高效液相色谱-电化学法测定大鼠不同脑区单胺类神经递质及其代谢产物的方法学研究

目的:建立使用高效液相色谱-电化学法测定大鼠下丘脑、海马、皮质中单胺类神经递质及其代谢产物的方法,所测指标包括去甲肾上腺素(NE)、五羟吲哚乙酸(5-HIAA)、高香草酸(HVA)、多巴胺(DA)、和5-羟色胺(5-HT)。方法:色谱柱采用Waters C18反相色谱柱(3.9mm×150mm,5μm),流动相为水相(每1L中含辛烷磺酸钠2.5g,磷酸二氢钾13.6g,乙二胺四乙酸36mg,pH值3.3):甲醇:乙腈=78:19:3,流速为0.8mL/min,柱温35℃;电化学检测器工作电极为玻璃碳电极,参比电极为银/氯化银(Ag/AgCl)电极,工作电压为0.7V[1]。结果:脑组织中五种神经递质的保留时间分别为:去甲肾上腺素3.4min、五羟吲哚乙酸4.2min,高香草酸4.8min,多巴胺5.8min,5-羟色胺11.4min;最低检测限为4～16ng/mL。线性范围为20～320ng。脑组织样品的相对回收率为87.5%～113.9%,日内、日间精密度RSD小于7%。结论:该方法具有快速、准确、灵敏且样品制备简便等优点,可用于大鼠部分脑区内单胺类神经递质的分离测定。     

安寐汤对失眠大鼠脑组织单胺类神经递质的影响

[目的]探讨安寐汤改善睡眠的作用机制.[方法]采用库仑阵列电化学高效液相色谱法测定对氯苯丙氨酸(PCPA)化失眠大鼠脑组织5-羟色胺(5-HT)、5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)的含量.[结果]安寐汤可以显著升高失眠大鼠脑内5-HT、5-HIAA含量.[结论]安寐汤改善大鼠睡眠的作用可能与其影响脑内单胺类神经递质5-HT...     

舒心安神膏对睡眠剥夺大鼠脑组织中单胺类神经递质含量的影响

目的：探讨舒心安神膏对睡眠剥夺大鼠脑组织单胺类神经递质含量的影响。方法35只雄性SD大鼠分为5组：模型组、药物对照组及舒心安神膏低、中、高剂量组,于实验当天分别灌服生理盐水、地西泮（4 mg／kg）及舒心安神膏（0．28、0．84、1．40 g／mL）,0．1 mL／10 g体重,给药1次／d,连续7 d。于给药的第5天通过大鼠腹腔注射对氯苯氨酸建立大鼠睡眠剥夺模型,高效液相色谱－电化学法测定各组大鼠脑组织中5－羟色胺（5－HT）、5－羟基吲哚乙酸（5－HIAA）、多巴胺（ DA）、去甲肾上腺素（ NE）含量变化。结果4种神经递质在9 min内完全洗脱,分离效果良好,在1～1000 ng／mL浓度范围有较好的线性关系,其相关系数不低于0．997,4种神经递质绝对回收率不低于95．56％;舒心安神膏低、中、高剂量组大鼠脑干、大脑皮质中5－HT、5－HIAA、NE的含量及药物对照组大鼠大脑皮质中5－HT、5－HIAA和NE的含量显著低于模型组（ P＜0．05）, DA含量差异无统计学意义（P＞0．05）。结论高效液相色谱－电化学法灵敏度高、重复性好,能有效分离检测大鼠脑组织中单胺类神经递质。舒心安神膏调治失眠作用可能与降低脑组织NE水平有关,通过调节5－HT、5－HIAA与NE等神经递质水平来恢复正常睡眠节律。     

大鼠脑组织中儿茶酚胺类神经递质的rP—HPLC—ECD定量分析

目的：建立一种定量分析脑组织中儿茶酚胺类神经递质的方法。方法：采用反相高效液相色谱电化学色谱法（ｒＰ－ＨＰＬＣ－ＥＣＤ）测定大鼠脑组织中去甲肾上腺素（ＮＥ）、肾上腺素（Ｅ）、多巴胺（ＤＡ）、５羟色胺（５－ＨＴ）。结果：由色谱图显示各单胺类成分分离完全。结论：本方法快速、简便、准确，为医务工作者提供方便与帮助     

