高糖环境下肾小球系膜细胞和内皮细胞相互作用对活性氧产生的影响以及茶多酚的干预作用

目的 :探讨在高糖环境下肾小球系膜细胞与内皮细胞相互作用对活性氧产生的影响和茶多酚的干预作用。方法 :系膜细胞和内皮细胞单独分别培养和共同培养 ,分正常对照组、高糖组及茶多酚干预组 ,培养 0、12、3 6h后 ,用分光光度法检测培养液中丙二醛 (MDA)含量及超氧化物歧化酶 (SOD)活性。结果 :高糖共同培养时SOD活性比两者分别单独培养时更低(P <0 .0 1) ;共同培养时茶多酚干预组的SOD活性显著高于高糖组 (P <0 .0 1)。高糖共同培养时MDA含量较两种细胞单独培养明显增高 ,高于两种细胞单独培养的总和 (P <0 .0 1) ;共同培养时茶多酚干预组MDA含量低于高糖组 (P <0 .0 1)。结论 :( 1)高糖环境下 ,系膜细胞和内皮细胞存在相互作用 ,这种作用能促进肾细胞活性氧的产生 ;( 2 )茶多酚通过干预活性氧的产生影响细胞间相互作用     

高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞中NO的变化及其对细胞外基质的影响

目的 探讨高糖培养的肾小球系膜细胞中一氧化氮（NO）合成的变化,以及上述变化对细胞外基质的影响.方法 体外培养大鼠肾小球系膜细胞,按干预方法分为正常组（NG组,5.56 mmol·L-1 DMEM）,高糖组（HG组,25 mmol·L-1 DMEM）、一氧化氮供体组（SNP组,5.56 mmol·L-1 DMEM＋100 μmol·L-1 SNP）、NO清除剂组（C-PTIO 组,25 mmol·L-1 DMEM＋200 μmol·L-1 C-PTIO）,以Griess比色法测定培养上清中NO水平;用ELISA法测定培养上清中Ⅳ型胶原、层黏蛋白含量.结果 高糖培养条件下上清中NO增多（P〈0.05）,Ⅳ型胶原、层黏蛋白含量增加（P〈0.01）,应用C-PTIO可显著降低上清中NO的含量,Ⅳ型胶原、层黏蛋白的含量也降低.结论 高糖可诱导大鼠肾小球系膜细胞产生NO,异常增多的NO又可导致系膜细胞中Ⅳ型胶原、层黏蛋白的积聚.     

雷帕霉素对高糖诱导肾小球系膜细胞增生、肥大及细胞外基质合成的影响

目的:观察雷帕霉素对高糖诱导肾小球系膜细胞增生、肥大及细胞外基质合成的影响.方法:在高糖状态下培养系膜细胞,予以不同剂量雷帕霉素进行干预,采用MTT的方法观察细胞增生能力,并用流式细胞仪检测各组系膜细胞体积,以前向角散射光平均强度表示细胞大小,Western印迹法检测细胞中纤维连接蛋白(FN)及Ⅳ型胶原(ColⅣ)的表达变化.结果:同正常糖及甘露醇组比较,高糖可使肾小球系膜细胞增生且发生肥大,同时高糖环境下系膜细胞分泌的FN及ColⅣ显著增加(P＜0.05),而雷帕霉素能显著抑制高糖的上述作用(P＜0.05),且呈剂量依赖性.结论:雷帕霉素可以抑制高糖状态下系膜细胞的增生、肥大及细胞外基质的合成,且呈剂量依赖性,有望用于糖尿病肾病的防治.     

