熊果酸诱导人急性髓系白血病细胞株U937细胞凋亡的实验研究

目的探讨熊果酸对人急性髓系白血病细胞株U937细胞的作用及机制。方法用不同浓度的熊果酸处理对数生长期的U937细胞48 h后,采用四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测其对细胞增殖的影响;Annexin V/PI染色和流式细胞仪检测细胞凋亡;免疫印迹法(Western blot)检测Wnt、β-catenin、p53、Bcl-2、Bax表达,以及细胞浆凋亡诱导因子(AIF)和细胞色素蛋白C(CytC)蛋白表达。结果熊果酸呈浓度依赖性诱导U937细胞增殖抑制和凋亡,上调Bax和细胞浆AIF、CytC表达,下调Wnt、β-catenin、p53及Bcl-2表达。结论熊果酸对U937白血病细胞有显著的增殖抑制和诱导凋亡作用,其机制可能为抑制Wnt/β-catenin/p53信号途径促发白血病细胞死亡。     

葛根素对人骨肿瘤细胞株 MG63 的增殖抑制和诱导凋亡作用

目的 探讨葛根素对人骨肉瘤细胞株MG63的作用及其机制。方法 取对数生长期的MG63细胞分别用不同浓度的葛根素处理(0,25,50,100 mmol·L^-1)。细胞培养48 h后,利用MTT检测MG63细胞增殖水平;流式细胞术检测细胞凋亡水平,RT-PCR检测PI3K、AKT、Bax、Bcl-2、p53 和 p21 mRNA水平。Western blotting 检测PI3K、AKT、Bax、 Bcl-2、p53和p21表达水平。结果 葛根素浓度依赖性的诱导MG63细胞增殖抑制、凋亡和 Bax 表达,减少PI3K、AKT、Bcl-2、p53和p21表达。结论 葛根素可通过抑制PI3K/AKT/p53信号通路而诱导MG63细胞增殖抑制和凋亡。     

dalbinol通过ROS/Dvl/GSK-3β/β-catenin信号通路诱导人结肠癌细胞凋亡的作用机制研究

目的探讨天然产物dalbinol对人结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法采用MTT法检测dalbinol对人结肠癌HCT116细胞的增殖抑制作用;利用Hoechst 33342荧光染色法观察细胞凋亡的形态学变化;应用流式细胞术检测细胞凋亡率和ROS水平;通过Western blot法检测Wnt/β-catenin信号通路及凋亡相关蛋白的表达情况。结果 dalbinol可抑制人结肠癌HCT116细胞的增殖,且呈剂量和时间依赖性,24、48和72 h的IC50分别为(4.8±0.53)、(2.5±0.43)和(0.6±0.22)μmol·L-1;Hoechst 33342染色观察到细胞皱缩、核固缩和染色质凝集等典型凋亡的形态学变化,同时dalbinol可剂量依赖性地提高细胞凋亡率,且能增加细胞内ROS水平;Western blot结果发现dalbinol通过下调抗凋亡蛋白Bcl-2和Mcl-1的表达水平,上调促凋亡蛋白Bax和Bim的表达,从而促进cleaved caspase-3和cleaved PARP活化裂解,进而诱导细胞凋亡;此外,dalbinol通过抑制Dvl-2和GSK3β(p S9)的蛋白表达,从而降低总的β-catenin和胞核β-catenin的表达,但胞质β-catenin无明显变化,最终下调Wnt/β-catenin通路下游靶蛋白c-Myc和Survivin的表达水平。结论dalbinol可抑制人结肠癌HCT116细胞增殖并诱导其凋亡,其分子机制可能与提高细胞内ROS水平和抑制Dvl/GSK-3β/β-catenin信号通路有关。     

