系统性红斑狼疮病人外周血白细胞TNFRSFl2mRNA表达的研究

目的：了解肿瘤坏死因子受体超家族成员12(TNFRSFl2)mRNA在系统性红斑狼疮(SLE)外周血白细胞中的表达是否异常，初步判断TNFRSFl2是否为SLE的易感基因。方法：采用TaqMan one-step RT-PCR方法。分别对SLE病人、正常人和类风湿性关节炎(RA)病人外周血白细胞TNFRSFl2 mRNA的表达进行检测。结果：SLE病人TNFRSFl2 mRNA的表达形式与表达量和正常人相比均存在差异，SLE病人白细胞存在TNFRSFl2 mRNA的两类形式剪切体。分别为编码膜结合蛋白形式和分泌形式的TNFRSF12，而正常人只有后者，在PHA刺激后才开始同时表达前者。并且TNFRSFl2 mRNA在SLE病人中的表达量与病情活动度和肾脏累及相关。结论：提示TNFRSFl2在SLE的发病机制中起一定作用,因此可能是SLE的易感基因。     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞TRAF1 mRNA的表达及其意义

目的：研究肿瘤坏死因子受体相关因子1(TRAF1)mRNA表达在SLE患者的外周血单个核细胞中的表达是否异常，以及该基因mRNA表达与SLE活动指数是否相关。方法：TRAF1 mRNA表达采用RT-PCR半定量法；SLE活动指数以SLEDAI为判断标准。结果：TRAF1 mRNA在SLE患者的外周血单个核细胞中的表达较正常人为高，但与SLEDAI指数无相关。结论：TRAF1基因可能在SLE的发病机制中起重要作用。     

SLE病人外周血白细胞Bcl-2和Bcl-X mRNA表达研究

测定SLE病人外周血白细胞凋亡相关基因Bcl 2和Bcl XmRNA表达量 ,探索凋亡在SLE发病中的作用和意义。采用荧光标记RT PCR半定量方法 ,以β actin为内参照 ,对 5 0例SLE病人、 2 4例RA病人和 2 4例正常人外周血白细胞凋亡相关基因Bcl 2和Bcl XmRNA表达水平进行了检测。结果显示 ,SLE病人Bcl 2表达低于正常人 (1 372 8± 1 2 90 5Vs 1 8418±1 0 15 79,P <0 0 1) ,Bcl Xs表达明显高于正常人 (3 112 6± 2 0 136Vs 1 32 75± 0 6619,P <0 0 0 0 1) ,亦高于RA病人 (3 112 6± 2 0 136Vs 1 30 61± 0 5 30 7,P <0 0 0 0 1) ,Bcl xl无明显改变 ;而RA病人Bcl 2表达低于正常人 (1 0 0 66± 0 5 82 1Vs 1 8418± 1 0 15 79,P <0 0 1) ,Bcl Xs和Bcl xl表达与正常人相比均无统计学差别。SLE病人外周血白细胞抗凋亡的基因表达降低而促进凋亡的基因表达增加 ,提示凋亡在SLE发病中可能具有一定作用和意义。     

Toll样受体7及I型干扰素通路在系统性红斑狼疮中的作用研究

探讨Toll样受体7(TLR7)及I型干扰素(IFN-α)通路在系统性红斑狼疮(SLE)发病中的作用。采用实时荧光定量PCR方法检测42例SLE患者和34例正常人外周血TLR7mRNA以及4个干扰素调节基因mRNA的表达水平,同时观察TLR7mRNA的表达量与SLE疾病活动相关指标和干扰素积分(IFN score)的关系。结果,SLE患者外周血TLR7mRNA的表达水平显著增高;TLR7mRNA的表达水平与SLEDAI积分、肾脏损伤指数、抗双链DNA(dsDNA)抗体、抗RNA相关抗体水平及干扰素积分呈正相关;与补体C3、C4、白细胞数呈负相关。TLR7—IFN-α通路可能参与了SLE的病理过程。     

Toll 样受体7及Ⅰ型干扰素通路在系统性红斑狼疮中的作用研究

探讨Toll样受体7(TLR7)及Ⅰ型干扰素(IFN-α)通路在系统性红斑狼疮(SLE)发病中的作用.采用实时荧光定量PCR方法检测42例SLE患者和34例正常人外周血TLR7mRNA以及4个干扰素调节基因mRNA的表达水平,同时观察TLR7mRNA的表达量与SLE疾病活动相关指标和干扰素积分(IFN score)的关系.结果,SLE患者外周血TLR7mRNA的表达水平显著增高;TLR7mRNA的表达水平与SLEDAI积分,肾脏损伤指数、抗双链DNA(dsDNA)抗体、抗RNA相关抗体水平及干扰素积分呈正相关;与补体C3、C4、白细胞数呈负相关.TLR7-IFN-α通路可能参与了SLE的病理过程.     

