聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶抑制剂在复发性卵巢癌维持治疗中的作用

奥拉帕利(olaparib)、卢卡帕利(rucaparib)及尼拉帕利(niraparib)均为聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶抑制剂(PARPi),是一类具有广阔发展前景的新型抗癌药物.PARPi通过靶向抑制细胞核内的聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶(PARP),从而特异性杀死同源重组修复通路(homologous recombin...     

PARP抑制剂治疗卵巢上皮性癌的研究进展

卵巢上皮性癌是病死率最高的妇科恶性肿瘤。目前采用的铂类和紫杉烷类联合化疗方案仍不能避免大多数患者的复发。新近发现的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(Poly-ADP Ribose Polymerase,PARP)在DNA修复通路中起着关键作用。PARP抑制剂作为一种DNA修复酶抑制剂,可通过靶向阻断肿瘤细胞DNA修复途径发挥抗肿瘤作用。     

聚(腺苷二磷酸-核糖)聚合酶及其生物学作用

近年关于聚(腺苷二磷酸-核糖)聚合酶(PARP)的研究日益引起国外的重视.本文就PARP及其生物学效应作一综述.     

慢病毒介导的RNA干扰技术建立hPARP-1缺陷细胞株

聚ADP核糖聚合酶(poly-ADP ribose polymerase,PARP)是真核细胞生物体内一类重要的DNA损伤修复酶家族.其在各种生物效应引起的DNA断裂的活化下,产生聚(ADP-核糖)合成活性与聚(ADP-核糖)转移活性,将ADP核糖单位转移至某些氨基酸残基上,对蛋白质进行修饰,继而产生各种不同的生物学效应[1].     

聚ADP-核糖聚合酶在DNA修复、保持基因组完整性及细胞死亡过程中的作用

聚ADP核糖化是细胞在对内外环境的遗传毒物刺激的应答过程中对蛋白质进行翻译后修饰的一种机制，催化此过程的酶即聚ADP-核糖聚合酶。聚ADP核糖化涉及细胞的许多重要功能，如DNA修复、细胞增殖、细胞死亡、染色质功能及基因组稳定性。     

PARP-1基因Val762Ala多态性与乳腺癌易感性的关系

目的探讨DNA修复基因聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)单核苷酸多态性位点Val762Ala基因多态性与中国人群乳腺癌易感性的关系。方法采用Sequenom MassARRAY单核苷酸多态性(SNP)基因型分析技术对经病理确诊的原发性乳腺癌女性患者837例(病例组)和健康对照组865例进行PARP-1基因单核苷酸位点Val762Ala基因分型。以非条件logistic回归计算优势比(odds ratio,OR)及其95%可信区间(CI)评价各基因型与乳腺癌发病风险的关系。数据均由SPSS13.0统计软件分析。结果病例组和对照组中TT、TC、CC和TC+CC 4种基因型的分布分别差异无统计学意义,OR[95%CI]值分别为1、1.07(0.83～1.39)、1.03(0.70～1.36)、1.08(0.82～1.33)。结论 Val762Ala基因型与乳腺癌易感性无显著相关性。PARP-1基因Val762Ala多态性在乳腺癌发病过程中无作用。     

氢醌对骨髓间充质干细胞PARP-1和DNA甲基转移酶基因和蛋白表达的影响

目的探讨氢醌(HQ)诱导DNA甲基化改变的分子机制。方法用磷酸盐缓冲液(PBS)溶解HQ,以PBS处理组作为对照,采用实时荧光定量-聚合酶链反应和蛋白质免疫印记法检测2.5、5.0、10.0、20.0μmol/L HQ染毒骨髓间充质干细胞(BMMSCs)聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶-1(PARP-1)和DNA甲基转移酶DNMT1、DNMT3a和DNMT3b基因和蛋白的表达。结果 PARP-1、DNMT1基因和蛋白表达水平均随HQ染毒剂量的增加而升高,呈剂量-效应关系,基因表达的回归方程分别为y=0.030 x+1.283,y=0.075 x+1.088,蛋白表达的回归方程分别为y=0.025 x+1.234,y=0.043 x+1.097,DNMT3a基因和蛋白表达水平随剂量增加而降低,呈剂量-效应关系,基因和蛋白表达的回归方程分别为y=-0.040 x+1.151;y=-0.012 x+1.021。结论 HQ暴露导致基因组DNA甲基化的改变可能与DNA甲基转移酶表达异常有关,且PARP-1可能参与了HQ暴露致DNA低甲基化的过程。     

