荔枝核皂苷对糖调节受损大鼠胰腺组织氧化应激的改善作用及其机制

目的：研究荔枝核皂苷（SL）对糖调节受损（IGR）大鼠氧化应激及核转录因子E2相关因子2（Nrf2）/血红素加氧酶1（HO-1）信号通路的作用,阐明其相关机制。方法：采用高脂饲料喂养制备IGR大鼠模型,随机分为模型组、二甲双胍组（0.20 g·kg^-1）、低剂量SL组（0.05 g·kg^-1）、中剂量SL组（0.10 g·kg^-1）和高剂量SL组（0.20 g·kg^-1）,同时设正常对照组,每组12只,连续给药6周。观察SL对实验大鼠糖脂代谢的影响,采用实时荧光定量（Real-time PCR）法检测大鼠胰腺组织中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）和HO-1 mRNA表达水平,Western blotting法检测大鼠胰腺组织胞核、胞质Nrf2和全细胞HO-1蛋白表达水平,采用SOD和MDA试剂盒检测大鼠胰腺组织中SOD活性和MDA水平。结果：与正常对照组比较,模型组大鼠空腹血糖（FBG）和血脂水平明显升高（P<0.05或P<0.01）,胰腺组织中SOD活性和mRNA表达水平降低（P<0.01）,MDA水平和mRNA表达水平升高（P<0.01）,胞核和胞质中Nrf2蛋白表达水平和核转位率升高（P<0.01）,HO-1 mRNA和蛋白表达水平升高（P<0.05或P<0.01）。与模型组比较,二甲双胍组和中、高剂量SL组大鼠FBG和血清甘油三酯（TG）水平明显降低（P<0.05或P<0.01）,胰腺组织中SOD活性和mRNA表达水平升高（P<0.05或P<0.01）,MDA水平和mRNA表达水平降低（P<0.05或P<0.01）,胞质中Nrf2表达水平降低（P<0.05或P<0.01）,胞核中Nrf2表达水平和核转位率升高（P<0.05或P<0.01）,HO-1 mRNA和蛋白表达水平升高（P<0.05或P<0.01）。结论：SL具有改善糖脂代谢和增强抗氧化应激作用,其作用机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路、促进Nrf2核转位及增强下游抗氧化基因HO-1表达有关。     

Nrf2/HO-1信号轴在氧化应激性疾病中的机制

在氧化应激性疾病发生发展过程中,活性氧(reactive oxygen species,ROS)的清除障碍或生成过多导致爆发性释放后,可损伤机体各组织器官。最新研究证明：核因子E2相关因子2/血红素加氧酶-1(nuclear factor erythroid-2-related actor 2/heme oxygenase 1,Nrf2/HO-1)信号轴通过发挥抗炎、抗氧化、减少线粒体损伤、调节钙离子内流、调控细胞凋亡(apoptosis)、焦亡(pyroptosis)、铁死亡(ferroptosis)及自噬(autophagy)等作用,抵抗氧化应激损伤,这为它在不同脏器(呼吸、心血管、神经、消化、泌尿、血液)的氧化应激性疾病中的治疗潜力提供了分子机制上的理论基础。因此,有效调控Nrf2/HO-1信号轴可成为治疗氧化应激性疾病的重要靶点。     

雌激素对D-半乳糖诱导的HEI-OC1细胞氧化应激损伤的作用

目的 探讨雌激素对D-半乳糖诱导耳蜗毛细胞氧化应激的影响及相关分子机制。方法 体外培养小鼠耳蜗毛细胞株HEI-OC1(house ear institute-organ of Corti 1),分为空白对照组、D-半乳糖组(20 mg/mL)和雌激素+D-半乳糖组(20 mg/mL D-半乳糖+10 nmol/L β-雌二醇)。CCK-8法检测各组HEI-OC1细胞增殖情况;利用DCFH-DA探针技术检测各组HEI-OC1细胞内的ROS含量;利用超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒检测各组HEI-OC1细胞内氧化应激因子SOD含量;Western blot检测各组细胞核因子E2相关蛋白(Nrf2)、血红素加氧酶(HO-1)的蛋白表达水平。结果 与空白对照组相比,D-半乳糖组细胞增殖活性减弱(P<0.01),ROS含量显著上升(P<0.01),SOD活力和Nrf2、HO-1蛋白表达水平显著下降(P<0.01)。与D-半乳糖组相比,雌激素+D-半乳糖组细胞增殖活性增加(P<0.01),ROS水平显著下降(P<0.01),同时,SOD活力和Nrf2、HO-1蛋白表达水...     

