海风藤提取物对D-半乳糖脑老化模型小鼠行为学、海马神经细胞线粒体膜电位及凋亡的影响

目的研究海风藤提取物对D-半乳糖(D-gal)脑老化模型小鼠行为学、海马神经细胞线粒体膜电位及凋亡的影响。方法用D-gal复制小鼠脑老化模型,随机分为模型组和海风藤治疗组,正常对照组采用健康昆明种小鼠。海风藤组每天给予腹腔注射海风藤注射液1次,每次1ml/100g体重;模型组和正常对照组给予等量2.5%二甲基亚砜;10w后成模。应用水迷宫试验观察小鼠学习记忆功能的变化,应用流式细胞术分析海马神经细胞凋亡率和线粒体膜电位的变化。结果①水迷宫结果显示,模型组小鼠第3、4、5天游完全程的时间和错误反应次数均较正常对照组增多(P<0.05);海风藤组小鼠的行为学障碍明显轻于模型组(P<0.05),与正常对照组比较差异无统计学意义。②模型组小鼠海马神经细胞凋亡发生率显著增加(P<0.01)、线粒体膜电位明显降低(P<0.01);海风藤组海马神经细胞凋亡发生率低于模型组(P<0.01)、线粒体膜电位高于模型组(P<0.01);与正常对照组接近。结论D-gal脑老化模型小鼠存在学习和记忆功能障碍,且其海马神经细胞凋亡率增加、线粒体膜电位降低;海风藤能够明显改善该小鼠的学习和记忆能力,其作用机制可能是通过稳定线粒体膜电位、抑制凋亡的发生而实现的。     

三氧化二砷对鸡马立克病肿瘤细胞凋亡及线粒体膜电位的影响

目的 研究三氧化二砷(arsenic trioxde,As2O3)诱导体外培养鸡马立克病(Marek disease,MD)肿瘤细胞株MDCC-MSB1细胞凋亡的机制.方法 将体外培养的MDCC-MSB1根据加As2O3终浓度不同分为0(对照)、2、4、8 μmol/L组.As2O3作用48 h后,用四甲基偶氮唑盐比色法(MTF)检测As2O3对MDCC-MSB1的抑制作用,采用荧光显微镜观察细胞形态学变化.琼脂糖凝胶电泳DNA梯形带检测细胞凋亡,罗丹明123(Rhodamine123)染色流式细胞术检测线粒体膜电位(△ψm)的变化.结果 随As2O3水平增加(0、2、4、8μmol/L),其抑制率逐渐升高,分别为0、(5.34±3.02)%、(10.78±0.55)%、(20.02±3.24)%,任意两组间的比较差异有统计学意义(P<0.01);各组细胞凋亡指数逐渐增高,分别为3.200±0.459、11.543±0.391、17.206±0.636、21.343±0.620.任意两组间的比较差异有统计学意义(P<0.01);4组均出现典型的DNALadder,同时细胞膜完整,但线粒体△ψm下降(PI-/Rh123-)的凋亡细胞增加,增加率分别为(1.06±0.14)%,(4.63±0.04)%、(9.62±0.07)%和(10.39±0.10)%,任意两组间的比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 As2O3可诱导MDCC-MSB1细胞凋亡,其诱导凋亡的途径与△ψm降低有关.     

海风藤提取物对脑缺血再灌注模型大鼠神经细胞凋亡和线粒体膜电位变化的干预作用

目的观察脑缺血再灌注2h后大鼠神经细胞凋亡和线粒体膜电位的变化及海风藤提取物的干预作用。方法应用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞再灌注模型,流式细胞术分别观察假手术组、模型组、二甲基亚砜组和海风藤组缺血灶周神经细胞凋亡和线粒体膜电位的变化。结果与模型组神经细胞凋亡率(72.7%±6.5%)和线粒体膜电位(0.117±0.011)比较,海风藤组神经细胞凋亡率(47.0%±3.8%)明显下降(P<0.01),线粒体膜电位(0.182±0.023)明显升高(P<0.01);而假手术组神经细胞凋亡率(5.8%±1.8%)和线粒体膜电位(0.331±0.016)与模型组比较差异均有显著性(P<0.01)。结论海风藤可以减轻脑缺血再灌注后早期神经细胞凋亡,并对线粒体膜电位有稳定作用,可以保护缺血脑组织。     

