Thapsigargin对心肌细胞钙释放和肌浆网钙容量的时间效应

[目的]肌浆网钙泵抑制剂 thapsigargin (TG)常被用于耗减肌浆网( sarcoplasmic reticulum, SR)的钙容量.本课题旨在探讨 TG (100 nmol· L-1) 对源自 SR的胞内钙释放和 SR钙容量耗减的时间效应以及 SR内钙对 SR钙释放的调节机理.[方法]局部场刺激作用于成年大鼠心肌细胞,使其产生动作电位,进而诱发胞内钙瞬变( action-potential-induced Ca2 transients, ACT).由 ACT可估测胞内钙释放.SR钙容量可由咖啡因 (20 mmol· L-1)诱发的钙瞬变( caffeine-induced Ca2 transients, CCT)估测.实验结果用激光共聚焦显微镜系统记录.[结果] TG对 ACT峰值(可衡量钙瞬变的大小)的时间效应如下: 0 min, 5.55± 0.28 (单位为标准钙荧光强度即 F/F0, F0为静息钙荧光强度 ); 10 min, 4.89± 0.36; 17 min, 2.58± 0.38; 25 min, 2.11± 0.19; 35 min, 2.22± 0.17; 50 min, 2.27± 0.27.TG对 CCT峰值的时间效应如下: 0 min, 6.73± 0.17; 10 min, 6.60± 0.59; 17 min, 6.24± 0.44; 25 min, 3.99± 0.28; 35 min, 2.24± 0.37; 50 min, 1.14± 0.01.以 CCT为自变量, ACT为因变量的曲线呈" J"形.[结论] TG对心肌胞内钙释放和 SR钙容量呈非线性的时间依赖效应.SR内钙部分耗减即可明显减少钙释放,说明 SR内钙对胞内钙释放具有重要的调节作用.     

丙泊酚、依托咪酯对小鼠离体子宫平滑肌收缩功能的影响

目的观察丙泊酚、依托咪酯对小鼠离体子宫平滑肌收缩功能的影响。方法制备孕9d雌性ICR小鼠子宫平滑肌肌条,采用Med—Lab—U／4cs生物信号采集处理系统记录不同浓度的丙泊酚（2．7、5．4、10．8ug／mL）和依托咪酯（0．2、0．4、0．8ug／mL）对子宫平滑肌收缩张力、强度、频率的影响。结果与基础值比较,2．7ug／mL的丙泊酚使子宫平滑肌的张力、强度降低（P〈0．05）,对其频率、活动力无影响（P〉0．05）;5．4ug／mL、10．8ug／mL丙泊酚使子宫平滑肌的张力、强度、活动力显著降低（P〈0．01）,对频率无影响;而三种浓度依托咪酯对子宫平滑肌的张力、强度、频率、活动力均无影响（P〉0．05）。结论浓度为2．7、5.4、10．8ug／mL的丙泊酚对子宫平滑肌收缩功能有浓度依存性抑制作用。     

吗啡对体外培养的人子宫平滑肌细胞MOR mRNA表达的影响

目的 研究吗啡对体外培养的人子宫平滑肌细胞的μ阿片受体信使核糖核酸(MOR mRNA)表达的影响. 方法 体外分离培养人子宫平滑肌细胞,并通过免疫细胞化学的方法进行鉴定;将细胞分为对照组、吗啡组(10-4,10-5,10-6,10-7mol/L),通过RT-PCR的方法半定量分析吗啡对子宫平滑肌细胞MOR mRNA表达的影响. 结果 吗啡组子宫平滑肌细胞中的MOR mRNA表达较对照组显著下降(P<0.05),且与吗啡浓度负相关(r=-0.999,P<0.001). 结论 外源性阿片类药物吗啡抑制子宫平滑肌细胞肛阿片受体mRNA的表达.     

