川芎嗪和siRNA沉默转化生长因子β1干预大鼠肝星状细胞结缔组织生长因子的表达

背景:作者前期研究发现川芎嗪可以通过抑制肝星状细胞的增殖、阻抑p38MARK信号通路、下调结缔组织生长因子的表达等多途径发挥抗肝纤维化的作用。一般认为转化生长因子β1是促进纤维化发生最重要的细胞因子,结缔组织生长因子是转化生长因子β1的下游效应介质,siRNA靶向抑制转化生长因子β1可能成为治疗肝纤维化的新方法。目的:观察川芎嗪及化学合成的siRNA转化生长因子β1对大鼠肝星状细胞结缔组织生长因子表达的影响。方法:体外培养大鼠肝星状细胞,从3条siRNA转化生长因子β1中筛选一条有效的基因沉默片段,然后利用脂质体转染试剂共同转染培养24h的细胞作为转染组,并设计空白对照组、转染试剂组、川芎嗪组及联合治疗组。结果与结论:与空白对照组相比,转染组、川芎嗪组、联合治疗组Ⅰ、Ⅲ型胶原及结缔组织生长因子mRNA表达均下调(P<0.05)。在转染组、川芎嗪组及联合治疗组,结缔组织生长因子蛋白表达均下调(P<0.05);培养上清液中Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原含量均降低(P<0.05)。结果表明,siRNA沉默转化生长因子β1基因能下调结缔组织生长因子的表达,减少Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达。川芎嗪也能下调结缔组织生长因子的表达,但对Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的抑制作用更加显著,提示川芎嗪抗肝纤维化可能是多种作用靶点。     

川芎嗪和siRNA沉默转化生长因子β1干预大鼠肝星状细胞结缔组织生长因子的表达

背景：作者前期研究发现川芎嗪可以通过抑制肝星状细胞的增殖、阻抑p38MARK信号通路、下调结缔组织生长因子的表达等多途径发挥抗肝纤维化的作用。一般认为转化生长因子β1是促进纤维化发生最重要的细胞因子,结缔组织生长因子是转化生长因子β1的下游效应介质,siRNA靶向抑制转化生长因子β1可能成为治疗肝纤维化的新方法。目的：观察川芎嗪及化学合成的siRNA转化生长因子β1对大鼠肝星状细胞结缔组织生长因子表达的影响。方法：体外培养大鼠肝星状细胞,从3条siRNA转化生长因子β1中筛选一条有效的基因沉默片段,然后利用脂质体转染试剂共同转染培养24h的细胞作为转染组,并设计空白对照组、转染试剂组、川芎嗪组及联合治疗组。结果与结论：与空白对照组相比,转染组、川芎嗪组、联合治疗组Ⅰ、Ⅲ型胶原及结缔组织生长因子mRNA表达均下调（P〈0.05）。在转染组、川芎嗪组及联合治疗组,结缔组织生长因子蛋白表达均下调（P〈0.05）;培养上清液中Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原含量均降低（P〈0.05）。结果表明,siRNA沉默转化生长因子β1基因能下调结缔组织生长因子的表达,减少Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达。川芎嗪也能下调结缔组织生长因子的表达,但对Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的抑制作用更加显著,提示川芎嗪抗肝纤维化可能是多种作用靶点。     

成纤维细胞生长因子-7、丝裂素激活蛋白激酶和转化生长因子-α在前列腺增生组织中的表达及其意义

目的 检测前列腺增生组织中成纤维细胞生长因子-7（FGF-7）和丝裂素激活蛋白激酶（MAPKs）、转化生长因子-α（TGF—α）的表达，探讨其在前列腺增生中的作用。方法 应用免疫组织化学方法，检测40例前列腺增生组织中FGF-7、MAPKS和TGF的表达，并与正常的前列腺组织进行比较。结果 前列腺增生组织中，前列腺组织中均见FGF-7和MAPKS、TGF—α阳性染色，前列腺增生组织中表达显著高于正常的前列腺组织。结论 前列腺增生组织中FGF-7、MAPKS和TGF—α的表达高于正常前列腺组织，提示FGF-7、MAPKS和TGF—α对促进前列腺的增生起重要作用。     