PBX1基因剪切体表达与SLE的相关研究

了解PBX1基因各种剪切体的表达在SLE患者和正常人中是否存在差异 ,探讨PBX1的表达与SLE发病的相关性。通过PCR扩增及毛细管芯片电泳 ,确证剪切体h、k、l存在于人体 ;通过实时荧光定量PCR技术 ,对剪切体h、k、l分别进行SLE患者组和正常组的mRNA表达定量比较。结果发现这 3种剪切体在患者组中的表达较正常人明显降低 ,正常人的表达是SLE的 9～ 12倍。重度患者的k、l剪切体与轻中度的病人相比表达明显降低 ,并发狼疮性肾炎的病人k剪切体的表达较无肾累及的病人显著降低。说明PBX1基因剪切体h、k、l在SLE患者中mRNA表达水平下降 ,并与SLE活动度及肾累及有关。提示机体通过PBX1的表达量的调节可能参与SLE的发病     

系统性红斑狼疮病人环孢素A受体mRNA的表达

目的探讨静止期、活动期系统性红斑狼疮病人(SLE)外周血单个核细胞(PBMC)环孢素A受体(CyP) mRNA表达及糖皮质激素对其表达的影响,为临床应用环孢素A辅助治疗该病提供理论依据.方法采用逆转录PCR方法,经凝胶图像半定量分析,检测患者外周血单个核细胞CyP mRNA的表达.结果 SLE病人外周血单个核细胞存在有CyP mRNA的表达,静止期较正常人差异无显著性(p>0.05)意义,但在活动期CyP mRNA的表达较正常人和静止期病人明显降低(p<0.01),地塞米松处理后,活动期病人CyP mRNA的表达水平显著上升(p<0.01).结论 SLE病人有CyP mRNA的表达,但活动期明显下降,糖皮质激素可改善CyP mRNA的表达.     

全身炎症反应综合征中性白细胞基因表达谱的研究

目的:研究全身炎症反应综合征患者外周血中性白细胞和健康人外周血中性白细胞的基因差异表达。方法:应用基因芯片技术对4例SIRS患者外周血中性白细胞和6例正常人外周血中性细胞的mRNA进行检测。结果:在8400条基因中发现差异表达基因382条, 其中SIRS患者中性白细胞基因122条表达增加, 260条表达减少, 差异表达的基因主要是细胞内信号转导通路基因(35％), 细胞受体基因(22％), DNA结合、转录的各种因子基因(23％)以及细胞因子基因(11％)等。结论:SIRS患者体内存在抗炎和促炎两种不同介质作用, 中性白细胞在该环境中基因表达的改变与血液中多种刺激因素作用结果相一致。基因芯片技术可同时大通量研究基因的表达水平, 是一种可应用于检测炎症反应基因改变的新方法。     

IL-1β基因多态性对RA患者PBMC IL-1β mRNA表达的影响

目的:探讨类风湿关节炎(RA)患者中白细胞介素-1β(IL-1β)基因多态对IL-1β mRNA表达的影响。方法: 应用荧光定量RT-PCR技术检测不同IL-1β基因型的RA病人外周血单个核细胞(PBMC)中IL-1β mRNA表达量的差异。结果: 携带IL-1β(-511)纯合子等位基因2组RA病人PBMC表达IL-1β mRNA量明显较非纯合子及正常人组为高(均P<0.01)。结论: IL-1β基因多态性改变对IL-1β mRNA的表达产生影响,IL-1β(-511)纯合子等位基因2促进了IL-1β mRNA的表达。     

系统性红斑狼疮中A20表达特点的研究

目的:了解系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血中肿瘤坏死因子α诱导蛋白3(TNFAIP3,也称A20)、核因子κB(NF-κB)、黏膜相关淋巴瘤易位基因1(MALT1)及其转录本1(MALT1V1)的mRNA表达特点。方法:采用real-time PCR法检测21例SLE患者(其中合并硬皮症2例,合并类风湿关节炎1例,合并淋巴瘤1例)及31例健康人外周血单个核细胞(PBMC)中MALT1、A20、NF-κB和MALT1V1 mRNA的表达情况。结果:SLE样本中,A20 mRNA表达水平较健康人明显降低(P0.01),MALT1和NF-κB也较健康人降低(P0.01)。在健康人组,A20和NF-κB mRNA的表达水平未呈现明显相关性,MALT1和NF-κB则呈正相关(P0.05);而在SLE组中,A20和NF-κB mRNA则显示出显著正相关(P0.05),MALT1和NF-κB则不存在相关性。SLE中MALT1V1表达量显著低于正常人(P0.05),相关性研究还显示,健康人中A20和MALT1V1存在正相关关系(P0.01),在SLE中则不存在(P0.05)。结论:本研究首先提供了MALT1-A20-NF-κB通路在SLE中的表达特点。SLE患者异常低表达A20,这可能与患者低免疫耐受相关,其与NF-κB表达的正相关性情况可能与其它因素的调控有关,有待进一步证实。     

