神经生长因子和脑源性神经营养因子对神经干细胞迁移的影响

目的:探讨神经生长因子(nervegrowth factor,NGF)与脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)体外实验对神经干细胞迁移的影响.方法:体外应用半固体培养法连续14d观察不同浓度的NGF、BDNF及NGF +BDNF组合诱导神经干细胞迁移的情况.结果:体外条件下不同浓度的神经营养因子的组间和组内比较显示,100μg/L BDNF诱导神经干细胞迁移作用最明显.BDNF+NGF联合组在诱导神经干细胞迁移方面未见协同效应.结论:NGF、BDNF二者皆有诱导神经干细胞迁移的作用,100μ g/L BDNF组诱导迁移作用最明显.     

BDNF在局部脑缺血大鼠的表达

目的 观察大鼠脑缺血后脑源性神营养因子(BDNF)含量的变化.方法 用大鼠大脑中动脉线栓法(MCAO)建立脑缺血模型,免疫组织化学观察BDNF在不同时间点表达变化.结果 与假手术组比较,脑缺血模型组大鼠BDNF在MCAO后缺血6 h表达增强(P＞0.05),48 h达高峰(P＜0.05).结论 脑缺血后神经元内BDNF含量增多,可有利丁受损神经元的修复.     

创伤愈合中bFGF bFGF受体的研究进展及其对表皮干细胞的影响

皮肤损伤是临床常见的外伤之一，大面积的皮肤损伤会危及患者的生命。因此，研究创伤愈合具有重大的临床意义。近年来，干细胞研究已经成为医学和生物学领域中最引人注目的热点之一。表皮千细胞在创伤修复中的作用也日益引起了人们的注意，因此本文主要就碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、bFGF受体及其对表皮干细胞的影响做一综述。     

外源性bFGF、VEGF对大鼠脊髓损伤后内源性神经干细胞增殖分化影响的实验研究

目的制备大鼠脊髓损伤模型,研究外源性碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血管内皮生长因子(VEGF)联合移植对内源性神经干细胞(ENSCs)是否具有促增殖分化作用。方法成年Wistar大鼠56只,随机分成四组:A组为生理盐水组(n=14);B组为bFGF组(n=14);C组为VEGF组(n=14);D组为bFGF、VEGF组(n=14)。用Allen法在T10节段制备大鼠脊髓损伤模型,损伤后立即分别给予生理盐水、bFGF、VEGF、bFGF和VEGF。术后各时间点BBB评分系统监测大鼠运动功能的恢复,并在术后21d取材,处死前24h腹腔注射5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu),取损伤部位近远端各5mm脊髓组织,行HE染色,免疫组织化学法检测Brdu、巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达情况。结果 (1)损伤后21d,bFGF、VEGF合用治疗组BBB高于其它三组,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)损伤后21d时,bFGF、VEGF治疗组组织形态学基本接近正常脊髓组织。(3)免疫组织化学结果:损伤后21d时,bFGF、VEGF治疗组,神经干细胞数量和神经元数量明显高于其它组(P<0.05)。结论联合移植外源性bFGF、VEGF对ENSCs增殖和向神经元方向分化具有促进作用,且二者具有协同作用。     

bFGF生物海绵对脊髓损伤神经保护作用的研究Ⅰ

目的：探索碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)对大鼠脊髓损伤的神经保护作用。方法：用大鼠脊髓半横断损伤模型,对局部脊髓组织和运动皮持进行神经纤维和神经细胞的定量分析。结果：术后1、2、3周bFGF组脊髓切口处神经纤维均较对照组组密,术后1、2周,神经纤维密度测定结果显示bFGF组较对照组明显增加（P＜0．05）。对照组运动皮质内锥体层神经细胞肿胀,尼氏体淡染,出现明显的噬神经细胞现象,bFGF组 偶见此现象,对照组胶质细胞记数明显多于bFGF组（P＜0．05）。结论：bFGF生物海绵对大鼠受损脊髓局部及投射纤维起源脑区－运动皮质具有明显的神经保护和神经纤维再生作用。     

