花青素通过TLR4/NF-κB通路对脂多糖诱导的血管内皮损伤的保护作用

目的探讨花青素(PC)对脂多糖(LPS)作用下血管内皮细胞损伤的影响及作用机制。方法体外培养人脐静脉血管内皮细胞,脂多糖作用于人脐静脉血管内皮细胞诱导其损伤,设置空白对照组、模型组(1000 ng/ml脂多糖处理)、不同浓度(100,50,25μg/ml)花青素组。使用MTT法检测各组细胞活力;ELISA检测各组细胞培养液中NO、TNF-α和IL-6的浓度变化;特定试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH-PX)含量;DHE荧光探针检测ROS的变化;Western blot法检测各组TLR4/NF-κB蛋白表达水平。结果与空白对照组相比脂多糖损伤组能够降低HUVECs的活力,增加ROS的含量,LDH、MDA含量显著增加,SOD、GSH-PX活性显著下降,同时降低NO分泌,诱导TNF-α和IL-6分泌及增加了TLR4/NF-κB的表达(P<0.01)。不同浓度花青素和脂多糖同时作用HUVECs时,细胞活力逐渐上升,ROS含量逐渐下降,LDH、MDA含量逐渐下降,SOD、GSH-PX活性随之上升,同时NO分泌增加,TNF-α和IL-6分泌及TLR4/NF-κB蛋白表达显著下降(P<0.01)。结论花青素能够提升脂多糖作用下HUVECs活力,恢复细胞分泌功能,增强细胞抗氧化能力,减少细胞的炎性反应;花青素可能部分地通过TLR4/NF-κB通路对血管内皮细胞发挥保护作用。     

2种海参胶原蛋白多肽对血管内皮细胞保护作用的比较研究

目的 观察革皮氏海参和北极刺参胶原蛋白多肽对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)损伤的血管内皮细胞的保护作用,探讨其保护内皮细胞的作用机制。方法 采用ox-LDL处理血管内皮细胞(ECV304)建立氧化应激损伤模型,以MTT法测定ECV304的增殖活性,硫代巴比妥酸法测定细胞内的丙二醛(MDA)含量,比色法测定一氧化氮合酶(NOS)活力和一氧化氮(NO)释放量,Hoechst33258染色法检测细胞的凋亡,Western blotting法检测caspase-3蛋白的表达。结果 经2种海参胶原蛋白多肽预处理后,ECV304细胞的增殖率显著升高 (P<0.05,P<0.01),细胞凋亡比率和MDA含量显著降低(P<0.05,P<0.01),细胞NOS活力和NO释放量均显著提高 (P<0.05,P<0.01),凋亡蛋白caspase-3的表达量显著降低。结论 2种海参胶原蛋白多肽均能有效保护脂质过氧化物损伤的血管内皮细胞,其中北极刺参胶原蛋白多肽在抑制细胞凋亡和提高NOS活性方面效果更突出,可能与其氨基酸组成有关。     

日本刺参酸性粘多糖、皂苷和胶原蛋白多肽对血管内皮细胞的保护作用

目的研究日本刺参酸性粘多糖、皂苷和胶原多肽对血管内皮细胞的保护作用。方法采用ox-LDL建立体外培养的人脐静脉血管内皮细胞株(ECV304)损伤模型。MTT法测定血管内皮细胞的增殖活性;硝酸还原酶法测定血管内皮细胞一氧化氮合酶(NOS)活力和NO释放量;TBA法测定细胞内MDA含量;DNA-Ladder法检测血管内皮细胞的凋亡。结果不同浓度的酸性粘多糖、胶原蛋白多肽和低浓度的皂苷能明显抑制ox-LDL对血管内皮细胞的损伤,促进血管内皮细胞增殖(P<0.05,P<0.01);降低细胞内MDA含量(P<0.05,P<0.01);拮抗ox-LDL引起的血管内皮细胞凋亡。酸性粘多糖和胶原蛋白多肽还能明显促进血管内皮细胞NO释放量(P<0.05,P<0.01),提高细胞NOS活力(P<0.05,P<0.01)。结论日本刺参酸性粘多糖、皂苷和胶原蛋白多肽对血管内皮细胞的脂质过氧化物损伤均具有明显的保护作用。     

Oxymatrine improves palmitic acid-induced vascular endothelial cell injury through Akt-eNOS-NO signaling pathway北大核心CSCD

