水产品中副溶血性弧菌脉冲场凝胶电泳分型

目的 采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对水产品中副溶血性弧菌进行分子分型。方法 采用PFGE技术,对80株分离自11个国家和中国浙江省和山东省的水产品中的副溶血性弧菌进行分子分型;基因组DNA用Not I和Sfi I 2种酶进行消化。结果 Not I和Sfi I 2种内切酶均得到68种带型,综合系统树图中分成70种带型;Not I和Sfi I的分辨率分别为78.8%和76.3%;14株来自加拿大的菌株分聚成相似度100%的4组,其中有4株菌和10株菌分别聚成相似度91.8%和93.3%的2组;挪威和新西兰分别有3株和2株菌相似度为100%;其他国家的菌株无与本国相同的菌株。结论 2种酶均适合于副溶血性弧菌的PFGE分型,Not I的效果略好于Sfi I;菌株间的亲缘关系与来源地无明显关联,但具有毒性基因的菌株更易在系统发育树上处于较近的分枝上。     

副溶血性弧菌脉冲场凝胶电泳分子分型研究

目的用脉冲场凝胶电泳方法绘制副溶血性弧菌食物中毒分离株的DNA指纹图谱,分析各菌株间的同源性关系。方法 55株食物中毒来源的副溶血性弧菌基因组DNA经限制性内切酶NotI酶切,用脉冲场凝胶电泳方法获得电泳图谱,利用BioNumerics软件对图谱进行聚类分析。结果实验得到55株副溶血性弧菌的DNA指纹图谱,可大致分为30种PFGE图谱。聚类分析显示,在大约90%的相似性水平上,有38株菌的PFGE图谱属于同一个克隆群,为2007-2008年引起闵行区食物中毒的优势流行菌型。结论闵行地区存在遗传谱系密切相关的副溶血性弧菌流行克隆。脉冲场凝胶电泳方法是分析副溶血性弧菌同源性的有效方法 ,有助于追溯传染源。     

副溶血性弧菌食物中毒的分子分型及耐药性分析

目的对1起副溶血性弧菌引起的食物中毒病原菌进行分子分型及耐药性分析。方法采用脉冲场凝胶电泳进行分子分型,利用药敏卡通过仪器对分离菌株进行药敏检测。结果从患者肛拭分离的9株副溶血性弧菌与可疑剩余食物中的菌株PFGE图谱完全一致,相似度为100％。分离的副溶血性弧菌菌株的耐药结果基本一致：均对氨苄西林耐药,对阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素、环丙沙星、左旋氧氟沙星、复方新诺明等敏感,对头孢一代、头孢二代中度敏感,部分头孢三代中度敏感。结论利用脉冲场凝胶电泳对本起副溶血性弧菌引起的食物中毒病原菌进行分子分型,为食源性疾病溯源及分子流行病学研究提供科学依据。     

丰台区2013年水产品及腹泻患者中副溶血性弧菌脉冲场凝胶电泳分型

目的 分析丰台区2013年水产品和腹泻患者分离的副溶血性弧菌分子生物学特征及其两者之间的遗传相关性,建立丰台区副溶血性弧菌分子分型数据库。 方法 对水产品及腹泻患者中分离到的72株副溶血弧菌进行PFGE分子分型,利用BioNumerics 5.10分析软件对图谱进行聚类分析。 结果 50株水产品来源的菌株分成48个PFGE型、22株腹泻患者来源的菌株分成13个PFGE型、对菌株间的相似性进行比较发现8个100%同源的PFGE型,其他菌株的分子特征的同源性均大于50%,水产品和腹泻患者来源的菌株分子特征同源性小于80%。 结论 丰台区2013年腹泻患者分离株与水产品分离株间PFGE带型具有相似性,但是两者间的关联需要进一步流行病学证据支持。水产品来源菌株基因型呈多态分布,腹泻患者菌株整体没有发现明显优势菌群。     

用分型方法检测溯源副溶血性弧菌

目的用分型的方法分析副溶血性弧菌的流行优势型,溯源其亲缘关系,为追踪感染源提供依据。方法用诊断血清进行血清学分型,用PFGE和ERIC进行基因分型。结果607株分离于海产品的VP分出10个血清群,有30株不能分型,分型率为94．64％,0：6群和0：5群为流行优势株;480株病人VP分为6个血清群,0：3群为流行优势株。377株分离于海产品的VP分成29个 PFGE型;480株病人VP分成12个 PFGE 型。261株不同来源的VP分出42个ERIC基因型。结论3种方法均能用于VP的分型,但各有特点。由于基因分型方法敏感性高、特异性强、分型率和分辨率佳的优点,将逐渐取代传统的表型分型技术。     