干扰素-α对人子宫平滑肌细胞和子宫肌瘤细胞的增殖研究

目的探讨干扰素-α（rhIFN-α）对人子宫平滑肌细胞和子宫肌瘤细胞的增殖研究。方法以离体培养的人子宫平滑肌细胞和子宫肌瘤细胞采用MTT法分别用雌激素、孕激素、米非司酮、干扰素测定细胞增殖。结果非肌瘤部位和肌瘤的子宫平滑肌细胞在雌激素、孕激素的刺激下,细胞增殖率都有增加的趋势改变,但非肌瘤部位的平滑肌细胞对于较低浓度的雌、孕激素的刺激,细胞增殖率已经开始增加;而肌瘤部位的平滑肌细胞在较高浓度的雌激素、孕激素刺激下细胞增殖率发生明显增加。对比于非肌瘤部位的平滑肌细胞来说,子宫肌瘤的平滑肌细胞对于IFN-α的抑制作用更加敏感,相同浓度的IFN-α作用下,子宫肌瘤平滑肌细胞增殖率下降要更为显著。结论干扰素抑制子宫非肌瘤部位和肌瘤部位的细胞增殖。     

花椒挥发油对小白鼠子宫平滑肌收缩功能的研究

目的研究花椒挥发油（essential oil of Zanthoxylum Maxim,EOZM）对离体未孕雌激素预处理小白鼠子宫平滑肌的作用及其可能机制。方法观察EOZM和维拉帕米（verapamil,Ver）对子宫自律性收缩的影响,对催产素（oxytocin,OXT）和氯化钙（CaCl2）引起的子宫收缩的影响,对OXT诱导的依内钙性收缩和依外钙性收缩的影响。结果EOZM和Ver均可抑制子宫自律性收缩以及OXT和CaCl2引起的子宫收缩,而且具有剂量依赖性;EOZM对OXT诱导的依内钙性收缩和依外钙性收缩均有抑制作用;Ver仅对OXT诱导的依内钙性收缩有抑制作用,对OXT诱导的依外钙性收缩则没有影响。结论EOZM可能主要通过阻断受体调控的钙通道（receptor operated calcium channel,BOC）和电压依赖的钙通道（voltage dependent calcium channel,VDC）,减少外钙内流和内钙释放从而抑制小自鼠子宫平滑肌的收缩。     

N-乙酰半胱氨酸对脂多糖刺激人子宫平滑肌细胞白细胞介素8表达的影响

目的探讨N-乙酰半胱氨酸（NAC）对脂多糖（LPS）刺激离体培养的人晚期妊娠子宫平滑肌细胞IL-8表达和核转录因子（NF-κB）活性的影响。方法原代培养足月未临产的子宫平滑肌细胞，10μg／mL LPS与经浓度分别为0（生理盐水对照，NS）、5、10、15mmol／L的NAC预处理的子宫平滑肌细胞作用8h，以及10mmol／L的NAC或NS预处理的子宫平滑肌细胞经LPS干预0h、3h、6h、12h、24h、48h，收集细胞免疫印迹检测NF-κB P65合成情况、RT-PCR检测IL-8 mRNA表达及上清液ELISA检测IL-8浓度。结果①NAC在5～15mmol／L呈剂量依赖性抑制LPS刺激IL-8蛋白合成和mRNA表达。②随着NAC浓度由低至高，NF-κB P65合成由强到弱，差异有统计学意义（P〈0．01），其变化趋势与IL-8 mRNA一致。结论NAC能抑制LPS刺激晚期妊娠子宫平滑肌细胞IL-8蛋白合成和基因表达，可能与其抑制NF-κB激活有关。     

CRH对人子宫平滑肌细胞Cx43磷酸化水平及细胞间隙连接通讯的影响

目的:探讨人类促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)对人子宫平滑肌细胞间隙连接蛋白43 磷酸化水平(P-Cx43)以及其对子宫平滑肌细胞间隙连接通道(GJIC)功能的影响。方法:原代培养人未孕子宫平滑肌细胞,给予不同浓度的CRH(0,5.85,58.5,585,5850 pmol/L)进行干预,采用Western印迹分别定量检测CRH各浓度组中子宫平滑肌细胞P-Cx43与非磷酸化Cx43蛋白(NP-Cx43)的表达;细胞划痕实验检测CRH各浓度组中GJIC的变化。结果:CRH各干预组子宫平滑肌细胞中P-Cx43蛋白的表达明显高于对照组,随着CRH干预浓度的递增,呈剂量依赖趋势,各组之间差异有统计学意义(P<0.01);而对照组和干预组之间NP-Cx43蛋白的表达差异无统计学意义(P>0.05);CRH干预后各浓度组荧光黄染料在子宫平滑肌细胞中传输的细胞数明显高于对照组,各组之间比较差异有统计学意义(P<0.01)。同时,随着CRH干预浓度的递增,荧光黄染料传输至最远细胞级所需要的时间呈剂量依赖趋势,各组之间比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:CRH可上调原代子宫平滑肌细胞中P-Cx43蛋白的表达,增强GJIC的功能。     