糖尿病小鼠视网膜神经细胞的凋亡及APP17肽对其影响

目的　研究Kkay(KK)小鼠视网膜神经细胞凋亡的情况 ,并观察APP17肽对其影响。　方法　实验小鼠随机分 3组 :正常对照 (NC)组 ,糖尿病 (DM )组 ,APP17肽组。分别于 1,3个月后取眼球作视网膜组织切片 ,TUNEL法标记凋亡细胞 ,光镜观察。　结果　DM组较NC组小鼠视网膜神经细胞凋亡显著增加 (P <0 .0 1) ,APP17肽治疗能显著减少视网膜神经细胞凋亡。　结论　DM早期即有视网膜神经细胞凋亡异常增多 ;APP17肽有抑制视网膜神经细胞凋亡的作用。     

EGCG对人食管癌CaEs-17细胞增殖、凋亡及其线粒体膜电位的影响

目的观察表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对人食管癌CaEs-17细胞增殖凋亡及线粒体腹电位（MMP）的影响。方法取对数生长期人食管癌CaEs-17细胞,随机分为观察组和对照组。观察组分别予30、60、240 mg/L EGCG处理48 h及120 mg/L EGCG分别处理12、24、48、72 h;对照组常规培养。采用MTT法检测细胞增殖率、流式细胞仪检测细胞凋亡率,JC-1染色检测MMP。结果观察组细胞增殖率均显著低于对照组,细胞凋亡率均显著高于对照组,MMP均显著低于对照组（P均〈0.05）,且呈浓度时间依赖性。结论 EGCG可在体外抑制人食管癌CaEs-17细胞增殖,促进凋亡,并降低其MMP。     

β-细辛醚对ox-LDL损伤ECV304细胞凋亡和线粒体膜电位的影响

目的观察石菖蒲有效成分β-细辛醚对氧化低密度脂蛋白（ox—LDL）损伤的人血管脐静脉内皮细胞株（ECV304）凋亡和线粒体膜电位（MMP）的影响。方法将ECV304细胞分为正常对照组、模型组及β-细辛醚高、中、低剂量组，采用流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡百分率和MMP平均荧光强度。结果ox-LDL损伤模型组细胞凋亡率增高，MMP明显降低，与正常对照纽比较有统计学意义（P〈0．001）；8一细辛醚能不同程度降低细胞凋亡率、稳定MMP，与模型纽比较有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。结论β-细辛醚能有效抑制ox-LDL对ECV304细胞线粒体的损伤，稳定MMP，抑制细胞凋亡。     

磷酸肌酸对心肌细胞线粒体的保护作用

目的 :研究能量治疗对心力衰竭的治疗机制。观察磷酸肌酸 （phosphocreatine,CP）对心肌细胞线粒体膜电位的保护作用。方法 :采用胶原酶分离成年大鼠心肌细胞 ,0 .2 mmol/ L H2 O2 刺激细胞 ,于刺激前 10 min加入 10mm ol/ L CP,利用荧光探针 JC-1结合流式细胞仪检测线粒体膜电位的变化 ;Annexin-V/ PI及 TUNEL 染色法鉴定心肌细胞的凋亡。结果 :H2 O2 导致线粒体膜电位下降 ,细胞凋亡增加。CP有效地减低了线粒体膜电位的下降 ,减少了细胞凋亡。结论 :CP能够抗心肌细胞氧化损伤 ,其机制可能依赖于减少或抑制线粒体膜电位的下降 ,保护了线粒体的正常功能     

线粒体对缺血性神经细胞死亡的影响

脑组织对缺血缺氧损害非常敏感,可引起神经细胞死亡。近年研究表明。缺血性神经元死亡是通过凋亡和死亡两种途径发生的。线粒体是氧化磷酸化生成能量的重要部位．对缺氧极其敏感,严重缺氧可降低线粒体功能,使ATP的生成减少．线粒体可出现肿胀、嵴崩解、外膜碎裂和基质外溢。同时,线粒体在神经细胞的坏死和凋亡中均发挥一定作用。一般轻中度线粒体损伤可导致神经细胞凋亡．而重度线粒体损伤则可导致细胞坏死。     

