Con A诱导急性免疫性肝损伤Wistar大鼠模型的构建

【目的】探讨刀豆蛋白A(Con A)诱导急性免疫性肝损伤Wistar大鼠模型的剂量和注射途径。【方法】(1)按不同剂量Con A尾静脉注射分组:将42只雌性Wistar大鼠随机分为A、B、C、D、E、N组,每组7只。N组为空白对照组,大鼠尾静脉注射生理盐水。A、B、C、D、E组大鼠尾静脉注射Con A,剂量分别为4、8、16、30、40 mg/kg。注射后第8 h,检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、白蛋白(ALB)及细胞因子白细胞介素(IL)-2、IL-10、干扰素(IFN)-γ、肿瘤坏死因子(TNF)-α的表达水平,采用苏木素—伊红(HE)染色法观察肝组织病理变化。(2)按Con A不同注射途径分组:将21只Wistar大鼠随机分为正常对照组、腹腔注射组、尾静脉注射组,每组7只,尾静脉注射组和腹腔注射组分别经尾静脉和腹腔注射16 mg/kg Con A。注射后第8 h,检测血清ALT、AST、ALB水平。【结果】实验结束时Con A各剂量组大鼠非正常死亡数:A、B、C组0只,D组2只,E组7只。A、B组的肝组织可见少量点状坏死,炎性细胞浸润,小叶结构基本完整;C、D组可见明显的桥接样坏死。尾静脉注射组大鼠血清ALT、AST、ALB水平显著升高,与正常对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。【结论】尾静脉注射16 mg/kg Con A可成功诱导Wistar大鼠急性免疫性肝损伤模型。     

血府逐瘀汤对刀豆蛋白A诱导小鼠肝纤维化的防治作用

目的:探索血府逐瘀汤对刀豆蛋白A(Con A)诱导小鼠肝纤维化的防治作用。方法:将Balb/c雄性小鼠,随机分为正常组、模型组及治疗组。模型组与治疗组按照12.5 mg/kg小鼠体质量予以尾静脉注射Con A,正常组予注射相应剂量生理盐水,1次/周,共10周。治疗组于造模同时予血府逐瘀汤药液10 ml/kg小鼠体质量灌胃,正常组及模型组予以等量饮用水,1次/d。10周后,处死各组小鼠,全自动生化仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)和白蛋白(Alb);HE和天狼星红染色观察肝组织炎症和胶原沉积;碱水解法检测肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量;RT-PCR法检测肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β1(TGF-β1)及Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原(Col I、Ⅲ、Ⅳ)表达。结果:模型组小鼠ALT和AST活性均较正常组明显升高(P0.05);肝组织HE染色可见肝细胞坏死和大量炎性细胞浸润;天狼猩红染色可见大量胶原沉积和假小叶形成;肝组织α-SMA、TGF-β1及ColⅠ、Ⅲ、ⅣmRNA表达较正常组显著升高(P0.01)。与模型组相比,治疗组ALT、AST水平明显降低(P0.05);肝脏炎症和胶原沉积明显改善;α-SMA、TGF-β1及ColⅠ、Ⅲ、ⅣmRNA表达显著下调(P0.05,P0.01)。结论:血府逐瘀汤可通过减轻肝脏炎症和抑制肝星状细胞(HSC)活化减少胶原合成而改善Con A诱导的小鼠肝纤维化。     

FTY720对实验性肝纤维化小鼠肝损伤的保护作用

目的:观察FTY720对刀豆蛋白A(Con A)所致肝纤维化小鼠的保护作用,探讨其可能的作用机制。方法:采用刀豆蛋白A(Con A)建立小鼠肝纤维化动物模型,取40只BALB/C小鼠随机分为空白对照组、模型组、FTY720低剂量(1 mg·kg^-1)组和FTY720高剂量(4 mg·kg^-1)组,每组10只。测定各组小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性和肝脏指数,观察肝脏组织学病理变化。结果:FTY720低剂量组和高剂量组ALT、AST 活性明显低于模型组(P<0.05 或P<0.01)。光学显微镜观察,模型组有炎性细胞浸润,肝细胞坏死。Masson 染色,模型组血管周围有明显纤维条束,肝小叶发生融合;与模型组比较,FTY720低剂量组和高剂量组损伤程度较轻,且随FTY720剂量增加肝组织损伤程度逐渐减轻。结论:FTY720对实验性肝纤维化小鼠的保护作用可能是通过降低ALT 和AST活性,进而减轻肝脏损伤程度而延缓纤维化进程。     

