热疗对SMMC-7721肝癌细胞形态、增殖、凋亡的影响

目的探讨热疗对SMMC-7721肝癌细胞的影响。方法将SMMC-7721肝癌细胞置恒温循环水浴锅中(42.5±0.5)℃孵育1h,然后放入37℃、5%CO2的培养箱中继续培养,分别于热处理后0、6、12、24h采用倒置显微镜(LM×400)观察细胞形态变化,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,予Annexin V/PI染色后用流式细胞仪检测细胞凋亡,予366EC和FITC-羊抗鼠IgG处理细胞后用流式细胞仪检测细胞DR5表达,用Fluo-3/AM负载细胞检测胞内Ca2+浓度的变化。结果热疗可导致肿瘤细胞形态改变,表现为细胞变小,变圆,脱落,出现空泡;热疗可抑制细胞增殖,细胞热疗后0、6、12、24h细胞抑制率分别为22.18%、26.76%、31.30%、36.62%。热疗后0h细胞凋亡率为15.00%,其中早期凋亡率为2.00%,晚期凋亡率为13.00%;热疗后6h细胞凋亡率为65.45%,其中早期凋亡率为43.23%,晚期凋亡率为22.22%;热疗后12h细胞凋亡率为12.32%,其中早期凋亡率为4.60%,晚期凋亡率为7.72%;热疗后24h细胞凋亡率为22.58%,其中早期凋亡率为7.15%,...     

热休克蛋白70在人肝癌细胞SMMC-7721中的表达

1　材料和方法1.1　材料　人肝癌细胞 SMMC- 772 1由本室保存 ;鼠抗人HSP70单抗、FITC标记的羊抗鼠 Ig G购自 BOSTER公司 ;ENVISION HRP标记的羊抗鼠 Ig G(即用型 )为 DAKO公司产品 .1.2　方法　 1细胞的热休克处理 :接种 2× 10 4SMMC- 772 1于置有盖玻片的 2 4孔培养板中 ,37℃培养过夜 ;将培养板置42℃水浴 2 h,分别于休克后 4,8,12 ,16 ,2 4和 48h,收集细胞爬片 ,以甲醇∶丙酮 (V/ V=1/ 1) 4℃固定 15 min,PBS(p H7.4)洗涤后 ,室温干燥备用 .2免疫组化法检测 HSP70在肝癌细胞的表达 :采用 ENVISION(两步法 ) .细…     

野生型P53基因诱导人肝癌HepG2/5-Fu耐药细胞株凋亡的研究

目的 探讨野生型P53基因与人肝癌耐药的相关性，为肝癌的临床治疗提供新的依据。方法 以IONP—PLL纳米颗粒为基因转运载体，将wtp53基因转入HepG2／5-Fu耐药性细胞株，MTT法、台盼兰拒染实验和Hochest33258染色等分析5-Fu对转染有wtp53基因的HepG2／5-Fu细胞的杀伤效应。结果 转染wtp53基因的HepG2／5-Fu细胞对5-Fu呈剂量依赖性杀伤效应和时间依赖性杀伤效应，在5-Fu作用下，能发生明显的凋亡效应。结论 以wtp53基因为靶点的肝癌基因治疗有望成为治疗晚期肝癌的一种新的治疗策略。     

槲寄生生物碱通过P53途径抑制肝癌细胞株SMMC-7721的研究

目的：探讨槲寄生生物碱对肝癌细胞株SMMC-7721 P53基因表达的影响。方法：MTT法测定槲寄生生物碱对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖的抑制作用;半定量RT—PCR法测定抑癌基因P53 mRNA表达变化。结果：槲寄生生物碱作用后SMMC-7721细胞出现显著生长抑制作用,且呈剂量和时间依赖性。RT—PCR检测SMMC-7721细胞中P53 mRNA表达的相对强度,发现0.100mg／mL的槲寄生生物碱作用于SMMC-7721细胞24小时后,P53 mRNA表达的相对强度增高（P〈0．01）。结论：擗寄生生物碱对抑癌基因P53表达的影响可能是其抑制肿瘤生长的分子基础。     

尼美舒利对肝癌SMMC-7721细胞增殖、凋亡的干预作用

目的 :研究尼美舒利对肝癌SMMC 772 1细胞增殖、凋亡的干预作用。方法 :研究对象为SMMC 772 1肝癌细胞系 ,细胞增殖采用MTT比色法检测 ,细胞凋亡采用电镜观察、流式细胞仪和TUNEL法检测。结果 :尼美舒利显著抑制体外培养的SMMC 772 1细胞增殖 ,随着药物剂量的增加和时间的延长 ,SMMC 772 1的生长、增殖明显抑制 ,呈剂量和时间依赖性。流式细胞术、TUNEL法检测示 ,使用不同浓度尼美舒利作用于SMMC 772 1细胞 72h后 ,可诱导SMMC 772 1细胞凋亡 ,随着药物浓度增加 ,凋亡率和凋亡指数均显著增加 ,差异有显著性。结论 :选择性COX 2抑制剂尼美舒利可以显著抑制SMMC 772 1细胞增殖 ,且呈明显的时间、剂量依赖关系 ,同时诱导SMMC 772 1细胞凋亡 ,且具有剂量依赖性     

