基因启动区异常甲基化导致肝癌中RASSF1A基因外失活的研究

目的观察肝癌组织中的抑癌基因RASSF1A的表达情况和由于启动区异常甲基化导致其基因外失活的状况，并分析DNA异常甲基化与肝癌临床相关因素之间的关系。方法利用RT—PCR和MS-PCR的方法，结合DNA测序和Taq I酶切消化法，分析了24例肝癌标本、4株肝癌细胞株（SMMC7721、HepG2、BEL7402和BEL7703）中RASSF1A基因的表达情况，以及其基因启动区异常甲基化的情况。采用甲基化抑制剂5＇-Aza—CdR处理肝癌细胞株，观察RASSF1A重新表达的情况。结果66．7％的肝癌组织未表达RASSF1A；4株肝癌细胞株中仅SMMC7721检测到RASSF1A的表达。83．3％的肝癌组织及4株肝癌细胞株都发生了异常甲基化，而正常肝组织和正常肝细胞株（L02）中却未发现甲基化。甲基化与肝硬化、乙肝表面抗原、肿瘤分化程度及血管浸润和远处转移有相关性。原来RASSF1A表达失活的3株肝癌细胞株经甲基化抑制剂5＇-Aza—CdR处理后，又重新恢复了表达。结论基因转录启动区的异常甲基化是导致肝癌中RASSF1A表达失活的主要原因。检测RASSF1A启动区异常甲基化可作为一种有潜在应用价值的生物分子指标来用于肝癌的早期发现和早期诊断，以及预后的判断。     

肝癌抑癌基因GSTP1、p16、RIZ1、RASSF1A异常甲基化检测及其临床意义

目的 研究肝细胞癌中的GSTP1、p16、RIZ1、RASSF1A 4种基因启动子区域甲基化状态的表达差异,并探讨其在肝癌发生中的作用.方法运用甲基化特异性聚合酶链反应（methylation-specific PCR,MSP）技术,分别检测35例肝癌组织及其相应的癌旁组织和20例正常对照肝组织中4种候选抑癌基因（GSTP1、p16、RIZ1、RASSF1A）启动子区域的甲基化表达情况,并结合临床病理资料进行分析.结果在肝细胞癌、癌旁及正常对照肝组织中检测到GSTP1基因启动子区的甲基化率分别是57.1 （20/35）,25.7％（9/35）,0％ （0/20）;p16基因启动子区甲基化率分别是54.3％ （19/35）,37.1％ （13/35）,0％ （0/20）; RIZ1基因启动子区甲基化率分别是68.6％ （24/35）,14.3％ （5/35）,0％ （0/20）;RASSF1A基因启动子区甲基化率分别是88.6％ （31/35）,74.3％（26/35）,10％ （2/20）,其中癌组织中GSTP1和RIZ1基因甲基化率均显著高于相应的癌旁组（P＜0.01）和正常对照肝组织（P＜0.01）,癌组织中p16、RASSF1A启动子区甲基化率高于癌旁组织,但二者无统计学意义（P＞0.05）,但明显高于正常对照肝组织（P＜ 0.01）.在肝癌组织中肿瘤有包膜侵犯者GSTP1基因甲基化阳性率明显高于无包膜侵犯者（P＜0.05）;乙肝表面抗原（HbsAg）阳性的肝癌患者p16基因甲基化阳性的比率要显著高于HbsAg阴性者（P＜0.05）;而RIZ1、RASSF1A与临床病理资料间均没有统计学意义（P＞ 0.05）.结论RIZ1、GSTP1基因甲基化状态具有肝癌特异性,或可作为临床肝癌辅助诊断的分子标记物.慢性HBV感染可能是导致p16甲基化而失活的原因,GSTP1基因启动子甲基化可能与肝细胞癌的侵袭性有关.     

抑癌基因RASSF1A与胆管癌的研究进展

Duand-Fardel于1840年第一次描述了胆管癌是一种起源于胆总管上皮的恶性肿瘤,是一种较少见的胆道恶性肿瘤,约占消化道肿瘤的3％.RASSF1A是Dammann等[1]于2000年利用酵母双杂交筛选方法,在染色体3p21.3这个区域克隆出的一个新型的Ras因子,它属于RASSF1家族(Ras Association Domain family 1)(RASSF1A-RASSF1 H)的一个亚型,后续的研究又表明它是一个新型的抑癌基因,其失活可以导致人类多种恶性肿瘤的发生.其失活方式有突变、杂合性缺失、纯合型缺失、启动子甲基化,其中以启动子甲基化最为常见.RASSF1A表达的失活同胆管癌的发生、发展、治疗、预后息息相关.     

