兔阴茎海绵体平滑肌细胞的体外培养及其生物学特性

目的 :研究体外培养的新西兰白兔阴茎海绵体平滑肌细胞的生物学特性。　方法 :采用组织块培养法 ,对兔阴茎海绵体平滑肌细胞进行活细胞观察 ,并测定其细胞生长曲线、贴壁率、细胞分裂指数。　结果 :①兔阴茎海绵体平滑肌细胞为梭形 ,呈长轴平行排列 ,具有明显的方向性 ;②体外贴壁快 ,生长迅速 ,体外培养的阴茎海绵体平滑肌细胞在合适的传代条件和比例下能够生存并保持其稳定的生物学特性。　结论 :体外培养的兔阴茎海绵体平滑肌细胞模型可用于检测某些药物对阴茎勃起的影响。     

雌兔阴蒂海绵体平滑肌细胞的体外培养及生物学特性

目的 :探讨雌兔阴蒂海绵体平滑肌细胞的体外培养方法及其生物学特性。　方法 :采用酶消化法对阴蒂海绵体平滑肌细胞进行体外培养 ,倒置显微镜下观察细胞形态 ,计数细胞贴壁率及生长情况 ,用免疫组织化学方法鉴别培养的平滑肌细胞。　结果 :体外培养的细胞证实为兔阴蒂海绵体平滑肌细胞 ,梭形 ,呈长轴平行排列 ,贴壁快 ,生长迅速而平稳。　结论 :体外培养的阴蒂海绵体平滑肌细胞可在合适的条件下生长和传代 ,并能够保持稳定的生物学特性 ,可为阴蒂生理等方面的研究提供细胞材料     

家兔阴茎海绵体平滑肌细胞体外培养方法对比研究

目的　探索更好、更方便的家兔阴茎海绵体平滑肌细胞体外培养方法。方法　分别采用组织块法、酶消化法、组织块 酶消化法对家兔阴茎海绵体平滑肌细胞进行培养 ,在倒置显微镜下对培养过程的细胞分别作了生长情况及形态学观察。用HE染色、MTT法分别描绘原代培养细胞的生长曲线、细胞分裂指数曲线 ;用倒置显微镜观察活细胞的贴壁过程 ,计数法测定细胞贴壁率。结果　组织块法及酶消化法培养的细胞其生长状况和形态学各有自己的特点。组织块法的细胞生长慢 ,培养时间相对较长 ,纯度相对较高 ,原代培养细胞生长速度快 ,但由于该法消化时间不易掌握 ,常影响其成功率 ,多数细胞呈梭形 ,细胞的密度高 ,原代培养时间为 7～ 10d。结论　每种培养方法都有各自的优缺点。我们可根据实验的需要而选择不同的方法或联合培养     

SD大鼠阴茎平滑肌细胞的获取和体外培养

目的 研究SD大鼠阴茎平滑肌细胞体外培养方法和生物学特性.方法 采用贴壁组织块培养法和酶消化培养法,对SD大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞进行活细胞观察.结果 (1)SD大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞为梭形,呈长轴平行排列,具有明显的方向性;体外贴壁快,生长迅速,体外培养的阴茎海绵体平滑肌细胞在合适的传代条件和比例下能够生存并保持其稳定的生物学特性.(2)酶消化培养法获得细胞的纯度高,接种后细胞生长快.贴壁组织块培养法操作简单易于掌握.结论 贴壁组织块培养法和酶消化培养法均可以获得平滑肌细胞,方法均方便可行.我们可根据实验的需要选择不同的方法.     

兔阴茎海绵体平滑肌细胞的快速分离及鉴定

目的探讨兔阴茎海绵体平滑肌细胞快速分离方法,为应用膜片钳技术研究阴茎勃起机制提供实验材料.方法采用木瓜蛋白酶和胶原酶两步酶解消化法,快速分离出新西兰大白兔阴茎海绵体平滑肌细胞并应用免疫组化鉴定.结果分离的细胞成活率较高,贴壁呈长梭形,胞膜光滑完整,胞浆均匀,可用于膜片钳记录.免疫组化鉴定为兔阴茎海绵体平滑肌细胞.结论酶解消化快速分离兔阴茎海綿体平滑肌细胞为全细胞膜片钳技术研究阴茎勃起功能障碍的电生理机制提供了较好的实验材料.     