人肝癌组织热休克蛋白70的表达

为探讨人肝癌组织热休克蛋白 70 (HSP70 )的表达及意义 ,采用SABC法检测人肝癌组织HSP70的表达 ,图像分析HSP70在癌组织中的表达特点。结果显示 :2 5例肝癌组织中均存在HSP70的表达 ,不同癌组织存在胞质、胞膜和胞核表达强度及部位的差异。证实人肝癌组织存在HSP70的表达异质性 ,呈现了胞质、胞膜和胞核的表达差异 ,HSP70在人肝癌组织的表达特点为今后肿瘤抗原肽瘤苗的提取和实验研究作了铺垫。     

术前射频热疗联合FOLFOX辅助治疗对结肠癌组织中MVD以及凋亡相关分子表达的影响

目的研究术前射频热疗联合FOLFOX辅助治疗对结肠癌组织中微血管密度（MVD）以及凋亡相关分子表达的影响。方法将2013年1月至2014年6月的120例结肠癌患者纳入研究,依据辅助治疗不同分为两组,观察组患者术前接受射频热疗联合FOLFOX化疗,对照组仅接受FOLFOX化疗。采用免疫组化染色的方法检测肿瘤组织中的MVD,Real-timePCR和Westernblot检测肿瘤组织中凋亡相关分子的表达情况。结果观察组患者肿瘤组织中MVD低于对照组（P＜0.05）;观察组患者肿瘤组织中Caspase-3、p16、Bax的mRNA和蛋白含量均高于对照组（均P＜0.05）;观察组患者肿瘤组织中突变型p53基因以及CDC25A、Bcl-2的mRNA和蛋白含量均低于对照组（均P＜0.05）。结论术前射频热疗联合FOLFOX辅助治疗有助于降低结肠癌组织中的MVD,同时上调促凋亡分子、抑制抗凋亡分子的表达。     

白英提取物诱导肝癌SMMC7721细胞凋亡过程中bax和bcl-2基因表达

目的探讨中药白英提取物对肝癌SMMC7721细胞中细胞凋亡相关基因的影响。方法用不同浓度的白英提取物处理肝癌SMMC7721细胞,利用TUNEL法检测其细胞凋亡;通过原位杂交法、免疫组化法,研究白英提取物诱导肝癌SMMC7721细胞产生凋亡时,凋亡促进基因bax和凋亡抑制基因bcl-2的mRNA和蛋白表达。结果 IPP图像分析表明,bax表达显著增高,bcl-2显著下降。结论白英提取物通过调节细胞凋亡促进基因和抑制基因,从而诱导肝癌SMMC7721细胞产生凋亡。     

热疗对膀胱癌细胞BIU-87HCPT耐药相关基因的影响

目的 探究热疗对膀胱癌细胞BIU-87HCPT耐药相关基因表达的影响.方法 培养试验用对羟基喜树碱耐药的膀胱癌细胞株BIU-87HCPT,待其处于生长对数期时取出待用.将对照组与实验组均放置于37～43℃不同的温度的恒温箱中化疗,72h后用酶标仪测量其吸光度.结果 单独热疗可以抑制BIU-87/HCPT癌细胞,且抑制效果与温度呈正相关.热疗联合化疗比单独热疗或者单独化疗效果好.热疗可抑制BIU-87/HCPT癌细胞繁殖.热疗可抑制P-gp、MRP1、GST-π和survivin的表达,且抑制效果与温度呈正相关.结论 热疗可以很好的抑制膀胱BIU-87/HCPT肿瘤细胞的生长繁殖,抑制其表达耐药相关蛋白从而降低其耐药性以提高疗效.     