β-arrestin1通过活化p38信号转导通路激活肝星状细胞促进肝纤维化

目的 探讨β-arrestin1(ARRB1)在肝纤维化中的作用，阐明ARRB1和p38信号转导通路诱导肝星状细胞活化从而促进肝纤维化的机制。方法 选取C57BJ/6L背景的雄性小鼠12只，随机分为对照组和模型组，每组6只小鼠，采用浓度为20%的四氯化碳诱导肝纤维化小鼠模型，并于临床收集肝硬化患者的肝组织及健康对照志愿者的肝组织样本。采用HE和天狼星红染色来评估肝纤维化情况。通过免疫组织化学法、蛋白免疫印迹法及实时荧光定量PCR法检测ARRB1、p38、磷酸化p38(pp38)及纤维化相关指标α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和Ⅰ型胶原蛋白的表达水平。在人肝星状细胞LX2中使用转化生长因子-β(TGF-β)细胞因子诱导其活化，并分析ARRB1的表达水平；进而利用小干扰RNA和质粒沉默或者过表达ARRB1，同时配合p38特异性抑制剂（SB203580），揭示两者的调控关系。结果 在肝纤维化组织中ARRB1表达升高，p38信号活化增强（P均<0.05）。在肝星状细胞LX2中，TGF-β可以激活肝星状细胞并表达ARRB1和增强p38信号。ARRB1表达的升高或抑制可以相应地影响p38信号从...     

川芎嗪可影响肿瘤坏死因子a刺激肝星状细胞结缔组织生长因子、核因子κB及相关基因产物的表达

背景:川芎嗪延缓肝纤维化形成的机制尚不清楚.目的:观察川芎嗪对肿瘤坏死因子a 刺激的肝星状细胞增殖及结缔组织生长因子、核因子κB 及其相关基因产物白细胞介素6 表达的影响.方法:体外培养HSC-T6 细胞株,取对数生长期的细胞用于实验.实验分为4 组:对照组仅加入细胞;TNF-a 组加入10 μg/LTNF-a;川芎嗪干预组先加入终浓度为10 μg/L 的TNF-a 作用30 min 后,分别加入川芎嗪50,100,200,400,600,1 000 mg/L;PDTC组先加入终浓度为10 μg/L的TNF-a 作用30 min 后,再加入终浓度18 μmol/L 的核因子κB 阻断剂PDTC.结果与结论:MTT 结果显示100,200,400,600,1 000 mg/L 的川芎嗪均能抑制HSC-T6 增殖,且呈剂量依赖性.免疫细胞化学染色及Western blot 检测发现10 μg/L 的肿瘤坏死因子a 刺激后,HSC-T6 细胞结缔组织生长因子、核因子κB 及白细胞介素6 的表达明显增多(P < 0.01 或P < 0.05),200,400,600 mg/L 的川芎嗪及18 μmol/L 的PDTC均可明显降低肿瘤坏死因子a 刺激后HSC-T6 细胞结缔组织生长因子、核因子κB 及白细胞介素6 的表达(P < 0.01),且随着川芎嗪质量浓度的增加,抑制作用增强,PDTC的抑制作用最明显.相关性分析结果显示HSC-T6 细胞结缔组织生长因子和核因子κB 的表达呈正相关(r=0.980,P < 0.01).说明川芎嗪可以抑制肝星状细胞结缔组织生长因子、核因子κB 及白细胞介素6 的表达,抑制肝星状细胞的增殖.     

川芎嗪可影响肿瘤坏死因子α刺激肝星状细胞结缔组织生长因子、核因子κB及相关基因产物的表达

背景：川芎嗪延缓肝纤维化形成的机制尚不清楚。目的：观察川芎嗪对肿瘤坏死因子α刺激的肝星状细胞增殖及结缔组织生长因子、核因子κB及其相关基因产物白细胞介素6表达的影响。方法：体外培养HSC-T6细胞株,取对数生长期的细胞用于实验。实验分为4组：对照组仅加入细胞;TNF-α组加入10μg/L TNF-α;川芎嗪干预组先加入终浓度为10μg/L的TNF-α作用30min后,分别加入川芎嗪50,100,200,400,600,1000mg/L;PDTC组先加入终浓度为10μg/L的TNF-α作用30min后,再加入终浓度18μmol/L的核因子κB阻断剂PDTC。结果与结论：MTT结果显示100,200,400,600,1000mg/L的川芎嗪均能抑制HSC-T6增殖,且呈剂量依赖性。免疫细胞化学染色及Western blot检测发现10μg/L的肿瘤坏死因子α刺激后,HSC-T6细胞结缔组织生长因子、核因子κB及白细胞介素6的表达明显增多（P〈0.01或P〈0.05）,200,400,600mg/L的川芎嗪及18μmol/L的PDTC均可明显降低肿瘤坏死因子α刺激后HSC-T6细胞结缔组织生长因子、核因子κB及白细胞介素6的表达（P〈0.01）,且随着川芎嗪质量浓度的增加,抑制作用增强,PDTC的抑制作用最明显。相关性分析结果显示HSC-T6细胞结缔组织生长因子和核因子κB的表达呈正相关（r=0.980,P〈0.01）。说明川芎嗪可以抑制肝星状细胞结缔组织生长因子、核因子κB及白细胞介素6的表达,抑制肝星状细胞的增殖。     