N-乙酰半胱氨酸对脂多糖刺激人子宫平滑肌细胞白细胞介素8表达的影响

目的探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对脂多糖(LPS)刺激离体培养的人晚期妊娠子宫平滑肌细胞IL-8表达和核转录因子(NF-κB)活性的影响。方法原代培养足月未临产的子宫平滑肌细胞,10μg/mL LPS与经浓度分别为0(生理盐水对照,NS)、5、10、15 mmol/L的NAC预处理的子宫平滑肌细胞作用8 h,以及10 mmol/L的NAC或NS预处理的子宫平滑肌细胞经LPS干预0 h、3 h、6 h、12 h、24 h、48 h,收集细胞免疫印迹检测NF-κB P65合成情况、RT-PCR检测IL-8 mRNA表达及上清液ELISA检测IL-8浓度。结果1NAC在5~15 mmol/L呈剂量依赖性抑制LPS刺激IL-8蛋白合成和mRNA表达。2随着NAC浓度由低至高,NF-κB P65合成由强到弱,差异有统计学意义(P<0.01),其变化趋势与IL-8 mRNA一致。结论NAC能抑制LPS刺激晚期妊娠子宫平滑肌细胞IL-8蛋白合成和基因表达,可能与其抑制NF-κB激活有关。     

肌浆网释放Ca2+对心房钠尿肽分泌的影响

目的 观察肌浆网(sarcoplasmic reticulum,SR)释放Ca2+对心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)分泌的影响.方法 利用SR激活剂和阻断剂,采用搏动的离体心房灌流模型及放射免疫技术观察SR释放Ca2+对家兔心房ANP分泌的变化.结果 SR抑制剂Ryanodine明显促使心房ANP的分泌,同时显著抑制心房搏出量和心房搏动压,而SR激活剂咖啡因的作用与Ryanodine完全相反.心肌兴奋-收缩耦联脱敏剂2,3-丁二酮单肟(BDM)促使ANP的分泌,对心房搏出量和心房搏动压呈抑制效应.腺苷酸环化酶直接激活剂福司柯林明显抑制ANP分泌,同时显著增加cAMP逸出量和心房搏出量.阻断L-型Ca2+通道明显促进心房ANP的分泌,但未能改变咖啡因对ANP分泌的抑制效应.结论 阻断SK或L-型Ca2+通道使细胞内Ca2+浓度降低可促进ANP的分泌,而激活二者则抑制ANP分泌.     

骨骼肌卫星细胞移植对残存心肌细胞游离Ca2+的影响

目的研究骨骼肌卫星细胞移植对梗塞心肌残存心肌细胞游离Ca     

异丙酚对人肠系膜小动脉平滑肌细胞膜外向钾通道电流的影响

目的 :研究异丙酚对人肠系膜小动脉平滑肌细胞膜外向钾通道电流的影响。方法 :用酶消化法获得急性分离的人肠系膜小动脉平滑肌细胞 ,采用全细胞膜片钳技术记录外向钾通道电流。结果 :在刺激电压 (Vt)- 70mV～ +70mV条件下 ,引发一外向钾电流 ,该电流可被 3mmol/LTEA阻滞 6 1%± 5 % ,异丙酚 (4 3μmol/L、86 μmol/L)分别增加外向钾通道电流幅值达 (13± 3) %和 (36± 7) %。 结论 :异丙酚增强人肠系膜小动脉平滑肌细胞外向钾通道电流 ,提示钾通道开放增加可能介导异丙酚引发的血管扩张。     