知母皂苷对体外培养成年大鼠海马神经前体细胞增殖的影响

目的　观察知母皂苷 (SAaB)对体外培养成年大鼠海马神经前体细胞增殖的影响。方法　体外传代培养的成年大鼠海马神经前体细胞经碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)、知母皂苷处理后 ,采用MTT法测定细胞增殖 ,流式细胞仪测定细胞周期。结果　与对照组相比 ,知母皂苷可明显促进成年大鼠海马神经前体细胞增殖 (P <0 .0 1 ) ,使细胞从G0 /G1 期进入S和G2 /M期 ,其作用效果呈浓度依赖性。结论　知母皂苷可促进成年大鼠海马神经前体细胞增殖 ,其机制可能与知母皂苷的多种生物学活性有关。     

天麻多糖与电针对脑缺血大鼠齿状回BDNF和 VEGF表达的影响

目的：观察天麻多糖与电针对脑缺血大鼠齿状回（dentate gyrus,DG） 脑源性神经营养因子（brain derived neurotrophic factor,BDNF）和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达的影响。方法：将40只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、电针组、天麻多糖组和针药结合组,每组8只。以单侧大脑中动脉栓塞法制备脑缺血模型。造模后2周,天麻多糖组和针药结合组大鼠给予天麻多糖 100 mg/kg灌胃,每天1次,连续2周;电针组和针药结合组大鼠给予“百会”、“足三里”穴电针刺激,持续 30 min,每天1次,连续2周。采用免疫组织化学染色法结合图像分析检测DG BDNF和VEGF的表达。结果：与正常对照组比较,模型组缺血侧DG BDNF和VEGF阳性表达增加（P〈0.05）;与模型组比较,电针组、天麻多糖组和针药结合组缺血侧DG BDNF和VEGF阳性表达明显增加（P〈0.05） ;针药结合组阳性表达显著多于电针组或天麻多糖组（P〈0.01）。结论：天麻多糖与电针结合可显著增加脑缺血大鼠缺血侧DG BDNF和VEGF的表达,促进内源性神经干细胞激活,且作用优于单用电针或天麻多糖。     

不同浓度bFGF对体外培养人视网膜色素上皮细胞增殖的影响

目的观察碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对体外人视网膜色素上皮细胞（hRPE）增殖调控的剂量-效应关系、时间-效应关系,明确bFGF体外培养hRPE增殖的最佳浓度和时间,为hRPE替代疗法治疗视网膜变性疾病提供新思路。方法采用经细胞化学染色法鉴定确认的hRPE细胞株,用CCK-8法检测不同浓度bFGF（0、2、4、8、16、32ng/ml）在不同作用时间（0、24、48、72、96 h）对hRPE增殖的影响。结果在相同浓度bFGF作用下,hRPE吸光度值（A值）随作用时间延长而增加,与对照组比较的差异有统计学意义（P〈0.05）。在相同培养时间条件下,hRPE A值随bFGF浓度增加而增加,与对照组比较的差异有统计学意义（P〈0.05）;bFGF浓度〈16 ng/ml的各组相邻浓度实验组组间A值比较的差异有统计学意义（P〈0.05）;bFGF浓度≥16 ng/ml的相邻浓度实验组组间A值比较的差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 bFGF对体外培养hRPE增殖的调控有剂量-效应关系和时间-效应关系。bFGF的促增殖作用在16 ng/ml浓度以上逐渐达到饱和,故促体外培养hRPE细胞增殖的bFGF浓度应以16 ng/ml为佳。     

ZMS对老年大鼠脑内NGF和BDNF的影响

目的　研究自然衰老大鼠脑内两种神经营养素与学习记忆的关系 ,以及中药活性成分ZMS的作用。方法　用Y 迷宫测试动物的学习记忆功能 ,酶联免疫吸附分析法测定脑组织中BDNF和NGF的含量。结果　老年大鼠的学习和记忆成绩比青年大鼠差 (P <0 0 1) ,脑组织中BDNF的水平降低 ,NGF的变化无显著性。老年鼠喂服ZMS 2mon后 ,学习和记忆能力改善 ,正确次数 /反应总时间比值提高 (P <0 0 1) ,同时BDNF含量也高于老年组 (P <0 0 1)。但是ZMS对脑内NGF含量无影响。结论　ZMS能提高增龄引起的脑BDNF降低 ,从而对神经元起保护作用 ,这可能是ZMS改善老年大鼠学习记忆功能的重要机制之一     

