风疹病毒单克隆抗体的研究

用风疹病毒（RV）Gos-10株免疫BALB／c小鼠，取其脾细胞与Sp2/0细胞融合，用ELISA法筛选分泌RV McAb的杂交瘤细胞6株，经克隆培养后发现其中的1A9株能稳定分泌高效价特异性McAb，经鉴定为IgG2a，经ELISA检测、抗原吸收试验、中和试验及HI试验证明该McAb是种特异性的，能与各株RV发生交叉反应，而与其它种病毒不发生反应，证明此McAb对RV抗原有高度特异性与敏感性，可用以制备诊断试剂，实现风疹的早期、快速诊断和基础理论研究。     

抗HIV-2 gp36基因工程抗原单克隆抗体的制备和鉴定

目的 制备稳定产抗人类免疫缺陷病毒-2gp36基因工程抗原单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb,单抗)的杂交瘤细胞株及相应单抗,鉴定细胞株的生物学特性和单抗的免疫学特性及理化特性;初步探索用所制单抗构建检测gp36酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)的适用性.方法 分别用杂交瘤技术和常规免疫制备抗gp36的单抗和多抗(polyclonal antibody,PcAb,多抗).纯化单抗和多抗,并标记辣根过氧化物酶.分别用纯化的单个单抗-单个单抗或单个单抗-多抗建立夹心ELISA.结果 获得9株稳定分泌抗gp36单抗的杂交瘤细胞株.用纯化的8E5单抗和辣根过氧化物酶标记的多抗建立的夹心ELISA可以检测到低至50 μg/L的gp36.结论 为人类免疫缺陷病毒-2感染的检测和研究初步提供了可资应用的单抗.     

风疹病毒的分离

自24例风疹症状典型的患儿咽拭中,经PRK细胞盲传后转种至RK_(13)及BhK_(21)细胞上出现明显的细胞病变,在MK_2细胞上对HSV-1型病毒攻击呈干扰现象者为阳性,分离出6株风疹病毒,命名为济南风疹病毒JRV_5、JRV_(11)、JRV_(13)、JRV_(18)JRV_(20)及JRV_(23)。     

单克隆抗体检测广州管圆线虫循环抗原的研究

目的制备抗广州管圆线虫成虫可溶性抗原单克隆抗体,用于广州管圆线虫循环抗原（CAg）的检测。方法广州管圆线虫成虫可溶性抗原免疫BALB／c小鼠,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞（SP2／0）融合,用酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫印迹试验对所获得的细胞克隆进行筛选和鉴定,双抗体（单抗3F1和4H2）夹心ELISA法检测实验感染广州管圆线虫大鼠、小鼠和广州管圆线虫病人血清中的CAg。结果获得了3株稳定分泌抗广州管圆线虫成虫可溶性抗原单抗的杂交瘤细胞株,经鉴定2株为IgG1（3F1、4H2）,1株为IgM（2A2）,杂交瘤细胞培养上清效价分别为1：25600、1：25600和1：12800,诱生腹水ELISA效价分别为1：80000、1：80000和1：40000。3株单抗均识别广州管圆线虫成虫相对分子量约为15000的蛋白。实验感染广州管圆线虫大鼠、小鼠血清CAg检出率分别为84．2％（48／57）和87．2％（41／47）,广州管圆线虫病人血清CAg检出率为86,4％（19／22）,与日本血吸虫、囊虫、肺吸虫、旋毛虫病人血清无交叉反应。实验感染小鼠血清CAg第2周即呈阳性反应,第4周A。。值达到高峰。结论建立了敏感性高、特异性强的3P1、4H2双抗体夹心ELISA检测广州管圆线虫循环抗原法,可用于广州管圆线虫病的临床诊断、疗效考核和流行病学调查。     

风疹患儿及育龄妇女风疹病毒感染的血清学研究

用酶联免疫吸附试验(ELISA)对沈阳市1988年临床诊断为风疹的患儿,有致畸史或早孕感冒的育龄妇女及1986年正常产妇血清做风疹病毒抗体的测定。风疹患儿急性期血清54份,抗风疹病毒IgM抗体阳性率为27.78%,IgG抗体阳性率为24.07%,与对照组差别有高度统计学意义(P<0.01);2份恢复期血清IgM抗体均阳性,IgG抗体1份阳转,1份效价增高4倍。提示1988年沈阳市确有风疹流行。流行期有致畸史或早孕感冒的育龄妇女血清36份,抗风疹病毒IgM抗体阳性率为16.67%,非流行期正常产妇血清60份,IgM抗体阳性率为1.67%,两者差别有高度统计学意义(P<0.01)。提示流行期有致畸史或早孕感冒的育龄妇女与风疹感染有关。正常产妇血清的抗风疹病毒IgG抗体阴性率为13.33%。说明我国育龄妇女中风疹易感者较多。     