缓激肽对高糖环境下肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质分泌的影响

目的观察缓激肽(BK)对高糖浓度下肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质分泌的影响。方法采用体外培养的大鼠肾小球系膜细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测系膜细胞增殖,酶联免疫(ELISA)法测细胞外基质分泌。结果高糖(30.0 mmol/L)环境可促进肾小球系膜细胞增殖和Ⅳ型胶原的分泌(P<0.05)。BK、ACEI(贝那普利)均抑制高糖环境下肾小球系膜细胞的增殖和Ⅳ型胶原的分泌(P<0.05)。结论高糖可促使肾小球系膜细胞增殖和Ⅳ型胶原的分泌。ACEI抑制肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质分泌的作用机制可能与减少BK的降解有关。     

川芎嗪对高糖环境大鼠肾小球系膜细胞增殖及其细胞外基质含量的影响

目的：探讨川芎嗪对高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞（MCs）增殖及其细胞外基质含量的影响。方法：体外培养大鼠肾小球系膜细胞株,分对照组、高糖组、TMP组,分别培养12h、24h、48h,CASY细胞计数仪计数细胞存活率;以CCK-8法检测细胞增殖;以ELISA法检测细胞上清液细胞外基质ColⅣ及FN的含量。结果：各TMP浓度组之间存活率无统计学差异（P〉0.05）;与对照组比较,高糖下培养24h、48hMCs增殖显著增快（P〈0.01）,分泌的ColⅣ及FN含量增多（P〈0.05）;与高糖组比较,TMP各组MCs增殖显著减慢（P〈0.01）,分泌ColⅣ及FN减少（P〈0.01或P〈0.05）。结论：川芎嗪可以有效抑制高糖的促增殖作用并能减少系膜细胞外基质的增加。     

高糖环境下肾小球细胞间相互作用对TGF-β1表达的影响及茶多酚的干预作用

目的探讨在高糖环境下人肾小球系膜细胞与内皮细胞间相互作用对TGF-β1mRNA表达的影响和茶多酚的干预作用.方法建立系膜细胞和内皮细胞共培养模型,分空白对照组、高糖组、茶多酚干预组和茶多酚对照组,培养0、12、36 h后,应用RT-PCR法检测模型中两种细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达情况.结果高糖可上调共培养模型中系膜细胞和内皮细胞TGF-β1mRNA表达,其作用显著强于单独培养的系膜细胞和内皮细胞,茶多酚可降低共培养模型中细胞TGF-β1mRNA表达,且效果优于单独培养.结论(1)高糖环境下系膜细胞和内皮细胞间存在相互作用,这种作用能促进两种细胞TGF-β1mRNA高表达.(2)茶多酚通过对TGF-β1mRNA表达的抑制影响细胞间相互作用.     

肾小球内皮细胞培养及产生细胞外基质的实验研究

作者成功地培养了肥儿及牛肾小球内皮细胞，将内皮细胞克隆后传代培养了７代，并利用间接免疫荧光方法进行鉴定，观察胎儿及牛肾小球内皮细胞都可以表达第ＶＩＩＩ因子相关抗原，纤维连接蛋白，ＩＶ型胶原及层粘连蛋白。测定了不同时胎儿肾小球内皮细胞培养上清中细胞外基质的水平。结果证实不加任何刺激因子，肾小球内皮细胞可以稳定地产生细胞外基质。     

肌肽对高糖作用下肾小球系膜细胞的影响

目的探讨肌肽对体外高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞MCs生长的影响。方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞（mesangial cells,MCs）,分为正常对照组（NG）、高糖组（HG）、高渗甘露醇组（HM）、正常糖加20 mmol/L肌肽组（NG＋C20）和高糖加20 mmol/L肌肽组（HG＋C20）5组。采用MTT法测定肾小球系膜细胞24 h、48 h的增殖情况。结果在24 h、48 h时间段,在与正常对照组相比高糖组出现明显的增殖现象（P〈0.01或P〈0.05）;高糖加20 mmol/L肌肽组与高糖组相比,具有显著的抑制作用（P〈0.01）。结论肌肽通过抑制高糖条件下肾小球系膜细胞的增殖来对糖尿病肾病起到保护作用,为糖尿病肾病的防治提供新途径。     