白细胞介素 -18抑制肝癌细胞增殖、促进细胞凋亡的机制研究

目的 探讨白细胞介素-18(IL-18)通过调控Wnt/β-连环素(β-catenin)信号通路影响肝癌细胞增殖及凋亡的作用机制.方法 培养肝癌细胞株HepG2、Bel-7402与正常肝细胞株L02,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)与蛋白质印迹法(Western blotting)分别检测细胞IL-18 mRNA及蛋白表达.预实验中筛选出HepG2细胞为实验细胞,分别转染pcDNA、pcDNA-IL-18,Western blotting验证转染效率.四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)与膜联蛋白V(Annexin V)-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)染色实验分别检测HepG2细胞增殖及凋亡情况.qRT-PCR与Western blotting分别检测HepG2细胞中B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、β-catenin、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达水平.HepG2细胞中转染IL-18过表达质粒后再加入Wnt/β-catenin通路激活剂(SKL2001),并检测其对HepG2细胞增殖及凋亡的影响.结果 与L02细胞相比,肝癌HepG2、Bel-7402细胞中IL-18 mRNA及蛋白表达均显著降低[(1.02±0.12)比(0.39±0.09)/(0.45±0.12);(0.41±0.14)比(0.11±0.13)/(0.19±0.14)](P<0.05);IL-18过表达后HepG2细胞吸光度[24 h(0.31±0.10)比(0.27±0.13);48 h(0.63±0.12)比(0.39±0.14);72 h(0.98±0.18)比(0.54±0.15)]、Bcl-2及β-catenin、Cyclin D1蛋白表达水平均明显低于pcDNA组,而细胞凋亡率[(6.93±0.22)％比(20.54±3.97)％]及Bax蛋白表达水平均明显升高;SKL2001可激活Wnt/β-catenin信号通路进而逆转IL-18对肝癌细胞增殖的抑制作用及其对细胞凋亡的促进作用.结论 IL-18可下调肝癌细胞β-catenin表达而抑制Wnt/β-catenin信号通路进而减弱肝癌细胞增殖能力并提高细胞凋亡水平.     

小檗碱抑制HCT116细胞生长与Wnt/β-catenin信号的关系研究

目的研究小檗碱对结肠癌细胞的增殖抑制作用与Wnt/β-catenin信号的关系。方法结晶紫染色法检测小檗碱对HCT116细胞增殖的抑制作用,采用流式分析及West-ern blot研究小檗碱诱导HCT116细胞凋亡;Western blot检测β-catenin蛋白表达、RT-PCR法检测β-catenin mRNA表达,确定小檗碱对其表达的影响;采用外源性过表达β-cate-nin研究小檗碱抑制HCT116细胞增殖与β-catenin的关系。结果小檗碱处理组细胞较对照组细胞增殖明显受到抑制,并诱导HCT116细胞凋亡。小檗碱处理组全细胞、胞质及核内β-catenin蛋白水平均明显较对照组低。外源性过表达β-catenin能减弱小檗碱对HCT116细胞增殖的抑制作用。小檗碱处理组β-catenin mRNA表达明显受到抑制。结论小檗碱能抑制HCT116细胞增殖并抑制Wnt/β-catenin信号转导,其机制可能与下调β-catenin mRNA表达有关。     

葫芦素B抑制神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖机制的初步研究

目的研究葫芦素B对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖的影响及其作用的分子机制。方法通过MTT法检测葫芦素B对SH-SY5Y细胞增殖的影响,流式细胞仪检测葫芦素B对SH-SY5Y细胞凋亡和生理水平上活性氧含量、线粒体膜电位的影响。Hoechst 33258染色检测药物处理前后细胞形态的变化。Westernblot检测葫芦素B处理SH-SY5Y细胞24 h前后Bcl-2、Bax、p21、p53等蛋白合成的变化。结果实验浓度范围内,葫芦素B可时间与浓度依赖性地抑制SH-SY5Y细胞增殖;浓度依赖性地诱导SH-SY5Y细胞凋亡、活性氧水平升高和线粒体膜去极化;在蛋白水平上,葫芦素B能诱导凋亡抑制蛋白Bcl-2下调,促凋亡蛋白Bax、p21、p53上调。结论葫芦素B在体外能显著抑制SH-SY5Y细胞增殖,这一影响可能通过诱导细胞凋亡、ROS积累、线粒体膜去极化及其相关蛋白表达变化来实现。     

甘露糖抑制宫颈癌HeLa细胞增殖和诱导凋亡的影响

目的 研究甘露糖抑制宫颈癌HeLa细胞增殖和诱导凋亡及其对Wnt/β-catenin通路的影响。方法 体外培养宫颈癌HeLa细胞,分为对照组(未经任何处理)和低、中、高剂量实验组(用甘露糖浓度为5、10、25 mmol·L^-1处理细胞)。以细胞计数试剂盒8(CCK-8)和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡情况,以蛋白质印迹法检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、p21、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Wnt/β-catenin通路相关蛋白的表达。结果 对照组和低、中、高剂量实验组的细胞抑制率分别为(0.00±0.13)%、(11.25±3.42)%、(23.78±3.41)%和(35.98±4.52)%,凋亡率分别为(4.59±0.35)%、(11.45±1.32)%、(18.47±2.01)%和(25.69±2.43)%, p21蛋白相对表达水平分别为0.21±0.03、 0.34±0.04、 0.51±0.06和0.69±0.05, Bcl-2蛋白相对表达水平分别为0.89±0.06、 0.67±0.04、 0.52±0.05和0.35±0.06, Bax蛋白相对表达...     

