歧杆菌分泌型黏附素对产毒性大肠杆菌(ETEC)和致病性大肠杆菌(ETEC)黏附肠上皮LOVO细胞的竞争抑制作用。方法 采用黏附试验计数肠上皮Lovo细胞黏附的细菌数并比较其结果。结果 除黏附素浓度为1μg/ml和5μg/ml时不能明显抑制ETEC和EPEC对Lovo细胞的黏附外,10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml浓度组均能明显抑制ETEC和EPEC对Lovo细胞的黏附,且随浓度的逐渐增加,这种抑制作用也逐渐增强。结论 双歧杆菌分泌型黏附素能抑制ETEC和EPEC对肠上皮Lovo细胞的黏附且呈剂量依赖效应。     

乳杆菌黏附抑制致病性大肠杆菌对肠上皮样细胞侵袭的初步研究

目的 探讨乳杆菌对肠上皮样细胞HT-29黏附的生物学保护作用。方法 将乳杆菌和致病性大肠杆菌与肠上皮样细胞HT-29共孵育3h后，采用活菌计数的方法来观察致病性大肠杆菌黏附肠上皮样细胞的数量；并通过检测细胞培养液中乳酸脱氢酶的含量，以观察细胞膜通透性的变化；采用MTT法检测细胞的活性。结果 路氏乳杆菌JCM1081可以抑制致病性大肠杆菌对肠上皮样细胞HT-29的黏附（28％）和侵袭（27．7％），并可减弱致病性大肠杆菌对细胞的损伤。乳杆菌JCM1081单独与肠上皮样细胞HT-29黏附作用3h后，细胞结构正常，乳酸脱氢酶的水平没发生明显的变化，细胞活力无明显下降。结论 路氏乳杆菌JCMl081通过对肠上皮细胞的黏附占位，竞争性抑制致病性大肠杆菌对肠上皮细胞的黏附和侵袭，保护细胞膜的完整性和细胞活性。     

支架材料聚乳酸-羟基乙酸/磷酸三钙的细胞毒性检测

目的 检测新型支架材料——聚乳酸-羟基乙酸/磷酸三钙( PLGA/TCP)的细胞毒性.方法 采用扫描电子显微镜观察PLGA/TCP支架材料的表面及内部结构,并选用小鼠L929细胞株,用MTT法体外检测PLGA/TCP复合体的细胞毒性,与已被美国FDA批准应用于临床的PLGA支架材料进行比较.结果 扫描电镜下PLGA/ ...     

小分子GnRH-luffinS重组嵌合毒素的制备及其细胞毒性检测

目的:制备以小分子丝瓜素(luffin)S2为毒性部分,以Ⅰ型促性腺激素释放激素(GnRH)为导向部分的重组嵌合毒素GnRH-luffinS,体外检测其对肿瘤细胞的杀伤作用.方法:重叠PCR方法扩增GnRH-luffinS的基因,克隆至表达载体pET32a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),挑取阳性克隆诱导表达,产物用Ni-NTA亲和层析柱纯化.纯化蛋白经重组肠激酶(rEK)切割去除Trx融合蛋白,XTT法检测重组毒素对HeLa, A549, HepG-2, SP2/0和鸡胚成纤维细胞(CEF)的体外细胞毒性.结果:成功构建了GnRH-luffinS的表达质粒,并在大肠杆菌中获得表达,纯化后的纯度为93%.GnRH-luffinS对HeLa,A549,HepG-2和SP2/0的IC50分别为67.19, 70.42, 84.44和106.25 μg/ml,而对CEF无作用.结论:重组毒素GnRH-luffinS对肿瘤细胞有一定的杀伤作用.     