EGF和bFGF对体外培养人视网膜色素上皮细胞增殖影响的比较

目的比较表皮生长因子（EGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对体外人视网膜色素上皮细胞（hRPE）增殖调控的剂量-效应关系、时间-效应关系,从而筛选出在体外培养hRPE增殖效应较强的生长因子,以提高体外hRPE的培养成效。方法采用经细胞化学染色法鉴定确认的hRPE细胞株,用CCK-8法检测成组配对的EGF和bFGF（0、2、4、8、16、32 ng/ml）在不同作用时间（0、24、48、72、96 h）对体外hRPE增殖的影响。结果在相同浓度EGF或bFGF作用下,hRPE吸光度值（A值）随作用时间延长而增加,与对照组比较的差异有统计学意义（P〈0.05）。在相同培养时间条件下,hRPE A值随EGF或bFGF浓度增加而增加,与对照组比较的差异有统计学意义（P〈0.05）;在相同作用时间下,浓度为4 ng/ml以上时,EGF组的hRPE吸光度值（A值）比bFGF组高且差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 EGF和bFGF对体外培养hRPE增殖的调控有剂量-效应关系和时间-效应关系。同浓度EGF的促进细胞增殖效应强于bFGF。     

BFGF、EGF联合应用对新生大鼠海马神干细胞分化的影响

目的:探讨EGF和bFGF联合应用后对新生大鼠海马神经干细胞增殖分化的影响。方法:联合应用EGF和bFGF培养海马神经干细胞及诱导贴壁的细胞分化,并用免疫细胞化学技术研究神经干细胞的分化情况。结果:bFGF和EGF联合应用可以明显扩增海马神经干细胞,并诱导细胞向神经元和星形胶质细胞分化。结论:bFGF和EGF除了具有促神经干细胞有丝分裂作用外,还可以诱导神经干细胞向神经元和星形胶质细胞分化。     

垂体腺苷酸环化酶激活肽对MCAO大鼠自体神经干细胞分化影响

目的:研究垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)对MCAO大鼠自体神经干细胞分化影响。方法:将大鼠随机分为不同浓度PACAP治疗组:P8组(1×10-8mol/L),P10组(1×10-10mol/L),P12组(1×10-12mol/L);对照组。免疫荧光双标观察BrdU /NSE 及BrdU /GFAP 细胞的表达变化。结果:各组BrdU /NSE 及BrdU /GFAP 细胞7d时较少,14d显著增加,28d时最高,PACAP治疗组高于对照组(P<0.01);P8组高于P10组,P12组(P<0.05)。结论:PACAP具有诱导神经干细胞分化的作用,以1×10-8mol/L为最佳浓度。     

不同细胞因子体外诱导神经干细胞向神经细胞分化的研究

目的观察碱性纤维母细胞生长因子、白血病抑制因子、脑源性神经营养因子及不同组合对成年SD大鼠脑神经干细胞在体外分化为神经细胞的作用。方法用含碱性纤维母细胞生长因子（bFGF）、B27的无血清细胞培养技术体外培养成年SD大鼠脑神经干细胞,单细胞克隆后行Nestin免疫细胞化学染色;根据培养液中所加营养因子的不同将单细胞克隆传代细胞分为5组培养：bFGF、LIF、BDNF、bFGF＋LIF、bFGF＋BDNF组,此5组细胞培养1周,进行NSE免疫细胞化学染色,计数阳性细胞比例后进行统计学分析。结果单细胞克隆培养后克隆球细胞表达Nestin;与bFGF组、LIF组、BDNF组相比,bFGF＋BDNF组和bFGF＋LIF组神经干细胞分化为神经细胞的比例较高（P〈0．01）,其中bFGF＋BDNF组神经细胞的比例最高。结论在bFGF培养条件下,BDNF促进成年SD大鼠脑神经干细胞向神经细胞分化的能力高于LIF。     