原发性肝癌RASSF1A基因启动子区甲基化及其临床意义

目的 探讨原发性肝癌中RASSF1A基因启动子的甲基化水平及其与临床病理特征的关系.方法 采用MSP测定100例原发性肝癌患者的肿瘤标本及其癌旁组织、6株肝癌细胞株及10例正常肝组织RASSF1A基因甲基化状态,分析甲基化与肝癌临床病理特征的关系.采用甲基化抑制剂5-Aza-CdR处理肝癌细胞株,用RT-PCR检测RASSF1A的重新表达情况.结果 100例肝癌组织中有69例(69％)存在RASSF1A基因CpG岛的异常甲基化,癌旁组织中有15例(15％),6株肝癌细胞株有4株(4/6)发生甲基化,而正常肝组织中无RASSF1A基因甲基化存在,RASSF1A基因异常甲基化在3种组织中的发生率差异有统计学意义(x2=67.75,P＜0.001).RASSF1A基因启动子甲基化与患者乙肝表面抗原及组织分化存在一定相关性.发生甲基化的4株肝癌细胞株经甲基化抑制剂5-Aza-CdR处理后,全部重新恢复表达.结论 原发性肝癌存在RASSF1A基因CpG岛异常甲基化,并与患者乙肝表面抗原及组织分化密切相关.经甲基化抑制剂处理的肝癌细胞株又重新恢复表达,推测CpG岛的甲基化可能是导致其基因表达降低的主要原因之一.     

肝细胞癌多基因启动子甲基化与预后关系的研究

目的 了解肝细胞癌(hepatucellular carcinoma,HCC)中,DAPK、FHIT及SLIT2基因的甲基化状况与病人生存预后的关系.方法 应用甲基化特异性PCR(methylation- specific PCR,MSP)技术,检测50例HCC组织中上述基因启动子区域的甲基化状况,并分析每种基因甲基化...     

Ras相关区域家族1A基因异常甲基化在前列腺癌中的研究进展

Ras相关区域家族1A(RASSF1A)是从3p21.3区域克隆出来的新型候选抑癌基因。启动子区域CpG岛的异常甲基化可以导致RASSF1A失活,对包括前列腺癌在内多种实体瘤的发生、发展中起着重要作用。对大量临床标本中RASSF1A基因异常甲基化及其与相应病例临床特点之间的关系分析表明,RASSF1A甲基化检测有望成为前列腺癌早期诊断和预后判断的重要辅助手段,而丰富的实验研究则提示甲基化抑制剂有望成为前列腺癌治疗的新手段。     

散发性肝外胆管癌中RASSF1A基因启动子甲基化状态的研究

目的　检测肝外胆管癌组织中RASSF1A基因启动子甲基化及各CpG位点甲基化发生率。方法　采用甲基化特异性聚合酶链反应 (MS PCR)和半巢式PCR对RASSF1A基因启动子区域进行扩增 ,并对扩增产物克隆测序。结果　在全部 48例肝外胆管癌组织中 ,RASSF1A基因启动子区域存在CpG位点甲基化现象的共 2 8例 ,16个CpG位点甲基化平均发生率为 42 .45 % ,明显高于对照组 (χ2 =11.77,P <0 .0 1)。结论　RASSF1A基因启动子区域CpG岛甲基化是RASSF1A失活的主要机制 ,在肝外胆管癌的发生过程中发挥重要作用。     

ING1启动子甲基化在散发性结直肠癌中的研究

具有完整活性的抑癌基因可有效地抑制肿瘤发生。p53是目前研究得比较透彻的抑癌基因。文献报道p53发挥抑癌作用．需要ING1（inhibitor of growth）的参与。若ING1表达缺失或受到拮抗，p53的抑制生长作用即明显受到抑制。ING1具有抑制细胞生长、促进凋亡，参与细胞衰老调控等作用。我们发现，在散发性结直肠癌中，ING1基因的异常改变少见，癌组织中ING1的表达强度比相应的正常组织明显降低。     

膀胱移行细胞癌中FHIT基因启动子甲基化及其蛋白的表达

目的：探讨膀胱移行细胞癌（BTCC）FHIT基因启动子甲基化状态及其与FHIT蛋白表达的关系。方法：采用甲基化特异性PCR（MSPCR）方法及免疫组织化学S-P法检测62例BTCC组织和10例正常膀胱组织中FHIT基因启动子甲基化状态及FHIT蛋白表达。结果：BTCC组织、正常膀胱组织FHIT基因启动子甲基化频率分别为19．4％（12／62）,0（0／10）。FHIT蛋白在正常膀胱组织、BTCC中阳性表达率分别为100．0％（10／10）和46．77％（29／62）,肿瘤不同分级中随恶性程度的增高,表达减少,Ⅰ级与Ⅲ级比较,差异有统计学意义（P〈0．05）,不同临床分期中随分期的增高,表达减少,Tis～T1与T2～T1比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。FHIT基因的启动子甲基化和蛋白阳性表达有相关（P〈0．05）。结论：FHIT基因的启动子甲基化可能是基因失活重要机制之一,FHIT基因启动子甲基化及表达在BTCC的发生、发展中起重要作用。     