肇庆市副溶血性弧菌血清型、毒力基因和脉冲场凝胶电泳分子分型研究

目的 通过副溶血性弧菌血清型、毒力基因和脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型研究,建立肇庆市副溶血性弧菌DNA指纹图谱基因库。方法 对肇庆市食物中毒分离出的28株副溶血性弧菌和食品安全风险监测的各类水产品分离的17株副溶血性弧菌进行血清分型,耐热直接溶血素相关基因(trh)和耐热直接溶血素基因(tdh)PCR检测,对45株副溶血性弧菌进行PFGE分子分型。结果 食物中毒分离的28株副溶血性弧菌,血清型以O₄:K₈(32.14%)和O₃:K₆(25.00%)为主,17株水产品分离的副溶血性弧菌,血清型以O₁:K_UT(42.11%)为主;21株(46.67%)为tdh⁺trh^-菌株,23株(51.11%)为tdh^-trh^-菌株,1株(2.22%)为tdh^-trh⁺。45株副溶血性弧菌的PFGE相似值为3.9%~100.0%,被分为36种不同的PFGE型别,带型100%相同的菌株几乎都出现在同一年代相近的时间点,但也出现了跨年代菌株。结论 肇庆市食物中毒的副溶血性弧菌以O₄:K₈和O₃:K₆血清型为主,多数菌株携带tdh基因。PFGE结果提示肇庆市流行的副溶血性弧菌存在多克隆来源。     

义乌市33株副溶血性弧菌脉冲场凝胶电泳分子分型结果

副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)是一种分布极广的海洋细菌,夏季海水及海产品中常带有此菌。     

副溶血性弧菌分子分型技术研究进展

副溶血性弧菌广泛分布子近海岸的海水、海底泥沙、浮游生物和鱼、虾、贝类等海产品中,是引起急性胃肠炎的重要病原菌之一,尤其在夏秋季节的沿海地区,常常引起暴发性食物中毒.随着分子生物学的发展,分子分型技术越来越广泛地应用于病原微生物流行病学研究,在副溶血性弧菌感染的预防、控制及检测等方面发挥了重要的作用.本文就近年来国内外在副溶血性弧菌分子分型技术的应用综述如下.     

3种副溶血性弧菌分型方法的应用与比较

目的:用分型的方法分析副溶血性弧菌的流行优势型,溯源其亲缘关系,为追踪感染源提供依据。方法:用诊断血清进行血清学分群,用PFGE和ERIC进行基因分型。结果:607株分离于海产品的VP分出10个O血清群,有30株至今尚不能分群,分群率为94.64%,O6群和O5群为流行优势群;480株病人VP分为6个血清群,O3群为流行优势群。377株分离于海产品的VP分成29个PFGE型;480株病人VP分成12个PFGE型。261株不同来源的VP分出42个ERIC基因型。结论:3种方法均能用于VP的分型,但各有特点。由于基因分型方法敏感性高、特异性强、分型率和分辨率佳的优点,将逐渐取代传统的表型分型技术。     

应用脉冲场凝胶电泳分型技术溯源副溶血弧菌食物中毒

目的应用脉冲场凝胶电泳（PFGE）技术对副溶血弧菌食物中毒进行分析。方法采用限制性内切酶NotⅠ,对一起广州市某餐厅副溶血弧菌食物中毒中30株副溶血弧菌进行PFGE分子分型,用BioNumerics Version4．0软件（复选Dice相关系数和UPGMA方法）进行聚类分析。结果分离的30株副溶血弧菌特异性toxR基因均为阳性,毒力基因tdh阳性,而trh阴性。30株副溶血弧菌PFGE型别相同。结论PFGE分型可揭示人、食品和公用具分离的副溶血弧菌菌株之间的流行病学联系,为疫情溯源提供分子流行病学证据和支持。     

