鱼藤酮对大鼠脑内多巴胺能神经元损伤的机制研究

目的研究鱼藤酮对大鼠脑内多巴胺能神经元的毒性作用机制。方法健康成年雄性Wistar大鼠背部皮下注射鱼藤酮制备帕金森病动物模型。采用免疫细胞化学、透射电镜技术及分光光度法技术检测大鼠脑内多巴胺能神经元的损伤及纹状体中氧化应激参数的改变。结果鱼藤酮组大鼠中脑酪氨酸羟化酶(TH)免疫反应阳性神经元数明显少于对照组(P<0.01),纹状体中TH免疫反应强度明显降低(P<0.05),透射电镜可见鱼藤酮组黑质多巴胺能神经元内线粒体损伤,树突变性,其内微粒、微管聚集,同时纹状体发生了明显的氧化损伤。结论氧化应激和超微结构改变是鱼藤酮对大鼠脑内多巴胺能神经元损伤的主要发病机制。     

多巴胺能神经元对鱼藤酮敏感性的增龄改变及其机制

目的 研究鱼藤酮对不同月龄SD大鼠多巴胺能神经元的影响及其机制.方法 3、12、20月龄雄性SD大鼠各40只,按照随机数字表法分为自然增龄组和鱼藤酮处理组,每组20只.自然增龄组皮下注射无鱼藤酮的混合溶剂,处理组皮下注射鱼藤酮[1.0 mg/(kg·d)],连续给药30d,每周停药1d,构建大鼠鱼藤酮染毒模型.大鼠黑质切片采用酪氨酸羟化酶(TH)免疫组化染色;测定黑质组织匀浆超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性;Western blotting检测黑质部位caspase-3表达水平.结果 鱼藤酮处理后各月龄大鼠TH阳性细胞计数均比相应自然增龄组降低,且20月龄大鼠降低最为明显,差异均有统计学意义(P＜0.05).自然增龄组3月龄大鼠黑质组织SOD和CAT活性最高,20月龄大鼠有所下降,而鱼藤酮处理后各月龄大鼠SOD、CAT活性均明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05).Western blotting结果显示,鱼藤酮处理组各月龄大鼠剪切活化的caspase-3的表达较自然增龄组均明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05),其中20月龄大鼠最为明显.结论 鱼藤酮可诱导大鼠TH阳性细胞随年龄增加而减少,氧化应激水平的增高和caspase-3的激活可能参与了SD大鼠对鱼藤酮敏感性随年龄增加的作用机制.     

丙炔苯丙胺对鱼藤酮致多巴胺能神经细胞损伤的保护机制研究

目的:探讨丙炔苯丙胺对多巴胺能神经细胞保护机制的研究。方法:用神经生长因子(NGF)将PC12细胞诱导分化成多巴胺能神经元的细胞模型,经鱼藤酮处理后给予不同浓度的丙炔苯丙胺,观察细胞形态改变,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活性及代谢状态,磷脂酰丝氨酸外翻法(Annexin-V)检测细胞凋亡,JC-1检测线粒体膜功能及DCFH-DA检测细胞内ROS。结果:经鱼藤酮处理24h后PC12细胞突起样结构消失,应用丙炔苯丙胺后细胞形态逐渐变大,突起也有恢复,细胞贴壁能力增强,与鱼藤酮组比较,在丙炔苯丙胺50μmol·L-1作用24h时即出现细胞活力恢复,A570值为0.39±0.01(P<0.01);Annexin-V检测凋亡细胞明显减少;JC-1检测丙炔苯丙胺处理组的线粒体膜电位较鱼藤酮处理组有明显恢复,DCFH-DA检测鱼藤酮组ROS水平升高,丙炔苯丙胺组ROS降低。结论:鱼藤酮在体外对多巴胺能神经元有毒性作用,丙炔苯丙胺能够明显减少鱼藤酮诱导的PC12细胞的死亡。其机制可能是抑制氧化应激及拮抗细胞凋亡。     

鱼藤酮致鼠黑质脑片多巴胺能神经元损伤的实验研究

目的 探讨低剂量鱼藤酮对乳鼠中脑黑质脑片多巴胺能神经元的毒性作用及依达拉奉的保护作用.方法 取Wistar乳鼠中脑黑质脑片进行培养,酪氨酸羟化酶(TH)免疫组化染色观察多巴胺神经元毁损情况,western-blot测定各组脑片α-突触核蛋白(α-Synuclein)含量,扫描电镜观察脑片超微病理结构变化.结果 黑质脑片多巴胺神经元的数目随鱼藤酮浓度及培养时间的增加而明显减少,多巴胺神经元的超微病理显示氧化应激性损害,α-Synuclein的含量随鱼藤酮浓度的增加而升高,依达拉奉 鱼藤酮组较鱼藤酮组能够减少多巴胺能神经元的凋亡并使α-Synuclein的表达量减少.结论 成功利用黑质脑片器官型培养体系建立了帕金森病(Pakinson's disease)模型;低剂量鱼藤酮导致选择性多巴胺神经元的凋亡,并导致α-Synuclein的含量增加,自由基清除剂依达拉奉对此有保护作用.     

