Luminex液相蛋白芯片用于研究着床窗期子宫内膜和早孕蜕膜基质细胞的细胞因子的表达谱

目的探索着床窗期子宫内膜和早孕期蜕膜基质细胞的细胞因子谱表达及其对胚胎着床和早期妊娠的可能影响。方法获取着床窗期子宫内膜基质细胞(ESC)和早孕期蜕膜基质细胞(DSC)进行体外培养,采用Luminex液相蛋白芯片技术检测细胞培养上清液中15种细胞因子:肿瘤坏死因子(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、颗粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、颗粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、巨噬细胞炎症蛋白-1α(MIP-1α)、单核细胞趋化蛋白因子-1(MCP-1)、受调节激活的正常T细胞排泌的因子(RANTES)和γ干扰素诱导蛋白10(IP-10)的含量变化,比较两者表达的差异。结果DSC分泌多种细胞因子,与ESC相比,其中TNF-α、IFN-γ、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IP-10、GM-CSF、G-CSF、MIP-1α、RANTES表达下调,有极显著差异(P<0.001);IL-4表达上调,有显著差异(P<0.01);MCP-1、IL-2和IL-12表达无明显变化。不同时期表达的细胞因子之间存在复杂的相关关系。结论从着床窗期子宫内膜到早孕期蜕膜基质细胞表达的细胞因子谱的水平发生变化,可能对调控胚胎着床和维持早期妊娠起着重要作用。     

早期自然流产患者蜕膜T细胞亚群及辅助性T细胞1、2型细胞因子的表达

自然流产 ( spontaneous abortion,SA)的原因 ,约 50 %～ 60 %与免疫因素有关 ,其中约 2 / 3原因不明。近年来研究发现 ,不明原因习惯性流产与辅助性 T细胞 ( Th) 1、Th2型细胞因子的平衡向 Th1型偏移密切相关 [1]。本研究旨在通过观察蜕膜局部 T细胞亚群及 Th型细胞因子的变化 ,探讨 SA的免疫学发病因素。一、资料与方法1 .研究对象 :1 998年 1 0月～ 1 999年 6月在我院妇科门诊就诊的病例 ,年龄 2 0～ 3 0岁。分为两组 :对照组 2 0例 ,妊娠 8周以内的健康妇女 ,未使用过任何激素类药物 ,无生殖系统急、慢性炎症 ,未放置宫内节育器 ,无…     

体外激活的细胞毒性T淋巴细胞与细胞因子诱导的杀伤细胞及淋巴细胞因子激活的杀伤细胞对胶质瘤杀伤作用比较

目前胶质瘤的免疫治疗越来越受到重视，研究较多的有淋巴细胞因子激活的杀伤细胞（LAKs）、细胞因子诱导的杀伤细胞（CIKs）及树突状细胞（Des）诱导的细胞毒性T淋巴细胞（CTLs）。本研究旨在比较了上述3种杀伤细胞对神经胶质瘤的体外杀伤作用。[第一段]     

米非司酮对早孕蜕膜组织中层粘连蛋白的影响

层粘连蛋白 ( laminin,L N)是组成人体细胞外基质 ( extracellular matrix,ECM)的主要成分之一。目前研究表明 ECM中 L N分布广泛 ,功能多样 [1] ,尤其对胚胎早期宫内发育的作用越来越受到重视。本研究比较对照组及米非司酮 ( RU486)作用后早孕蜕膜中的 L N的含量 ,探讨 RU486对早孕蜕膜中 L N的影响。一、材料和方法1 .研究对象 :选择 1 999年 1～ 4月就诊于我院门诊的 5 5例早孕者 ,自愿要求终止妊娠并符合以下条件 :年龄 <40岁 ,<60 d的宫内妊娠 ,孕前未应用任何激素 ,非带环妊娠 ,非哺乳期 ,无生殖器炎症及全身主要器官疾病史。…     