目的探讨氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)对棕榈酸(palmitic acid,PA)致血管内皮细胞损伤的改善作用及其机制。方法MTT法检测人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡;ELISA法检测细胞内活性氧(ROS)水平以及细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)及一氧化氮(NO)水平;Western blot法检测bcl-2、bax、caspase-3、Akt和内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)的蛋白表达。结果OMT对PA诱导的HUVECs细胞存活率下降和LDH水平升高有明显的抑制作用;降低细胞凋亡;上调bcl-2/bax蛋白比值及下调caspase-3蛋白表达;在细胞培养液中降低ROS和MDA水平而提高SOD、GSH-PX和NO水平;上调Akt和eNOS的磷酸化蛋白表达。结论OMT通过Akt-eNOS-NO信号通路改善PA诱导的血管内皮细胞损伤。     

单氰胺对大鼠肾细胞抗氧化功能的影响

目的 探讨单氰胺对大鼠肾细胞抗氧化损伤功能的影响.方法 分别将终浓度为0.06、0.12、0.18、0.24、0.30 mg/ml的单氰胺添加到大鼠肾细胞(NRK)培养液中.培养24 h后.检测NRK细胞培养物上清内乳酸脱氢酶(LDH)活力、细胞中一氧化氮(NO)和丙二醛(MDA)含量以及一氧化氮合酶(NOS)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活力.结果 随着单氰胺浓度的增加,LDH活力和NO含量先升高后下降,MDA含量增加,NOS活力升高,SOD和GSH-Px活力下降,实验组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05;P<0.01).结论 单氰胺可导致大鼠肾细胞抗氧化损伤功能下降.     

脂联素对人脐静脉内皮细胞保护作用的实验研究

目的体外培养人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）,加入低密度脂蛋白（LDL）建立细胞损伤模型,观察脂联素（APN）对模型细胞结构和功能的影响。方法观察对照组、LDL损伤组、APN预处理组和APN干预组内皮细胞（EC）的形态改变,测定细胞活性,测定细胞培养上清中一氧化氮（NO）、乳酸脱氢酶（LDH）和6-酮前列腺（6-keto-PGF1）的含量变化,测定细胞中一氧化氮合酶（NOS）的含量。结果与正常细胞对照组比较,LDL损伤组的细胞形态明显改变,细胞存活率明显降低,LDH释放明显增高,NO、NOS和6-keto-PGF1合成明显降低（P〈0.01）;而APN预处理组和干预组能明显降低LDH释放,促进NO、NOS和6-keto-PGF1合成（P〈0.01）。结论 APN对EC有一定的保护作用,能拮抗LDL对EC的损伤。     

川芎嗪对脂多糖诱导的血管内皮细胞损伤的影响

目的探讨川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导引起的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)损伤的保护作用。方法以人脐静脉内皮细胞为实验对象,MTT法检测细胞活力,比色法测定一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)活性,硝酸还原酶法测上清液一氧化氮(nitric oxide,NO)含量,荧光法测定胞内NO及ROS水平,流式细胞仪法测定细胞凋亡与周期。结果川芎嗪与脂多糖同内皮细胞孵育后没有引起细胞活力的明显改变,排除了实验模型中药物直接细胞毒作用。脂多糖可以抑制细胞NOS活性(P<0.05)及胞内外NO含量(P<0.05),增加胞内ROS水平(P<0.01),促进细胞凋亡(P<0.05),抑制正常细胞周期的进程(P<0.05),而川芎嗪可以恢复脂多糖所致的上述效应,并具有一定的浓度依赖性。结论川芎嗪可以通过有效抑制脂多糖诱导的HUVEC NO、ROS水平改变所引起的细胞凋亡,从而起到内皮细胞损伤的保护作用。     

三七皂苷对氧化低密度脂蛋白损伤血管内皮细胞保护作用的研究

目的:研究三七皂苷(PNS)对氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)损伤血管内皮细胞的保护作用。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),加入100mg·L-1Ox-LDL造成细胞损伤,同时加入不同浓度PNS进行干预。观察形态学变化;采用MTT法测定细胞活性;比色法检测细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)的释放量;硝酸还原法和放射免疫法分别测定HUVEC培养上清液中一氧化氮(NO)、内皮素(ET)含量。结果:各剂量PNS可使作用Ox-LDL的HUVEC形态趋于正常。与正常对照组比较,HU-VEC经Ox-LDL作用后,细胞活性显著下降,LDH的释放量显著升高;300、100、30mg·L-1PNS显著升高细胞活性,抑制LDH释放。HUVEC经Ox-LDL作用后,与正常对照组比较,培养上清液中NO含量显著降低,ET含量显著升高;300、100mg·L-1PNS显著升高NO含量,300mg·L-1PNS显著降低ET含量。结论:PNS对Ox-LDL损伤的血管内皮细胞具有一定的保护作用,可调节内皮细胞活性物质NO、ET的分泌。     

