去甲二氢愈创木酸交联猪去细胞脊髓支架及其相关特性研究

目的 :观察去甲二氢愈创木酸(nordihydroguaiaretic acid,NDGA)交联猪去细胞脊髓支架的结构及性能。方法:取成年猪胸段脊髓,采用2次冻融化学萃取法对脊髓行去细胞处理,再用2.5g/L NDGA溶液进行交联处理。在体视显微镜及扫描电镜下分别观察猪去细胞脊髓支架及NDGA交联猪去细胞脊髓支架的结构。采用Instrong生物力学测试仪检测正常猪脊髓(正常组)、猪去细胞脊髓支架(未交联支架组)及NDGA交联猪去细胞脊髓支架(交联支架组)的极限抗拉强度和弹性模量。取第4代SD大鼠星形胶质细胞分别与未交联支架和NDGA交联支架联合培养,采用CCK8法检测细胞生长率,评价支架的细胞毒性。将未交联支架和交联支架分别包埋至SD大鼠背部皮下,在1、2、4周取出检测其包埋后的降解率,并取包埋4周的组织行HE染色,评价支架的生物相容性。结果:正常组脊髓组织为圆柱状,呈乳白色,横切面可见灰质与白质分界明显;未交联支架基本保持原组织外形,呈白色半透明状,白质与灰质无明显分界;交联支架质地稍变硬,呈棕黄色。扫描电镜显示未交联支架与交联支架内的基质纤维保存完好,相互交织成网状三维结构,内部孔洞连通。未交联支架的抗拉强度及弹性模量较正常组显著性下降(P0.05);交联支架抗拉强度和弹性模量较未交联支架显著性增强,两组比较有统计学差异(P0.05),但仍低于正常组(P0.05)。星形胶质细胞在交联支架及未交联支架中均生长良好,共培养时间越久,OD值越大,两组相同时间点OD值比较无统计学差异(P0.05)。相同时间点交联组在体内降解率明显低于未交联组(P0.05)。包埋4周后未交联组支架HE染色可见炎症细胞及成纤维细胞浸润,并且有肉芽组织聚集在内部孔隙中;交联组支架炎症细胞明显减少,且可见新生血管状结构。结论:NDGA交联猪去细胞脊髓支架与未交联猪去细胞脊髓支架比较三维结构未见明显改变,但生物力学性能和体内抗降解能力显著性增强,生物相容性提高,且无明显细胞毒性,可作脊髓损伤修复的支架材料。     

去甲二氢愈创木酸对前列腺癌PC-3细胞作用机制的实验研究

目的 观察脂氧合酶抑制剂去甲二氢愈创木酸(NDGA)对前列腺癌PC-3细胞增殖及凋亡的影响并探讨其相关机制. 方法以不同浓度(0、20、40,80和160 μmol/L)的NDGA干预体外培养的前列腺癌PC-3细胞.通过细胞形态学观察、四甲基偶氮唑盐比色法及TUNEL法检测NDGA对PC-3细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用,流式细胞术检测其活化Caspase-3的表达情况.结果 40、80、160μmol/L NDGA对PC-3细胞增殖有明显抑制作用,作用强度具有时间和剂量依赖性.0、20、40、80和160μmol/L NIX;A作用48 h后,PC-3细胞凋亡指数分别为(2.9±0.2)%、(3.2±0.3)%、(68.5±0.8)%、(86.2±0.3)%和(86.9±0.6)%,后3组与第1组比较差异有统计学意义(P<0.05).0、20,40、80和160/μmol/L NDGA作用PC-3细胞48 h后活化Caspase-3的阳性率分别为(3.9±0.0)%、(4.1±0.1)%、(55.5±0.8)%、(75.1±0.3)%和(76.3±0.7)%,后3组与第1组比较差异有统计学意义(P<0.05). 结论 NDGA能抑制前列腺癌PC-3细胞增殖、诱导其凋亡,作用呈剂量和时问依赖性,其机制可能与PC-3细胞Caspase-3活化有关.     

去甲二氢愈创木酸对恶性胶质瘤细胞增殖、分化和凋亡的影响

目的：观察去甲二氢愈创木酸（NDGA）对人恶性胶质瘤细胞系SHG－44细胞增殖,分化和凋亡的影响。方法：采用噻唑蓝（MTT）法,流式细胞仪法检测细胞增殖抑制怕情况,利用光镜和电镜观察,免疫组织化学及原位末端标记法（TUNEL）法检测培养细胞分化和凋亡的情况。结果：在200μmol/L浓度范围内,NDGA可使SHG－44细胞增殖受阻于G1→S期,且NDGA液浓度越高,这种作用越明显,即呈明显的剂量依赖性;光镜和电镜观察,免疫组织化学结果显示,NDGA对SHG－44细胞有明显的诱导分化作用;TUNEL法检测结果显示,一定浓度的NDGA处理SHG－44细胞12－96h,均可诱导SHG－44细胞发生凋亡,且随着作用时间的延长,凋亡细胞数值增加越明显。结论：NDGA对SHG－44细胞有明显的增殖抑制,诱导分化和促进凋亡作用,但其确切机制有待进一步深入研究。     