双炔失碳酯对人早孕绒毛蜕膜组织细胞分泌功能的影响

本实验以绒毛、蜕膜组织细胞培养为模型 ,用放射免疫测定方法 ,观察了双炔失碳酯对绒毛、蜕膜组织细胞分泌功能的影响。结果 :培养的绒毛、蜕膜组织细胞中加入系列浓度的双炔失碳酯后 2 4和 48h,h CG、E2 、P均明显降低 (P<0 .0 1 ,P<0 .0 5 ) ,PGF2α明显增高 (P<0 .0 1 ,P<0 .0 5 )。表明 ,双炔失碳酯可直接作用于人绒毛、蜕膜组织 ,抑制h CG、E2 、P的产生 ,刺激 PGF2α的合成。结果提示 ,绒毛、蜕膜是双炔失碳酯抗早孕时 ,主要作用环节之一。     

米非司酮对人蜕膜中雌激素及孕酮受体的影响

本研究观察了服用米非司酮后人蜕膜中雌激素受体（ＥＲ）和孕酮受体（ＰＲ）的变化。６０名孕６～７周的妇女，被随机分为３组。在手术终止妊娠前的１２和２４小时两组中，分别一次性口服米非司酮２００ｍｇ，对照组服用安慰剂。服用米非司酮后，蜕膜中ＥＲ和ＰＲ的免疫组织化学染色反应与对照组比较增强了。卡方分析表明，服用米非司酮后，ＥＲ阳性标本的数量明显增加     

细胞因子诱导的杀伤细胞治疗胃癌对其无瘤生存的影响

目的 探讨体外诱导自体细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)治疗胃癌以无瘤生存为结局的相关因素.方法 应用生物技术体外诱导自体细胞因子激活的杀伤细胞进行临床应用.选择1998年1月1日至2009年12月31日在苏州大学附属第三医院手术治疗并经病理诊断的胃癌病例181例.采用Kaplan-Meier及Log-rank检验比较化疗联合CIK细胞治疗组(CIK治疗组)和化疗组对胃癌无瘤生存的影响.结果 对影响预后的重要因素如性别、年龄、胃癌部位、肿瘤大小、组织学类型、浸润深度、淋巴结转移、病理分级等因素进行分析,两组间差异无统计学意义;CIK治疗组胃癌患者的无瘤中位生存时间明显高于化疗组(x2=9.722,P＜0.01);且生存时间和CIK细胞治疗次数呈正相关(x2=14.769,P＜0.01).结论 CIK细胞治疗可以显著延长胃癌患者的中位生存时间.     

早孕人子宫蜕膜、绒毛膜糖复合物的组化分析

以糖特异性单克隆抗体作为组化探针，观察早孕期人子宫蜕膜、绒毛膜表面糖复合物的变化。结果表明：６种糖特异单抗ＳＨ－１（抗鼠ＬｅＸ单克隆抗体），ＡＨ－６（抗鼠ＬｅＹ单克隆抗体），ＮＵＨ－１（抗鼠６ｃ单克隆抗体），ＮＵＨ－２（抗鼠ＤＳＩ单克隆抗体），Ｊ１（抗鼠Ｔ单克隆抗体），Ｃ６（抗鼠Ｉ单克隆抗体）在早孕期与子宫蜕膜及绒毛膜结合显示不同变化。其中ＡＨ－６、ＳＨ－１绒毛膜滋养细胞结合随妊娠天数增加着色逐渐减弱，相反ＮＵＨ－２的着色逐渐加强。ＡＨ－６，ＳＨ－１，Ｃ６与子宫蜕膜在早孕着色程度无改变。Ｊ１与蜕膜在各期未见结合。ＮＵＨ－１与蜕膜结合随妊娠天数增加而着色逐渐加强。早孕期人子宫蜕膜、绒毛膜糖复合物的变化为进一步研究其功能提供新方法。     