阴茎海绵体平滑肌细胞表型转化及其影响因子的研究进展

阴茎海绵体平滑肌细胞是组成阴茎海绵体的主要功能成分,其表型转化是平滑肌细胞增殖和迁移的关键性起始步骤。因此,探讨平滑肌细胞表型转化的机制及其影响因子在阴茎勃起功能障碍的防治过程中具有重要意义。目前通常将平滑肌细胞分为收缩型(分化型)和合成型(未分化型、增殖型或去分化型)两种类型,并发现L转化生长因子(TGF-β)、转录因子E2F1、基本转录元件结合蛋白2(BTEB2)、胰岛素等因素可能影响平滑肌细胞表型转化。本文就近年来阴茎海绵体平滑肌细胞表型转化及其影响因子的研究进展作一简要综述。     

钙通道阻滞剂舒张阴茎海绵体平滑肌的研究进展

钙通道广泛存在于心肌、骨骼肌、平滑肌及神经元细胞膜上 ,钙通道阻滞剂因其舒张血管平滑肌而广泛应用于心血管疾病的治疗。本文综述了钙通道阻滞剂舒张阴茎海绵体平滑肌的实验研究的最新进展 ,能否应用于阴茎勃起功能障碍的诊断和治疗尚有待进一步研究和探讨     

体外分离培养兔阴茎海绵体平滑肌细胞的纯度分析

目的比较和评价不同条件下体外培养兔阴茎海绵体平滑肌细胞的纯度。方法应用胶原酶消化法和组织贴块法分离培养幼兔海绵体平滑肌细胞。差速贴壁法纯化海绵体平滑肌细胞。采用α-平滑肌肌动蛋白(α-SM-actin)和肌球蛋白(Myosin)免疫荧光鉴定海绵体平滑肌细胞,波形蛋白(Vimentin)衬染检测成纤维细胞。流式细胞仪检测海绵体细胞表达α-SM-actin的阳性率,比较不同培养条件下海绵体平滑肌细胞的纯度。结果体外培养的海绵体来源细胞在荧光显微镜下对α-SM-actin和Myosin仅有少量表达,随传代次数的增加,细胞表达α-SM-actin和Myosin的阳性率进一步降低。流式细胞仪检测酶消化法和贴块法原代培养的海绵体平滑肌细胞的纯度分别为16.91%和11.13%。经差速贴壁纯化后第1代海绵体平滑肌细胞的纯度分别提高到26.88%和21.98%。Vimentin免疫荧光检测到大量阳性表达。结论目前常规方法体外分离、培养的海绵体平滑肌细胞纯度较低,大量海绵体间质来源的成纤维细胞混杂生长,差速贴壁法可在一定范围内提高海绵体平滑肌细胞的纯度。     

阴茎海绵体平滑肌钙信号通路研究进展

早在100多年前，研究者已经注意到Ca^2＋在生命中的作用，但直到1967年，美籍华人张槐耀发现钙调素后，人们才开始对Ca^2＋的作用机理有了深刻的认识，提出了Ca^2＋是胞内的一种第二信使。随着研究的深入，人们发现钙信号通路在生命活动中无处不在，具有非常重要的地位。阴茎勃起与疲软受很多因素的影响，但最终分子机制的共同通路就是钙信号通路。所以研究钙信号通路对阴茎勃起及勃起障碍的生理、病理、诊断及治疗等有很重要的意义。     

阴茎海绵体平滑肌收缩的分子机理研究进展

阴茎勃起或维持疲软状态与否受控于阴茎海绵体平滑肌松弛或收缩的复杂性神经生理过程。尽管已经有些关于阴茎海绵体平滑肌收缩的研究报道,但是其受关注程度远远不如对阴茎海绵体平滑肌松弛机理的研究。阴茎勃起功能障碍即由于在有效性刺激条     