蜕皮甾酮对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞增殖及其细胞外基质含量的影响

目的：观察蜕皮甾酮对高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞（MCs）增殖、细胞外基质的影响。方法：体外培养大鼠MCs细胞株,分低糖组、高糖组、高糖＋蜕皮甾酮组（EDS组）,分别作用12、24、48h,MTT法检测细胞增殖活力,ELISA法检测细胞上清中FN的含量。结果：与低糖组比较,高糖组12h、24h、48h MCs增殖显著增快（P〈0.01）,FN含量明显增加（P〈0.05）;与低糖组比较,EDS在浓度〉1×10-5mol/L时MCs增殖显著减慢（P〈0.01）;与高糖组比较,EDS 1×10-6mol/L组各时间点及1×10-7mol/L组24h、48h MCs增殖显著减慢（P〈0.05或P〈0.01）,EDS 1×10-6mol/L组各时间点FN含量均有降低（P〈0.05或P〈0.01）;EDS 1×10-10、1×10-8mol/L组各时间点FN含量差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：①蜕皮甾酮在浓度〉1×10-5mol/L时对MCs有明显的细胞毒性作用。②蜕皮甾酮可抑制高糖诱导的MCs增殖。③蜕皮甾酮能减少高糖培养大鼠MCs细胞外基质的增加。     

PAF通过PKCβ途径对系膜细胞分泌细胞外基质的影响

目的 探讨血小板活化因子(PAF)是否通过高糖可激活蛋白激酶C-β(PKCβ)途径调节高糖高脂环境下细胞外基质(ECM)的分泌.方法 将人肾小球系膜细胞分成6组:正常对照组、PAF组、PAF+ LY333531组、高糖高脂组、高糖高脂+ PAF组、高糖高脂+PAF+ LY333531组;ELISA法测定各组中纤维联接蛋白(Fn)及Ⅳ型胶原(ColⅣ)含量,实时定量PCR测定PKCβ Ⅰ mRNA表达水平.结果 与正常对照组比较,其他5组Fn、ColⅣ、PKCβ Ⅰ mRNA表达增加(P＜0.05);与PAF组比较,PAF+ LY333531组Fn、ColⅣ、PKCβ Ⅰ mRNA表达减少(P＜0.05);与高糖高脂+ PAF+LY333531组比较,高糖高脂组、高糖高脂+ PAF组Fn、ColⅣ、PKCβ Ⅰ mRNA表达显著增加(P＜0.05).结论 高糖高脂环境下PAF通过促进PKCβ Ⅰ表达刺激Fn、ColⅣ分泌;当加入LY333531时,ECM分泌减少,PKCβ Ⅰ抑制剂对肾脏可能具有一定的保护作用.     

脂多糖诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖和分泌细胞外基质的研究

目的观察脂多糖（LPS）对大鼠肾小球系膜细胞（GMC）增殖及分泌细胞外基质（ECM）的作用。方法建立体外培养的大鼠GMC,鉴定后用于实验。实验分为两组：对照组和LPS诱导组。甲基噻唑基四唑（MTT）比色法测定24h和48h两个时点两组系膜细胞的增殖情况;ELISA法测定6h、12h和24h系膜细胞培养上清液中ECM蛋白含量;荧光半定量反转录PCR（RT-PCR）法检测ECM中层黏连蛋白（LN）β2 mRNA表达的变化。结果（1）LPS组和对照组GMC增殖情况间差别有显著性意义（P〈0.05）;（2）正常培养的大鼠GMC可分泌一定量的ECM,LPS组在各时点分泌ECM量与对照组间差别有显著性意义（P〈0.01）;（3）正常培养的大鼠GMC有微量LNβ2 mRNA表达,LPS组在各时点LNβ2 mRNA表达量与对照组间差别均有显著性意义（P〈0.01）。结论从蛋白和mRNA两个水平同时观察到ECM成分（如FN、LN和ColⅣ）的增加,说明在系膜增殖性肾炎中ECM明显增加并起主要作用。     