脉冲场凝胶电泳技术对一起肠炎沙门菌疫情分子生物学分析

目的用脉冲场凝胶电泳（PFGE）技术对一起肠炎沙门菌暴发疫情进行病原菌分子特征、菌株之间的遗传相关性分析。方法对分离到的菌株进行PFGE分析,对菌株进行分子分型,以BioNumericsV4.0软件UPGMA方法进行聚类分析。结果食物中毒分离4株肠炎沙门菌以XbaI酶切后PFGE可分为同一型别。结论该次食物中毒的暴发为同一型肠炎沙门菌引起,可能有共同的传染来源。     

脉冲场凝胶电泳技术在鼠伤寒沙门菌分型中的应用

[目的]探讨脉冲场凝胶电泳(PFGE)在鼠伤寒沙门菌分型中的应用。[方法]选择XbaⅠ酶对鼠伤寒沙门菌全基因组DNA进行酶切、脉冲场凝胶电泳。电泳带用Freeview软件进行相似性比较。[结果]13株鼠伤寒沙门菌经PFGE，根据其条带的差异可分为10个PFGE型别。[结论]PFGE法重复实验结果稳定，分型力较强，适合鼠伤寒沙门菌分型应用。     

厦门地区霍乱弧菌O1群非产毒株的脉冲场电泳分析

[目的]分析1998—2007年厦门地区从水和水产品中分离的220株O1群霍乱弧菌非产毒株的型别分布。[方法]220株菌株的基因组DNA经NotⅠ酶切、脉冲场电泳后,利用Bionumerics软件分析电泳图谱。[结果]以90.0%为标准,220株菌株可分成50种不同的脉冲场电泳技术(PFGE)型,相同来源的同一批菌株属于相同PFGE型别;不同来源或不同年份的菌株的PFGE型存在差异,但部分菌株属于相同PFGE型。[结论]水和水产品污染的霍乱弧菌O1群非产毒株趋异性高,牛蛙养殖池与周围环境存在交叉污染;脉冲场电泳技术有助于对霍乱的日常监测。     

脉冲场凝胶电泳对肠球菌的分子检测与同源性分析

目的对40株肠球菌进行分子同源性检测分析,探讨脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrothoresis, PFGE)在分子流行病学方面的价值. 方法应用PFGE对40株分离自住院患者的肠球菌进行同源性分析. 结果 40株肠球菌经脉冲场凝胶电泳在30～500 kb之间显示12～18条大小不同的DNA片段;40株肠球菌表现出大小不一的同源性:3对肠球菌100%同源,来自同一病房的4对肠球菌分别为78.27%、72.73%、72.73%、80.01%同源;来自不同病房两对肠球菌分别为80.01%、77.78%同源,其余菌株则显示了较低的同源性或者无同源性. 结论 40株肠球菌未见同一克隆的暴发流行;PFGE是细菌分子流行病学分析的理想方法.     

江苏省1999—2005年霍乱弧菌的脉冲场凝胶电泳分析

目的了解江苏省1999-2005年间分离的霍乱弧菌核酸特征,及O139群与O1群霍乱弧菌在基因组水平上的关联。方法 NotⅠ酶切霍乱弧菌基因组,脉冲场凝胶电泳(PFGE)得到指纹图谱,并进行比较分析。结果 PFGE指纹图谱将全部136株霍乱弧菌分为6类,PFGE-A型由1株临床来源El Tor、120株临床来源和9株环境来源的O139组成,PFGE-B型由1株临床来源的El Tor组成,PFGE-C型由1株临床来源的El Tor和1株临床来源的O139组成,PFGE-D型由1株环境来源的El Tor组成,PFGE-E型由1株环境来源的O139组成,PFGE-F型由1株临床来源的O139组成。结论PFGE指纹图谱提示O139起源于不同克隆的El Tor霍乱弧菌,为了解O139的进化路线和流行规律提供了有效证据。作为高分辨率的基因分型工具,PFGE可用于追踪霍乱弧菌的暴发流行传染源,并在其分子流行病学研究中发挥重要作用。     

广州地区小川型霍乱弧菌的脉冲场凝胶电泳分析

目的分析小川型霍乱弧菌的致病相关基因型,探讨广州地区小川型霍乱流行趋势和规律。方法采用多重PCR方法检测小川型菌株的4种致病相关基因,应用脉冲场凝胶电泳技术（PFGE）对菌株进行分子分型,对PFGE图谱采用分子分型软件BioNumerics Version 4.0进行聚类分析。结果广州地区小川型菌株中存在3种致病相关基因型,即A型、B型和C型,20%感染者分离株为致病相关基因A型,80%环境分离株为致病相关基因C型。25株霍乱弧菌分为14个不同的PFGE型,归为3个聚类群（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ群）。每一次小川型暴发中分离的菌株PFGE克隆型相同或相近,而散发病例分离株与暴发株的PFGE型有些相同,有的差异较大。环境小川型菌株中存在PFGE克隆型的多样性,部分环境株与感染者分离株具有相近的PFGE型。结论应建立广州地区霍乱菌株的PFGE分子分型数据库,加强霍乱的预防、控制和预警。     