外源性碱性成纤维细胞生长因子对大鼠阴茎肌源性干细胞增殖的影响

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子对大鼠阴茎肌源性干细胞体外增殖的影响。方法本试验自2020年12月至2021年6月在滕州市中心人民医院精准实验室完成。取健康雄性Wister大鼠5只, 体质量(200±50)g, 取其阴茎海绵体并采用酶消化法分离肌源性干细胞, 应用密度梯度离心法和差速贴壁法进行纯化。取第2代肌源性干细胞分为两组进行培养, 实验组:200 μl生长培养基+肌源性干细胞, 分别用终浓度为10 μg/L、30 μg/L、50 μg/L、70 μg/L、90 μg/L外源性碱性成纤维细胞生长因子进行干预;对照组:加入200 μl生长培养基+肌源性干细胞。分别于培养24 h、48 h、72 h、96 h、120 h、144 h加入四甲基偶氮唑蓝(MTT)溶液。应用免疫细胞化学法鉴定大鼠阴茎肌源性干细胞, MTT比色法检测细胞增殖情况。统计学方法采用独立样本t检验、Tukey检验。结果 (1)肌源性干细胞多呈Sca-1阳性反应[表达量为(79.90±1.82)%], 少数呈Desmin阳性反应[表达量为(68.60±0.72)%]。(2)两组肌源性干细胞均随培养时间的延长而明显增殖(...     

氯胺酮对胚胎大鼠培养神经干细胞增殖和细胞周期的影响

目的　探讨氯胺酮对体外培养的大鼠神经干细胞细胞增殖、细胞周期的影响。方法　采用MTT法检测氯胺酮对体外培养的大鼠神经干细胞细胞生长的抑制作用 ,流式细胞仪检测细胞周期分布。结果　氯胺酮对体外培养的大鼠神经干细胞细胞具有生长抑制作用 ,并存在量效关系。流式细胞仪分析表明G0 /G1期细胞百分率上升 ,S期细胞百分率下降。结论　氯胺酮对大鼠培养神经干细胞的增殖有抑制作用 ,其机制与细胞周期阻滞有关。     

碱性成纤维细胞因子对SD大鼠表皮干细胞分化为神经干细胞的影响

目的 研究碱性成纤维细胞因子(bFGF)对大鼠表皮干细胞分化为神经细胞的影响。 方法 分离获得饲养了1~3天的新生SD大鼠表皮基底层组织,利用10 min快速贴壁法消化、分离获得表皮干细胞,于倒置显微镜下观察表皮干细胞的形态。培养表皮干细胞的培养基为K-SFM,然后按照不同密度表皮干细胞进行分组处理(0.1×10⁷/mL,0.3×10⁷/mL,0.5×10⁷/mL,0.1×10⁶/mL),每组加入20 ng/mL的bFGF,利用细胞免疫组织化学法检测细胞标志物Nestin和NSE的变化,以及观察细胞形态发生的变化。 结果 成功分离得到SD大鼠表皮干细胞;bFGF诱导后,0.3×10⁷/mL组和0.1×10⁷/mL组细胞第3天即可见细胞开始伸展生长,在约1周时细胞开始分化成神经细胞;且在细胞形态发生双极化改变的数目趋势上也具有一致性;Nestin和NSE检测均呈阳性表达。     

新生大鼠海马神经干细胞的分离培养及鉴定

目的：从新生大鼠海马分离培养并鉴定神经干细胞。方法：应用含有碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)和表皮生长因子（EGF）的无血清条件培养基，采用无底物的悬浮培养法培养神经干细胞，并用免疫细胞化学技术鉴定传代后形成的细胞团。结果：EGF bFGF可能明显地促进神经干细胞分裂增殖，免疫细胞化学检测发现传代后形成的细胞团中的细胞均表达神经上皮干细胞蛋白（Nestin)。结论：我们成功地建立了新生大鼠海马神经干细胞培养模型。     