系统性红斑狼疮患者脱氧核糖核酸酶1基因表达研究

目的　研究脱氧核糖核酸酶 1(deoxyribonuclease ,DNASE1)基因表达及 m RNA剪接形式与系统性红斑狼疮 (systemic lupus erythematosus,SL E)的关联性。　方法　以实时荧光定量聚合酶链反应 (real- time PCR)方法检测 DNASE1的 m RNA表达水平 ,以毛细管电泳技术分析 m RNA编码区替代剪接体 ,结合单核苷酸多态性 (single nucleotide polymorphisms,SNPs)单倍型了解基因结构对表达的影响。　结果　SL E患者 DNASE1基因表达水平显著高于正常对照 (P<0 .0 0 1) ,未发现 SL E疾病活动性指数积分与基因表达水平存在相关性 ,但性别分析显示女性患者 DNASE1基因表达水平高于男性患者 (P<0 .0 1)。 8名正常人与 18例患者的毛细管电泳结果显示 ,患者与正常人替代剪接谱系不同 ,且 380 bp处存在明显条带 ,具有不同单倍型的 SL E患者替代剪接谱系亦有差异。　结论　 SL E患者 DNASE1基因表达异常 ,并存在与正常人不同的 m RNA剪接体。 DNASE1基因与 SL E发病相关     

Effects of dexamethasone on the expression of Fas molecules and apoptosis of lymphocytes in patients with systemic lupus erythematosus

Previous studies have shown that the autoimmune phenomenon could be caused by defective apoptosis of autoreactive lymphocytes. Corticosteroids used for treatment of systemic lupus erythematosus (SLE) are potent apoptosis inducers. We examined dexamethasone (DEX)-induced apoptosis and Fas expression in peripheral blood lymphocytes of SLE patients and normal subjects. Peripheral blood lymphocytes were obtained from 40 SLE patients and 18 sex- and age-matched control subjects. Percentages of apoptosis and expression of Fas molecule in lymphocytes were assessed by flow cytometry. Fas expression in lymphocytes treated with or without DEX was significantly higher in SLE patients than normal controls [median (interquartile range) of mean fluorescence intensity without DEX: 74.9 (50.7-98.0) vs 20.0 (17.7-25.0), p < 0.001; with DEX: 77.9 (56.0-130.5) vs 20.5 (18.6-24.7), p<0.001]. DEX (0.1-5 microM) could also induce apoptosis of lymphocytes from SLE and control subjects in a dose-dependent manner. Elevation of apoptotic susceptibility was more prominent in DEX-treated SLE lymphocytes [33.9% (24.7-37.5%) vs 19.6% (13.6-26.1 %), p = 0.003]. The higher apoptotic susceptibility of SLE lymphocytes upon DEX treatment in vitro may be related, at least partly, to the pharmacological action of corticosteroids.     

高果糖诱导的胰岛素抵抗大鼠外周血白细胞iNOS mRNA与ecNOS mRNA表达的变化

目的:探讨高果糖饮食对Wistar大鼠外周血白细胞iNOSmRNA与ecNOSmRNA表达的影响。方法:普通饲料喂养,实验组饮用12 %的果糖水造型。于实验前、实验过程中1-6个月每月断尾取血,测定外周血白细胞诱导型一氧化氮合酶mRNA(iNOSmRNA)与内皮源型一氧化氮合酶mRNA (ecNOSmRNA)表达;观察实验前、造型1、2、3及 6个月时的空腹血糖、血浆胰岛素水平变化。结果:1个月后,血糖与实验前无显著差异;血浆胰岛素明显高于对照组 (P <0.01),并持续维持在高水平上;外周血白细胞ecNOSmRNA表达增强。 2个月后血糖高于对照组 (P <0.05);外周血白细胞出现iNOSmRNA表达。 3及 6个月,血糖明显高于对照组 (P <0.01);iNOSmRNA与ecNOSmR NA持续保持高表达状态。结论:高果糖饮食两个月,可引起Wistar大鼠产生明显的高胰岛素血症和胰岛素抵抗;首先ecNOSmRNA表达增强,可能延缓胰岛素抵抗的形成。继之,iNOSmRNA表达增强,可能促进胰岛素抵抗形成.     

系统性红斑狼疮病人环孢素A受体mRNA的表达

目的 探讨静止期、活动期系统性红斑狼疮病人（SLE）外周血单个核细胞（PBMC）环孢素A受体（CyP）mRNA表达及糖皮质激素对其表达的影响,为临床应用环孢素A辅助治疗该病提供理论依据。方法 采用逆转录PCR方法,经凝胶图像半定量分析,检测患者外周血单个核细胞CyP mRNA的表达。结果 SLE病人外周血单个核细胞存在有CyPmRNA的表达,静止期较正常人差异无显著性（P＞0．05）意义,但在活动期CyPmRNA的表达较正常人和静止期病人明显降低（P＜0．01）,地塞米松处理后,活动期病人CyPmRNA的表达水平显著上升（P＜0．01）。结论 SLE病人有CyPmRNA的表达,但活动期明显下降,糖皮质激素可改善CyP mRNA的表达。