一种合成的纳米粒高分子材料的细胞毒性研究

目的 检测本实验室新合成的准备应用于静脉注射的系列高分子材料poly(ethylene glycol)-D,L-lactic and glycolic acid-poly(ethylene glycol)(mPEG-PLGA-mPEG,PELGE)以及由其制成的纳米粒对多种细胞的细胞毒性.方法 利用快速评定细胞增殖率和细胞毒性的噻唑蓝比色法(MTT),不仅参照美国药典用小鼠成纤维细胞L929细胞株进行评价,还根据该材料将来可能的应用领域,用Chang氏正常肝细胞株,原代人肾血管内皮细胞,原代人胚成骨细胞,原代人胚成肌细胞评价其细胞毒性.结果 结果表明该系列聚合物对L929细胞株24 h内和内皮细胞48 h内的毒性为0或I级,即无细胞毒性,而对其它不同种细胞具有不同程度的细胞毒性.结论 该材料具有应用于静脉注射的可能性.该实验为进一步的动物试验提供依据,同时为该新型材料应用于实际提供了前提检测方法.     

心脏辅助泵隔膜材料聚氨酯的细胞毒性研究

目的 通过对聚氨酯材料的细胞毒性研究,评价其作为人工心脏辅助泵体材料的可行性。方法 采用材料直接接触细胞培养法和四唑盐(MTT)比色试验评价聚氨酯的细胞毒性。结果 聚氨酯材料直接接触L-929细胞后具有良好的细胞相容性。MTT比色试验证明聚氨酯材料具有较低的OD值。结论 聚氨酯材料具有良好的细胞相容性。     

流细胞术与图像分析术在细胞凋亡检测上的比较

细胞凋亡 (ａｐｏｐｔｏｓｉｓ)是细胞在基因控制下的有序死亡 ,是机体维持自身稳定的一种基本生理功能 ,由于其在机体疾病发生发展中的重要作用以及治疗上的潜在意义 ,对凋亡及其方法的研究已成为生物医学领域的热点之一。本文作者选择了 3种细胞系给予电离辐射作用 ,用ＰＩ和Ｈｏｅｃｈｓｔ33342进行双染 ,流式细胞术与图像细胞术同时检测细胞凋亡的发生 ,目的在于将两种方法加以比较 ,从而以一种更全面的方法检测和评价凋亡的发生。一、材料和方法1 细胞系选用ＥＬ 4、Ｂ16和ＨｅｌａＳ3细胞系 (由卫生部放射生物重点实验室提供 )在ＲＰ…     

树突状细胞与细胞因子诱导的杀伤细胞共培养后对人肝癌细胞株HEP-3杀伤活性的研究

 目的 研究树突状细胞(DC)与细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)共培养后增殖活性、表型的变化和其对人肝癌细胞株HEP-3杀伤活性的影响.方法 分离外周血单个核细胞(PBMC),经不同细胞因子作用后定向分化成DC和CIK细胞,将收获的DC与CIK共培养3d,以流式细胞仪检测CIK 细胞膜表面分子表达,MTT 法检测共培养后CIK细胞对HEP-3杀伤活性的变化.结果 CIK与DC 共培养3d 后增殖活性开始显著提高,与DC共培养的CIK较单独培养的CIK具有更强的杀瘤活性.结论 共培养后DC能够促进CIK增殖,提高其对肝癌细胞的杀伤活性,为指导临床应用DC与CIK联合治疗原发性肝癌提供了实验依据.     

Z24系列化合物一般毒性的比较研究

目的:对具有较强抗肿瘤活性的Z24系列化合物进行一般毒性的比较研究,从中选出毒性较低的候选新药做进一步开发.方法:采用急性毒性上下法和MTT比色法比较5种Z24系列化合物的体内外急性毒性,利用HepG2细胞长期蛋白合成抑制试验评价Z24的长期毒性潜能.结果:Z24系列化合物的急性经口毒性LD50为232.0～＞2 000 mg/kg,SU5416的毒性最低,Z24次之;对CHL细胞的体外细胞毒性IC50为0.019～0.071 mmol/L,Z24的毒性最低.体外染毒6周后Z24对HepG2细胞的24 h半数蛋白合成抑制浓度(PI5024h-6w)明显低于染毒前PI5024h,提示Z24具有潜在的长期毒性.结论:将5种化合物的前期药理学和药效学试验结果与本研究的毒理学结果比较,确定Z24是该系列化合物中最具开发前景的候选新药.     