丹参酮ⅡA对波动性高糖体外诱导人脐静脉内皮细胞损伤保护作用的机制研究

目的探讨丹参酮ⅡA对波动性高糖诱导人脐静脉内皮细胞株（HUVEC）损伤后丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、一氧化氮（NO）、一氧化氮合酶（NOS）、Rho/Rho激酶Ⅰ（ROCKⅠ）mRNA含量影响的机制。方法将HUVEC分为6组,正常对照组的培养基中加入5.50 mmol·L^-1葡萄糖200μL,培养48h;损伤组的培养基中先后加入5.50,20.00 mmol·L^-1葡萄糖200μL,培养48h;丹参酮ⅡA低、中、高浓度组在损伤组的基础上,加入10.00,30.00,50.00μg·mL^-1丹参酮ⅡA 200μL,培养48 h;阳性对照组在损伤组的基础上,加入100.00 mg·L^-1维生素C 200μL,培养48 h。比较6组细胞的MDA、SOD、NO、NOS、ROCKⅠmRNA等指标。结果正常对照组、丹参酮ⅡA低、中、高浓度组及阳性对照组的SOD、NO、NOS含量均较损伤组增高,MDA及ROCKⅠmRNA含量均较损伤组降低,但除丹参酮ⅡA低浓度组外,其余差异均有统计学意义（P<0.05）,其中上述指标以丹参酮ⅡA高浓度组最为明显（P<0.05）。结论丹参酮ⅡA对波动性高糖体外诱导的HUVEC损伤有保护作用,可增强其SOD、NO、NOS活性、降低MDA及ROCKⅠmRNA表达,并呈现一定的浓度依赖,其作用机制可能与清除活性氧、降低脂质过氧化、提高内皮细胞抗氧化酶体系的活力,通过Rho/Rho激酶系统抑制NOS表达,进而影响NO分泌等有关。     

栀子苷对氧化应激损伤血管内皮细胞的保护作用

目的研究栀子苷对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)氧化损伤的保护作用。方法采用过氧化氢(Hy-drogen peroxide,H2O2)建立体外培养的HUVEC细胞氧化应激损伤模型。将细胞分为正常对照组、H2O2氧化损伤组、H2O2加栀子苷低、中、高剂量组,其中后3组给予栀子苷预培养24h后加入400μmol.L-1H2O2,然后继续培养12h。MTT法检测细胞存活率;检测各组细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、一氧化氮合酶(NOS)水平和培养液中一氧化氮(NO)水平;检测细胞内活性氧簇(ROS)水平;用流式细胞仪检测细胞凋亡及周期改变。结果栀子苷能明显提高H2O2损伤的内皮细胞的存活率,提高细胞内SOD、GSH-Px、NOS活性,使培养液中NO含量增加,降低细胞内ROS水平,减少H2O2诱导的细胞凋亡率,恢复血管内皮细胞增殖。结论栀子苷具有较强的抗氧化能力及内皮细胞保护作用,可减轻血管内皮细胞的氧化损伤。     

卡托普利对尼古丁所致大鼠血管内皮功能损伤的保护作用

目的:探讨卡托普利对尼古丁损伤大鼠肠系膜动脉内皮依赖性舒张功能的保护作用及其机制。方法:将30只大鼠分为3组,即正常对照组、尼古丁损伤组(2mg·kg-1)、卡托普利组(尼古丁2mg·kg-1+卡托普利3mg·kg-1),4周后检测各组肠系膜动脉环血管舒张率及血清一氧化氮(NO)含量,一氧化氮合成酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:尼古丁使肠系膜动脉环血管舒张率明显降低,并伴随血清NO含量及NOS、SOD活性的明显下降(P<0.01或P<0.05);而卡托普利可升高血管舒张率,并且抑制了尼古丁诱导的NO含量及NOS、SOD活性的下降(P<0.01)。结论:卡托普利对尼古丁所致的血管内皮功能损伤具有明显保护作用,该作用可能与其抗氧化、促进内皮细胞合成、释放NO有关。     