脑内5-羟色胺受体的分布和功能

5-羟色胺(5-HT)作为神经递质,需与5-HT受体(5-HTR)结合才能发挥正常的生理功能。5-HTR可分为7大类,并可进一步分为14个亚型。研究发现几乎所有的5-HTR类型在脑内均有表达,但它们的分布区域、密度及作用特点各不相同,故它们的主要生理功能也不尽相同。目前证实许多疾病,如抑郁症、偏头痛和精神分裂等与5-HT某些受体亚型的异常有关。本综述主要对5-HTR亚型在脑内的分布情况及可能具备的功能作简要介绍,为进一步研究提供参考。     

α-硫辛酸对帕金森病大鼠脑内多巴胺能神经元的保护作用及其机制探讨

目的观察α-硫辛酸(LA)对鱼藤酮致帕金森(PD)大鼠模型黑质多巴胺能神经元的保护作用。方法健康成年雄性Wistar大鼠背部皮下注射鱼藤酮制备PD大鼠模型,药物治疗组同时给予大鼠腹腔注射LA。采用分光光度法检测大鼠脑内丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH),Western blot检测大鼠中脑黑质及纹状体酪氨酸羟化酶(TH)的表达变化。结果与对照组相比,鱼藤酮组大鼠纹状体中MDA明显增高(P<0.01)而GSH含量明显降低(P<0.01),TH蛋白在黑质和纹状体与对照组比较明显降低(P<0.05);LA干预后与鱼藤酮组相比MDA明显降低及GSH明显增高(P<0.05),TH蛋白表达明显增加(P<0.05)。结论氧化应激在PD发病中起着非常重要的作用,LA能有效减轻PD大鼠脑内氧化应激损伤、保护脑内多巴胺能神经体系,同时改善PD样症状。     

鱼藤酮处理大鼠脑内VMAT2及TPH、5-HT的表达改变

目的观察鱼藤酮处理大鼠脑内单胺囊泡转运体2(VMAT2)。色氨酸羟化酶(TPH)及5—羟色胺(5—HT)的表达变化;探讨其对5—HT能神经元的影响及可能机制。方法选用健康、成年雄性Wistar大鼠,背部皮下注射鱼藤酮3d或28d制作大鼠动物模型;利用免疫细胞化学分析VMAT2在大鼠黑质、中缝背核和尾壳核以及TPH、5—HT在中缝背核的表达变化;以透射电镜观察轴突超微结构的改变,探讨鱼藤酮毒性作用的可能机制。结果鱼藤酮3d组:(1)鱼藤酮组大鼠黑质、中缝背核VMAT2的表达增加,免疫反应强度吸光度值显著高于对照组;尾壳核VMAT2的表达减弱,免疫反应强度吸光度值明显低于对照组(P0.01);(2)鱼藤酮组大鼠中缝背核TPH、5—HT的表达减少,免疫反应强度吸光度值显著低于对照组(P0.01);(3)透射电镜观察显示鱼藤酮处理大鼠中缝背核轴突变性、其内微管解聚。鱼藤酮28d组:(1)鱼藤酮组大鼠黑质、中缝背核及尾壳核VMAT2的表达均减弱,免疫反应强度吸光度值显著低于对照组(P0.01或P0.05);(2)与对照组相比,鱼藤酮组大鼠中缝背核TPH、5—HT的表达降低,免疫反应强度吸光度值显著低于对照组(P0.01)。结论鱼藤酮降低5—HT能神经元TPH、5—HT的表达,其毒性作用可能与轴突微管解聚导致突触囊泡VMAT2轴浆顺行转运障碍有关。     

脑内5-羟色胺的生理特点及检测途径

5-羟色胺(5-HT)是神经精神相关领域的研究热点和难点,本文阐述了其生理特点,并对脑内5-HT的检测途径进行了分析和综述,以利于相关临床研究参考。     

帕金森病伴发抑郁患者血小板5-羟色胺浓度的对照研究

目的 了解5-羟色胺(5-HT)在帕金森病(PD)伴发抑郁症状中的作用.方法 采用高效液相色谱法,分别测定60例PD患者(伴发抑郁症状31例)和48 例正常对照者的血小板5-HT含量.结果 51. 7 %的PD患者伴发抑郁症状,PD组5-HT浓度较正常组显著下降,伴发抑郁组PD患者血小板5-HT浓度较未伴发抑郁组亦显著降低.结论 本文研究结果支持5- HT 代谢异常在PD患者中起重要作用的理论,纠正血小板5-HT浓度异常可能会促进PD患者神经功能康复.     