衰老大鼠下丘脑单胺类神经递质含量的变化

目的:观察D-半乳糖衰老大鼠下丘脑单胺类神经递质含量的变化.方法:D-半乳糖连续腹腔注射制作亚急性衰老的大鼠模型,采用高效液相色谱-电化学法检测各组大鼠下丘脑单胺类神经递质去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)的含量.结果:D-半乳糖衰老大鼠下丘脑NE、DA、5-HT的含量明显降低(与正常大鼠相比P＜0.01).结论:D-半乳糖衰老大鼠脑单胺类神经递质含量下降,这可能是D-半乳糖致衰老的作用机制之一.     

高效液相色谱-电化学检测法测定生物样品中单胺类神经递质及其代谢产物*

[目的]建立一种简单、快速、灵敏的测定生物样品中单胺类神经递质及其代谢产物的高效液相色谱方法.[方法]色谱柱采用Waters C18反相色谱柱(3.9 mm×150 mm,5 μm),流动相为水相(每500 mL中含辛烷磺酸钠1.25 g,磷酸二氢钾6.8 g,乙二胺四乙酸18 mg,pH值3.3)∶甲醇∶乙腈=78∶19∶3,流速为0.8 mL/min,柱温35 ℃;电化学检测器工作电极为玻璃碳电极,参比电极为银/氯化银(Ag/AgCl)电极,工作电压为0.7 V.[结果]5种物质保留时间分别为去甲肾上腺素3.6 min,5-羟吲哚乙酸4.5 min,高香草酸5.2 min,多巴胺6.2 min,5-羟色胺11.9 min;线性范围均为20-1 000 μg/L,最低检测限为4～8 μg/L.[结论]此方法测定生物样品中的单胺类神经递质及其代谢产物,简便,快速且灵敏度高.     

舒肝解郁饮对抑郁大鼠脑组织单胺类神经递质及其代谢产物的影响

目的：探讨舒肝解郁饮（SGJYY）对抑郁大鼠模型脑组织中单胺类神经递质及其代谢产物的影响。方法：用孤养加慢性不可预见的中等强度刺激建立大鼠抑郁模型,给予中药舒肝解郁饮,用高效液相-电化学方法检测抑郁大鼠脑组织单胺类神经递质及其代谢产物的含量。观察各组大鼠体重和糖水消耗量、旷场行为实验、游泳不动时间等行为学指标的变化。结果：与对照组比较,各造模组大鼠体重增长缓慢（P<0.01）,糖水消耗量减少（P<0.01）,旷场行为实验得分减少（P<0.01）,游泳不动时间延长（P<0.01）;与对照组比较,模型组大鼠脑组织5-羟色胺(5-HT)含量降低（P<0.01）,5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)升高（P<0.01）,去甲肾上腺素(NE)降低（P<0.01）,5-甲氨基-4羟基苯乙二醇(MHPG)升高（P<0.01）;多巴胺(DA)、3,4二羟基苯乙酸(DOPAC)降低（P<0.01）。舒肝解郁饮能对抗慢性应激所造成的大鼠体重增长缓慢,并使各项行为学指标得到改善。百忧解组、SGJYY大剂量组大鼠脑组织中5-HT升至正常水平,SGJYY中剂量组5-HIAA降至接近正常水平;百忧解组、SGJYY大剂量组NE升至正常水平,百忧解组、SGJYY大、中、小剂量组MHPG降至正常水平;百忧解组、SGJYY大剂量组DA升至接近正常水平,百忧解组DOPAC升至接近正常水平。结论：舒肝解郁饮抗抑郁机制与调节脑内单胺类神经递质5-HT、NE、DA及其代谢物的含量有关。     