食管鳞癌与细胞因子信号转导负调控因子3及其DNA甲基化的关系

目的 检测食管鳞癌(ESCC)组织中细胞因子信号转导负调控因子3(SOCS3)的DNA甲基化、mRNA及蛋白表达水平,探讨其在食管鳞癌发生、发展、浸润和转移中的作用.方法 采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)、Real-Time聚合酶链反应(PCR)和Western blot法分别检测43例食管鳞癌组织中SOCS3的DNA甲基化、mRNA和蛋白表达水平,并与相应的癌旁正常食管组织进行对照研究,分析其与临床病理参数的关系.结果 (1)食管鳞癌组织SOCS3 DNA甲基化的阳性率(79.1%)明显高于癌旁组织(14.0%,P＜0.01);(2)食管鳞癌组织SOCS3 mRNA相对表达强度比值(0.53±0.30)明显低于癌旁组织(1.15±0.44,P＜0.01),食管鳞癌组织中甲基化组的SOCS3 mRNA表达(0.45±0.24)显著低于非甲基化组(0.86±0.29,P＜0.05);(3)食管鳞癌组织SOCS3蛋白表达(1.66±0.22)显著低于癌旁组织(1.83±0.15,P＜0.01),食管鳞癌组织中甲基化组SOCS3蛋白表达(1.61±0.21)显著低于非甲基化组(1.87±0.15,P＜0.01);(4)在TNM分期中Ⅲ期组表达均低于Ⅰ～Ⅱ期组(P＜0.05),伴有淋巴结转移组表达也都低于无淋巴结转移组(P＜0.05),未发现其在性别、年龄、家族史、吸烟史中有明显差异(P＞0.05);(5)食管鳞癌组织中SOCS3mRNA表达及其蛋白表达水平与肿瘤分化级别呈正相关(0.301＜r＜1,P＜0.05),与TNM分期、淋巴结转移呈负相关(-1＜r＜-0.301,P＜0.05).结论 食管鳞癌组织中SOCS3 DNA甲基化阳性率高,导致SOCS3基因表达下调,与食管鳞癌的分化、浸润和转移密切相关.     

RASSF1A基因在骨肉瘤中的表达及其临床意义

目的探讨肿瘤抑制基因RASSF1A在骨肉瘤组织中的表达与骨肉瘤的生物学行为之间的关系。方法用RT-RCR方法检测a）骨肉瘤MG-63细胞中RASSF1A基因的表达;b）30例骨肉瘤组织、10例骨软骨瘤组织及10例正常骨组织中RASSF1A基因的表达。结果a）骨肉瘤MG-63细胞中未发现RASSF1A基因表达;b）30例骨肉瘤组织中RASSF1A基因缺失率为43.33%,对照组骨软骨瘤中表达率为100%,正常骨组织中表达率为100%。RASSF1A基因的表达与肿瘤的Enneking分期及是否发生远处转移相关（P〈0.05）,而与患者的年龄、性别、肿瘤的部位及大小、Price组织学分级及是否侵犯软组织无关（P〉0.05）。结论RASSF1A基因可能在骨肉瘤的发生发展中起重要作用,有可能为骨肉瘤的基因治疗提供新的靶点。     

人类肿瘤中RASSF1基因的作用

一系列肿瘤抑制基因山于内源性基因事件失活--而不是经典的突变或缺失事件导致基因功能失活逐渐增加.基因甲基化失活是可逆性的,通过启动子的高度甲基化导致基因沉默有很多潜在的临床用处,如有利于肿瘤的早期诊断、预后及治疗,这些肿瘤包括肺癌、乳癌、肾癌、胃癌、膀胱癌等.RASSF1A就属于经常囚甲基化失活而不是突变失活的一类基因,而且该基因和一个哺乳动物的Ras受体有相似性.RASSF1A在体内与体外试验中均抑制肿瘤生长,更进一步支持它做为一个肿瘤抑制基因的作用.迄今为止,它已经显示出在细胞周期调节、凋亡和微管稳定方面发挥着重要的作用.本综述主要总结关于RASSF1A肿瘤抑制基因在基因结构、内源性基因失活和功能分析方面的知识及进展.     