输注供者自然杀伤细胞对小鼠单倍型相合造血干细胞移植的影响

目的 探讨输注供者自然杀伤(NK)细胞对小鼠单倍型相合造血干细胞移植的影响.方法 选取C57BL/6(H-2b)雄性小鼠为供者、CB6F1(H-2d/b)雌性小鼠为受者.移植前制备供者的骨髓细胞(BMC)、脾细胞(SC)及脾NK细胞,NK细胞经体外培养扩增和激活;所有受者均接受直线加速器X线全身照射(TBI)预处理.TBI后将受者分为4组(每组10只),分别进行单倍型相合造血干细胞移植.单纯TBI组:TBI后不输注细胞,仅作为对照;单纯BMC输注组:输注5×106个BMC;诱发GVHD组:输注5×106个BMC+1.5×107个SC;NK细胞输注组:输注5 x 106个BMC+1.5×107个SC+1×107个NK细胞,并腹腔注射100 ng重组人白细胞介素2(rhIL-2)和1μg rhIL-15,持续7 d.移植后观察各组受者GVHD的发生情况,并对各组受者进行组织病理学、供者细胞嵌合度和免疫功能重建等检测.另取TBI后受者20只,设白血病复发组和白血病治疗组,每组10只.白血病复发组:输注5×106个BMC+1×107个SC+2×106个白血病细胞株EL9611;白血病治疗组:在白血病复发组的基础上再输注1 x 107个NK细胞,并腹腔注射100 ng rhIL-2和1μg rhIL-15,持续7 d.观察两组受者白血病复发情况和移植后100 d的存活率.结果 单纯BMC输注组受者无GVHD发生,NK细胞输注组受者GVHD的评分和组织病理学改变均较诱发GVHD组轻(P<0.05)f诱发GVHD组的免疫功能重建较NK细胞输注组延迟.白血病复发组和白血病治疗组移植后100 d的存活率分别为20%和90%,两组比较,差异有统计学意义(P<0.01).结论 输注激活的供者NK细胞可以减轻小鼠单倍型相合造血干细胞移植后的GVHD,减少白血病复发,促进免疫功能重建.     

BCG induced killer cell activity

Summary To investigate the mechanism of Bacillus de Calmette Guérin (BCG) bladder instillation therapy, the killer cell activity induced in peripheral blood mononuclear cells (PBMNCs) after BCG instillation was examined. Significant cytotoxic activity against natural killer (NK) cell resistant target tumor cells was detected after 3 days of instillation. To characterize this BCG induced cytotoxic activity further, human PBMNCs were cultured with BCG in vitro. From 24 h maximum cytotoxicity was obtained and continued for 3 days, then decreased slightly. Neither a DNA synthesis inhibitor Cytosine-arabinoside (Ara-C) nor a cytotoxic T cell (CTL) generation inhibitor Cyclosporine A inhibited this killer cell activation. Monoclonal antibody treatment revealed that both precursor and effector cells are Leu1^-, 3a^-, 7⁺, 11b⁺. The recognition specificity from cold target competition experiments was selective. Taken together NK type precursor was activated with BCG into NK type effector which has wider spectrum of target cells than usual NK cell.     