金黄色葡萄球菌肠毒素Ⅰ单克隆抗体的制备和鉴定

目的:制备稳定分泌抗金黄色葡萄球菌肠毒素Ⅰ(SEI)单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并对单克隆抗体的性质进行鉴定.方法:以SEI蛋白免疫Balb/c小鼠,利用细胞融合技术,经ELISA检测筛选及3次有限稀释,获得目的杂交瘤细胞株;采用杂交瘤细胞免疫小鼠,制备并纯化了单克隆抗体,并对所获得的单克隆抗体进行性质鉴定.结果:最终获得了两株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞8F7与D8,两者分别为IgG2b型与IgG1型;亲和常数分别为9.215×108 L·mol-1和1.968×1010 L·mol-1;两者均有较强的特异性,与纯化的SEG、SEE、SEC及金黄色葡萄球菌上清液均未有交叉反应;相加实验表明两个单克隆抗体识别的为相同表位.结论:单克隆抗体的成功制备,为初步建立肠毒素SEI的双抗夹心测定方法奠定了基础.     

金黄色葡萄球菌肠毒素Ⅰ单克隆抗体的制备和鉴定

目的：制备稳定分泌抗金黄色葡萄球菌肠毒素（SEI）单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并对单克隆抗体的性质进行鉴定。方法：以SEI蛋白免疫Balb/c小鼠,利用细胞融合技术,经ELISA检测筛选及3次有限稀释,获得目的杂交瘤细胞株;采用杂交瘤细胞免疫小鼠,制备并纯化了单克隆抗体,并对所获得的单克隆抗体进行性质鉴定。结果：最终获得了两株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞8F7与D8,两者分别为IgG2b型与IgG1型;亲和常数分别为9.215&#215;108L.mol^-1和1.968&#215;1010L.mol^-1;两者均有较强的特异性,与纯化的SEG、SEE、SEC及金黄色葡萄球菌上清液均未有交叉反应;相加实验表明两个单克隆抗体识别的为相同表位。结论：单克隆抗体的成功制备,为初步建立肠毒素SEI的双抗夹心测定方法奠定了基础。     

185例孕妇风疹病毒抗体检测结果分析

目的探讨风疹病毒抗体检测对预防出生缺陷患儿的临床意义。方法应用酶联免疫吸附法检测孕妇血清中风疹病毒特异性抗体IgM,分析阳性IgM检测率与流产发生的关系。结果 185例妊娠者中检出IgM阳性18例,阳性率为9.73%;初次妊娠者IgM阳性率为5.6%,明显低于多次妊娠者IgM阳性率(27.27%);IgM阳性孕妇的早期流产率为22.22%(4/18),而IgM阴性孕妇的早期流产率为9.58%(16/167),两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论测定血清中风疹病毒IgM抗体能够减少不良妊娠的发生,可以降低有缺陷新生儿的出生。     

风疹病毒特异性IgM诊断试剂盒的研制和临床应用

目的 :建立风疹病毒特异性IgM诊断试剂的技术方法并应用于临床。方法 :对传统的间接ELISA方法进行了改良 ,定性检测人血清中风疹病毒IgM。结果及结论 :本法克服了类风湿因子 (RF)和特异性IgG对实验的干扰 ;与HSV 1、HSV 2和HCMV抗原无交叉反应 ;具有快速、敏感、特异性强、重复性好等优点。在 16 5例临床可疑风疹病例中检出阳性 142例 ,用进口风疹病毒捕获法试剂盒检出阳性 133例 ,阴阳符合率为 84.0 %。     