黄甲软肝颗粒对小鼠急性肝损伤和肝纤维化的保护作用研究

目的：研究黄甲软肝颗粒对D- 氨基半乳糖（D-galactosamine,D-Gal N）诱导小鼠急性肝损伤和刀豆素 蛋白A（concanavalin A,Con A）诱导的小鼠肝纤维化的保护作用。方法：急性肝损伤保护作用实验：84 只ICR 小鼠随机分为阴性对照组、模型组、阳性药组,黄甲软肝颗粒高、中、低剂量组。灌胃给药,每天1 次,连续14 d, 阴性对照组及模型组灌胃同体积去离子水。给药后d 13,除阴性对照组外,其余动物腹腔注射D-Gal N,建立急 性肝损伤模型。于末次给药后60 min,取血并剖检。肝纤维化保护作用实验：96 只BALB/c 小鼠随机分成阴性 对照组、模型组、阳性药组、黄甲软肝颗粒高、中、低剂量组。除阴性对照组以外的动物按照尾静脉注射Con A,阴 性对照组动物注射同体积的无菌PBS,每周注射1 次,共注射7 次。于第4 次注射当天,各组开始灌胃给药,每天 1 次,连续4 w,阴性对照组及模型组灌胃同体积的去离子水,于末次给药后24 小时,取血并剖检。两次实验均 测定血清丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase,ALT）和门冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase, AST）,摘取肝脏、脾脏称重计算脏器指数、观察肝脏组织病理改变。结果：急性肝损伤保护作用实验中各给药组 血清ALT、AST 较模型组显著降低、各给药组脾脏指数明显减小、肝损伤程度明显减轻;肝纤维化保护作用实验 中黄甲软肝颗粒高、中剂量组血清ALT、AST 较模型组显著降低,中剂量组肝指数明显减小。结论：黄甲软肝颗 粒对小鼠急性肝损伤和肝纤维化均具有一定的保护作用。     

破壁灵芝孢子粉对ConA诱导免疫性肝损伤模型小鼠血清ALT、AST水平及肝组织炎症程度的影响

目的探讨破壁灵芝孢子粉对Con A诱导免疫性肝损伤模型小鼠血清谷丙氨酸转氨酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平及肝组织炎症程度的影响。方法雄性Balb/c小鼠随机分成正常组10只,模型组、低剂量破壁灵芝孢子粉组(低灵组)、高剂量破壁灵芝孢子粉组(高灵组),各12只。除正常组外,其余各组用Con A 5mg/kg尾静脉注射,隔天1次,共2周,建立免疫性肝损伤小鼠模型。正常组和模型组小鼠分别用等容量生理盐水灌胃,低灵组及高灵组小鼠分别给予破壁灵芝孢子粉1.0g/kg、2.0g/kg灌胃。4周后检测各组小鼠血清ALT、AST水平及观察肝组织炎症程度。结果低灵组、高灵组小鼠血清ALT、AST水平明显低于模型组[ALT:(129.62±44.65)U/L、(92.76±33.78)U/L比(201.78±62.47)U/L,P0.05;AST:(134.38±42.67)U/L、(101.76±34.56)U/L比(223.63±77.31)U/L,P0.05];高灵组小鼠血清ALT、AST水平及肝组织炎症程度明显低于低灵组(P0.05);低灵组及高灵组小鼠肝细胞变性、坏死及炎症细胞浸润程度比模型组明显减轻(P0.05);结论破壁灵芝孢子粉能改善Con A诱导免疫性肝损伤模型小鼠血清ALT、AST水平及肝组织炎症程度。     