细胞因子诱导杀伤细胞杀伤胃癌的特异性与非特异性研究

目的 观察特异性与非特异性杀伤在细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)体外杀伤胃癌细胞(SGC-7901)中所起的作用.方法 从正常人外周血单个核细胞诱导树突状细胞(DC)、CIK细胞,用人胃癌细胞SGC-7901提取肿瘤抗原致敏DC,用DC诱导CIK生成DC诱导CIK细胞(DC-CIK)和经胃癌抗原致敏的DC诱导CIK细胞(抗原-DC-CIK).培养的第14天,用流式细胞仪检测CIK、DC-CIK、抗原-DC-CIK细胞表型CD3、CD3/CD8和CD3/CD56.以CIK、DC-CIK和抗原-DC-CIK为效应细胞,以经主要组织相容性复合体(MHC)分子阻断的SGC-7901细胞和未经MHC分子阻断的SGC-7901细胞为靶细胞,效靶比分别为5:1、10:1、20:1,用噻唑蓝(MTT)比色法分别检测各组杀伤效应(每组n=3).结果 (1)培养的第14天,抗原-DC-CIK中CD3~+CD56~+和CD3~+CD8~+双阳性细胞的比例较DC-CIK和单独培养CIK明显增高(P均<0.01).(2)效靶比为20:1时,CIK组、DC-CIK组、抗原-DC-CIK组对SGC-7901的杀伤活性分别为:(46.6±2.2)%、(52.6±1.6)%、(72.5±2.1)%(P均<0.01);对经MHC分子阻断的SGC-7901的杀伤活性分别为:(44.3±1.1)%、(49.9±0.9)%、(50.4±1.9)%.抗原-DC-CIK中特异性杀伤占总杀伤效力的比例明显高于DC-CIK和CIK.结论 CIK杀伤胃癌细胞以非特异性杀伤为主,特异性杀伤仅占总杀伤效力的4.9%;未致敏的DC诱导CIK后,总杀伤效力增强,以非特异性杀伤为主,特异性杀伤效力增加不明显,占总杀伤效力的5.1%;抗原致敏的DC诱导CIK后,杀伤仍以非特异性杀伤为主,特异性杀伤效力大幅度增加,占总杀伤效力的30.5%.     

蜕膜自然杀伤细胞与不明原因反复自然流产的关系

目的通过测定子宫蜕膜自然杀伤(NK)细胞亚群及其杀伤活性,探讨其在不明原因反复自然流产(URSA)发病中的作用。方法随机选取确定URSA的患者10例为实验组,选取15例正常妊娠(NP组)为对照,采用流式细胞仪检测两组蜕膜组织NK细胞亚群,MTT还原法测定NK细胞杀伤活性。结果URSA组蜕膜中CD56+NK细胞含量显著高于NP组(P<0.01),且URSA组CD56+CD16+细胞亚群含量及CD56+CD16+/CD56+CD16-比值也较NP组显著升高(P均<0.01),而CD56+CD16-细胞亚群含量两组比较无差异(P>0.05)。蜕膜NK细胞活性URSA组为(31.60±2.62)%,而NP组仅为(15.65±2.02)%,两组蜕膜NK细胞活性有显著差异(P<0.01)。结论URSA的发生可能与NK细胞亚群失衡及杀伤活性异常增高而导致母胎间的免疫耐受平衡被打破有关。     

Correlation between alpha rhythms and natural killer cell activity during yogic respiratory exercise

In eight yoga instructors, we examined changes in brain rhythms and natural killer cell activity (NK activity) during yoga exercises. We found that the practice of all three exercises studied resulted in increased alpha activity. There were no apparent changes in NK activity after a series of postural (asana) and meditative (mantra) exercises. During respiratory exercises (pranayama), however, changes in NK activity were observed in the eight subjects, positively correlating to increases in alpha frequencies (r = 0.83, p < 0.02). Copyright © 2001 John Wiley & Sons, Ltd.     

Modulation by interferon alpha of the decreased natural killer activity in patients with glioblastoma

Summary It is known that natural killer (NK) cells are involved in immunosurveillance against tumours. This study examines the NK activity of mononuclear cells (MNC) from the peripheral blood of patients with gliobalstoma. The cytotoxic inducer effect of interferonalpha (IFN-) upon these MNC has also been studied. A marked decrease in NK activity mediated by MNC from these patients was found. This functional defected in MNC is not due to a decrease in phenotypically defined NK cells. After long-term (5-day) incubation with IFN-, MNC from 5 out of 14 patients showed strong lytic activity against NK-sensitive target cells. In this system, IFN- failed to induce cytotoxic activity against NK-resistant target cells in MNC from all the patients studied. Thisin vitro induction of cytotoxic activity in MNC from some patients with glioblastoma by IFN- suggests a potential immunotherapeutic use of the lymphokine in these subjects.     