高效液相色谱-电化学检测法测定生物样品中单胺类神经递质及其代谢产物

[目的]建立一种简单、快速、灵敏的测定生物样品中单胺类神经递质及其代谢产物的高效液相色谱方法。[方法]色谱柱采用WatersC18反相色谱柱(3.9mm×150mm,5μm),流动相为水相(每500mL中含辛烷磺酸钠1.25g,磷酸二氢钾6.8g,乙二胺四乙酸18mg,pH值3.3)∶甲醇∶乙腈=78∶19∶3,流速为0.8mL/min,柱温35℃;电化学检测器工作电极为玻璃碳电极,参比电极为银/氯化银(Ag/AgCl)电极,工作电压为0.7V。[结果]5种物质保留时间分别为:去甲肾上腺素3.6min,5-羟吲哚乙酸4.5min,高香草酸5.2min,多巴胺6.2min,5-羟色胺11.9min;线性范围均为20～1000μg/L,最低检测限为4～8μg/L。[结论]此方法测定生物样品中的单胺类神经递质及其代谢产物,简便,快速且灵敏度高。     

巴戟天水提液对自然衰老小鼠脑组织中单胺类神经递质含量的影响

目的 研究巴戟天水提液对自然衰老小鼠脑组织中多巴胺（DA）、去甲肾上腺素（NE）、肾上腺素（E）和5-羟色胺（5-HT）含量的影响,探讨巴戟天益脑的作用机制.方法 17个月龄昆明种小鼠连续给药15天后进行力竭性负重游泳实验,并采用高效液相-库伦阵列（HPLC-ECD）法检测小鼠脑组织中单胺类神经递质含量,比较分析各给药组与空白组的差异.结果 巴戟天水提液能提高小鼠负重游泳时间,与空白组相比,巴戟天水提液高、中、低剂量组脑组织中NE、E、DA的含量均升高,且E和DA的含量存在明显的量效关系,5-HT的含量则降低.结论 巴戟天水提液能明显提高大鼠脑中能提高记忆的NE、E、DA的含量,同时降低能阻抑记忆的5-HT的含量,表明巴戟天水提液可以通过改变脑内单胺类神经递质的含量而益脑.     

姜黄素类似物L6H3对帕金森病大鼠脑部纹状体中单胺类神经递质代谢物的影响

目的：研究姜黄素类似物L6H3对帕金森病（PD）大鼠脑纹状体中7种单胺类神经递质及其代谢物的影响。方法：采用脑部纹状体定位注射6-羟基多巴胺（6-OHDA）建立PD大鼠模型,将大鼠随机分为假手术组、PD组和PD+L6H3组。通过微透析活体取样技术和高效液相色谱电化学检测法（HPLC-ECD）联用测定PD组大鼠脑纹状体细胞外液中单胺类神经递质及其代谢物含量。结果：造模后第6周（即给药第2周）及造模后第7周（即停药第1周）,PD+L6H3组大鼠脑纹状体的多巴胺（DA）、3,4-二羟基苯乙酸（DOPAC）、高香草酸（HVA）、去甲肾上腺素（NE）、肾上腺素（E）、5-羟色胺（5-HT）、5-羟基吲哚乙酸（5-HIAA）与PD组比较明显升高（P＜0.01）。结论：L6H3在给药后第2周及停药后1周均能明显提高PD大鼠脑中单胺类神经递质及其代谢物的含量。     

抗郁散对CUMS大鼠中枢递质5-HT和NE的影响

目的：观察抗郁散对慢性不可预见性轻度应激（CUMS）抑郁症模型大鼠行为学及脑内单胺神经递质去甲肾上腺素（NE）和5-羟色胺（5-HT）的影响。方法：将60只清洁级SD雄性大鼠,随机分为空白对照组、模型组、西药氟西汀组、抗郁散大、中、小剂量组,每组10只。其中50只大鼠采用CUMS制备抑郁模型;采用高效液相-电化学检测法（HPLC-ECD）检测脑内5-HT和NE含量的变化,进行统计分析比较。结果：与模型组比较,抗郁散中剂量组的大鼠体重明显增加（P〈0.05）,行为活动明显增多（P〈0.05）,对糖水的偏嗜明显增强（P〈0.05）,脑内单胺神经递质NE和5-HT的含量显著提高（P〈0.05）。结论：抗郁散具有改善CUMS抑郁模型大鼠行为学的特征,明显提高CUMS抑郁模型大鼠脑内单胺神经递质5-HT和NE的含量,提示抗郁散通过提高大鼠脑内单胺神经递质5-HT和NE的含量或活性,从而达到治疗抑郁症的目的。     