氧化苦参碱对小鼠免疫性肝纤维化作用机制的研究

目的 研究氧化苦参碱对小鼠免疫性肝纤维化的作用机制。方法 将BABL/c 小鼠随机分成正常对照组、阳性对照组、氧化苦参碱小剂量、大剂量治疗组,阳性对照组和氧化苦参碱治疗组每周静脉注射1次刀豆蛋白A,共20周。氧化苦参碱治疗组分别腹腔注射氧化苦参碱30mg/kg、60mg/kg。共20周。分别于注射刀豆蛋白A后5、12和20周取血低温保存;并每次处死一批小鼠取肝脏组织液氮低温保存、常规HE染色、Van Gieson胶原纤维染色,冰冻切片CD4,CD8T淋巴细胞染色。图像分析系统定量分析肝纤维组织含量。结果 氧化苦参碱治疗组血清ALT含量及肝组织内炎症活动度、纤维含量均低于阳性对照组,而且呈剂量依赖性。结论 氧化苦参碱有减轻小鼠肝脏炎症活动度及抗小鼠免疫性肝纤维化的作用。     

不同浓度四氯化碳诱导小鼠肝纤维化模型的比较

目的对比观察不同剂量四氯化碳(CCl_4)诱导小鼠肝纤维化模型的效果,探索一种稳定可行且较为高效的肝纤维化小鼠造模方法。方法将60只C57BL/6J小鼠随机分为正常组和模型组,模型组小鼠分别腹腔注射体积分数10%的CCl4(5 mL/kg)以及体积分数20%的CCl_4(1 mL/kg),每周2次,连续8周。分别在造模2周、4周、6周、8周注射后处死小鼠,进行HE染色和Masson染色,检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平,以及肝匀浆氧化/抗氧化指标,丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)和超氧化物岐化酶(SOD)变化,Western blotting法检测肝组织中胶原表达情况。结果随着造模时间的延长,病理染色显示肝纤维化程度不断加重,胶原表达逐步增加,血清ALT、AST水平逐渐升高,肝匀浆SOD、GSH活性降低,氧化产物MDA含量升高。在造模的相同时间点,体积分数10%CCl_4、5 m L/kg剂量组相比于体积分数20%CCl4、1 m L/kg剂量组,病理染色显示肝纤维化程度更加严重,血清ALT、AST水平明显升高,肝脏中SOD、GSH活性明显降低,氧化产物MDA含量明显升高,肝纤维化形成的时间更短,效果更好。结论两种造模方法都能形成肝纤维化小鼠模型,但体积分数10%CCl_4(5 m L/kg)剂量组的纤维化形成时间更短且效果更好。因此,每周2次,连续8周腹腔注射10%CCl_4(5 m L/kg)可作为一种较为理想的纤维化小鼠造模方法。     