细胞因子诱导的杀伤细胞对胆囊癌细胞株GBC-SD杀伤活性的影响

目的 研究脐血单个核细胞体外多向诱导分化为LAK,CD3AK,CIK细胞及体外对胆囊癌细胞株GBC-SD杀瘤活性的变化. 方法 采用IL-2刺激诱生LAK细胞;用CD3单抗和IL-2刺激诱生扩增CD3AK细胞;加入IFN-γ,24 h后加入IL-1,CD3单抗,IL-2刺激诱生CIK细胞,观察它们的扩增情况,并分析其相互关系;取培养的CIK细胞用流式细胞仪分析表型;用MTT法以胆囊癌细胞株GBC-SD为靶细胞,分组测定LAK,CD3AK,CIK细胞的杀伤活性. 结果 CD3AK和CIK细胞的扩增能力远大于LAK细胞(P<0.05).CIK细胞和CD3AK相比,在前期无明显差异,至第20天左右时CIK细胞的扩增倍数显著高于CD3AK(P<0.05).流式细胞仪分析结果显示CIK细胞培养后,其主要效应细胞CD3+ CD56+细胞较培养前显著增加(P<0.05),CD8+细胞也较培养前显著增加(P<0.05).CD3AK和CIK细胞对胆囊癌细胞株GBC-SD的杀伤活性均显著高于LAK细胞(P<0.05),而CIK细胞杀伤活性又强于CD3AK细胞(P<0.05). 结论 CIK细胞具有更高的扩增能力和更强的杀伤活性,是肿瘤过继免疫治疗中更为有效的杀伤效应细胞.     

吗啡对小鼠血清IL-6和NK细胞活性的影响

目的 探讨不同剂量吗啡对小鼠血清IL－6、NK细胞活性的影响。方法 选择BABL／C小鼠,随要分组。第一部分为6组,其中4组分别注射不同剂量的吗啡,另2组为完全空白对照组,生理盐水对照组,第二部分将小鼠分为5组,1－4组先注射不同剂量纳洛酮,15min后每组半数小鼠注射纳洛酮（30mg/kg）,余下的半数小鼠注射生理盐水。第5组是小鼠先注射吗啡（30mg/kg),15min后注射纳洛酮（1mg/kg)。检测血清IL－6、NK细胞活性、脾细胞cAMP含量。结果 第一部分：与对照组相比：①腹腔注射吗啡100mg/kg使IL－6明显增加;②3mg/kg吗啡即可使小鼠的NK细胞活性明显降低;③腹腔注射吗啡30mg/kg、100mg/kg使小鼠cAMP明显降低。第二部分：①注射纳洛酮和吗啡与同浓度纳洛酮加生理盐水组相比,IL－6含量没有明显改变;②纳洛酮0．1mg/kg不能拮抗吗啡NK细胞活性的抑制;而纳洛酮1.0mg/kg,10mg/kg能增加NK细胞的活性,但与对照组相比没有明显差别;③纳洛酮1.0mg/kg,10mg/kg可拮抗吗啡对cAMP的抑制作用;④不同注射顺序吗啡和纳洛酮的对IL－6和cAMP无影响,但先注射吗啡,后注射纳洛酮对NK活性的抑制较轻。结论 吗啡对小鼠的免疫功能的调节作用,大剂量使IL－6含量明显增加,纳洛酮没有明显的拮抗作用;小剂量吗啡即可使NK细胞活性受到抑制,且呈剂量依赖性,但纳洛酮不能反转抑制;cMAP降低呈吗啡剂量依赖性,纳洛酮对此拮抗作用,也呈剂量依赖性。后注射纳洛酮对NK细胞活性抑制要明显低于先注射纳洛酮组。     