攻击行为与5-羟色胺能

讨论攻击行为与5-羟色胺能的关系;发现其与自杀、暴力行为等相关。     

鱼藤酮帕金森病大鼠模型建立的研究

目的探讨鱼藤酮帕金森病大鼠模型的建立方法.方法采用背部皮下注射鱼藤酮,然后观察大鼠的行为学及黑质-纹状体的酪氨酸羟化酶免疫活性变化、海马病理学变化.结果经过1～8周观察,鱼藤酮处理大鼠出现明显的行为学、黑质-纹状体酪氨酸羟化酶免疫活性变化,海马无明显病理学变化,模型显示出帕金森病的典型特征.结论背部皮下注射鱼藤酮的方法可成功制作帕金森病大鼠模型.     

利福平对鱼藤酮诱导大鼠的抗多巴胺神经元凋亡作用

目的探讨利福平抗鱼藤酮诱导帕金森病大鼠模型多巴胺神经元凋亡的作用。方法给SD大鼠背部皮下注射鱼藤酮1.5 mg/(kg.d)3周使其黑质多巴胺神经元发生凋亡,同时经灌胃给予利福平30 mg/(kg.d)干预,并通过对大鼠中脑切片进行TUNEL及Bax、Bcl-2和Caspase-3的免疫活性检测以明确利福平抗多巴胺神经元凋亡的作用。结果长期低剂量接触鱼藤酮可诱导SD大鼠中脑黑质部位出现凋亡细胞增加以及Bax、Bcl-2、Caspase-3的免疫活性的改变(P均<0.01),而应用利福平后可明显减轻这些变化(P均<0.01)。结论利福平具有抗鱼藤酮帕金森病大鼠模型的多巴胺神经元凋亡的作用,且此作用是通过上调Bcl-2和Bax的比值、抑制caspase通路而实现的。     

鱼藤酮灌胃制备帕金森病小鼠模型的评价及机制

目的探讨经持续鱼藤酮灌胃制备帕金森病小鼠模型及其发病机制。方法将50只老年雄性C57小鼠随机分为模型组和对照组,2组均给予连续灌胃12周,模型组予灌注0．01ml／g鱼藤酮氯仿溶液,对照组则予灌注0．01mg／g氯仿溶液。在灌胃前、灌胃6、12周时对2组小鼠行网格试验、爬杆试验和滚轴试验以检测行为学变化,使用高效液相色谱电化学法（HPLC-ECD）检测纹状体多巴胺（DA）、3,4-二羟基苯乙酸（DOPAC）、高香草酸（HVA）等神经递质浓度;对肠、胸段脊髓、中脑行α-突触核蛋白（α-Syn）、硫磺素S（ThS）、酪氨酸羟化酶（TH）等免疫组化染色。结果至灌胃12周时模型组行为学变化较对照组均有显著性差异（P〈0．01）,模型组纹状体DA、DOPAC、HVA水平较对照组有显著性降低（P〈0．01）。灌胃6周时模型组小肠内、胸段脊髓处α-Syn的表达水平较对照组明显增加,且ThS表达比例增多,而中脑处a-Syn及TH阳性细胞数无显著性差异;至灌胃12周时模型组中脑处Syn的表达较对照组明显要增多,而TH阳性细胞数较对照组显著性减少（P〈0．05）。结论经持续鱼藤酮灌胃制备的慢性进展性帕金森病小鼠模型模拟了PD缓慢进展的病理过程,其机制可能是小肠神经丛局部的α-Syn多聚体通过类朊蛋白途径沿着神经传导通路播散至脑内。     

多巴胺对鱼藤酮细胞毒性介导作用研究

目的探讨多巴胺在鱼藤酮细胞毒性损伤中的作用。方法采用鱼藤酮(1μmol/L)处理PC12细胞,噻唑蓝比色法检测细胞活性,流式细胞术检测DHR123荧光强度;并采用多巴胺耗竭剂-利血平预处理3小时,观察上述指标。结果 1μmol/L鱼藤酮处理PC12细胞24小时,导致细胞活力较正常组显著下降(P<0.05),吸光度为0.730±0.01(正常组为1.112±0.025);利血平(1μmol/L和5μmol/L)预处理后再给予鱼藤酮,孵育24小时后,吸光度分别为0.945±0.02和1.06±0.03,细胞活力较鱼藤酮组显著升高(P<0.05)。鱼藤酮处理24小时,过氧化物水平升高至正常组的281%,而利血平(1μmol/L和5μmol/L)预处理后,分别降至正常组的248%和232%,与鱼藤酮组比较有显著差异(P<0.05)。结论多巴胺介导了鱼藤酮对多巴胺能细胞的毒性作用。     