丹酚酸A对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的研究丹酚酸A对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化损伤的保护作用。方法采用过氧化氢(H2O2)诱导的HUVECs氧化损伤模型,观察丹酚酸A(10,20和40μg·mL-1)对血管内皮细胞损伤的保护作用,MTT法检测细胞存活率,试剂盒检测细胞上清液中的超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮(NO),比色法测定Caspase-3的活性。结果丹酚酸A可抑制H2O2诱导的血管内皮细胞的凋亡,同时增加SOD的活性,降低MDA的水平,减少LDH的漏出量,增加NO的释放,降低Caspase-3的活性。且丹酚酸A的上述作用均呈质量浓度依赖性。结论丹酚酸A可以有效保护内皮细胞免受氧化损伤。     

硫普罗宁对阿霉素心脏毒性的保护作用及机制

目的：研究硫普罗宁（MPG）对阿霉素（ADM）心脏毒性的保护作用及机制。方法：建立ADM损伤大鼠心脏模型,灌胃给予MPG,检测血清肌钙蛋白Ⅰ（cTnⅠ）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）及脑钠肽（BNP）、心肌组织超氧化物歧化酶（SOD）活力,丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）含量及一氧化氮合酶（NOS）的活性,并观察心肌组织病理改变。结果：与ADM大鼠心脏模型组相比,MPG干预ADM处理后大鼠的血清cTnⅠ、CK—MB及BNP显著降低（P〈0．05或P〈0．01）,心肌组织SOD活力显著增高,MDA、NO含量,总NOS活力及iNOS活力显著降低（P均〈0．01）,心肌组织病理积分显著下降（P〈0．05）。结论：MPG对ADM心脏毒性具有较好的保护作用;MPG可能通过恢复心肌组织SOD的活力、抑制iNOS活性使心肌组织NO产生减少,从而减轻ADM所致大鼠心肌组织的氧化损伤。     

美洛昔康对铝负荷致大鼠海马神经元损伤的保护作用

目的:观察美洛昔康对铝负荷致海马神经元损伤的保护作用。方法:离体培养新生SD大鼠海马神经元7d,分成空白对照组(200μmol·L-1NaCl)、铝模型组(200μmol·L-1AlCl3)、美洛昔康小、中、大剂量(10-8、10-7、10-6mol·L-1)组,给药24h后,检测各组神经元光密度值、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,并观察神经元形态。结果:与空白对照组比较,铝模型组光密度值降低、LDH漏出率升高、SOD活性减弱、MDA含量升高(P<0.01),神经元形态发生明显损伤;与铝模型组比较,美洛昔康各剂量组光密度值升高、LDH漏出率降低、SOD活性增强、MDA含量降低(P<0.01或P<0.05),神经元形态出现明显改善。结论:美洛昔康对于铝负荷致离体海马神经元损伤有一定的保护作用,其机制可能与抑制炎症反应和氧化应激有关。     

阿片受体激活对培养心肌细胞缺氧／复氧损伤的保护作用

目的：观察δ阿片受体激活剂D-丙（2）-D-亮（5）脑啡肽（DADLE）对培养心肌细胞缺氧／复氧（H／R）损伤的保护作用。方法：采用培养的SD大鼠乳鼠的心肌细胞，建立H／R损伤模型，检测指标包括：（1）心肌细胞形态；（2）心肌细胞存活率；（3）超氧化物歧化酶（SOD）活性；（4）丙二醛（MDA）含量；（5）乳酸脱氢酶（LDH）活性。结果-模型组缺氧后心肌细胞存活率降低，复氧30min后进一步下降，各个时间点细胞内SOD活性下降，MDA含量升高，LDH活性升高，与正常组比较差异有统计学意义（P〈0．01），复氧60min后各指标逐渐趋于正常状态；DADLE 1μmaol／L组细胞存活率升高，LDH活性降低，MDA含量逐渐趋于正常，SOD活性逐渐回升，表明经DADLE干预后，心肌细胞抗损伤能力加强，发生损伤的程度减轻；δ阿片受体抑制剂纳曲吲哚10μmol／L抑制DADLE的保护作用。结论：DADLE通过δ阿片受体对乳鼠心肌细胞H／R损伤具有保护作用。     