Kh DIC小鼠海马神经细胞线粒体自由基水平的变化及APP17肽的影响

目的 观察Kh DIC（KM hn／IDL JIMP CAMS）小鼠海马神经细胞线粒体自由基水平的变化及APP17肽（β-amyloid precursor protein，APP，319-335肽段）的影响。方法 2．5月龄的Kh DIC小鼠随机分为模型组和APP17肽治疗组，正常对照组采用月龄和性别相匹配的正常昆明（KM）小鼠。APP17肽治疗组给予皮下注射APP17肽，每只每次0．34g-g，每周3次；模型组和正常对照给予等量的生理盐水；25W后成模。应用水迷宫试验观察小鼠学习、记忆功能的变化，应用羟胺法和硫代巴比妥酸（TBA）比色法分别检测了海马神经细胞线粒体抗氧化酶活性及自由基水平。结果 ①水迷宫结果显示，模型组小鼠存在明显的学习和记忆功能障碍，其游完全程的时间和错误反应次数均较正常对照组增多（P〈0．05）；APP17肽治疗组小鼠的行为学障碍明显轻于模型组，其上述的水迷宫检测结果与正常对照组比较无显著性差异。②与正常对照组比较，模型组小鼠海马神经细胞线粒体超氧化物歧化酶（SOD）活性明显降低（P〈0．01），丙二醛（MDA）含量显著升高（P〈0．01）；APP17肽治疗组检测结果与正常对照组接近，SOD活性高于模型组（P〈0．01），而MDA含量低于模型组（P〈0．01）。结论 ①Kh DIC小鼠存在学习和记忆功能障碍；而且其海马神经细胞线粒体氧化应激反应明显加剧。②APP17肽具有清除自由摹和抑制氧化应激反应的作用，从而提高脑组织的抗氧化能力，保护学习、记忆功能。     

醌氧化还原酶2下调对大鼠主动脉平滑肌细胞线粒体膜电位的影响

目的研究醌氧化还原酶2(NQO2)下调对大鼠主动脉平滑肌细胞(RASMCs)线粒体膜电位的影响。方法将RASMCs分为3组:野生型组、阴性对照组和NQO2下调组。利用RNA干扰技术下调体外培养的RASMCs中NQO2,采用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)渗入法检测细胞增殖,用阳离子染料JC-1标记RASMCs线粒体内膜并检测线粒体膜电位,试剂盒法检测总超氧化物歧化酶(SOD)活性和细胞色素C水平。结果在野生型组、阴性对照组和NQO2下调组中,Brd U阳性细胞比率分别为(18.94±1.43)%,(18.29±0.92)%和(9.21±1.42)%,NQO2下调组的细胞增殖明显被抑制(P0.01);3组细胞经JC-1标记后红色/绿色荧光比值分别为15.48±0.41,15.96±0.52和13.58±0.12,NQO2下调组细胞线粒体膜电位明显下降(P0.01)。细胞色素C水平在3组细胞中分别为(9.62±0.29)ng/L,(9.36±0.07)ng/L和(15.83±0.83)ng/L,NQO2下调组明显升高(P0.01)。结论 NQO2的下调可降低RASMCs线粒体膜电位,致细胞色素C释放增加,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,发挥抗动脉粥样硬化作用。     

APP17肽对D-半乳糖脑老化模型小鼠神经元凋亡的影响

目的观察D-半乳糖脑老化小鼠(DGAM)海马内凋亡相关蛋白Fas、Fas配体(Fas-L)、核因子κB(NFκB)、C-Fos、C-Jun的表达及其脑神经元是否发生凋亡,并观察APP17肽的作用. 方法用D-半乳糖(D-gal)制造脑老化小鼠模型,给模型小鼠皮下注射APP17肽进行预防或治疗.D-gal皮下注射8周后,小鼠灌注取脑,行脑切片,一部分切片做免疫组织化学染色,观察各组小鼠海马内凋亡相关蛋白Fas、Fas-L、NFκB、C-Fos、C-Jun的表达;另一部分切片用凋亡试剂盒检测神经元是否发生凋亡. 结果对照组小鼠海马内Fas、Fas-L、C-Fos、C-Jun阳性染色神经元的数目分别为20.60±4.60、20.00±4.24、9.93±3.79、13.44±4.18,DGAM组小鼠上述各种抗体的阳性染色神经元数目分别为42.80±15.83、38.53±8.13、23.25±5.18、23.47±8.49,DGAM组比对照组明显增加(P＜0.05).DGAM组海马内NFκB的阳性染色神经元数目为13.93±5.31,比对照组小鼠的23.93±3.69明显减少(P＜0.05).用APP17肽预防或治疗后小鼠上述各种蛋白质的表达恢复到接近对照组小鼠的水平.对照组小鼠未发现凋亡的神经元;DGAM组小鼠脑神经元出现大量凋亡,用APP17肽预防或治疗后,神经元凋亡的数目与对照组小鼠接近. 结论 DGAM海马内凋亡相关蛋白表达异常,脑神经元发生凋亡.APP17肽可恢复各种凋亡相关蛋白的表达,阻止神经元凋亡,维持神经元的正常功能.     