大黄酸-雌酮对去卵巢大鼠子宫及骨组织 ERα和 ERβmRNA 表达的影响

目的：研究骨靶向雌激素大黄酸-雌酮（ LC）对去卵巢大鼠骨组织中的ERα和ERβmRNA表达的影响。方法72只6月龄雌性未孕Wistar大鼠，分为6组：假手术组（ Sham）、去卵巢模型组（ OVX）、雌酚酮组（ E，OVX＋雌酚酮1.0 mg/kg· d）、大黄酸-雌酮高（ H-LC， OVX＋LC 1.0 mg/kg· d）、中（ M-LC，OVX＋LC 0.5 mg/kg· d）、低（ L-LC，OVX＋LC 0.25 mg/kg· d）剂量组，除假手术组外其余各组均行双侧卵巢切除。给药24周后，采用放射免疫方法测定血中雌二醇水平，采用RT-PCR法测定子宫及骨组织ERα和ERβmRNA水平。结果与Sham组比较，OVX组雌二醇水平明显降低，与OVX组比较，E组和H-LC、M-LC组大鼠血清雌二醇明显升高，L-LC组与OVX组无明显差别。 Sham组胫骨近端ERαmRNA和ERβmRNA均有表达，OVX组ERβmRNA表达水平与Sham组相比降低，未检出ERαmRNA。 E组ERαmRNA和ERβmRNA水平均与Sham组无差异，大黄酸-雌酮各组均未检出ERαmRNA，ERβmRNA相对表达量高于OVX组，大黄酸-雌酮各剂量组之间ERβmRNA无明显差异。Sham组大鼠子宫组织有ERαmRNA和ERβmRNA表达，OVX组ERαmRNA表达量明显降低，未检出ERβmRNA。 E组大鼠子宫组织ERαmRNA和ERβmRNA均较OVX组上调。大黄酸-雌酮各剂量组之间ERαmRNA无明显差异，但均低于E和Sham组。结论大黄酸-雌酮在骨及子宫均能选择性上调ERβmRNA表达，而对ERαmRNA无影响，雌酚酮对两种亚型无选择性，这可能是大黄酸-雌酮对骨具有保护作用而对子宫并无雌激素样刺激作用的原因之一。     

ERα和ERβ及GPR30在MCA-38细胞中的表达及对细胞增殖的影响

目的：检测雌激素受体ERα、ERβ和GPR30在小鼠结肠腺癌细胞系MCA-38中的表达,研究雌激素影响MCA-38细胞增殖的作用机制。方法：采用RT-PCR和Western blot检测MCA-38细胞ERα、ERβ、GPR30 mRNA及蛋白表达情况,经不同浓度E2和E2-BSA（空白对照、0.01、0.1、1、10和100 nmol/L）作用于MCA-38细胞24 h后应用MTT法检测细胞增殖情况,比较E2组和E2-BSA组细胞增殖差异。结果：MCA-38细胞表达ERα、ERβ和GPR30,其中ERβ表达量最高;生理浓度的E2（0.1～10 nmol/L）促MCA-38细胞增殖作用最为明显（P〈0.05）,而E2-BSA组与空白对照组比较,无明显促增殖作用（P〉0.05）。结论：ERα是MCA-38细胞所表达的主要雌激素受体,一定浓度的E2对MCA-38细胞有明显的促增殖作用,该作用为E2通过核受体途径实现,而与雌激素膜受体无关。     

去甲二氢愈创木酸联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对胰腺癌细胞PCNA-1的抑制作用

目的 探讨脂氧合酶抑制剂去甲二氢愈创木酸(nordihydroguaiaretic acid,NDGA)联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand,TRAIL)对胰腺癌细胞的抑制作用.方法 MTT法测定NDGA、TRAIL及NDGA联合TRAIL作用于PCNA-1细胞后的细胞生存率,同时,用流式细胞技术测定细胞凋亡率,Western b1ot检测caspase-3的表达水平的变化.结果 各组给药组与对照组比较均能不同程度抑制PCNA-1细胞增值并诱导其凋亡作用,且caspase-3表达上调;NDGA与TRAIL联用明显增强诱导凋亡作用.结论 NDGA与TRAIL联用可明显增强PCNA-1细胞抑制效果和诱导凋亡作用,其诱导凋亡的机制可能与其上调caspase-3表达有关.     

巨噬细胞对内皮细胞系同源盒B2基因和血管内皮生长因子受体mRNA及整合素αvβ3表达的影响

目的　体外观察巨噬细胞(M)对血管内皮细胞同源盒(HOX)B2基因mRNA和血管内皮生长因子(VEGF)受体KDRmRNA及整合素ανβ3表达的影响。　方法　体外培养人脐静脉血管内皮细胞系ECV304,分为(1)ECV304组; (2)ECV304 伴刀豆球蛋白A(conA,终浓度25mg/L)组; (3)ECV304 人M系U937组:ECV304细胞中加入1×105 /mlU937细胞; (4)ECV304 U937 conA组:ECV304中加入1×105 /mlU937细胞及终浓度25mg/L的conA.反应48h后,用免疫荧光技术检测各组ECV304细胞整合素ανβ3的表达情况,并用逆转录聚合酶链反应(RT PCR)技术检测细胞KDRmRNA和HOXB2基因mRNA的表达水平。　结果　ECV304组细胞的整合素ανβ3、KDRmRNA及HOXB2基因mRNA的表达水平分别为6. 7±1. 5、0. 633±0. 012、0. 674±0. 004。ECV304 U937 conA组细胞上述指标较ECV304组均明显上调(P<0. 01 ),分别为10. 2±1. 7、0. 879±0 003、0. 947±0 003。其余两组细胞上述指标与ECV304组比较,差异均无统计学意义(P>0. 05).结论　被conA活化的M通过影响内皮细胞的KDRmRNA、HOXB2mRNA基因及整合素ανβ3的表达,来促进内皮细胞增殖、迁移及与基质黏附,从而调节血管生成。