细胞凋亡相关基因在膀胱移行细胞癌中表达的意义

目的 :探讨与细胞凋亡关系最为密切的三个基因 P5 3、BCL2及 BAX在膀胱移行细胞癌中的表达与其病理分级及预后的关系。方法 :采用 P5 3、BCL2单克隆抗体及 BAX多克隆抗体 ,对 70例膀胱移行细胞癌和 1 0例膀胱炎石蜡切片进行免疫组织化学染色。结果 :P5 3蛋白的阳性表达率在各级别间及复发与未复发组间的差异有统计学意义 ( P <0 .0 5或 P <0 .0 1 ) ;BCL2在 级肿瘤的阳性表达率 ( 4 4.4% )明显高于 级 ( 3 .5 % )的表达率 ( P <0 .0 5 ) ;BAX的阳性表达率在 级 ( 2 2 .2 % )则明显低于 ( 86.2 % )、 级 ( 73 .9% )的表达率 ( P <0 .0 5 ) ,BAX的阳性表达率在膀胱良恶性病变间无明显差异 ( P >0 .0 5 ) ;二者在复发组的阳性表达率明显高于未复发组 ( P <0 .0 5 ) ;BCL2 /BAX及与 P5 3三者的共同表达情况与肿瘤的恶性程度呈正相关 (均 P <0 .0 5 ) ,与预后无相关性 ( P >0 .0 5 )。结论 :P5 3、BCL2及 BAX的阳性表达可以在一定程度上反映膀胱移行细胞癌恶性程度的增加及临床预后不良 ,三者可能通过对细胞凋亡的调节从而影响肿瘤恶性性状的发展。     

10-羟基喜树碱诱导人肝癌细胞SMMC-772l凋亡及其机制的初步研究

目的研究10-羟基喜树碱(10-HCPT)诱导人肝癌细胞凋亡的作用。方法用10-HCPT以不同终浓度、不同作用时间诱导SMMC-721人肝癌细胞。分别以倒置相差显微镜、电镜、荧光显微镜观察其形态学改变,提取细胞内小分子DNA进行琼脂糖凝胶电泳,并对这些细胞的P53蛋白进行免疫组织化学染色。结果当10-HCP终浓度>2.0μmol·L-1时,部分细胞可见典型的凋亡特征核固缩、凋亡小体、梯状电泳带。随着10-HCPT浓度或作用时间增加,凋亡率逐渐升高。各组细胞P53蛋白免疫组化染色均为阴性。结论10-HCPT可诱导SMMCC-7721细胞凋亡,其作用效果呈剂量、时间依赖性。     

中药抗癌灵对肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响

目的观察中药抗癌灵(Kangailing,Ka)对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响并探讨其可能分子机制。方法提取、配制不同抗癌灵生药浓度,作用于体外培养的人肝癌SMMC-7721细胞,采用MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪法检测凋亡率,二步法免疫组化检测野生型P53、NF-кB P65和Bcl-2蛋白表达变化。结果与正常对照组比较,Ka各浓度组细胞抑制率显著上升(P<0.001),细胞凋亡率明显升高(P<0.01或P<0.001),P53蛋白表达显著上升(P<0.001),NF-кB和Bcl-2蛋白表达明显下降(P<0.001)。结论Ka通过诱导细胞凋亡而抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖,其分子机制可能与上调野生型P53蛋白表达,下调NF-кB P65和Bcl-2蛋白表达有关。     

表阿霉素对人肝癌SMMC-7721细胞bcl-2蛋白表达的影响

目的 探讨表阿霉素诱导SMMC-7721细胞凋亡的可能分子机制。方法 采用流式细胞仪间接免疫荧光法检测表阿霉素作用于人肝癌SMMC-7721细胞后bcl-2蛋白的表达。结果 随着表阿霉素的浓度增加，作用于SMMC-7721细胞时间的延长，细胞bcl-2蛋白的表达逐渐降低，SMMC-7721细胞bcl-2蛋白的表达与表阿霉素作用浓度EY时间呈负相关。结论 Bcl-2基因表达下调可能是表阿霉素诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的重要机制之一。     

抗癌药莪棱舌草Ⅰ号诱导人肝癌细胞凋亡的研究

用流式细胞光度术检测细胞凋亡 ,运用细胞化学方法检测凋亡相关基因蛋白的表达 ,以及用Westernblot ting分析研究抗癌药莪棱舌草Ⅰ号对人肝癌细胞 (772 1细胞 )凋亡的诱导作用。结果表明药物能够诱导 772 1细胞发生凋亡 ,凋亡率可达 4 0 % ;药物作用可以使细胞中凋亡抑制基因bc1 2表达减少 ,凋亡促进基因Bax表达增加。提示诱导肿瘤细胞凋亡可能是莪棱舌草Ⅰ号抑制肝癌细胞的机制之一     