青藤碱通过免疫调节防护刀豆蛋白A诱导的大鼠急性免疫性肝损伤

【目的】探讨青藤碱对刀豆蛋白A(Con A)诱导的大鼠急性免疫性肝损伤的防护效果及可能机制。【方法】将49只雌性Wistar大鼠随机分为7组,即正常组,模型组,青藤碱60、90、120、150 mg/kg组,地塞米松磷酸钠(Dex)组,每组7只。除正常组外,其余各组均尾静脉注射16 mg/kg Con A建立肝损伤模型。Dex组、青藤碱不同剂量组分别于Con A注射前1 h给药1次,青藤碱各组在Con A注射3 h后另再给药1次。Con A注射8 h后,腹主动脉取血,摘取肝脏组织。采用全自动生化仪检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、白蛋白(ALB)水平;采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素10(IL-10)水平;采用苏木素—伊红(HE)染色观察肝组织病理改变。【结果】与正常组比较,模型组大鼠肝脾指数及ALT、AST、IL-2、IL-10水平均明显升高,ALB水平降低,差异均有统计学意义(P0.05),表明造模成功;与模型组比较,Dex组、青藤碱不同剂量组肝指数,ALT、AST、IL-2水平均明显降低,ALB、IL-10水平升高,差异有统计学意义(P0.05),且组织病理结果显示肝细胞坏死及炎细胞浸润程度明显减轻;与Dex组比较,青藤碱120 mg/kg组肝指数,ALT、AST、IL-2水平均明显降低,ALB、IL-10水平升高,差异有统计学意义(P0.05)。【结论】青藤碱对Con A诱导大鼠急性免疫性肝损伤具有防治作用,抑制部分T淋巴细胞活化,调节IL-2、IL-10的分泌可能是其作用机制之一。     

芦丁对1型糖尿病小鼠肝功能及肝组织形态学的影响

目的 探究芦丁对链脲佐菌素（STZ）诱导的1型糖尿病小鼠肝功能及肝脏组织形态的影响。方法 雄性昆明小鼠60只,选出12只作为正常组,余下小鼠腹腔注射STZ,连续给药5 d,建立1型糖尿病小鼠模型。成模小鼠随机划分为模型组与芦丁低、高剂量组。正常组与模型组给予羧甲基纤维素钠溶液, 芦丁低、高剂量组分别按小鼠体质量予芦丁50 mg/kg、100 mg/kg灌胃,给药8周,每日1次。测定给药第4周,第8周小鼠餐后随机血糖,血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、乳酸脱氢酶（LDH）、总蛋白(TP)和白蛋白(ALB)的含量。通过HE、Masson染色及透射电镜观察肝组织形态。结果 与正常组比,模型组小鼠血糖上升（P<0.01）,血清中ALT、AST、LDH含量增高,TP、ALB含量降低（P<0.05,P<0.01）;与模型组比,芦丁组小鼠给药第4周血糖降低（P<0.05）,给药第8周血清ALT、AST、LDH含量下降,TP、ALB含量升高,其中高剂量组作用更明显（P<0.05,P<0.01）。形态学结果显示,模型组肝细胞增大变形,肝索排列紊乱,肝组织纤维化程度较高;芦丁低、高剂量组小鼠肝组织形态有所改善,高剂量组作用更明显。结论 芦丁可改善STZ诱导的1型糖尿病小鼠的肝功能,缓解糖尿病小鼠肝脏组织的损伤程度。     

复方甘草酸苷对免疫性肝损伤小鼠的保护作用

目的观察复方甘草酸苷对免疫性肝损伤小鼠的保护作用。方法将50只小鼠随机分为正常对照组、模型组、复方甘草酸苷高、中、低剂量组[400、200、100 mg/(kg d)],用药7 d,腹腔注射,正常对照组、模型组注射等量生理盐水,除正常对照组外,其余各组尾静脉注射20 mg/kg刀豆蛋白A(Con A)。12 h后测定血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT),计算肝脏、脾脏指数,测定血清TNF–α含量。结果与模型组比较,高、中、低剂量的复方甘草酸苷均能明显降低Con A介导的肝损伤小鼠肝、脾指数,降低血清中AST、ALT的水平,明显降低血清中TNF-α的含量。结论复方甘草酸苷对Con A所致免疫性肝损伤小鼠具有保护作用。     