人白细胞介素4单克隆抗体的研制及其鉴定

应用脾内免疫法免疫BALB/c小鼠,进行细胞融合,获得两株分泌IgG型抗人白细胞介素4单克隆抗体的杂交瘤细胞。用间接ELISA法可测出的抗原量100pg/ml;抗体的效价细胞培养基上清达1:16,腹水达1:1×10~(-5)。对E.coli表达的重组IL_4、商品化的IL_4及天然IL_4呈阳性反应,与E.coli蛋白及重组IL_1、IL_2、IL_3、IFNa及TNFa无交叉反应。     

风疹病毒在BALB/c小鼠体内的感染与分布

用BALB/c小鼠形成风疹病毒感染模型,小鼠经尾静脉感染RVGOS_(-10)株10~6TCID_(50),每只0.5ml,病毒血症持续约一周,感染后第4天达最高滴度,为10~(6.3)TCID_(50)/0.25ml,间接免疫荧光及间接酶标染色法观察小鼠组织切片,感染后不同时间,病毒对小鼠各脏器可形成广泛的侵害,抗原主要分布于胞桨,病毒分离结果与之吻合,感染后第18天,心、眼、肺中的病毒滴度分别为10~(5.2),10~(5.6),10~(5.5)TCID_(50)。     

一组抗人T淋巴细胞表面抗原单克隆抗体的制备及鉴定

用鼠细胞融合杂交瘤技术,获得3株分泌抗人T淋巴细胞表面抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别为SMU_1、SMU_2、SMU_3,为IgG_1类,不与补体结合。间接免疫荧光法表明,SMU_1、SMU_3分别与50.3±6.42%和51.5±6.37%的周血单个核细胞反应,SMU_2与68.89±9.92%的周血半个核细胞及74.68±8.08%的成熟粒细胞反应,3株单抗的分子量为54～62kD(未还原)。调变试验及竞争抑制试验表明SMU_1、SMU_3与WuT_3识别相同的抗原分子,但为不同的表位。SMU_2为一非系限性单抗。本组单抗对研究T淋巴细胞分化及临床白血病免疫分型是有意义的。     

人类结肠癌单克隆抗体的研究

用大肠癌HT29作抗原免疫小鼠,取其脾脏的淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合,产生三株杂交瘤细胞——Ga_3、Gb_6和Cb-5,其所作用的抗原为肿瘤相关抗原。间接免疫荧光的研究发现:三株抗体与肿瘤的石腊切片无反应,但与冰冻切片及大肠癌细胞株作短期固定者反应阳性。Ga_3属IgG_(2a),Gb_6和Cb_5属IgM。三株抗体可能有助于结肠癌的免疫诊断。     

HBV上PHSA受体特性的研究

作者建立了检测乙型肝炎病毒(HBV)的人血清聚白蛋白(PHSA)受体的ELISA法,受体的检出率为32.02％(65/203)。用本室制备的抗-PHSA包被酶标板,用同样方法对HBV上的受体与循环中的PHSA结合情况作了初探,其结合率为6.5％(6/91)。PHSA在循环中的检出率为7.8％(13/165),初探结果说明HBV与血循环中的PHSA很少呈结合状态,PHSA可能主要与肝细胞膜上相类似的受体结合以此作为“桥梁”介导HBV吸附到肝细胞膜以启动感染。此外,作者还对该受体的其他特性作了探讨。     

生物素-链霉亲和素技术一步法检测淋球菌抗原的研究

目的 :建立一种灵敏、快速诊断淋球菌感染的酶免疫测定法。方法 :检测淋球菌抗原的生物素 -链霉亲和素酶联免疫一步法。结果 :36例临床淋球菌标本中淋球菌抗原含量 1 0 8.47± 5 1 .39μg/ L ,阳性率 97.2 % ,显著高于非淋球菌标本的 4.71± 2 .1 3μg/ L ,阳性率 0 % (P均 <0 .0 1 ) ,本法检测灵敏度 0 .6 2 5 μg/ L,特异性 1 0 0 % ,敏感性 97.2 %。结论 :该法可作为灵敏、快速诊断淋球菌的新的辅助方法。     

济南假单胞菌菌苗促LAK活性的研究

研究了济南假单胞菌菌苗(PJV)在体外对小鼠脾LAK细胞活性的影响。结果表明:1.PJV对YAC-1肿瘤靶细胞在3.9～62.5μg/ml浓度范围内对单个核脾细胞有明显的刺激增殖作用,此增殖细胞对肿瘤靶细胞无杀伤作用;2.PJV在LAK细胞的诱导阶段可增加其诱导数量和增殖活性,提高杀伤活性,但PJV在LAK细胞杀伤阶段对其活性无影响;3.PJV不能单独促进脾产生细胞IL-2,但可促进ConA诱导脾细胞产生的IL-2活性。     