肾炎康复片对TGF-β_1诱导下肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质合成的影响

目的：观察肾炎康复片对转化生长因子-β1（transforming growth factor,TGF-β1）诱导下肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质成分表达的影响。方法：体外培养正常大鼠肾小球系膜细胞,分为正常对照组,TGF-β1刺激组,TGF-β1加肾炎康复片低剂量组（100 mg·L^-1）、中剂量组（200 mg·L^-1）、高剂量组（500 mg·L^-1）。分别利用甲基噻唑基四唑法（metyl thiazolyl tetronzolium,MTT）观察肾炎康复片对TGF-β1诱导细胞活力的影响;双抗体夹心ABC-ELISA法检测细胞上清I型胶原（Col I）、纤维连接蛋白（FN）的含量。结果：TGF-β1可以显著增加大鼠肾脏系膜细胞活力,TGF-β1刺激组Col I、FN表达量较正常对照组明显升高（P〈0.05）;TGF-β1加肾炎康复片各剂量组的Col I、FN均低于TGF-β1刺激组（P〈0.05）。结论：肾炎康复片能抑制TGF-β1诱导的细胞活力及肾小球细胞外基质（ECM）的合成。提示抑制TGF-β1刺激GMC分泌细胞外基质是肾炎康复片治疗慢性肾小球疾病的重要机制之一。     

地骨皮活性成分对高糖致肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质的影响

目的?观察地骨皮中有效成分对高糖刺激的肾小球系膜细胞的增殖以及细胞外基质分泌的影响,研究其对糖尿病肾病的保护机制。方法?体外培养肾小球系膜细胞,分为高糖模型组（葡萄糖浓度为30?mmol/L）,空白对照组（葡萄糖浓度为5.5?mmol/L）,甜菜碱、山奈酚5个浓度剂量组（0.01、0.1、1、10、100?μmol/L）,用MTT法观察系膜细胞增殖情况,ELISA法观察细胞外基质分泌情况。结果?与高糖模型组比较,不同剂量甜菜碱组和山奈酚组,对高糖致肾小球系膜细胞增殖有不同程度的抑制。甜菜碱、山奈酚均能抑制细胞外基质的分泌,与高糖模型组比较有显著性差异（P<0.05~0.01）。结论?地骨皮中有效成分甜菜碱和山奈酚均具有抑制高糖刺激下系膜细胞增殖以及细胞外基质分泌的作用,推测地骨皮中有效成分具有治疗糖尿病肾病的作用。      

高糖浓度对人肾小球系膜细胞的作用

目的 模拟相血糖控制不佳出现的糖浓度波动,研究波动性细胞外高糖浓度（ＦＥＨＧ）对肾小球系膜细胞（ＭｓＣ）增殖及其纤维连接蛋白合成的影响。方法 利用四甲基偶氮唑蓝（ＭＴＴ）比色法和竞争抑制ＥＬＩＳＡ法动态观察不同葡萄糖浓度及波动性高糖浓度对ＭｓＣ增殖和ＦＮ合成的作用。结果 高糖浓度抑制ＭｓＣ增殖,此抑制作用和糖浓度成正相关,同时刺激ＭｓＣ的ＦＮ合成增加;     

当归补血汤对高糖条件下系膜细胞增殖及细胞外基质表达的影响

目的:研究当归补血汤对培养在高糖条件下系膜细胞(GMC)增殖及细胞上清液中层粘连蛋白(LN)、Ⅳ胶原纤维(ColⅣ)、纤维连接蛋白(FN)的表达的影响,探讨其在糖尿病肾病(DN)防治中的意义。方法:①采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定经体外培养的大鼠肾小球系膜细胞在各种处理因素的作用下上清液中LN、Ⅳ型胶原及FN的表达情况;②利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法动态观察各种处理因素的作用下各组GMC增殖情况。结果:高糖能明显刺激体外培养的GMC增殖,同时促进GMC分泌FN、LN和ColⅣ(P<0.05或P<0.01)。而当归补血汤能抑制GMC增殖及GMC分泌FN、LN和ColⅣ,并呈一定量效关系(P<0.05或P<0.01),即随糖或药物浓度的增加,GMC增殖、GMC分泌FN、LN和ColⅣ的能力也相应增加或减少。结论:高糖可促进GMC增殖、细胞外基质(ECM)蛋白分泌,当归补血汤能明显抑制高糖条件下GMC增殖、及其分泌FN、LN和ColⅣ,说明当归补血汤能直接抑制GMC增殖及分泌ECM,从而发挥预防肾小球纤维化及硬化的发生、发展,进而延缓DN的进展。     