聚ADP核糖聚合酶1与DNA甲基化的关系及其可能的机制

聚腺苷酸二磷酸核糖基聚合酶[poly (ADP-ribose) polymerase,PARP]是一类存在于多数真核细胞中的蛋白质翻译后修饰酶,主要存在于细胞核内,少量存在于细胞浆内[1],具有蛋白修饰和核苷酸聚合作用.尽管目前PARP家族至少有18名成员,但研究表明,PARP-1活力占所有PARP蛋白活力的90％以上.PARP-1在绝大多数组织中为组成型表达,但受到DNA链断裂等损伤激活后,其活力会立即上升500倍以上[2-3].PARP-1是该家族中最重要的一员,具有保持染色体结构完整、参与DNA复制和转录的功能[4-6],在维持基因组稳定和细胞死亡及调控基因组的甲基化模式的过程中发挥着重要作用[7-9].     

肺癌患者hPARP-1基因突变PCR-SSCP检测

目的用聚合酶链反应-单链构象多态性（PCR-SSCP）技术研究肺癌患者聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1（hPARP-1）基因突变情况，寻找与肺癌发生相关的分子标记物。方法收集广东地区220名健康人群和106例肺癌病人的基础资料及血液标本，常规酚-氯法抽提血液DAN，用PCR单链构象多态性（SSCP）法检测hPARP-1基匹1第13，17和20外显子突变情况，并进行DNA序列分析。结果检测出5例肺癌病人在hPARP-1基因第17外显子有杂合性突变，为CAC→CGC的错义突变，即组氨酸→精氨酸。hPARP-1基因其余2个外显予未发现突变。结论PCR-SSCP是筛检基因突变的1种快速有效的方法，hPARP-1基因第17外显子上的突变可能是与肺癌发生相关的1种分子标记物。     

抑制聚ADP核糖聚合酶1活性的短发夹RNA载体构建

目的构建抑制人聚ADP核糖聚合酶1(hPARP1)活性的短发夹RNA(shorthairpinRNA,shRNA)表达载体。方法化学合成2对编码短发夹RNA序列的、靶向hPARP1基因的寡核苷酸,各69对碱基,退火,然后利用BamHⅡ及EcoRⅠ与pSIRENRetroQ载体连接。用EcoRⅠ及BglⅡ切取其中U6启动子及下游的shRNA部分,与pEGFPC1载体重组构建pEGFPC1shRNA载体。结果重组构建的pEGFPC1P1、pEGFPC1P2、pEGFPC1N载体经双酶切电泳分析及插入基因片段序列分析,结果表明330个碱基成功插入到预计位点。结论载体的成功构建,为进一步研究聚ADP核糖聚合酶在DNA修复过程中的功能打下基础。     

多聚聚合酶-1在氢醌诱导的DNA损伤应答中的作用及其机制

目的探讨多聚聚合酶-1(PARP-1)在氢醌(hydroquinone,HQ)诱导的DNA损伤应答中的作用及其相关的调控机制。方法以磷酸盐缓冲液(PBS)溶解HQ,以10μmol/L HQ染毒TK6细胞为处理组,分别在染毒0.5、1、2、3、4、5和6 h时收集细胞,以0 h为对照组,或用HQ处理PARP-1沉默细胞,运用western bloting技术检测TK6细胞中磷酸化组蛋白H2AX(γ-H2AX)、聚腺苷二磷酸核糖(PAR)以及DNA损伤应答(DDR)相关蛋白PARP-1和抗凋亡转录因子(AATF)的表达情况。结果 HQ处理TK6细胞后,γ-H2AX的含量在3 h时达到高峰[(14.83±1.14)倍](P0.05),此后逐渐下降;AATF的含量一直上升,6 h含量最高[(15.62±1.14)倍](P0.05)。PARP-1的含量先下降后上升,3 h其含量最低[(0.66±0.04)倍](P0.05)。PAR的含量在0.5 h达高峰[(1.78±0.13)倍](P0.05),而后逐渐下降。PARP-1沉默细胞中,HQ处理使得PARP-1、PAR和AATF的含量分别降了77%(P0.05)、64%(P0.05)和68%(P0.05),γ-H2AX的含量上升了1.65倍(P0.05)。结论 PARP-1通过聚多聚腺苷二磷酸(ADP)核糖基化作用增强AATF稳定性参与由氢醌诱导的DNA损伤修复。     