肝星状细胞增殖与p38丝裂原活化蛋白激酶信号传导通路的关系

背景:肝星状细胞的激活、增殖导致肝纤维化,p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路可参与调控细胞增殖。目的:探讨SB203580作用于乙醛刺激的大鼠肝星状细胞后p38丝裂原活化蛋白激酶活性变化和细胞增殖变化。方法:体外培养大鼠肝星状细胞株,在乙醛干预的基础上加入不同浓度的p38特异性抑制剂SB203580进行培养,并设置对照。以Westernblot检测磷酸化p38蛋白表达水平变化,MTT比色法检测细胞增殖。结果与结论:乙醛刺激后大鼠肝星状细胞内磷酸化p38水平增强,细胞增殖明显。使用5,10,20μmol/L SB203580能明显抑制乙醛刺激的肝星状细胞增殖(P<0.05),加大浓度至30μmol/L时,抑制作用更明显(P<0.01),抑制率为43.9%,而磷酸化p38水平也降低(P<0.05)。结果证实,抑制p38丝裂原活化蛋白激酶活性可能影响肝星状细胞的增殖。     

肝星状细胞增殖与p38丝裂原活化蛋白激酶信号传导通路的关系

背景：肝星状细胞的激活、增殖导致肝纤维化,p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路可参与调控细胞增殖。目的：探讨SB203580作用于乙醛刺激的大鼠肝星状细胞后p38丝裂原活化蛋白激酶活性变化和细胞增殖变化。方法：体外培养大鼠肝星状细胞株,在乙醛干预的基础上加入不同浓度的p38特异性抑制剂SB203580进行培养,并设置对照。以Westernblot检测磷酸化p38蛋白表达水平变化,MTT比色法检测细胞增殖。结果与结论：乙醛刺激后大鼠肝星状细胞内磷酸化p38水平增强,细胞增殖明显。使用5,10,20μmol/L SB203580能明显抑制乙醛刺激的肝星状细胞增殖（P〈0.05）,加大浓度至30μmol/L时,抑制作用更明显（P〈0.01）,抑制率为43.9%,而磷酸化p38水平也降低（P〈0.05）。结果证实,抑制p38丝裂原活化蛋白激酶活性可能影响肝星状细胞的增殖。     

人脐带间质干细胞培养上清液可下调肝星状细胞转化生长因子β的表达

背景：人脐带间质干细胞有望成为治疗肝纤维化新的种子细胞,但目前相关的体外实验报道较少。目的：探讨人脐带间质干细胞培养液上清对大鼠肝星状细胞纤维化形成生物学活性的影响及可能的作用靶点。方法：将肝星状细胞以1.0×108L-1接种于六孔板内,无血清培养24h后,加入2mL脐带间质干细胞培养液上清处理肝星状细胞,设为实验组;对照组为加入等量完全培养基处理肝星状细胞;RT-PCR法检测肝星状细胞内转化生长因子β1、collagen-α1、TIMP-2 mRNA表达;Western blot法检测肝星状细胞内转化生长因子β1蛋白表达。结果与结论：实验组中肝星状细胞内转化生长因子β1、collagen-α1、TIMP-2 mRNA表达较对照组明显下调,且随处理时间的延长,mRNA表达的下调程度亦随之增强（实验组72h〉实验组48h〉对照组）;实验组肝星状细胞内转化生长因子β1蛋白表达较对照组下调,同时具有时间依赖性（对照组〉实验组48h〉实验组72h,P〈0.05）。提示脐带间质干细胞可抑制肝星状细胞纤维化形成的生物学活性,并可能是通过针对转化生长因子β靶点及其下游基因产物起作用。     

转化生长因子-β_1对新生大鼠星形胶质细胞结缔组织生长因子表达的影响

目的观察转化生长因子(TGF-β1)对新生大鼠星形胶质细胞(Ast)结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响。方法采用新生SD大鼠大脑皮层Ast,以FITC细胞免疫荧光鉴定后,用含0、1、2、4 ng/m L的TGF-β1分别干预培养24 h,分别用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Wb)检测细胞中CTGF mRNA和蛋白的表达。结果 TGF-β1能显著增加Ast中CTGF mRNA及蛋白表达;随着TGF-β1浓度的增加,CTGF mRNA和蛋白的表达量均有升高的趋势,差异有统计学意义(P0.05)。结论 TGF-β1能上调Ast中CTGF的表达,而该影响随TGF-β1浓度增加而显著,提示TGF-β1可以在一定程度上通过调节新生SD大鼠Ast CTGF表达导致神经胶质化。     

磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶与转化生长因子β1在正常和腰椎间盘退变组织中的表达

背景：研究表明p38丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路与椎间盘退变过程中炎症反应密切相关。目的：检测腰退变椎间盘组织和正常腰椎间盘组织中磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶和转化生长因子β1的表达。方法：选取经手术切除的36例退变椎间盘组织和10例正常椎间盘组织为对象,应用免疫组织化学法检测两组中磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶和转化生长因子β1的表达,并应用真彩色病理图像分析系统进行分析。结果与结论：腰退变椎间盘组织中磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶和转化生长因子β1的阳性表达率均高于正常椎间盘组织（P〈0.05）,证实磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶和转化生长因子β1在退变椎间盘组织中呈高表达。     

磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶与转化生长因子β1在正常和腰椎间盘退变组织中的表达

背景:研究表明p38丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路与椎间盘退变过程中炎症反应密切相关。目的:检测腰退变椎间盘组织和正常腰椎间盘组织中磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶和转化生长因子β1的表达。方法:选取经手术切除的36例退变椎间盘组织和10例正常椎间盘组织为对象,应用免疫组织化学法检测两组中磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶和转化生长因子β1的表达,并应用真彩色病理图像分析系统进行分析。结果与结论:腰退变椎间盘组织中磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶和转化生长因子β1的阳性表达率均高于正常椎间盘组织(P<0.05),证实磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶和转化生长因子β1在退变椎间盘组织中呈高表达。     

Inhibition of p38 mitogen-activated protein kinase blocks activation of rat pancreatic stellate cells

Activated pancreatic stellate cells (PSCs) have recently been implicated in the pathogenesis of pancreatic fibrosis and inflammation. However, the signal transduction pathways in PSCs remain largely unknown. We examined the role of p38 mitogen-activated protein (MAP) kinase in the activation of PSCs. PSCs were isolated from rat pancreas tissue and used in their culture-activated, myofibroblast-like phenotype. Activation of p38 MAP kinase was determined by Western blotting using anti-phosphospecific antibody. The effects of two p38 MAP kinase inhibitors, 4-(4-flurophenyl)-2-(4-methylsulfinylphenyl)-5-(4-pyridyl)imidazole (SB203580) and 4-(4-flurophenyl)-2-(4-hydroxyphenyl)-5-(4-pyridyl)1H-imidazole (SB202190), on the parameters of PSC activation, including proliferation, expression of alpha-smooth muscle actin, alpha1(I) procollagen, and prolyl 4-hydroxylase (alpha) genes, and monocyte chemoattractant protein-1 production were evaluated. Interleukin-1beta and platelet-derived growth factor-BB activated p38 MAP kinase. Platelet-derived growth factor-induced PSC proliferation was inhibited by SB203580 and SB202190. These reagents decreased alpha-smooth muscle actin protein expression, and alpha1(I) procollagen and prolyl 4-hydroxylase (alpha) mRNA levels. Treatment with these p38 MAP kinase inhibitors also resulted in inhibition of monocyte chemoattractant protein-1 expression. In addition, SB203580 inhibited spontaneous activation of freshly isolated PSCs in culture on plastic. Thus, inhibition of p38 MAP kinase modulated profibrogenic and proinflammatory actions in PSCs, implying a potential application of p38 MAP kinase inhibitors for the treatment of pancreatic fibrosis and inflammation.     

接受骨髓单个核细胞移植慢性肾损伤大鼠肾脏转化生长因子β1和结缔组织生长因子的表达

背景:近年来干细胞移植在肾脏病领域取得了一定进展,但多局限于急性肾损伤,涉及慢性肾损伤方面的报道较少,且肾脏保护机制不清楚.目的:观察同种异体骨髓单个核细胞移植后慢性肾损伤大鼠尿蛋白排泄、肾功能的变化,以及对.肾组织转化生长因子β1和结缔组织生长因子表达的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008-05/10在解放军沈阳军区总医院动物实验中心完成.材料:健康SPF级雌性SD大鼠30只,随机分为3组:正常对照组、模型组、细胞移植组,10只/组.另取雄性SD大鼠10只用于骨髓单个核细胞的制备.方法:模型组、细胞移植组大鼠采用改良肾脏5/6切除术建立慢性肾损伤模型,造模成功后10周,细胞移植组大鼠心脏内注射骨髓单个核细胞悬液1.0 mL,细胞数1×10~8个,只,治疗4周;模型组心脏内注射等量生理盐水.主要观察指标:24 h尿蛋白定量及肾功能变化,肾组织病理学变化,肾组织转化生长因子β1及结缔组织生长因子蛋白的表达.结果:①与正常对照组比较,模型组、细胞移植组大鼠尿蛋白排泄量及血清尿素、肌酐浓度均显著升高(P相似文献