蛇床子素通过p53信号通路诱导人乳腺癌细胞株MCF-7凋亡

目的 探讨蛇床子素对人乳腺癌细胞株MCF-7的作用及其机制。方法 对数生长期的MCF-7 细胞用0,25,50,100 mmol·L^-1的蛇床子素处理。细胞培养48 h后,利用MTT检测细胞增殖;流式检测细胞凋亡和膜电位。RT-PCR检测p53、p21、BCL-2、Bax和CytC mRNA水平;免疫印迹法检测p53、p21、BCL-2、Bax 和CytC 表达。结果 蛇床子素可以成浓度依赖性诱导MCF-7 细胞增殖抑制和凋亡,上调Bax、p53、p21和CytC表达,下调 Bcl-2的表达以及细胞膜电位。结论 蛇床子素可通过激活p53信号通路而诱导MCF-7细胞凋亡。     

白藜芦醇抑制高糖诱导的肾脏系膜细胞增殖的机制研究

目的 探讨白藜芦醇(resveratrol,RSV)对高糖诱导的大鼠肾脏系膜细胞HBZY-1 cells(MCS)增殖的影响,并探讨其潜在作用机制。方法 将对数生长期细胞随机分为对照组、高糖组、RSV组。各组细胞培养48 h后,利用MTT检测各组HBZY-1细胞增殖;RT-PCR检测Wnt、β-catenin、Collagen-Ⅳ、TNF-α、IL-6 和MCP-1基因表达;ELISA检测TNF-α、IL-6 和MCP-1表达;Western blotting检测Wnt、β-catenin和Collagen-Ⅳ蛋白的变化。结果 与对照组相比,高糖组细胞增殖率、Wnt、β-catenin、Collagen-Ⅳ、TNF-α、IL-6 和MCP-1表达水平均明显增高(P<0.05)。与高糖组相比,RSV组细胞增殖率、Wnt、β-catenin、p-p65、Collagen-Ⅳ、TNF-α、IL-6和MCP-1表达水平均明显降低(P<0.05)。结论 RSV可通过抑制炎症而减轻高糖诱导的肾脏系膜细胞增殖,其机制与抑制Wnt/β-catenin/p65信号通路激活有关。     

姜黄素对肺癌细胞的放疗增敏作用及机制研究

目的 观察姜黄素对肺癌NCI-H446细胞的体外放疗增敏作用,探讨其可能的机制.方法 体外培养肺癌NCI-H446细胞,分为对照组、姜黄素处理组、X射线干预组以及联合干预组.对照组仅给予等体积培养基,姜黄素处理组给予不同浓度姜黄素处理48 h,X射线组采用X射线照射(剂量率250 cGy/min),联合治疗组细胞先采用姜黄素处理,之后使用X射线照射.采用MTT法检测各处理组细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中p53、p21、Bax、Bcl-2蛋白表达.结果 不同浓度的姜黄素对人肺癌NCI-H446细胞生长具有抑制作用;剂量为6～12 Gy的X线处理后,也可显著抑制NCI-H446细胞增殖;不同浓度姜黄素和8GyX线处理后,NCI-H446细胞增殖进一步降低,并与姜黄素浓度呈一定的剂量依赖性.流式细胞术结果显示:姜黄素和X射线照射均可促进细胞凋亡;2者联合使用与单纯姜黄素或X射线照射相比细胞凋亡显著增加,差异均有统计学意义(P＜0.05).Western blot结果显示:姜黄素与X射线均能诱导NCI-H446细胞中p53、p21和Bax蛋白表达,降低Bcl-2蛋白表达(P＜0.05).X射线与姜黄素联合处理后,p53、p21和Bax以及Bcl-2蛋白含量比单独作用变化显著,差异有统计计学意义(P＜0.05).结论 姜黄素对人NCI-H446细胞具有放疗增敏作用,其机制与诱导细胞凋亡,上调p53、p21蛋白及下调Bel-2/Bax表达有关.     