临床妊娠失败微生物感染的检测方法研究

目的：通过分析妊娠失败病人（妊娠失败组）,妊娠情况正常但要求人工流产者（正常人流组）和足月分娩且胎儿正常产妇（正常分娩组）三种妊娠状况时腺病毒（ADV）,人类微小病毒BIP（B19V）,巨细胞病毒（CMV）,爱泼思坦－巴尔病毒（EBV）,单纯疱疹病毒（HSV）,风疹病毒（RV）,柯萨奇病毒（COX）,弓形虫（TOX）,解脲支原体（UU）等微生物的检测结果,探索临床实用的妊娠失败微生物病因学检测方法。方法：妊娠失败组106人,正常人流组55人,正常分娩组55人,对同一对象,采集静脉血液和流产组织或静脉血液和胎盘组织为检测标本,应用聚合酶链反应（PCR）方法检测血液和组织标本中 各种微生物,应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血液标本中相应的IgM抗体。结果：上述微生物感染的妊娠失败组中均有阳性发现,其中以PCR检测组织标本的阳性检出率最高;两个正常组也有较低的阳性发现,PCR法检测B19V,CMV,HSV,RV,TOX核酸和应用ELISA检测CMVIgM结果在妊娠失败组和两个正常组之间的差别具有显著性（P＜0．5）。结论：在妊娠失败病人中,微生物的感染率高于正常人工流产者和正常分娩产妇,提示微生物的感染是导致妊娠失败的重要原因之一,PCR和ELISA方法是妊失败临床微生物病因学论断的较实用的方法。PCR检测流产组织标本可以做确证诊断,ELISA和PCR检测血液标本可以做动态监测。     

吲哚美辛对荷瘤BALB/c小鼠的抗肿瘤作用

用荷S_(180)腹水肉瘤的BALB/c小鼠为动物肿瘤模型,检测其血浆中PGE_2的水平,用吲哚美辛(消炎痛,IN)肌肉注射及灌服的方法观察对S_(180)腹水肉瘤的作用。结果荷瘤小鼠血浆PGE_2为2414pg/ml,比正常对照组高1081ps/ml(P<0.05);经IN作用的荷瘤小鼠血浆PGE_2在218pg/ml以下,明显低于荷瘤对照及正常对照组(P>0.01),NK细胞杀伤活性增强,肿瘤明显小于不用药的荷瘤对照组(P<0.05)。提示PGE_2与肿瘤的发生与发展有关,IN具有抑制肿瘤生长的作用。     

STUDY ON THE MOTHER TO INFANT TRANSMISSIONOF HEPATITIS C VIRUS BY COMBINED ASSAYOF ANTI-HCV AND HCV-RNA

ResumeObjecti,Avecunecombinaisond'antiHCvetHeyRNA,Ona';tudi';6]o/eminesenceintesdont18dtaienttrouvdesin/ectdesdeHCV(2.95%).cathodedetr/sultatsParmi18enlantsdescendantsdemeresinfecttes,5(27.8%)dtaientinfectesetievirusprdsentaitiemimegenotJ'Pequeceluideleursparents.Concl"sio"Lepapierconclutquelacombinaisond'anti--VCVavecHCV--RNAestunbonmOltenpourd4celerhdpatiteCdefernmesenceintesquiprdsentaientunevirdmiedetitreassezbasdansnoiregroupe.MOtSalesvirushdpatiteCtransmissongenotypetitredevi…     

灵芝多糖对免疫调节作用的实验研究

灵芝多糖(GLP)是从灵芝菌培养物的菌丝体中提取的多糖。本研究证明,向小鼠腹腔连续注射大剂量的GLP(4mg/只,2mg/只)5天,对T细胞增殖、T细胞表型的表达、T细胞诱生IL-2及B细胞产生溶血素抗体均有抑制作用;当适量的GLP(0.1mg/只,0.05mg/只)连续向小鼠腹腔注射5天,可明显增强上述免疫指标。表明GLP是一种生物反应调节剂,适量可增强机体的细胞及体液免疫功能,为临床应用GLP治疗免疫功能紊乱提供了理论依据。