瞬时感受器电位香草酸受体1在低氧诱导肺动脉平滑肌细胞内钙升高中的作用

目的观察记录低氧条件培养的人肺动脉平滑肌细胞中瞬时感受器电位香草酸受体1(transient potential vanilloid receptor1,TRPV1)对细胞内Ca2+浓度(用340nm/380nm的荧光强度比值表示)的影响,探讨TRPV1在低氧性肺动脉平滑肌细胞增生中的作用。方法应用4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(4′,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)染色、流式细胞周期测定以及细胞内Ca2+浓度测定的方法检测细胞增生及细胞内Ca2+浓度变化。结果低氧能明显促进人肺动脉平滑肌细胞的增生,升高人肺动脉平滑肌细胞内静息Ca2+浓度,显著加强环并偶氮酸(cyclopiazonic acid,CPA)诱发的库容性Ca2+内流(capacitative Ca2+entry,CCE),上述效应均可被TRPV1阻断剂Capsazepine(CPZ)所抑制。结论在人肺动脉平滑肌细胞中,TRPV1可能是低氧所致细胞内Ca2+浓度增加、CCE增强和细胞过度增生的重要途径或调制因素。     

内皮素通过增强库容性钙内流促进肺血管平滑肌细胞增生

目的通过观察内皮素-1(ET-1)诱导人肺动脉平滑肌细胞(HPASMCs)增生的作用机制及细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)变化,探讨ET-1在肺动脉高压(PAH)发病过程中的作用,为进一步干预治疗提供有效的基础依据。方法体外培养HPASMCs并分为:正常对照组和内皮素组(ET-1:0.01μmol/L,0.1μmol/L,1.0μmol/L)。分别应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和细胞计数检测细胞的增生情况,荧光钙成像法测定[Ca2+]i,运用RealTime-PCR、WesternBlotting检测编码钙库操控性钙通道(SOC)的规范瞬时受体电位1(TRPC1)基因及蛋白表达情况。结果ET-1可促进HPASMCs增生,且ET-1诱导的细胞增生依赖于细胞外Ca2+的内流,ET-1处理的细胞中[Ca2+]i和库容性钙内流(CCE)显著升高,同时TRPC1基因转录与蛋白表达也明显增加。结论ET-1能显著促进肺血管平滑肌细胞增生,其机制可能与上调编码SOC的TRPC1表达、增加库容性钙内流使肺血管平滑肌细胞的[Ca2+]i异常升高有关。     

低氧通过Ca~(2+)-NFAT信号通路促进肺动脉平滑肌细胞增生

目的通过观察低氧对肺动脉平滑肌细胞增生的影响及作用机制,探讨低氧在肺动脉高压发病过程中的作用,为肺动脉高压的进一步干预治疗提供可靠的理论依据。方法培养人肺动脉平滑肌细胞(human pulmonary artery smooth muscle cell,HPASMCs)并分为以下几组:正常对照组、低氧组(24h、48h、72h)、低氧并处理组(低氧48h并在细胞外液中加入EDTA2mmol/L或VIVIT4μmol/L)。分别应用细胞计数法检测细胞的增生情况、荧光钙成像法测定细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)、激光共聚焦显微镜观察活化T细胞核因子c3(nuclear factor of activated Tcells,NFATc3)在细胞核内外分布的变化。结果低氧呈时间依赖性促进HPASMCs增生;低氧处理的细胞静息[Ca2+]i和库容性钙内流(capacitative calcium entry,CCE)显著升高,NFATc3的核转位增多。EDTA(Ca2+螯合剂)或VIVIT(NFAT特异性抑制剂)能够明显抑制低氧诱导的细胞增生现象。结论低氧能促进HPASMCs的增生,其机制可能是通过增加静息[Ca2+]i和库容性钙内流,使HPASMCs内的Ca2+异常升高并导致NFATc3转位至核内,进而促进与增生有关的基因的表达。     