水苏碱抗炎活性的研究

目的:研究水苏碱的抗炎活性及其相关作用机制。方法:通过二甲苯致小鼠耳廓肿胀法和棉球致大鼠肉芽肿实验考察水苏碱的抗炎作用;通过检测角叉菜胶致大鼠胸膜炎性渗出液中蛋白质含量和白细胞(WBC)数及前列腺素E(2PGE2)、白细胞介素1(IL-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、一氧化氮(NO)含量,结合血清中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性测定,初步研究水苏碱抗炎有关的作用机制。结果:24、12mg.kg-1剂量下水苏碱可显著降低模型大鼠胸膜炎性渗出液中蛋白质含量和WBC数,降低炎症部位PGE2、IL-1、TNF-α含量,同时降低模型大鼠血清中MDA含量,提高血清SOD活性(P<0.01或P<0.05)。12mg.kg-1剂量下水苏碱可显著降低模型大鼠炎症部位NO含量(P<0.05)。结论:水苏碱在一定剂量内具有较强抗炎作用,其抗炎作用可能与改善细胞膜通透性、降低炎性因子水平、减少脂质过氧化反应等作用相关。     

晚期糖基化终末产物对人脐静脉内皮细胞分泌NO功能的影响

【摘要】 目的 探讨晚期糖基化终产物（AGEs）对人脐静脉内皮细胞一氧化氮分泌功能的影响。方法 培养人脐静脉内皮细胞,制备晚期糖基化终末产物（AGEs-HSA）。将体外培养的人脐静脉内皮细胞随机分为AGEs-HSA组和HSA（人血白蛋白）组, 分别用不同浓度的AGEs-HSA、HSA刺激内皮细胞24 h。然后用酶联免疫法分别测定细胞培养上清液中的NO含量、NOS活性、SOD活性和MDA含量。结果 1与HSA组相比,AGEs-HSA组在浓度为100、200、400 mg/L 时能够明显抑制内皮细胞NO的产生和NOS的活性,并呈浓度依赖性（P <0.05）。2与HSA组相比,AGEs-HSA组在浓度为25、50、100、200、400 mg/L 时均能够明显抑制内皮细胞SOD的活性和促进MDA含量的增加,并呈浓度依赖性（P <0.05）。3 AGEs-HSA组中在AGEs-HSA刺激浓度为400 mg/L时, NO浓度和NOS活性、SOD活性呈正相关（P <0.01）,而与MDA含量呈负相关（P <0.01）。NOS的活性与SOD活性呈正相关（P <0.01）,与MDA含量呈负相关（P <0.01）。结论 晚期糖基化终末产物能够抑制人脐静脉内皮细胞NO的分泌。其机制之一可能是AGEs介导内皮细胞发生氧化损伤致使NOS活性降低进而导致内皮细胞NO分泌下降。      

红景天苷对异丙肾上腺素致大鼠急性心肌缺血的影响

目的：研究红景天苷对异丙肾上腺素（ISO）致大鼠急性心肌缺血的影响。方法：连续两天皮下给予ISO,诱导大鼠急性心肌缺血模型,观察红景天苷对大鼠心电图的影响,检测血清中乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）、超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）的含量,测定心肌梗死面积。结果：红景天苷（6.0、12.0、24.0mg/kg）能有效对抗心电图T波和J点的升高,显著降低血清中LDH、CK和MDA的含量,升高血清中SOD的含量（P〈0.01,P〈0.05vs模型）,明显减少心肌梗死面积（P〈0.01vs模型）。结论：红景天苷对ISO所致大鼠急性心肌缺血有一定的保护作用。     

金银花总黄酮对氧化应激中肝星状细胞的保护作用

目的:研究金银花总黄酮对氧化应激中肝星状细胞(HSC)的保护作用。方法:培养大鼠HSC为模型。实验分为空白对照(DMEM培养基)组、模型(DMEM培养基)组与金银花总黄酮1、2、3、4(12.5、25.0、50.0、100.0μg/ml)组。检测MTT抑制率;测定超氧化物歧化酶(SOD)与乳酸脱氢酶(LDH)活性、丙二醛(MDA)含量、总抗氧化能力(T-AOC)。结果:与空白对照组比较,模型组MTT抑制率降低,MDA含量增加,LDH活性增强,SOD活性减弱,T-AOC减弱,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05);与模型组比较,金银花总黄酮1、2、3、4组MTT抑制率升高,MDA含量减少,LDH活性减弱,SOD活性增强,T-AOC增强,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论:金银花总黄酮具有抑制肝纤维化形成的作用,其作用机制可能与抑制HSC的增殖及抗氧化应激,以及抑制脂质过氧化反应有关。