鱼藤酮对多巴胺能神经元的神经毒性作用

目的　探讨鱼藤酮 (rotenone)对多巴胺能神经元的神经毒性作用的机制。方法　用神经生长因子 (NGF)将PC12细胞诱导分化成多巴胺能神经元的细胞模型 ,经不同浓度的鱼藤酮处理 ,观察细胞形态改变 ,四甲基偶氮唑盐 (MTT)法检测细胞活性及代谢状态 ,磷脂酰丝氨酸外翻法(Annexin V)检测细胞凋亡 ,流式细胞术检测细胞凋亡率 ,α synuclein、硫磺素T(thioflavinT)染色研究细胞内蛋白聚集情况。结果　经鱼藤酮处理 2 4h后PC12细胞突起样结构消失 ,细胞体积变小、形态变圆 ;随着鱼藤酮浓度或作用时间增加 ,细胞活性进一步下降 ,呈量效和时效依赖性。与对照组比较 ,细胞活力在浓度为 10nmol/L鱼藤酮作用 2 4h时即出现明显下降 ,吸光度A570 值为 0 4 15± 0 0 13(P <0 0 5 ) ;可见Annexin V呈阳性的早期凋亡细胞 ;凋亡率在 5nmol/L为 7 35 %± 0 5 2 % (P <0 0 5 ) ,在 10nmol/L为 13 30 %± 1 80 % (P <0 0 1) ;细胞内出现α synuclein和硫磺素T双标染色呈阳性的蛋白聚集。结论　鱼藤酮在体外对多巴胺能神经元有毒性作用 ,可诱导出现细胞凋亡并出现类包涵体 ,表明鱼藤酮可能通过影响α synuclein的代谢而在帕金森病发病机制中起作用。     

Protective effects of Forsythia suspense extract with antioxidant and anti-inflammatory properties in a model of rotenone induced neurotoxicity

The present study investigated the neuroprotective effects of Forsythia suspense extract in a rotenone-induced neurotoxic model. FS8, one of the herbal extracts, markedly protected PC12 cells against rotenone toxicity and was selected for the in vivo study. Gavage administration of FS8 (50 and 200 mg/kg, but not 10 mg/kg) for 25 days significantly improved the behavior function, decreased the loss of dopaminergic neurons in substantia nigra (SN), and maintained the level of dopamine in striatum after unilateral infusion of rotenone in SN. Wherein, the protective effects of FS8 at the dose of 200 mg/kg were better than selegiline. Further study indicated the excellent antioxidant activity of FS8 on the 5th and 21st days after intranigral injection of rotenone. Moreover, FS8 could inhibit microglia activity and accumulation in SN, and obviously decreased the expression of pro-inflammatory molecules (IL-6, TNF-α, iNOS and COX-2), which indicated the anti-inflammatory effects of FS8. In the PI3K/Akt/NF-κB and MAPK pathways, FS8 significantly down-regulated the protein expression of p-PI3K, p-Akt, p-IκB, p-P65, cleaved Caspase 8, p-p38 and p-JNK but not p-mTOR, cleaved Caspase 3 and p-ERK. Therefore, FS8 protected dopamine neurons against rotenone toxicity via antioxidant and anti-inflammatory effects, which suggested the promising application of FS8 in the prevention and treatment of Parkinson disease.     

鱼藤酮诱发PC12细胞内质网应激的钙机制和超微结构的变化

目的探讨鱼藤酮诱发内质网(endoplasmicreticulum,ER)应激的钙离子机制及其超微结构的变化。方法应用流式细胞仪(flowcytometry,FCM)检测鱼藤酮对体外培养大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞株活性氧的影响,应用激光扫描共聚焦显微镜观察细胞内钙离子变化及透射电镜观察超微结构。结果0·1、1·0、2·0和3·0μmol/L浓度鱼藤酮诱导细胞内活性氧的生成,荧光指数(FI)值分别为1·55±0·17、2·16±0·10、1·77±0·20和1·41±0·12,相同浓度鱼藤酮所致细胞内钙离子荧光强度变换值分别为0·6029±0·0685、1·0902±0·1127、0·7479±0·0820和0·5614±0·0870,分别与对照组比较差异有统计学意义(P<0·01)。当鱼藤酮浓度大于1·0μmol/L时,其作用呈剂量依赖性递减。预先用超氧化物歧化酶(SOD)1200U/ml干预24h,可有效减弱1·0μmol/L鱼藤酮引发的细胞内钙离子升高(P<0·01)。电镜观察到滑面内质网大量增生,粗面内质网轻、中度扩张及脱颗粒。结论鱼藤酮可通过活性氧途径耗竭ER腔钙离子,诱发ER应激,并引起其超微结构的相应变化。     