曲马多术后镇痛对妇科肿瘤病人T淋巴细胞亚群、NK细胞的影响

目的 比较曲马多用于妇科肿瘤病人术后静脉自控镇痛(PCIA)与硬膜外自控镇痛(PCEA)对T淋巴细胞亚群、NK细胞的影响。方法 39例妇科肿瘤病人,随机分为两组,Ⅰ组(n=21)为静脉自控镇痛组,E组(n=18)为硬膜外自控镇痛组。两组均用硬膜外麻醉。Ⅰ组曲马多800mg、氟哌啶醇5mg、生理盐水83 ml。E组曲马多400 mg、氟哌啶醇5 mg、生理盐水91 ml。负荷剂量:术毕前15 minⅠ组曲马多100 mg静脉缓注,E组硬膜外给药。PCA泵容量100 ml,背景输注速率2ml/h,单次泵药剂量0.5 ml,锁定时间15 min。术后1、2 d评定镇痛效果(VAS),并于术前30min、术后1、2 d抽取肘静脉血液1.5 ml,采用流式细胞仪检测T细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+)、NK细胞的百分率。结果 两组镇痛差异无显著性(P>0.05)。两组间各时点各免疫指标的差异均无显著性(P>0.05)。E组术后1、2 d NK细胞显著低于术前(P<0.05),Ⅰ组术后2 d NK细胞下降(P<0.05)。两组T细胞亚群指标与术前相比差异无显著性(P>0.05)。结论 曲马多PCIA与PCEA用于妇科肿瘤病人术后镇痛对T淋巴细胞亚群、NK细胞的影响相同。     

硼替佐米增强前列腺癌细胞对NK细胞介导细胞杀伤作用的敏感性

目的:探讨硼替佐米是否能够增强前列腺癌细胞对NK细胞介导杀伤作用的敏感性,以及是否在不同类型的人前列腺癌细胞系中有相似的作用。方法:以激素依赖性的前列腺癌细胞株LNCaP和激素非依赖性的前列腺癌细胞株DU145为模型,不同浓度(0、5、10、15、20、25nmol/L)硼替佐米处理细胞后,CCK-8法检测肿瘤细胞的增殖,Annexin V/PI法检测细胞凋亡率。结果:15、20、25nmol/L硼替佐米处理DU145细胞48、72h后,各处理组细胞的增殖率分别为(82.79±2.04)%、(73.59±2.95)%、(74.16±6.16)%和(71.24±5.30)%、(51.20±2.91)%、(38.02±2.67)%,同样处理LNCaP细胞后,各处理组细胞的增殖率分别为(77.04±7.74)%、(42.61±6.62)%、(23.85±6.04)%和(36.45±7.02)%、(14.94±5.76)%、(11.65±5.87)%。与对照组相比,硼替佐米强烈抑制两种细胞系的增殖(P0.05)。15、20、25nmol/L硼替佐米处理DU145细胞24h后,DU145细胞的凋亡率分别为(14.41±1.32)%、(16.13±1.55)%、(14.48±1.42)%,而在LNCaP细胞,20、25nmol/L硼替佐米处理24h后,凋亡率为(12.77±1.28)%和(14.84±1.65)%,与对照组相比有统计学差异(P0.05),DU145细胞对硼替佐米诱导的凋亡作用较LNCaP细胞更加敏感。但是,在短期分析中硼替佐米不能致敏两种细胞系对NK细胞介导的杀伤作用。在长效分析中,用硼替佐米处理肿瘤细胞后,20nmol/L硼替佐米+NK组诱导的DU145细胞和LNCaP细胞凋亡率分别为(41.83±5.06)%和(30.31±3.62)%,较单独应用硼替佐米或者NK细胞更高(P0.05)。结论:硼替佐米能够应用于致敏前列腺癌细胞对NK细胞介导的杀伤作用的敏感性,提高当前前列腺癌的治疗水平。而且此治疗策略对雄激素非依赖性的前列腺癌患者更有效。