葛根素对人小细胞肺癌H446细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制研究

目的观察葛根素对人小细胞肺癌H446细胞增殖与凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法采用MTr比色法和流式细胞术检测葛根素对H446细胞增殖抑制和诱导凋亡的作用;免疫组化法检测葛根素对PCNA、Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。结果40、80μg/ml浓度的葛根素体外作用24、48h,对H446细胞有促增殖作用,在160—640μg／ml浓度范围内,葛根素能够抑制H446细胞的生长,并呈现良好的剂量依赖和时间依赖关系。435μg/ml的葛根素可以诱导H446细胞凋亡。检测葛根素对PCNA、Bax和Bcl-2蛋白表达的影响显示葛根素能够下调PCNA和Bcl-2蛋白的表达,上调Bax蛋白的表达。结论在一定浓度范围内,葛根素可能通过下调PCNA和Bcl-2蛋白的表达,上调Bax蛋白的表达而诱导H446细胞凋亡。     

多纳非尼抑制胆管癌TFK-1细胞增殖、迁移和侵袭及促进凋亡的机制研究

目的 研究多纳非尼抑制人胆管癌TFK-1细胞增殖、迁移和侵袭及促进凋亡的机制。方法 将人胆管癌TFK-1细胞分为对照组（加入等量的二甲基亚砜处理）,2、5、10μmol/L多纳非尼组。CCK-8法检测细胞增殖抑制率;平板克隆实验检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;蛋白质免疫印迹法检测通路蛋白Wnt、β-catenin、细胞周期蛋白-D1(Cyclin D1)、抗凋亡蛋白Bcl-2、促凋亡蛋白Bax的表达;免疫荧光实验检测β-catenin进入细胞核的变化。结果 随着多纳非尼浓度增加,TFK-1细胞增殖抑制率、凋亡率升高,平板克隆形成数、细胞迁移和侵袭数量逐渐减少,Wnt、β-catenin、Cyclin D1、Bcl-2表达均逐渐下降,Bax表达逐渐增高（P<0.05）;免疫荧光显示,与对照组比较,2μmol/L多纳非尼组能够抑制β-catenin进入细胞核（P<0.05）。结论多纳非尼可以抑制人胆管癌TFK-1细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin通路活化及促进细胞凋亡相关。     

Interferon-α2b and transforming growth factor-β1 treatments on HCC cell lines: Are Wnt/β-catenin pathway and Smads signaling connected in hepatocellular carcinoma?

Wnt/β-catenin pathway is often dysregulated in hepatocellular carcinoma (HCC). Activated β-catenin accumulates in the cytosol and nucleus and forms a nuclear complex with TCF/LEF factors like TCF4. Interferon-α (IFN-α) has recently been recognized to harbor therapeutic potential in prevention and treatment of HCC. Transforming Growth Factor-β1 (TGF-β1) is a mediator of apoptosis, exerting its effects via Smads proteins. One mode of interaction between Wnt/β-catenin and TGF-β1/Smads pathways is the association of Smads with β-catenin/TCF4. In this study we analyzed the effects of IFN-α2b and TGF-β1 treatments on Wnt/β-catenin pathway, Smads proteins levels, β-catenin/TCF4/Smads interaction and proliferation and apoptotic death in HepG2/C3A and Huh7 cell lines. IFN-α2b and TGF-β1 attenuated Wnt/β-catenin signal by decreasing β-catenin and Frizzled7 receptor proteins contents and the interaction of β-catenin with TCF4. Truncated β-catenin form present in C3A cell line also diminished after treatments. Both cytokines declined Smads proteins and their interaction with TCF4. The overall cellular response to cytokines was the decrease in proliferation and increase in apoptotic death. Treatment with Wnt3a, which elevates β-catenin protein levels, also generated the increment of Smads proteins contents when comparing with untreated cells. In conclusion, IFN-α2b and TGF-β1 proved to be effective as modulators of Wnt/β-catenin pathway in HCC cell lines holding both wild-type and truncated β-catenin. Since the inhibition of β-catenin/TCF4/Smads complexes formation may have a critical role in slowing down oncogenesis, IFN-α2b and TGF-β1 could be useful as potential treatments in patients with HCC.     

Protective effects of puerarin on alcohol-induced oxidative injury in PC12 cells

OBJECTIVE The aim of this study was to investigate the protective effect of puerarin on alcoholtoxicity in rat pheochromocytoma cell line(PC12). METHODS The PC12 cells were incubated with different concentrations of puerarin in advance. The protective effects of the puerarin on alcohol induced PC12 cel impairment were evaluated according to the fol owing approach: the viability of PC12 cel was determined by MTT assay and the impairment level was evaluated by analysis the leakage content of the lactate dehydrogenase(LDH). The cel apoptosis degree and the pro-apoptotic p53 protein expression were measured by flow cytometry. RESULTS Alcohol significantly impaired PC12 cel viability(P<0.05),and increased LDH leakage(P<0.05),induced cell apoptosis and upregulated expression of p53(P<0.05).While Puerarin significantly reversed these changes(P<0.05). CONCLUSION Puerarin might exert protection effect against ethanol-induced neurotoxicity via inhibition the expression of p53 protein.     