兔阴蒂海绵体平滑肌细胞的体外培养方法及生物学特性

目的：探索新西兰白兔阴蒂海绵体平滑肌细胞的体外培养方法及生物学特性。方法：取兔阴蒂海绵体，采用酶消化法进行平滑肌细胞体外培养；在倒置显微镜下观察培养细胞的生长状况、形态特征及贴壁过程；用计数法测定细胞贴壁率；用MTT法描绘原代培养细胞的生长曲线；利用逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)方法检测平滑肌细胞特征性标记物α-actin表达。结果：培养的兔阴蒂海绵体平滑肌细胞具有典型的平滑肌细胞形态特征，为梭形，呈长轴平行排列，具有明显的方向性；体外贴壁快，生长迅速，体外培养的阴蒂海绵体平滑肌细胞在合适的传代条件和比例下能够生存并保持其稳定的生物学特性。结论：体外培养的兔阴蒂海绵体平滑肌细胞模型可用于进一步研究阴蒂组织细胞学、分子生物学机制以及受体介导的平滑肌收缩信号转导机制及药理学作用等。     

低氧对SD大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞凋亡的影响

目的:探讨低氧和SD大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞(CCSMC)凋亡的关系。方法:体外培养CCSMC,免疫组化鉴定细胞;低氧(1%O2浓度)干预12、24、48、72 h,常规氧浓度作为对照,流式细胞术测定细胞周期变化和凋亡情况。结果:体外培养的CCSMC生长良好,抗平滑肌α-肌动蛋白单克隆抗体免疫组化DAB法染色阳性。流式细胞术检测CCSMC G0/G1期在48 h内细胞比例逐渐增加,后下降;S期细胞比例与G0/G1期呈相反趋势;G2/M期细胞比例无明显规律。结论:CCSMC在低氧环境下,随时间的延长凋亡程度加重,48 h达到最大值,进一步延长时间细胞裂解,不能加重凋亡。     

阴茎海绵体平滑肌细胞内信号转导研究进展

阴茎海绵体平滑肌细胞信号转导通路是海绵体平滑肌张力调节的细胞内分子机制。各种神经递质通过活化细胞膜受体蛋白或细胞内酶途径产生细胞外化学信号 ,细胞内第二信使分子和离子传递并放大这些信号 ,使平滑肌细胞舒张 ,最终诱发勃起。因此 ,海绵体平滑肌细胞信号转导的研究对于理解勃起生理学、勃起功能障碍的病理生理学以及开发治疗勃起功能障碍的新的选择性药物具有重要意义     

新西兰兔尿道海绵体平滑肌细胞的原代培养及鉴定

目的 为构建新西兰兔组织工程尿道提供种子细胞。方法 取新西兰兔阴茎头，用含10％胎牛血清的高糖DMEM作体外原代培养，并行免疫组织化学法鉴定。结果经10～14d培养后，培养瓶底铺满梭状细胞，免疫组织化学法鉴定确认为兔尿道海绵体平滑肌细胞。结论兔阴茎头平滑肌细胞可在体外条件下生长传代、扩增，可作为构建组织工程尿道的种子细胞。     

硝苯吡啶体外对家兔阴茎海绵体平滑肌的舒张作用

阴茎海绵体平滑肌可表达L型电压依赖性钙通道，钙拮抗剂通过选择性作用于钙通道，阻滞细胞的外钙内流而舒张阴茎海绵体平滑肌，在犬阴茎海绵体内注射维拉帕米能诱发阴茎勃起。本实验旨在观察硝苯吡啶（NIF）对高K^＋诱发的离体家兔阴茎海绵体平滑肌条收缩的影响，并探讨其舒张效应和机制。     

西地那非抑制阴茎海绵体平滑肌细胞中超氧化物的生成

为评价西地那非对培养的阴茎海绵体平滑肌细胞（CVSMCs）中超氧化物的生成及gp47（phox）（NADPH氧化酶的活性亚基）表达的影响。Koupparis AJ等进行了一项体外试验。CVSMCs取自家兔阴茎，通过U46619（TXA2类似物）在37℃下培养1h或16h，并按是否加入西地那非分为两组。通过分光光度计测量到的高铁细胞色素C的减少可以反映超氧化物歧化酶受抑制所致超氧化物的生成增多，而gp47（phox）则可以通过Western印迹术检测分析。再利用NADPH氧化酶和cGMP各自的特异性抑制剂，     