酸性成纤维细胞生长因子对帕金森病大鼠模型脑神经递质的影响

目的：探讨酸性成纤维细胞生长因子（aFGF）对帕金森病（PD）大鼠脑神经递质的影响。方法：SD大鼠60只,随机分为3组：正常组（Sham）、模型组（PD）和aFGF给药组（AFGF）,每组20只,通过脑内立体定向术,将6-羟基多巴胺（6-OHDA）注入后2组大鼠脑右侧纹状体建立PD大鼠模型,阿扑吗啡（APO）诱导行为学来判断模型是否成功,采用高效液相色谱-电化学（HPLC-ECD）联用检测大鼠脑纹状体组织中的单胺类神经递质及其代谢产物含量。结果：aFGF给药组的去甲肾上腺素（NE）、肾上腺素（E）、3,4-二羟基苯乙酸（DOPAC）、多巴胺（DA）、高香草酸（HVA）明显高于模型组,低于正常组,差异均具有统计学意义。5-羟色胺（5-HT）和5-羟基吲哚乙酸（5-HIAA）与模型组相比含量无明显变化,但低于正常组,且差异具有统计学意义。结论：aFGF能有效提高帕金森动物模型脑内纹状体中单胺类神经递质的含量,并且在一定程度上改善了PD的症状。     

高效液相色谱法测定四磨汤口服液中槟榔碱的含量

目的建立高效液相色谱法（HPLC）测定四磨汤口服液中槟榔碱含量的方法。方法色谱柱：Diamonsil C18柱（250mm×4．6mm,5μm）,流动相：0．02mol／L磷酸二氢钾（含0.3％三乙胺,H3PO4调pH3）-乙腈（99：1）,检测波长：215nm,柱温：20℃,流速：0．8mL/min。结果主峰与相邻峰分离度较好,槟榔碱浓度在0．054-0．54μg/mL范围内,其峰面积值与浓度呈良好的线性关系（r=0．9993）,平均加样回收率为99．2％,RSD=1．1％。结论该方法简单、灵敏、快速、准确。可用于四磨汤口服液中槟榔碱的含量测定。     

清肺抑火口腔喷雾剂中栀子苷、黄芩苷含量测定

目的：建立清肺抑火口腔喷雾剂中栀子苷和黄芩苷含量的测定方法。方法：采用HPLC法,以依利特C18柱（4.6mm×200mm,5μm）分离,以乙腈-水（11∶89）和甲醇-水-磷酸（45∶55∶0.2）为流动相,238nm和280nm为检测波长,流速1.0mL.min-1,柱温30℃。结果：栀子苷和黄芩苷分别在1.19~3.95μg（r=0.9998）和1.61~5.63μg（r=0.9998）范围内呈良好的线性关系,平均回收率分别为100.62%（RSD=1.70%）和100.32%（RSD=1.58%）。结论：该方法简便、快速、灵敏度高,可作为清肺抑火口腔喷雾剂中栀子苷和黄芩苷含量的测定方法。     

HPLC法测定脑梗死患者血清PDE活性及临床意义

目的建立血清磷酸二酯酶（PDE）活性测定的HPLC方法并探讨其在脑梗死患者的临床意义。方法分离293例脑梗死患者和148例对照组外周血白细胞，匀浆可溶部分为酶样品，以cAMP为反应底物，采用底物的减少来测定PDE的活性。色谱柱为Nova—Pak^18C（3．9mm×150mm，4μm），流动相为甲醇-磷酸盐缓冲液（10：90，V／V）；流速为0．8mL／min，柱温为室温；检测波长为254nm。结果PDE底物（cAMP、cGMP）和系列产物（5＇AMP、5＇GMP、腺苷、次黄嘌呤和腺嘌呤）分离良好。无干扰。cAMP和cGMP检测限分别为0．125μmoL／L和0．0625μmoL／L；平均回收率91．2％～102．8％；日内及日间RSD均〈10％。脑梗死组外周血PDE活性为（13．805±3．121），对照组为（7．334±2．324），差异有统计学意义（P〈0．001）。结论脑梗死患者PDE活性增高；HPLC法简单易行，能精确可靠地测定外周血白细胞的PDE活性。     