记忆增强肽对糖尿病小鼠学习,记忆功能及海马NT—3神经元的影响

目的 研究糖尿病小鼠学习、记忆功能及糖尿病小鼠脑海马内ＮＴ－３神经元表达变化,并观察记忆增强肽对糖尿病小鼠学习、记忆功能及脑海马内ＮＴ－３神经元表达的影响。方法 用链脲佐菌素（ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎ,ＳＴＺ）诱发糖尿病小鼠模型,并皮下注射记忆增强肽,４周后行水迷宫试验。水迷宫试验后对小鼠进行灌注固定,邓小鼠脑海马进行冰冻切片行免疫组化染色。结果 １记忆增强肽不影响糖尿病小鼠的血糖水平;２行为     

快速老化小鼠海马神经细胞存活信号转导通路相关蛋白的变化及APP17肽的影响

目的　观察快速老化小鼠SAMP10 (senescenceacceleratedmouse / prone 10 )海马神经细胞存活信号转导通路相关蛋白的变化及淀粉样前体蛋白 (APP) 17肽对其表达的影响。　方法　 4月龄的SAMP10小鼠 18只被随机分为模型组和APP17肽治疗组 ,正常对照组采用 9只同月龄的抗快速老化小鼠SAMR1。APP17肽治疗组给予皮下注射APP17肽 ,每只每次 0 3 4 μg ,每周 3次 ;模型组和正常对照组给予等量的生理盐水 ;2 8周后成模。然后进行免疫组织化学染色 ,观察各组小鼠海马神经细胞存活信号转导通路相关蛋白的表达。　结果　与正常对照组比较 ,模型组小鼠海马神经细胞存活信号转导通路相关蛋白TrkA、Akt /PKB和bcl 2阳性染色细胞数分别减少 6 3 %、5 0 %和4 5 %(P <0 0 1) ,经APP17肽治疗后上述各种蛋白的表达明显上调 (P <0 0 5 ) ;而神经生长因子(NGF)和抗cAMP应答元件结合蛋白 (CREB)的表达无明显差异 (P >0 0 5 )。　结论　SAMP10小鼠海马脑区存在神经细胞存活信号转导通路的障碍 ,此改变可能是导致海马神经细胞变性死亡的重要机制 ;而APP17肽能激活这一通路 ,部分纠正这些蛋白的异常表达。     

糖尿病大鼠海马神经元存活和凋亡相关蛋白的表达及APP17肽的作用

目的　探讨糖尿病 (DM )大鼠海马神经元存活和凋亡相关蛋白神经生长因子α(NGF)、I抗磷脂酰肌醇 3激酶 (PI 3K)、有丝分裂原活化蛋白激酶 (MAPK)、凋亡诱导因子 (AIF)、细胞色素C和磷酸化 MAPK的表达以及APP17肽的作用。　方法　用链脲佐菌素腹腔注射诱发DM模型 ,并皮下注射APP17肽对DM大鼠进行治疗。 12周后 ,6只大鼠取脑组织行NGF、PI 3K、MAPK和AIF、细胞色素C抗体的免疫组化染色 ;6只取新鲜海马组织匀浆 ,以免疫沉淀并Western印迹方法检测PI 3K及磷酸化MAPK抗体的表达。　结果　DM组大鼠海马CA1区NGF、PI 3K、MAPK表达减少(P <0 0 1) ,AIF、细胞色素C阳性神经细胞增多 (P <0 0 1) ;APP17肽治疗 (DP)组与DM组比较 ,AIF(P <0 0 5 ) ,NGF、PI 3K、MAPK和细胞色素C的表达差异有显著意义 (P <0 0 1) ,接近正常对照(NC)组。Western印迹法显示DM组PI 3K比NC组降低 ,p MAPK的表达 3组无明显区别 ;DP组与DM组比较PI3 K表达增高。　结论　DM大鼠海马神经细胞存在功能异常 ,神经存活和凋亡蛋白的异常改变可能参与DM脑病的发生发展 ;APP17肽具有改善这一病理过程的作用     