神经干细胞移植对Alzheimer病大鼠脑形态及动物行为学影响

目的 :观察移植入 Alzheimer病 (AD)大鼠脑内的神经干细胞存活、分化及功能。方法 :由新生大鼠海马分离培养神经干细胞 ,采用切断穹窿海马伞的方法制作 AD大鼠模型 ,模型建立 8～ 10 d后行神经干细胞移植。移植 1个月后 ,通过暗回避试验检测大鼠的学习记忆能力 ,应用尼氏染色 ,乙酰胆碱酯酶 (Ach E)染色观察体内移植神经干细胞的存活 ,分化以及 AD大鼠 Ach E纤维密度的变化。结果 :神经干细胞在额叶和海马都能够存活 ,分化成神经元 ,可与宿主建立突触联系 ,在海马区移植神经干细胞的生长优于额叶。与对照组相比 ,接受神经干细胞移植鼠的暗回避潜伏期变长 (P <0 .0 5 ) ,探索次数减少(P<0 .0 5 ) ,海马 Ach E纤维密度增加 (P <0 .0 5 )。结论 :神经干细胞能够在 AD大鼠额叶、海马存活、分化 ,并可导致 Ach E纤维密度增加 ,AD大鼠学习、记忆能力改善     

A rat model for studying neural stem cell transplantation

Aim:

The goal of this project was to develop a rat model for neural stem cell (NSC) transplantation studies in which NSCs were modified with brain-derived neurotrophic factor (BDNF) genes that may permit extensive and reliable analysis of the transplants.

Methods:

NSCs were cultured and purified by limiting dilution assay in vitro and infected with recombinant retrovirus pLXSN-BDNF (BDNF-NSCs) and retrovirus pLXSN (p-NSCs). The expression of BDNF genes in transgenic and control NSC groups was measured by FQ-PCR and ELISA assays. NSCs were then transplanted into the subretinal space of normal rat retinas in four groups, which included NSCs alone, BDNF-NSCs, phosphate buffered saline (PBS) control, and normal control. Survival, migration, and differentiation of donor cells in host retinas were observed with optical coherence tomography (OCT), Heidelberg retina angiograph (HRA), and immunohistochemistry, respectively.

Results:

The results obtained by FQ-PCR demonstrated that the copy numbers of BDNF gene templates from BDNF-NSCs were the highest among the four groups (P<0.05). Consistent with the results of FQ-PCR, BDNF protein level from the supernatant of the BDNF-NSCs group was much higher than that of the other two groups (P<0.05) as suggested by the ELISA assays. HRA and OCT showed that graft cells could successfully survive. Immunohistochemical analysis revealed that transplanted BDNF-NSCs could migrate in the host retinas and differentiate into glial cells and neurons three months after transplantation.

Conclusion:

BDNF promotes NSCs to migrate and differentiate into neural cells in the normal host retinas.     

扇贝裙边糖胺聚糖对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响(英文)

目的　研究扇贝 (Placopectamagellanicus)裙边中提取的糖胺聚糖 (SS GAG)是否如肝素一样抑制血管平滑肌细胞 (VSMC)的增殖。方法　采用胎牛血清和碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)所诱导的大鼠胸、腹主动脉VSMC增殖模型 ,通过细胞计数、结晶紫染色及MTT比色法观察SS GAG对VSMC增殖的影响 ,并运用免疫组织化学技术和计算机图像分析系统检测SS GAG对VSMC的增殖细胞核抗原(PCNA)和血小板衍化生长因子 (PDGF)表达的影响。结果　SS GAG 5 0 ,10 0和 2 0 0mg·L- 1对 2 0 %胎牛血清和 5 0 μg·L- 1bFGF所诱导的VSMC增殖均有明显抑制作用 ,并能抑制VSMC增殖时PCNA和PDGF的表达。结论　SS GAG能抑制VSMC的增殖 ,该作用可能是通过抑制PDGF和PCNA的表达而实现的。