维生素C体外抑制宫颈癌H eLa细胞株生长及其机制的研究

目的探讨维生素C对人宫颈癌HeLa细胞生长和凋亡的影响,并初步探讨其机制。方法用MTT比色法检测细胞生长抑制作用,流式细胞术测定各组细胞周期分布和凋亡率,以间接免疫荧光法流式细胞术检测相关蛋白的表达,以TRAP-PCR-ELISA法测定端粒酶活性。结果维生素C能以浓度依赖和时间依赖方式阻滞HeLa细胞于G0/G1期,抑制其生长并诱导凋亡。同时HPV18 E6、Bc l-2蛋白表达下调,wtp53、Bax蛋白表达上调,端粒酶活性降低。结论维生素C可抑制HeLa细胞生长,使其细胞周期阻滞于G0/G1期,并诱导其凋亡;其原因在于病毒癌基因E6表达的降低,以及由此而引起的端粒酶活性的降低和细胞内蛋白表达水平的改变,包括HPV18 E6、Bc l-2蛋白表达的下调,wtp53、Bax蛋白表达的上调。     

葛根素下调基质金属蛋白酶-16表达影响乳腺癌细胞的生物学行为

目的：探讨葛根素通过下调基质金属蛋白酶-16（matrix metalloproteinase-16,MMP-16）表达抑制MCF-7乳腺癌细胞的增殖并促进细胞凋亡行为的调控及其机制。方法：qPCR检测不同浓度的葛根素对乳腺癌细胞的活性影响情况;分析葛根素对乳腺癌细胞增殖行为的影响情况;流式细胞术实验检测葛根素对乳腺癌细胞周期的影响;Western blotting实验检测葛根素对乳腺癌细胞中基质金属蛋白酶-16表达情况的影响。结果：1 μmol·L^-1的葛根素对乳腺癌细胞的活力的抑制作用最佳;随着时间的进展,葛根素对乳腺癌细胞的增殖能力的直接抑制作用,可以在一定程度上干扰乳腺癌细胞的生长进程;葛根素对乳腺癌细胞的凋亡行为有一定的促进作用;合适浓度葛根素对乳腺癌细胞中MMP-16蛋白有直接的干扰作用。结论：葛根素通过下调基质金属蛋白酶-16表达抑制MCF-7乳腺癌细胞的增殖并促进细胞凋亡行为。     

Proteasome inhibitor inhibits proliferation and induces apoptosis in renal interstitial fibroblasts

BackgroundThe ubiquitin proteasome pathway plays a pivotal role in controlling cell proliferation, apoptosis and differentiation in a variety of normal and tumor cells. This study aimed to investigate the role of a proteasome inhibitor on proliferation, apoptosis and related proteins in renal interstitial fibroblasts (NRK-49F).MethodsNRK-49F cells were induced using transforming growth factor-β1 (TGF-β1) and pretreated with the proteasome inhibitor MG-132. Cell proliferation was measured using 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT). The cell cycle and apoptosis were analyzed using flow cytometry. Apoptosis was also analyzed using a DNAladder. The protein expression of p53, p27, p21, caspase-3, Bcl-2 and Bax was examined using western blots.ResultsThe results showed that TGF-β1 (5 ng/ml) can stimulate the proliferation of NRK-49F cells.MG-132 (0.25–5 μM) inhibited TGF-β1-induced proliferation in a dose-dependent manner through G1-arrest; TGF-β1 alone did not induce apoptosis (3.8 ± 0.4% vs. 4.7 ± 1.6%). However, pretreatment with MG-132 significantly induced apoptosis in TGF-β1-stimulated NRK-49F cells in a dosedependentmanner. AtypicalDNAladderwas also confirmed in these two groups.Western blot analysis showed thatMG-132 activated p53, p21, caspase-3 and Bax, and inhibited Bcl-2 in a dose-dependent manner, while p27 expression remained unchanged.ConclusionsA proteasome inhibitor inhibited proliferation and induced apoptosis in renal interstitial fibroblasts stimulated by TGF-β1. The mechanism may relate to the p53, p21, caspase-3, Bcl-2 and Bax pathways. Our results suggest that a proteasome inhibitor could be a new strategy to treat renal interstitial fibrosis.