APP17肽对脑缺血大鼠记忆能力及海马Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的研究APP17肽对脑缺血大鼠记忆能力及海马Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。方法采用双侧颈总动脉结扎方法制备前脑缺血致血管性痴呆大鼠模型,将大鼠随机分为假手术组、手术组和治疗组,每组24只,并观察APP17肽的保护作用,采用Morris水迷宫检测记忆能力,免疫组织化学检测海马Bcl-2和Bax蛋白表达。结果手术组与假手术组比较,记忆能力明显下降(P<0.01),Bcl-2和Bax免疫阳性细胞数增多(P<0.01),治疗组较手术组记忆功能改善明显(P<0.01)。Bcl-2免疫阳性细胞数明显增多(P<0.01),Bax免疫阳性细胞数明显减少(P<0.01)。结论APP17肽可能通过调节Bcl-2和Bax蛋白表达来抑制细胞凋亡,从而改善脑缺血大鼠的记忆能力。     

APP17肽对糖尿病大鼠脑枕叶视区皮层神经元退行性变的影响

目的 探讨APP17肽对糖尿病(DM)大鼠脑内视觉传导通路枕叶视区皮层神经元退行性变的影响。方法 用链脲佐菌素(STZ)腹腔注射诱发DM模型，10周后取脑组织行免疫组化染色观察神经元内凋亡因子Bax、Bcl-2、Cyto C的表达。同时取枕叶视区皮层处脑组织作电镜观察。结果 DM组枕叶视区皮层17区内Bax、CytoC阳性反应神经元数目多、染色深，Bcl-2较正常组神经元数目少，APP17肽组Bax、Bcl-2、CytoC的表达均接近正常组。DM组大鼠枕叶视区皮层神经元超微结构出现明显损害，给予APPl7肽后病变有改善。结论 APP17肽可改善DM大鼠枕叶视区皮层神经元的退行性改变。     

APP17肽对DM大鼠海马神经元胰岛素和凋亡信号传导通路相关蛋白的影响

目的 观察糖尿病大鼠海马脑区胰岛素和凋亡信号传导通路中某些相关蛋白的表达及APP17肽对其表达的影响。方法 链脲佐菌素诱发大鼠糖尿病模型，并用APP17肽治疗。用免疫沉淀和Western-blot法分析海马中信号传导及部分凋亡相关蛋白；电镜观察大鼠脑组织超微结构。结果 DM大鼠IGF－IRα、Akt/PKB、CREB表明明显降低，APP17肽治疗后明显上调（P＜0．05），GSK－3β、PP－1及凋亡相关蛋白Bax、AIF表达增加，治疗后则明显降低（P＜0．05）；超微结构表明APP17肽治疗后兴奋性突触小泡明显减少。结论 糖尿病大鼠海马脑区胰岛素和凋亡信号传导通路中某些重要蛋白表达异常，APP17肽部分纠正这些蛋白的异常表达，这可能是其保护DM大鼠海马神经元的机制。     

PI3K特异性抑制剂Wortmannin和APP17肽对SY5Y细胞胰岛素信号转导通路的作用

目的利用PI3K的特异性抑制剂Wortmannin阻断体外培养的人神经母细胞瘤株SY5Y细胞的存活信号转导通路，观察β淀粉样肽前体蛋白（APP）17肽对SY5Y细胞生长的影响及其作用机制。方法体外培养SY5Y细胞，分为对照组、Wortmannin组、APP17肽组、APP17肽＋Wortmannin组、葡萄糖组、葡萄糖＋APP17肽组、葡萄糖＋Wortmannin＋APP17肽组，观察各组细胞的噻唑蓝（MTT）代谢率、乳酸脱氢酶（LDH）漏出率、细胞轴突长度、胞体面积。结果（1）APP17肽可促进SY5Y细胞MTT代谢率升高、LDH漏出率降低、细胞轴突长度和胞体面积增加，但经Wortmannin作用后，其作用减弱。（2）APP17肽对高糖环境下的SY5Y细胞也有上述作用，且经Wortmannin作用后其作用减弱。结论APP17肽能通过激活胰岛素的PI3K信号转导通路发挥其神经保护作用。