还原型谷胱甘肽对高糖诱导的小鼠系膜细胞氧化应激及细胞外基质表达的影响

目的 观察还原型谷胱甘肽（GSH）对高糖诱导的小鼠肾小球系膜细胞氧化应激及细胞外基质表达的影响。方法 体外培养小鼠肾小球系膜细胞株分别予正常糖（NG组）、高糖（HG组）、高糖+GSH（1、5、10mmol/L,高糖+GSH 1～3组）组干预72h;ELISA法测定各组细胞培养上清液中的丙二醛（MDA）、过氧化氢（H₂O₂）、一氧化氮（NO）、总超氧化物歧化酶（tSOD）和转化生长因子β₁（TGF-β₁）、纤连蛋白（FN）及层粘连蛋白（LN）的表达情况。结果 HG组小鼠肾小球系膜细胞MDA、H₂O₂、NO、TGF-β₁、FN、LN的表达水平均较NG组增加,tSOD表达降低（P<0.05）;高糖+GSH 1～3组MDA、H₂O₂、FN、LN表达较HG组减少（P<0.05）,高糖+GSH2、3组NO、TGF-β₁表达较HG组降低（P<0.05）,高糖+GSH 3组tSOD表达较HG组增加（P<0.05）。结论 GSH可改善高糖诱导的系膜细胞氧化应激反应及减少细胞外基质积聚,对糖尿病肾病可能有一定防治作用。     

当归补血汤含药血清对高糖条件下肾小球系膜细胞增殖的影响

目的观察当归补血汤含药血清对高糖条件下肾小球系膜细胞（GMC）增殖的影响,探讨其在糖尿病肾病（DN）防治中的意义。方法采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法动态观察各种处理因素的作用下GMC增殖情况。结果高糖能明显刺激体外培养的GMC增殖,而当归补血汤能明显抑制GMC增殖,并呈一定量效关系,即随糖或药物浓度的增加,GMC增殖也相应增加或减少。结论高糖可促进GMC增殖,当归补血汤能明显抑制高糖条件下GMC增殖,从而发挥预防和延缓DN发展的积极作用。     

脂质过氧化对内皮细胞和单核细胞间相互作用的影响

以巯基氧化剂联胺作用于培养人血管内皮细胞，引发细胞过氧化脂质蓄积与脂质过氧化损伤。结果发现，内皮细胞脂质过氧化损伤使单核细胞对内皮细胞的粘附增加，单核细胞主要粘附于受损伤的内皮细胞表面和间隙。揭示单核细胞对内皮细胞粘附增加，是内皮细胞脂质过氧化损伤促进和加重动脉粥样硬化病变形成的一个重要机制。     

D-葡萄糖对系膜细胞产生细胞外基质的时效与量效研究

目的探讨不同浓度葡萄糖在不同时间对系膜细胞产生细胞外基质（ECM）的影响。方法人系膜细胞分别在不同浓度D-葡萄糖（5．5、10、20、30mmol／L）条件下培养不同时间（6、12、24、48h）,ELISA法检测各组细胞上清液纤维连接蛋白（Fn）、Ⅳ型胶原（ColⅣ）含量。结果（1）10、20、30mmol／LD-葡萄糖条件下,培养6、12、24、48h均能引起细胞上清液中的Fn、Col Ⅳ显著升高（P〈0．05）,以24h最明显（P〈0．05）。（2）在相同的时间点上,随浓度增加,5．5、10、20、30mmol／LD-葡萄糖培养均能引起细胞上清液中的Fn、Col Ⅳ显著升高（P〈0．05）,以30mmol／LD-葡萄糖组最明显（P〈0．05）。结论葡萄糖可以时间和剂量依赖的方式刺激系膜细胞Fn、Col Ⅳ产生。