冷血及晶体心肌麻痹液与肌浆网钙泵功能改变

目的：评价冷血心肌麻痹液（ＣＢＣ）及心肌温度与晶体心肌麻痹液（ＣＣ）心肌保护效果的关系。方法：采用离体工作鼠心模型，对ＣＢＣ及ＣＣ停搏１２０ｍｉｎ心功能、超微结构、心肌肌浆网（ＳＲ）Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性及Ｃａ２＋摄取的保护效果进行了研究。结果：８℃ＣＢＣ对心功能、超微结构、ＳＲＣａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性及Ｃａ２＋摄取保护效果优于１６℃ＣＢＣ及８℃ＣＣ组，１６℃ＣＢＣ与８℃ＣＣ之间保护效果差异无显著意义。结论：８℃ＣＢＣ心肌保护有效性与释氧和降低心肌代谢作用有关，ＣＢＣ心肌保护效果优于ＣＣ是温度相关的过程     

Fca受体在人支气管平滑肌细胞的表达与功能研究

目的 探讨Fca受体在人支气管平滑肌细胞的表达特征及其功能.方法 采用RT-PCR和免疫荧光技术,从基因和蛋白水平检测Fca受体在人支气管平滑肌细胞的表达;以Fura-2/AM为细胞内钙离子荧光指示剂,观察IgA对人支气管平滑肌细胞内钙离子浓度的影响.结果 RT-PCR和免疫荧光染色方法、均检测到Fca受体在人支气管平滑肌细胞的表达.slgA与人支气管平滑肌细胞孵育90min后,细胞内Ca2 浓度明显增高,差异具有显著性(P＜0.05).mlgA与人支气管平滑肌细胞孵育90min后,细胞内Ca2 浓度无明显改变(P＞0.05).结论 Fca受体在人支气管平滑肌细胞存在表达,slgA使人支气管平滑肌细胞内钙离子浓度增高.     

钙拮抗剂和ACEI对主动脉平滑肌细胞增殖的影响

该研究以培养人体血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）为模型，用３Ｈ－ＴｄＲ掺入试验观察钙拮抗剂（Ｎｉｆｅｄｉｐｉｎｅ、Ａｍｌｏｄｉｐｉｎｅ）和ＡＣＥＩ（Ｃｉｌａｚａｐｒｉｌ、Ｂｅｎａｚａｐｒｉｌ）对细胞增殖效应。结果３种浓度钙拮抗剂都明显抑制细胞增殖（Ｐ＜０．０１），高浓度（１０－５ｍｏｌ／Ｌ、５×１０－６ｍｏｌ／Ｌ）时Ｎｉｆｅｄｉｐｉｎｅ抑制程度更好（Ｐ＜０．０５），低浓度（１０－６ｍｏｌ／Ｌ）以Ａｍｌｏｄｉｐｉｎｅ为佳（Ｐ＜０．０５）。ＡＣＥＩ中发现高浓度时２种药物均能抑制细胞增殖（Ｐ＜０．０１），而低浓度时细胞生长反常地超过对照组（Ｐ＜０．０５）。钙拮抗剂与ＡＣＥＩ比较，前者尤其是Ｎｉｆｅｄｉｐｉｎｅ抑制细胞增殖程度较ＡＣＥＩ明显。由此推测小剂量ＡＣＥＩ反而刺激细胞增生是否与药物含量较低时仅抑制血浆ＡＣＥ活性，不能抑制组织ＡＣＥ活性有关。     

人妊娠子宫峡部平滑肌M受体检定及IP3测定

应用放射配体结合实验方法，检定了人妊娠子宫峡部平滑肌毒蕈碱样胆碱受体（Ｍ受体）及亚型。结果表明：在人子宫峡部存在两种Ｍ受体亚型。并应用竞争性蛋白结合分析法，测定了ＡＣｈ对人妊娠子宫峡部平滑肌细胞合成ＩＰ３的影响。     

人动脉平滑肌细胞贴块培养法

应用贴块法成功地进行了人动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）原代培养。培养出的人ＳＭＣ呈典型的“谷”与“峰”样生长，电镜下见细胞浆内含有肌丝结构，马氏染色呈红色。经历１０个月传代培养至３５代，该细胞生长未见异常改变。文内还讨论了人主动脉ＳＭＣ体外培养应注意的问题。