Ameliorative effects of flavonoids and polyketides on the rotenone induced Drosophila model of Parkinson’s disease

Parkinson’s disease (PD) is a movement disorder associated with the progressive loss of dopaminergic neurons (DA). PD treatment remains unsatisfactory as the current synthetic drugs in clinical use relies on managing only motor symptoms. This study investigated antioxidant potentials of selected compounds namely, 5,6,7,4′-tetramethoxyflavone (1), 6-hydroxy-2,3,4,4′-tetramethoxychalcone (2), 6-methoxyhamiltone A (3), diosquinone (4) and toussantine D (5) against rotenone (6) induced PD in Drosophila melanogaster. Toxicity of these compounds was conducted by monitoring flies’ survival for seven days and determining the lethal concentrations (LC₅₀). Whereas compound 1 had LC₅₀ value of 91.3 μM within three days, compounds 2, 3, 4, and 5 had LC₅₀ values of 87.2, 58.0, 64.0 and > 1000 μM, respectively on the seventh day of the experiment. We exposed flies (1–4 days old) to 500 μM rotenone and co-treated with different doses of the test compounds in the diet for seven days at final concentrations of 11.0, 43.6 and 87.2 μM for compounds 2 and 3. The concentrations used for compound 4 were 8.0, 32.0 and 64.0 μM, while 250, 500 and 1000 μM were used for compound 5. Rotenone fed flies showed impaired climbing ability compared to control flies, the phenotype that was rescued by the treatment of tested phytochemicals. Rotenone toxicity also increased malondialdehyde levels assayed by lipid peroxidation in the brain tissues relative to control flies. This effect was reduced in flies exposed to rotenone and co-treated with the phytochemicals. Moreover, expression levels of mRNA of antioxidant enzymes; superoxide dismutase and catalase were elevated in flies exposed to rotenone and normalized in flies that were co-treated with tested compounds. Besides compound 1, this study provides overall evidence that the tested flavonoids and polyketides ameliorated the rotenone provoked neurotoxicity in D. melanogaster by battling the induced oxidative stress in brain cells including DA neurons and hence rescue the locomotor behaviour deficits.     

姜黄素通过上调LncRNA NORAD/miR-543-3p对MPP+诱导的帕金森病细胞模型的影响

目的 探讨姜黄素对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP⁺)诱导的帕金森病细胞模型的影响及分子机制。方法 使用MPP⁺(5 mmol/L)处理MN9D细胞构建帕金森病细胞模型,记为MPP⁺组; 正常培养的细胞作为对照组; 细胞给予40 μmol/L姜黄素处理后再用MPP⁺处理记为MPP⁺+姜黄素组; 将NORAD siRNA转染至细胞后分别用40 μmol/L姜黄素和MPP⁺处理记为MPP⁺+姜黄素+si-NORAD组; 将NORAD siRNA和miR-543-3p inhibitor共转染细胞后分别用40 μmol/L姜黄素和MPP⁺处理记为MPP⁺+姜黄素+si-NORAD+anti-miR-543-3p组,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测lncRNA NORAD和miR-543-3p表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡,双荧光素酶实验检测lncRNA NORAD和miR-543-3p的靶向关系。结果 与对照组比较,MPP⁺组MN9D细胞中lncRNA NORAD表达下调,miR-543-3p表达上调,细胞凋亡率升高, MDA水平明显升高,SOD水平明显降低; 与MPP⁺组比较,MPP⁺+姜黄素组lncRNA NORAD表达上调,miR-543-3p表达下调,细胞凋亡率降低, MDA水平明显降低,SOD水平明显升高; lncRNA NORAD靶向负调控miR-543-3p的表达; 抑制lncRNA NORAD逆转了姜黄素对MN9D细胞凋亡和氧化应激的抑制作用; 抑制miR-543-3p逆转了lncRNA NORAD的作用。结论 姜黄素可抑制MPP⁺诱导的MN9D细胞凋亡和氧化应激,其机制可能与调控lncRNA NORAD/miR-543-3p通路有关。