逍遥散对抑郁症模型大鼠脑和结肠中五羟色胺表达的影响

目的观察中药逍遥散对抑郁模型大鼠脑和结肠中五羟色胺(5-HT)表达的影响。方法 40只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、氟西汀组、逍遥散组各10只,后3组采用慢性应激方法结合孤养法制备抑郁大鼠模型,正常组及模型组给予生理盐水,氟西汀组给予2 mg/ml的氟西汀,逍遥散组给予1.25g/ml的逍遥散,均2 ml,连续21 d。观察各组体质量增长、自主活动、糖水消耗的变化,并用免疫组化SABC法检测各组大鼠右侧大脑皮质和结肠中5-HT的表达。结果与正常组比较,模型组体质量增长数、主动活动次数及糖水消耗量下降,脑皮质及结肠中5-HT的MD值及YP值均均降低(P<0.01)。与模型组比较,氟西汀组及逍遥散组各项指标均有改善,且逍遥散组改善优于氟西汀组(P<0.05,P<0.01)。结论逍遥散的抗抑郁作用可能与增加脑内及结肠中单胺神经递质5-HT含量有关。     

高效液相色谱法测定传统朝药方两仪煎中马钱苷的含量

[目的]建立传统朝药方两仪煎中马钱苷的含量测定方法.[方法]采用高效液相色谱法(HPLC法),色谱柱为Diamonsil C18(250.0mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-水(15∶85),流动速度为1.0 mL/min,检测波长为240 nm,柱温为30℃.[结果]马钱苷在0.23～1.61"g范围内时线性关系良好,回归方程为Y=40 743 X-15 784,r=0.999 9(n=7),平均加样回收率(n=9)为103.19%,RSD为1.84%.[结论]HPLC法准确、灵敏、专属性强、重现性好,可作为传统朝药方两仪煎的质量控制方法.     

高效液相色谱法测定安尔眠胶囊中丹参素钠的含量

目的建立安尔眠胶囊中丹参素钠含量的测定方法。方法采用高效液相色谱（HPLC）法对安尔眠胶囊中的丹参素钠进行含量测定。色谱柱为Hypersil ODS2（250 nm×4.6 nm,5μm）,流动相为甲醇-1.1%冰醋酸（5∶95）,流速为1.0 mL/min,检测波长为281 nm。结果丹参素钠对照品在2 1.44~214.40μg/mL范围内呈良好的线性关系（r=0.999 9,n=6）,平均加样回收率为98.78%,RSD为2.15%（n=6）。结论本法操作简便,结果可靠,重现性好,适用于安尔眠胶囊的质量控制。     

盐酸利多卡因在高原藏族健康志愿者体内的药物动力学研究

目的研究盐酸利多卡因在高原藏族健康志愿者体内的药物动力学特征。方法采用RP—HPLC法测定人血浆中药物浓度,色谱柱为Liehrospher C18（4．6×250mm,5μm）,流动相为乙腈-甲醇-0．5％冰乙酸溶液（15：20：50,v／v）。DAS2．0软件计算药物动力学参数。结果盐酸利多卡因在高原藏族志愿者的t1／2为（2．44±0．52）h,AUC（0—t）为7．08±1．32μg．h／mL,MRT（0-t）为（2．50±0．25）h,Tmax为0．53±0．12h,Cmax为2．74±0．57μg／ml,CL为1．30±0．27L／h,V为4．49±0．90L。结论盐酸利多卡因在高原藏族健康志愿者体内吸收迅速,半衰期较平原志愿者显著延长。