人体骨-髌腱-骨及半月板移植物浸提液的细胞毒性研究

目的:探讨ACL重建及半月板修复所用异体移植物的组织安全性。方法:分别以不同浓度梯度人体骨-髌腱-骨和半月板移植物浸提液培养NIH3T3细胞,光镜下观察细胞形态,MTT法检测受试物中存活细胞百分比,其结果与DMEM培养液(阴性对照组)及苯酚(阳性对照组)中存活细胞百分比进行比较。结果:光镜下各种浓度移植物浸提液培养的细胞形态均正常,存活率均大于97%,明显优于阳性对照组。结论:本实验中人体骨-髌腱-骨和半月板移植物未见细胞毒性。     

相思子毒素的分析检测技术及毒性机制与解毒对抗措施研究进展

相思子毒素是目前已知毒性最强的植物毒素蛋白,受到国际《禁止化学武器公约》和《禁止生物及毒素武器公约》共同关注,亟须有效的检测和解毒对抗措施,以应对其对于人类健康和公共安全的潜在威胁。该文在文献聚类研判的基础上,结合对相思子毒素的多种亚型结构的认识,对其分析检测技术、毒性机制、解毒对抗措施进行了全面综述,最后阐述了该领域的难点及发展趋势。目前主要的相思子毒素分析检测技术包括亲和分析、理化分析以及活性检测技术三大类,亟须发展灵敏特异准确的结构与活性测定技术方法,以准确厘清毒素威胁。目前尚无有效解毒剂,治疗仅为对症治疗。研发中和抗体仍然是对抗其中毒最有潜力的手段。     

靶向HER2的CAR T细胞构建与对膀胱癌细胞杀伤活性的探索研究

目的 制备特异性杀伤人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)表达阳性的膀胱癌细胞的嵌合抗原受体T细胞（chimeric antigen receptor T-Cell,CAR T）,初步探索HER2-CAR T细胞治疗膀胱癌的可行性。方法 首先免疫组化法检测膀胱癌患者石蜡组织切片中肿瘤细胞HER2表达情况,然后以赫赛汀单克隆抗体的单链抗体（single chain antibody fragment,scFv）序列作为CAR T的识别序列,构建包含铰链,共刺激分子（CD28和4-1BB胞内域）和CD3z的三代CAR T慢病毒质粒。使用293T细胞包装慢病毒,感染人源外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell, PBMC）细胞,制备HER2-CAR T细胞,并采用流式细胞术检测CAR的转导效率。将CAR T细胞分别与HER2表达阳性并且稳转构建表达荧光素酶的SK-BR3阳性对照细胞和MDAMB-468阴性对照细胞及T24膀胱癌细胞共培养,采用荧光素酶报告基因检测法检测杀伤...     

一种简易的用于检测细胞凋亡的微流控芯片分析技术

目的 针对微流控芯片的加工、细胞培养及细胞响应分析发展一套易于被普通生物学实验室实施的微流控芯片细胞分析技术,以天然抗癌药物重楼皂苷Ⅰ促人肺癌细胞A549凋亡作用分析对该技术进行验证.方法 微流控芯片加工采用了基于感光干膜的软光刻工艺;微流控芯片结构设计为储液池加直微通道,通过ANSYS软件对芯片的流体动力学行为进行分析;细胞培养采用间歇式细胞动态培养技术;重楼皂苷Ⅰ对A549细胞的促凋亡作用通过细胞形态学改变、活/死细胞荧光染色及乳酸脱氢酶(LDH)释放进行定性和定量分析.结果 感光干膜软刻工艺加工微流控芯片简单易行;储液池加微通道结构的微流控芯片适合各类贴壁细胞培养;形态学和荧光染色实验提示重楼皂苷Ⅰ具有促A549细胞凋亡作用,且促凋亡效率与浓度呈正比关系;微流控芯片上LDH释放定量分析结果与传统96孔板实验结果吻合.结论 该文展示的技术操作简单、低试剂消耗,能实现定性和定量分析相结合,可在无相关微流控技术经验的生物医学实验室中推广使用.     