苦参碱对免疫性肝损伤小鼠肝组织Fas、FasL表达的影响

目的观察苦参碱对豆蛋白A（Concanavalin A,ConA）所致免疫性肝损伤小鼠肝组织Fas、FasL表达的影响,探讨其抗肝损伤的作用机制。方法70只NIH小鼠随机分为5组,分别为正常对照组,模型组、苦参碱高剂量组、低剂量组和联苯双酯治疗组。除正常对照组外,其他组于实验首日静脉注射ConA20mg／kg后,苦参碱高剂量组、低剂量组均采用尾静脉注射给药,联苯双酯灌胃口服,1次/d,连续5d,末次给药后4h,再次尾静脉注射Con A20mg／kg。8h后检测血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）活性,观察肝组织病理学变化和Fas、FasL的表达。结果苦参碱高、低剂量组小鼠血清ALT、AST活性均明显低于模型组,差异有显著性意义（P〈0．01）,苦参碱各剂量组肝脏病理改变明显减轻,肝组织Fas、FasL的表达明显减弱,与模型组比较,差异均有显著性意义（P〈0．01）。结论苦参碱对ConA所致小鼠免疫性肝损伤具有较好的保护作用,抑制肝组织中Fas、FasL的表达,从而减轻Fas／FasL系统介导的肝细胞凋亡,是其抗肝损伤的作用机制之一。     

抗纤软肝方对刀豆蛋白A致小鼠免疫性肝损伤的保护作用

目的探讨抗纤软肝方对刀豆蛋白A（ConA）所致免疫性肝损伤的保护作用。方法72只NIH小鼠随机分为6组,分别为正常对照组,模型组、抗纤软肝方高剂量组、中剂量组、低剂量组（20.0、10.0、5.0g/kg）和联苯双酯（150mg/Kg）治疗组。除正常对照组外,其他组小鼠于实验首日静脉注射ConA20mg/Kg,抗纤软肝方高、中、低剂量组和联苯双酯组均灌胃给药,每天1次,连续3d,末次给药后4h,再次静脉注射ConA20mg/kg,8h后检测血浆谷丙转氨酶（ALT）活性、干扰素γ（IFN-γ）和肿瘤坏死因子（TNF-α）含量,观察肝组织病理学变化。结果抗纤软肝方高、中、低剂量组小鼠ALT活性、IFN-γ和TNF-α含量均明显低于模型组,差异有显著性意义（P〈0.01）;抗纤软肝方三个剂量组肝脏病理改变明显减轻。结论抗纤软肝方对ConA所致小鼠免疫性肝损伤具有较好的保护作用,抑制T淋巴细胞活化和IFN-γ、TNF-α的释放是其主要的作用机制。     

抗肝纤冲剂对肝纤维化小鼠Ⅰ型胶原蛋白表达的影响

目的：探讨抗肝纤冲剂对猪血清所致的免疫损伤肝纤维化小鼠肝组织Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)蛋白表达的影响,阐明抗肝纤冲剂对肝纤维化小鼠的治疗作用。方法：将75只雌性Balb/c小鼠分为5组,每组15只：正常对照组,肝纤维化模型组,秋水仙碱组,抗肝纤冲剂低剂量组,抗肝纤冲剂高剂量组。除正常对照组外,其余各组均采用腹腔注射猪血清的方法制备肝纤维化小鼠模型。造模的同时分别用药物对小鼠进行干预治疗7周。7周末处死小鼠,取肝组织,经固定、切片、HE染色,光镜下观察。其他肝组织用于实时定量PCR和Western blotting检测。结果：肝组织病理学结果显示,抗肝冲剂治疗组与模型组比较,肝组织的炎症减轻;抗肝纤冲剂低剂量组与肝纤维化模型组比较,肝组织中的ColⅠa2在mRNA表达水平显著降低(P<0.01);Western blotting检测结果显示,抗肝纤冲剂高剂量组的肝组织中ColⅠa1的表达也显著减少。结论：抗肝纤冲剂可以显著减少免疫损伤肝纤维化小鼠肝组织Col Ⅰ的表达,提示抗肝纤冲剂对肝纤维化小鼠的具有较明显的治疗作用。     