副溶血性弧菌引起食物中毒的病原学检测

目的对从食物中毒患者粪便标本以及可疑食物中分离到的病原菌,进行表型和毒力基因的鉴定以及同源性分析。方法参照食品卫生微生物学检验中副溶血性弧菌检验方法（GB／T4789．7—2008）,分离鉴定副溶血性弧菌。对检出的副溶血性弧菌做血清分型、耐药性、毒力基因（toxR、trh、tdh、tlh）的测定,并用脉冲场凝胶电泳（PulsedFieldGelElectrophoresis,PFGE）测定菌株的同源性。结果从3份食物标本和5份患者粪便标本中检出副溶血性弧菌8株,8株菌分属于不同的血清型。8株菌的生物学性状和药物敏感性试验一致。8株菌的toxR和tlh均阳性,trh均阴性,tdh为粪便标本均阳性,食物标本均阴性。8株菌共产生6种PFGE带型。结论此次食物中毒由副溶血性弧菌引起,但分离于粪便标本和分离于可疑食物标本的菌株之间,其PFGE带型比较分散,可能是由副溶血性弧菌多种O抗原群混合污染引起。     

鲍曼不动杆菌的耐药基因分型与脉冲场凝胶电泳分型的比较

[目的]了解耐药鲍曼不动杆菌（Acinetobacter baumannii,Ab）中耐药基因的分布情况,并比较基于耐药基因分型和脉冲场凝胶电泳分型的差异性。[方法]对2005年宁波市第二医院收集的27株流行和散发的Ab进行耐药分析,并对脉冲场凝胶电泳方法和基于耐药基因聚合酶链反应的聚类分析方法进行比较。[结果]27株Ab耐多种抗生素和携带多种耐药基因。基于多个类别的耐药基因分型与脉冲场凝胶电泳方法分型相比有88.9%的一致性,而且耐药基因分型能更好地反映不同耐药株的耐药过程。[结论]与脉冲场凝胶电泳方法相比,耐药基因分型方法可以用于院内感染的流行研究,且有助于临床的诊断和治疗。     

脉冲场凝胶电泳分子分型方法用于霍乱弧菌相关性分析

目的用脉冲场凝胶电泳（PFGE）分子分型方法,分析辽宁丹东和广东珠海两地区从水体和水产品中分离的霍乱弧菌之间的相关性。方法对39株霍乱弧菌用内切酶Not I酶切DNA后进行PFGE分子分型,并在0.5×TBE电泳缓冲液中加入终浓度为3.8 mg/L的硫脲溶液电泳。结果所有39株霍乱弧菌的基因组DNA显示出良好的分型结果,从朝鲜排污口、丹东鸭绿江水体中的鲫鱼、河蟹以及丹东排污口分离出的霍乱弧菌之间的相似度达到100%,说明这些产品之间应为同一个污染源;珠海的大头鱼和鳙鱼之间的相似度达到100%,说明这两者之间应为同一个污染源;珠海鲫鱼中检出的霍乱弧菌和鸭绿江水体中检出的霍乱弧菌之间的相似度达到88.4%,说明这两者之间可能为同一个污染源。结论PFGE技术适用于霍乱弧菌环境样品分离菌株的相关性分析和传染源的追踪。     

1起由副溶血性弧菌引起的食物中毒

[目的]调查此次集体食物中毒的病原菌,为防止类似食物中毒事件的发生提供依据。[方法]按照GB/T4789.7-2008《食品卫生微生物学检验》[1],对分离到的病原菌进行生化鉴定试验。[结果]2份粪便标本和1份剩余食物(大虾)均分离到副溶血性弧菌。所检出的3株副溶血性弧菌经生化分型为同一生化型,神奈川试验均为阳性,具有同源性。呕吐物未检出致病菌。[结论]结合流行病学、患者临床表现和实验室检测结果,证实此次食物中毒是由副溶血性弧菌引起。