聚合酶键反应与DNA测序

用一对寡核苷酸引物和DNA聚合酶对基因组中一特定的DNA片段进行体外扩增,这一技术称为聚合酶链反应(Polymerase chain Reaction,PCR),又称体外DNA放大。其过程是;DNA加热而变性解链→退火时引物与相应的DNA顺序(靶基因)互补配对→DNA聚     

PARP-1抑制剂4-氨基-1,8-萘二胺增加阿霉素对小鼠胚胎成纤维细胞敏感性的研究

目的研究抑制聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶-1[PARP-1]活性能否增加阿霉素(ADM)的细胞敏感性。方法以小鼠胚胎成纤维细胞为研究对象,将细胞按是否经PARP-1抑制剂4-氨基-1,8-萘二胺(4-AN)处理分为处理组和对照组,比较两组细胞经ADM染毒后细胞存活情况和DNA单链断裂及染色体损伤的差异。结果 4-AN处理组细胞的阿霉素半数抑制浓度(1.09±0.15μg/ml)低于对照组(2.19±0.22μg/ml),差异有显著性(P=0.002);在0.025～0.2μg/ml时,群体倍增时间较对照组长(P<0.05),0.05～0.2μg/ml时,集落形成率较对照组低(P<0.05)。单细胞凝胶电泳及微核实验结果显示,当ADM浓度范围为0.02～0.5μg/ml时,4-AN处理组细胞的拖尾率、尾长、Olive尾矩3个指标值均大于对照组(P<0.05),在ADM为0.01～0.2μg/ml时,4-AN处理组细胞的微核细胞率和细胞微核率均比对照组高(P<0.05)。结论抑制PARP-1活性能显著增加阿霉素的细胞敏感性,其机制与DNA损伤修复有关。     

核糖核苷酸还原酶M2在肿瘤中的表达及意义

核糖核苷酸还原酶M2(RRM2)是DNA合成和修复的限速酶,在妊娠滋养细胞疾病、乳腺癌、胰腺癌等肿瘤中高表达。研究表明,其高表达增加肿瘤治疗中的化疗抵抗,产生耐药问题,由此激发了核苷酸还原酶抑制剂的研制和开发,其中最具代表性的是3-AP和吉西他滨。目前在其结构和功能的基础上,研究核糖核苷酸还原酶M2在其相关肿瘤中的意义和治疗已逐渐成为热点与重点,随着分子生物学技术的发展,有望通过阻断核糖核苷酸还原酶M2的表达抑制肿瘤发展,提高肿瘤的治疗效果。     

核糖核苷酸还原酶M2在肿瘤中的表达及意义

核糖核苷酸还原酶M2(RRM2)是DNA合成和修复的限速酶,在妊娠滋养细胞疾病、乳腺癌、胰腺癌等肿瘤中高表达.研究表明,其高表达增加肿瘤治疗中的化疗抵抗,产生耐药问题,由此激发了核苷酸还原酶抑制剂的研制和开发,其中最具代表性的是3-AP和吉西他滨.目前在其结构和功能的基础上.研究核糖核苷酸还原酶M2在其相关肿瘤中的意义和治疗已逐渐成为热点与重点.随着分子生物学技术的发展.有望通过阻断核糖核苷酸还原酶M2的表达抑制肿瘤发展,提高肿瘤的治疗效果.     

聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1多态性的检测

目的 检测人类聚腺苷二磷酸核糖聚合酶—1(PARP—1)5个外显子核苷酸多态性。方法 采用聚合酶链式反应(PCR)—单链构象多态性(SSCP)和银染技术检测3个民族634名正常人PARP—1基因多态性。结果 在3个民族634名正常人血标本的5个外显子扩增产物SSCP电泳条带中，219名汉族人PARP—1基因5个外显子均未检出多态性条带；203名布依族和212名壮族人PARP—1基因的5个外显子扩增产物中分别有2例的外显子20的SSCP电泳条带检出1条多态性条带。其余4个外显子扩增产物SSCP电泳未见多态性条带。结论 PARP—1基因第20外显子上可能存在多态性。PCR—SSCP银染技术具有简便、高效、快速、重现性好等优点，是对大样本进行PARP—1基因突变筛检的一种有效的方法。可用于分子流行病学研究。     

腺苷二磷酸核糖基化及其生物学效应

真核生物体内蛋白质表达后均需经过一系列的修饰过程才能发挥作用,主要包括腺苷二磷酸(ADP)核糖基化、乙酰化、磷酸化、糖基化等.ADP-核糖基化是蛋白质翻译后的重要修饰方式之一,分为单-ADP-核糖基化,聚-ADP-核糖基化2种,其与染色质的功能与调节、肿瘤的发生、细胞死亡、细胞分化与信号转导、程序性细胞死亡等很多重要的生命活动相关[1-2].笔者将重点介绍哺乳动物细胞中的酶促的单-ADP-核糖基化反应和聚-ADP-核糖基化反应,以及这些反应的主要生物学效应.     

葡多酚对大鼠肝PARP mRNA异常表达的抑制

目的　研究葡多酚 (GPC)对N -亚硝基化合物引发的大鼠肝细胞聚腺苷二磷酸核糖聚合酶〔(poly(ADP-ribose)polymerase,PARP)〕mRNA表达的影响作用。 方法　采用 0 5%的亚硝酸钠经口灌胃诱发大鼠肝脏突变 ,2个GPC实验组同时经口分别给予GPC 10 0和 10mg/kg ,8周后体内灌注固定肝组织 ,用原位杂交技术检测肝细胞PARPmRNA的表达水平 ,用图像分析仪对其表达水平进行定量分析。结果　诱变损伤组PARPmRNA表达的阳性细胞率和吸光度分别为 3 0 12 %和 0 3 543± 0 0 419,高剂量GPC组则分别为 11 48%和 0 2 687± 0 0 172 ,两组之间均有显著性差异 (P <0 0 1)。结论　葡多酚可抑制N -亚硝基化合物引发的大鼠肝细胞PARPmRNA的异常表达     

大鼠聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1基因RNA干扰表达质粒构建与鉴定

目的 构建并筛选大鼠聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)基因的RNA干扰(RNAi)表达质粒,为职业性疾患的基因治疗探索新途径.方法 根据基因序列数据库中报道的PARP-1基因序列及短发夹RNA(shRNA)设计原则,设计、合成用于构建RNAi质粒的寡核苷酸,构建4种重组PARP-1 RNAi质粒,酶切及测序鉴定正确后,以脂质体Lipofectamine TM2000介导转染大鼠骨髓间充质干细胞.48 h后,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测转染细胞中PARP-1 mRNA的转录水平,筛选有效的PARP-1 RNAi质粒.结果 4种重组PARP-1 RNAi质粒经酶切及测序证明构建正确.转染后48 h,转染质粒shRNA-PARP-1-532的细胞PARP-1基因抑制效果最明显,mRNA的转录水平下降了78％,可作为后续实验的有效质粒.结论 成功构建并筛选出PARP-1基因的RNAi表达质粒,为探索PARP-1基因在疾病中的作用奠定了基础.     

卵巢癌治疗中PARPi耐药机制及克服策略

卵巢癌死亡率位于女性生殖道恶性肿瘤首位,由于早期缺乏症状,多数患者确诊时已是晚期。手术切除困难及化疗后耐药导致患者预后较差。聚腺苷二磷酸核糖聚合酶抑制剂(PARPi)的出现为卵巢癌患者带来曙光。随着PARPi越来越多应用于临床,在明显延长卵巢癌患者无进展生存(PFS)时间的同时,其耐药问题也随之出现,克服耐药已成为亟待解决的问题。该文总结了PARPi的耐药机制,并讨论了可能逆转PARPi耐药的策略。