蒿鳖养阴软坚方对刀豆球蛋白A诱导的肝纤维化Nrf2/HO-1信号通路影响

目的:探讨蒿鳖养阴软坚方对刀豆球蛋白A（ConA）诱导的肝纤维化Nrf2/HO-1信号通路的影响。方法:Balb/c小鼠随机分为正常、模型、秋水仙碱和蒿鳖养阴软坚方低、中、高剂量(1.16 g/kg、3.36 g/kg、11.58 g/kg)组。除正常组外,剩余各组均尾静脉注射1.5 mg/mL ConA,每周1次,持续10周。取小鼠肝脏作病理切片,观察肝脏的病理变化,检测肝组织羟脯氨酸浓度,免疫组化法检测肝组织Nrf2、HO-1蛋白的表达情况。结果:与模型组比较,蒿鳖养阴软坚方各剂量组能不同程度地减轻肝组织的炎症反应和降低肝组织羟脯氨酸的浓度,显著减轻肝纤维化程度（P＜0.05）;随着蒿鳖养阴软坚方浓度增加,Nrf2和HO-1的阳性表达逐渐增强。结论:蒿鳖养阴软坚方对Nrf2/HO-1信号通路具有激活作用,且该作用可能为其抗肝纤维化机制之一。     

小鼠进展性肾病模型建立的探讨及相关研究

目的为了更好地研究慢性进展性肾病的发病机制,寻求建立一个与人类慢性肾病极其相似的动物模型。方法给予Balb/c小鼠尾静脉注射阿霉素10～11mg/kg后观察0,1,2,4,6,8周体重、尿蛋白、血清白蛋白、血甘油三酯、胆固醇、肾功能、外周血T淋巴细胞及病理学改变。结果小鼠慢性进展性肾病模型复制成功。尿蛋白、血甘油三酯、胆固醇随着实验的进程明显增高,而血清白蛋白、肾功能进行性下降,肾脏病理由微小病变型发展至肾小球硬化型。结论本实验成功地建立了一个稳定性好、重复性好、个体差异小且与人类慢性肾病极其相似的小鼠慢性进展性肾病模型,为更好地研究慢性进展性肾病的发病机制提供了保证。     

兔激素性股骨头坏死病程中肝脂肪酶改变的意义

目的:探索激素性股骨头坏死(NFH)病程中肝脂肪酶(HL)的变化及其意义. 方法: 新西兰大白兔40只随机分为4组,A组: 空白对照;B组: 地塞米松;C组: 地塞米松 丙酸睾酮;D组: 丙酸睾酮.分别在给药的第0, 1, 3, 5 wk采血行三酰甘油(TG),总胆固醇(TCH),高密度脂蛋白(HDL)以及HL活性的检测. 并于实验的第5, 8 wk分批处死实验对象,取股骨头标本行骨坏死指标的检测. 结果: B, C 组TG, TCH, HDL较A,D组明显升高,B组的HL活性下降,C组的HL活性较B组明显升高,D组较正常组高. B组第8 wk镜下可见股骨头内脂肪细胞增多,骨细胞坏死空骨陷窝形成明显;但第5 wk时改变轻微. C组也存在类似改变,但病变程度较轻. 结论: 激素性股骨头坏死病程中存在高脂血症、HL活性下降,给予HL活性增强剂可以改善血脂紊乱状态,并可以改善骨坏死的程度,延缓其进程.     

汉防己甲素抗肝纤维化的形态计量学研究

[目的 ]观察汉防己甲素的抗肝纤维化的作用 .[方法 ]将 72只大鼠随机分组 .用 5 0 %四氯化碳油剂皮下注射 14周制作大鼠肝纤维化模型 .治疗组用汉防己甲素灌胃 ,连续 14周 ,第 4,8,14周取肝组织作切片 ,着重观察肝细胞脂肪变性、纤维化程度 ,并利用彩色图象分析系统测量胶元纤维的面积 .[结果 ]中毒组肝细胞脂肪变性从第 4周开始逐渐加重 ,第 14周有所减轻 ,肝纤维化从第 4周开始逐渐加重 ,第 14周形成假小叶 ;治疗组肝细胞脂肪变性、肝纤维化程度比中毒组轻 ,肝组织内胶原含量明显减少 ,与中毒组比较有显著性差异 .汉防己甲素的疗效每kg体重 5 0mg组优于 30mg组 .[结论 ]汉防己甲素有较好的抗肝细胞脂肪变性及抗肝纤维化的作用     