RASSF1A mRNA在原发性肝癌中的表达及其临床意义

目的 应用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法分析RASSF1 A在原发性肝细胞癌中的表达及其临床意义.方法 提取65例外科手术切除的肝细胞癌组织(其中右肝癌41例,左肝癌的24例)及其相对应的癌旁正常组织和6株肝癌细胞株及1株正常肝细胞株的总RNA,逆转录成cDNA,应用实时荧光定量RT-PCR方法检测RASSF1 A mRNA的表达水平.结果 癌旁正常组织RASSF1A mRNA表达量为癌组织的3.32倍,两者差异有统计学意义(癌旁正常组织△CT=4.64±2-44,癌组织中△CT=6.30±1.92,P<0.01),其中38例(58.5%)肝癌组织中的RASSF1A mRNA表达水平比癌旁正常组织显著下调:下调8倍以上的有17例,下调4倍以上的有8例,下调2倍以上的有13例,另外有5例(7.7%)在肝癌组织中的RASSF1A表达水平比癌旁正常组织较高,其余22例(33.8%)则差异无统计学意义(P>0.05);3株(QGY-7701、PLC、Hep3B,50.0%)肝癌细胞株中的RASSF1A mRNA表达水平比正常肝脏细胞株(HL-7702)显著下调;在肝癌组织中RASSF1A的表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小等无明显相关(P>0,05),但和门脉癌栓与否(P<0.05)、临床分期(P<0.05)及血清HbsAg明显相关(P<0.01).结论 RASSF1A基因的缺失或低表达可能在肝细胞癌发生、发展过程中起一定作用.     

抑癌基因RASSF1A在结肠癌中的表达研究

目的探讨抑癌基因Ras相关区域家族1A（RASSFlA）基因在结肠癌组织以及相应正常结肠组织中的表达并分析其表达与结肠癌临床病理因素之间的关系。方法采用免疫组织化学SP法和Western blot法检测34例结肠癌手术标本和相应的正常结肠组织中RASSFlA蛋白的表达水平,应用RT-PCR法检测RASSFlAmRNA在结肠癌和正常结肠组织中的表达情况。结果①免疫组织化学法结果：结肠癌组织中RASSFlA蛋白表达阳性率明显低于其在正常结肠组织中的表达阳性率[35．3％（12／34）比97．1％（33／34）,P〈0．05]。结肠癌组织中RASSFlA蛋白的表达与肿瘤分化程度和TNM分期均有关（P〈0．05）,即高、中分化及TNM分期较低（Ⅰ＋Ⅱ期）者的RASSFlA蛋白表达阳性率较高P〈0．05）。②Western blot法结果：在34例结肠癌患者中RASSFlA蛋白表达水平明显低于其在相应的正常结肠组织中的表达水平[0．3168＋0．0196比0．9144±0．1776,P〈0．05];该结果与RT-PCR法检测到的RASSFlAmRNA表达情况基本一致[0．1589±O．2237和0．5723±0．1939,P〈0．05]。结论RASSFlA基因的失表达可能在原发性结肠癌的发生、发展中起重要作用,检测RASSFlA的表达情况可为结肠癌的早期诊断提供帮助。     

RASSF1A基因在肺癌中的表达及其意义

目的 观察人肺癌组织中RASSF1A的表达.方法 应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测56例进展期肺癌患者肺癌组织及其癌旁组织中RASSF1A的表达.结果 38例肺癌患者的癌组织中有RASS1A基因表达的缺失或失活,占67.85%(38/56);而仅18例肺癌患者的癌旁组织中有RASS1A基因表达的缺失或失活,占32.14%(18/56);两者差异有统计学意义(P＜0.05).结论 进展期肺癌患者中存在RASSF1A基因表达的缺失或失活,它可作为肺癌的早期诊断和预后判断的参考指标.     

NORE1B、RASSF1A mRNA在肝细胞癌中的表达及其相关性

目的 探讨肝细胞癌(HCC)组织中NORE1B、RASSF1A的转录表达及其临床意义.方法 应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分析41例HCC及对应癌旁组织中NORE1B、RASSF1AmRNA的表达情况,以及与临床病理特征的关系,并探讨两者表达的相关性.结果 NORE1B mR-NA在HCC中的缺失率为63.4%,癌旁组织中为34.1%(P<0.01).RASSF1A mRNA在HCC中的缺失率为75.6%,癌旁组织中为39.0%(P<0.05).两者的差异表达与乙肝、肝硬化以及Edmondson分级均存在相关性(P<0.05),而与年龄、性别、肿瘤大小、术前肝功能Child-Push分级和血清AFP检测值均无显著相关.NORE1B与RASSF1A mRNA在HCC中的表达呈正相关性(P<0.05).结论 NOBE1B与RASSF1A在HCC的发生发展中可能存在协同作用.     

Survivin和RASSF1A基因在大肠癌中的表达及其临床意义

为研究大肠癌组织中生存素(survivin)基因与Ras相关区域家族1A(RASSF1A)基因表达与大肠癌发生、发展的关系,利用逆转录PCR技术,测定60例大肠癌组织及20例癌旁组织中survivin基因与RASSF1A基因的mRNA表达情况;利用甲基化特异性PCR(MSP)技术对RASSF1A启动子甲基化情况进行了鉴...