应用RNA干扰技术抑制PDE5A3基因在人阴茎海绵体平滑肌细胞表达

目的应用RNA干扰(RNAi)技术抑制人阴茎海绵体平滑肌细胞PDE5A3基因的表达,探讨应用该技术治疗勃起功能障碍(ED)的可行性.方法构建6个靶向人PDE5A3基因的短发夹RNA(shRNA)重组质粒,转染人阴茎海绵体平滑肌细胞48 h后,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot检测PDE5A3基因的表达抑制效果.结果抑制率最高的1、2、4号重组质粒使PDE5A3基因表达在mRNA水平分别抑制(66.26±4.02)%,(54.90±3.06)%,(23.83±3.61)%;在蛋白质水平分别抑制(64.14±3.32)%,(49.21±2.96)%,(29.85±4.91)%.结论RNAi能明显抑制人阴茎海绵体平滑肌细胞PDE5A3基因的表达,且抑制率具有序列相关性,是潜在的ED基因治疗新方法.     

成人及家兔阴茎海绵体平滑肌细胞培养和鉴定

目的 :探索阴茎海绵体平滑肌细胞 (CCSM)体外培养及鉴定方法。　方法 :采用勃起功能正常的成年男子及新西兰家兔的新鲜阴茎标本 ,经处理后采用原代细胞培养法 ,对阴茎海绵体组织块进行培养 ,获得CCSM后用光镜、透射电镜和免疫组化等多种方法从细胞形态学及CCSM生长特性等不同侧面对培养的人及新西兰家兔的CCSM进行鉴定 ,并测定CCSM在体外培养时的细胞增殖情况。　结果 :经 2 4h潜伏期 ,体外培养的CCSM进入指数增长期 ,维持约 96h后进入平台期 ;从接种组织块至长成单层细胞约需 15～ 2 0d ,传代后约 4～ 7d后长成单层 ;传代后的细胞增殖旺盛 ,成束状生长 ,并呈现层叠排列及“峰 谷”现象 ;CCSM在体外可稳定传 7～ 12代 ,传代期间其形态及增殖活性变化不明显 ;各种检测鉴定均证实所获细胞为CCSM。　结论 :CCSM原代细胞培养法简便、稳定、可靠 ,对研究阴茎的勃起机制及勃起功能障碍的发生、发展、调控及其治疗药物筛选有重要理论及现实意义。     

体外冲击波治疗阴茎海绵体硬结症

〔德国泌尿外科学会 .UrologeA2 0 0 4 ,4 3:5 97(德文 )〕　　阴茎海绵体硬结症 (IPP)主要症状是阴茎斑块、阴茎疼痛和偏斜 ,少数病例伴有勃起功能障碍 (ED)。形态学基础是阴茎海绵体白膜斑块形成 ,发病机理尚不清楚 ,故尚无针对病因的药物、仪器和手术疗法。标准疗法如口服药物、斑块内用药、电离子透入疗法和局部放疗等 ,不能肯定其疗效 ,纠正阴茎偏斜或假体植入作为治疗伴有ED的最后手段。1990年临床开始应用体外冲击波(ESWT)治疗IPP ,此期间 14个工作组刊登了 2 0篇原著 ,但对其疗效机理仍不清楚 ,有些学者认为疼痛减轻是直接破…     

离子通道在阴茎海绵体平滑肌紧张性调节中的作用

阴茎海绵体平滑肌舒张或收缩的调节 ,即海绵体平滑肌紧张性的生理学分别决定阴茎的勃起或疲软状态。众多的证据提示与其他血管组织一样 ,钾通道、钙通道是阴茎海绵体平滑肌紧张性的主要调节物质。在培养的海绵体平滑肌细胞和游离海绵体组织平滑肌条研究显示 :参与阴茎勃起的神经递质大多通过对平滑肌细胞离子通道及离子跨膜流动的作用而调节海绵体平滑肌紧张性。