重组凋亡素真核表达载体诱导人卵巢癌细胞凋亡

目的 观察凋亡素基因（VP3）在卵巢癌细胞株CoCl中诱导凋亡的情况。方法 用Kpn Ⅰ、Xba Ⅰ分别双酶切pMD18-CAVP3和pcDNA3．1（＋），分别回收365bp和5．0kb大小的片断，然后常规行连接反应，构建重组凋亡素真核表达栽体pcDNA3．1-VP3。采用Lipofectamine^TM 2000介导的基因转染法，在体外将pcDNA3．1-VP3转染入卵巢癌细胞株CoCl中，RT—PCR检测凋亡素在细胞中的表达，用流式细胞仪检测细胞凋亡。结果 酶切鉴定及测序结果表明重组凋亡素真核表达载体pcDNA3．1-VP3构建成功。RT—PCR证实VP3基因在COCl中存在并在转录水平表达。转染pcDNA3．1-VP3细胞凋亡率明显高于转染空质粒组（P〈0．01）。结论 凋亡素可有效诱导卵巢癌细胞COCl凋亡。     

热休克蛋白70和P53在人类乳腺癌中的表达及意义

目的　探讨HSP70和P5 3在乳腺癌中所起的作用及其在临床诊断中的应用价值。方法　运用超敏免疫组织化学技术 (SP法 )检测HSP70和抑癌基因P5 3蛋白在 5 2例乳腺癌中的表达情况。结果　HSP70的阳性率为 35 % (18/ 5 2 ) ,其表达与乳腺癌的病理学级别有关 (P <0 .0 5 )。P5 3的过度表达率为 36 .5 % (19/ 5 2 ) ,其表达与乳腺癌的病理学级别有关 (P <0 .0 5 )。在 5 2例乳腺癌中 ,P5 3的过度表达和HSP70的表达具有一定的相关性 (P<0 .0 5 )。结论　HSP70和P5 3在乳腺癌中的相关性提示HSP70可能参与P5 3的代谢 ;HSP70和P5 3表达程度与肿瘤的恶性程度有关。     

高温阻滞HeLa细胞于G1期并引起G1期细胞凋亡

目的探讨高温阻滞HeLa细胞周期进程及其与细胞凋亡的关系。方法HeLa细胞经培养增殖后分为37℃、40℃、43℃和45℃共4个温度组。每组分别在0．5、1、2和4h共4个时间点取材，经PI染色在流式细胞仪上检测4种温度条件下，4个时间段时HeLa细胞的凋亡指数和在各细胞周期时相中的指数。结果37℃时，60％的细胞处于G，期，S期及Gz／M期的HeLa细胞分别为17％和18％，约5％细胞凋亡。40℃时，细胞周期受到抑制，G1期的HeLa细胞明显增加，达73％，S及G2／M期的细胞分别为9％和15％，凋亡细胞占3％。43℃时，不但细胞周期受阻，而且凋亡细胞极明显地增加，达19％，G1期细胞为61％，S期细胞为9％，G2／M期细胞为11％。45℃时，细胞凋亡数和在细胞周期各时相的细胞数与40℃时的分布相似。结论温度升至40℃时对HeLa细胞的增殖活动有明显的抑制，使HeLa细胞滞留于G1期。43℃时除了细胞周期受抑制外，凋亡细胞明显增加，这可能是由于细胞周期受阻和高温启动了凋亡机制而诱发了细胞凋亡，凋亡的细胞主要为G1期的细胞。45℃以上的高温对HeLa细胞的杀伤失去对周期时相的选择性，均等地杀伤细胞周期各时相的细胞。     

表阿霉素对癌细胞SMMC-7721与MD-231的作用

目的探讨表阿霉素（EPI）诱导肝癌细胞与乳腺癌细胞凋亡的作用,为临床治疗提供依据。方法采用流式细胞术、形态学方法观察EPI对肝癌细胞SMMC-7721与乳腺癌细胞MD-231的促凋亡作用。结果EPI在体外诱导SMMC-7721和MD-231细胞凋亡,经激光共聚焦显微镜检测,细胞呈现典型的凋亡形态特征;流式细胞术分析显示EPI（10μg／ml）作用两种细胞12h后,S期细胞明显增加,与对照组比较差异有高度统计学意义（P〈0．01）,表明细胞阻滞于S期。结论EPI具有诱导肝癌细胞和乳腺癌细胞凋亡的作用。     

全身热疗与肿瘤细胞凋亡的研究进展

全身热疗是恶性肿瘤综合治疗的手段之一。研究表明,当全身温度都升高到约41.8～42.0℃时,通过热作用可以选择性的杀灭肿瘤细胞,并控制肿瘤细胞的广泛转移。全身热疗不仅可以直接杀伤肿瘤细胞,而且可以激发机体免疫系统活性、增强放化疗的敏感性和抑制肿瘤的血管形成从而达到诱导肿瘤细胞凋亡的目的。就全身热疗与化疗、放疗、免疫治疗、基因治疗相结合诱导肿瘤细胞凋亡的机制的研究进展进行综述。