2型糖尿病患者血糖、血脂、氧化应激与β细胞功能的相关性研究

目的探讨不同糖耐量个体血糖、血脂及氧化应激与胰岛β细胞第一时相分泌功能的关系。方法纳入新诊断2型糖尿病患者(T2DM组)40例,糖耐量减低者(IGT组)37例,糖耐量正常者(NGT组)43例。分别行静脉葡萄糖耐量试验(IVGTT),测定血糖、血脂、8-羟基脱氧尿苷(8-OHdG)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、空腹胰岛素(FINS)等,计算0~10min胰岛素曲线下面积(AUC)、急性胰岛素反应3-5(AIR3-5)、稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)及稳态模型胰岛素分泌指数(HOMA-B)。分析氧化应激指标与空腹血糖(FPG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、AUC、AIR3-5、HOMA-IR及HOMA-B的关系。结果 IGT组、T2DM组SOD、AIR3-5、AUC显著低于NGT组(P<0.05)。IGT组、T2DM组LDL-C、TG8、-OHdG和MDA显著高于NGT组(P<0.05)。IGT组SOD、AIR3-5、AUC显著低于T2DM组(P<0.05),而LDL-C、TG、8-OHdG和MDA则显著高于T2DM组(P<0.05)。MDA、8-OHdG与FPG、TG、LDL-C呈正相关,与FINS、HOMA-B、AUC、AIR3-5呈负相关;SOD与FINS、HOMA-B、AUC、AIR3-5呈正相关,与FPG、TG、LDL-C呈负相关。多元逐步回归分析显示,8-OHdG、SOD的独立影响因素是FPG、LDL-C;且8-OHdG、SOD是AIR3-5的独立影响因素。结论 T2DM患者存在明显的糖脂代谢紊乱以及氧化应激,氧化应激对胰岛β细胞第一时相分泌功能有显著影响,可能与T2DM的发病机制相关。     

聚合酶链反应法与荧光免疫法检测沙眼衣原体的比较研究

为了评价聚合酶链反应法（ＰＣＲ）对泌尿生殖道标本中沙眼衣原体的检测结果，每份临床标本进行了ＰＣＲ法和荧光免疫法（ＤＦＡ）平行检测比较。检测临床标本９３例，ＰＣＲ法阳性率为２５．８％，ＤＦＡ法的阳性率为１７．２％（Ｐ＞０．０５）。结果说明ＰＣＲ是一高度特异和敏感的检测方法。     

纳米金新型基因芯片检测系统结合限制性酶切非PCR法同时检测多种病原性微生物的研究

目的 研究将纳米金新型基因芯片检测系统与限制性酶切非PCR法结合以实现同时对多种病原性微生物进行检测的方法.方法 以幽门螺杆菌、肺炎支原体、沙眼衣原体、白色念珠菌、解脲脲原体、EB病毒作为检测目标,选择Hha Ⅰ内切酶作为工具酶.对所有待检样本核酸进行Hha Ⅰ酶切,对酶切产物进行同聚A加尾处理,并结合纳米金新型芯片检测系统,分别与特异性探针及通用探针进行两次杂交以完成对目标微生物的检测.通过对168份临床样品的检测,考察新构建芯片的检测结果与荧光定量PCR检测结果的符合率;对构建芯片的稳定性及检测灵敏度进行测试.结果 新构建的基于限制性酶切非PCR法的纳米金芯片技术实现了对选定目标的检测.对168份临床样品的检测结果显示,该芯片检测与荧光定量PCR检测的结果有150例完全相符,符合率为89.2%;进一步芯片检测性能实验结果表明,该芯片检测稳定性为100%,检测敏感性为50pmol/L.结论 本研究构建的基于限制性酶切非PCR法的纳米金芯片技术可以同时实现对细菌、真菌、支原体、衣原体及病毒等微生物的检测.适用性广且对大幅度提高检测通量有积极意义.     

放射免疫法与Visualine-Ⅱ法用于毛发中吗啡的检测及对比研究

采用放射免疫法与Visualine—Ⅲ法快速检测毛发中的吗啡,其方法的可行性、准确性、灵敏度以及毛发预处理的水解条件已作分析研究,并将两种方法进行对比研究分析,结果提示,两种方法阳性检出率为100％。另随机取样进行GC/MS测定证实,结果与国外报道一致。