RNA干扰治疗肝纤维化的实验研究

目的观察转化生长因子(TGF-β1)小干扰RNA(siRNA)对小鼠免疫性肝纤维化的阻断作用。方法设计3条针对TGF-β1不同靶位的短发夹RNA(shRNA),以及1条无关对照序列(HK),克隆至pGenesil-1质粒中,构建重组真核表达载体pGenesil-TGF-β1-m1、pGenesil-TGF-β1-m2、pGenesil-TGF-β1-m3和pGenesil-HK。30只雄性昆明小白鼠随机分为6组:正常组、模型组、无关序列对照组(pGenesil-HK)、序列1治疗组(pGenesil-TGF-β1-m1)、序列2治疗组(pGenesil-TGF-β1-m2)、序列3治疗组(pGenesil-TGF-β1-m3)。采用尾静脉注射刀豆蛋白A(Con A)制备免疫性肝纤维化动物模型。3个序列治疗组、无关序列对照组分别于第2、4、6周,在Con A注射后24 h内,尾静脉高压注射pGenesil-TGF-β1-m1、pGenesil-TGF-β1-m2、pGenesil-TGF-β1-m3和pGenesil-HK。第7周处死全部小鼠。常规生化方法测定肝组织羟脯氨酸(HYP)含量;应用半定量RT-PCR技术检测肝组织内TGF-β1、Smad3、Smad7、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA的表达。结果治疗组小鼠HYP较模型组明显降低(P<0.01);RT-PCR显示治疗组肝脏内TGF-β1、Smad3及α-SMA mRNA表达较模型组明显降低(P<0.01),而Smad7 mRNA表达增强(P<0.01)。在3个治疗组中,pGenesil-TGF-β1-m1治疗组的疗效最佳。结论 TGF-β1 siRNA能有效抑制小鼠免疫性肝纤维化的发生,其机制可能是抑制肝内TGF-β1、Smad3及α-SMA表达,并促进Smad7表达,从而下调HSC的激活信号,减少胶原合成。     

iRGD肽修饰阿霉素脂质体的理化性质和对肿瘤细胞增殖抑制作用的初步研究

目的 制备整合素分子识别配体（RGD）iRGD多肽修饰阿霉素脂质体（iRGD-LP-DOX）,研究iRGD-LP-DOX的理化性质,体外肺癌细胞A549靶向性和肿瘤细胞增殖抑制率。方法 制备iRGD-LP-DOX,透射电镜观察其形态,采用透析袋法检测iRGD-LP-DOX中阿霉素的释放特点;流式细胞术检测A549细胞对iRGD-LP-DOX的摄取效率;构建肺癌A549细胞肿瘤球模型,激光共聚焦定性观察iRGD-LP-DOX 对肿瘤球的穿透能力;MTT实验检测空白脂质体和不同阿霉素剂型的细胞毒性,并计算50%抑制浓度（IC ₅₀ ）。结果 制备的iRGD-LP-DOX粒径均一,呈球形。游离DOX在5 h内全部释放,而LP-DOX和iRGD-LP-DOX 48 h内释放约40%。定量摄取实验表明A549细胞对iRGD-LP-DOX的摄取效率高于LP-DOX,差异有统计学意义（ P<0.01）;肿瘤球穿透实验结果显示iRGD-LP-DOX组的荧光强度显著强于LP-DOX组。MTT实验表明,iRGD-LP-DOX组A549细胞增殖能力受到抑制,差异有统计学意义（ P<0.01）,其IC ₅₀ 值低于LP-DOX组细胞。结论 阿霉素脂质体经过iRGD修饰后,具有缓释能力,增强了DOX高效进入肿瘤细胞并抑制肿瘤细胞生长能力。