褪黑素对精神分裂症模型大鼠海马神经元氧化应激损伤的保护作用

目的：研究褪黑素（MT）对精神分裂症模型大鼠海马神经元氧化应激损伤的保护作用及机制。方法：60只雄性SD大鼠被分为5组：对照组、模型组、模型+MT低剂量组（12.5 mg/kg）、模型+MT高剂量组（25 mg/kg）、模型+MT受体阻断剂组（Luzindole,1 mg/kg）,每组12只。采用腹腔注射MK-801的方法建立精神分裂症大鼠模型,造模成功后,模型+MT低剂量组、模型+MT高剂量组以及模型+MT受体阻断剂组均腹腔注射相应药物,对照组及模型组注射10%无水乙醇溶液,持续21 d。采用Morris水迷宫实验检测大鼠的学习记忆功能,试剂盒法检测海马组织匀浆液中氧化应激相关因子ROS、SOD、MDA含量,免疫组织化学法检测神经元标记蛋白NeuN的表达,Western blot法检测海马核因子E2相关因子2（Nrf2）、血红素加氧酶-1（HO-1）蛋白水平。结果：与对照组比,模型组大鼠学习记忆功能受损,海马ROS、MDA含量显著增加,SOD活性下降,NeuN阳性细胞数明显减少,海马Nrf2、HO-1蛋白表达显著升高（均P＜0.05）;与模型组比,模型+MT高剂量组大鼠学习与记忆功能均有较明显的改善,海马ROS、MDA含量均下降,SOD活性升高,NeuN阳性表达增加,Nrf2、HO-1蛋白表达显著升高（均P＜0.01）。与模型+MT高剂量组比,模型+MT受体阻断剂组大鼠学习记忆功能受损,海马ROS含量上升,NeuN阳性表达下降,Nrf2、HO-1蛋白表达下降（P＜0.05）。结论：MT具有保护精神分裂症大鼠海马神经元氧化应激损伤的作用,其机制与调控Nrf2/HO-1信号通路有关。     

氧化应激下大鼠肝星状细胞增殖情况及硫化氢含量的变化

目的了解氧化应激（Oxidative stress）下肝星状细胞（Hepaticstellate cell,HSC）的增殖情况以及细胞中硫化氢（Hydrogen sulphide,H2S）含量的变化,初步探讨H2S在肝纤维化（Hepatic fibrosis）中的作用。方法利用铁超载体外培养细胞的氧化应激模型,给予不同浓度的外源性H2S供体NaHS和KATP通道阻断剂格列本脲（glibenclamide,GLBN）,用MTT检测各组细胞的生长曲线;用敏感硫电极检测各组细胞上清液中H2S含量的变化。结果给予FeNTA后HSC增殖,其OD值随着NaHS浓度的增加和时间的延长而下调;给予GLBN后细胞增殖情况与前者相反;细胞增殖下调时细胞上清液和裂解液中的H2S含量升高,细胞增殖上调时H2S含量降低。结论H2S在氧化应激下能抑制HSC增殖,具有细胞保护作用。     

对比剂对维持性血液透析患者氧化应激状态的影响

目的:评估维持性血液透析(maintenance hemodialysis,MHD)患者注射对比剂后氧化应激水平的时序变化,同时观察患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中核因子E2-相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)和血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)的变化?方法:选取30例未用对比剂进行CT检查的MHD患者(MHD-对照组)?30例应用对比剂行增强CT检查的MHD患者(MHD-CM组)和30例应用对比剂行增强CT检查的肾功能正常体检者(nonHD-CM组),检测患者氧化应激指标:晚期蛋白质氧化物(advanced oxidation protein products,AOPP)?8-羟基脱氧鸟嘌呤核苷(8-hydroxydeoxyguanosine,8-OHdG)和丙二醛(malondialdehyde,MDA),同时应用Western blot检测患者PBMC中Nrf2核蛋白和HO-1总蛋白表达情况?结果:MHD-CM组AOPP?8-OHdG和MDA水平增高且持续时间长,AOPP和MDA水平在CT检查后28 d仍维持在高水平?nonHD-CM组血清AOPP?8-OHdG和MDA水平在增强CT检查后1 d升高,7 d内恢复到CT检查前的水平?增强CT检查后1 d,MHD-CM组患者PBMC中Nrf2核蛋白和HO-1总蛋白的表达水平无明显变化(P > 0.05),而nonHD-CM组显著增加(P均 < 0.01)?结论:MHD患者应用对比剂可引起较长时间的氧化应激,估计与MHD患者排泄对比剂能力下降和Nrf2活化障碍有关?     

姜酮通过激活Nrf2/HO-1信号通路减轻OGD/R后氧化应激损伤对HT22细胞凋亡的抑制作用

目的：探讨姜酮对氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)后小鼠海马神经元HT22细胞的保护作用,阐明其相关作用机制。方法：培养HT22细胞,设置不同OGD/R时间梯度,建立OGD/R细胞损伤模型。HT22细胞分为对照组、OGD/R组、OGD/R+1μmol·L^-1姜酮组、OGD/R+10μmol·L^-1姜酮、OGD/R+100μmol·L^-1姜酮组和OGD/R+0.2%二甲亚枫(DMSO)组,CCK-8法检测各组细胞活性并计算各组细胞存活率,确定姜酮最适药物浓度。细胞分为对照组、OGD/R组、OGD/R+姜酮组和OGD/R+姜酮+核因子E2相关因子2 (Nrf2)抑制剂(ML385)组,OGD/R+姜酮组细胞经姜酮给药处理4 h后予以OGD 8 h和复糖复氧8 h处理,OGD/R+姜酮+ML385组细胞在姜酮给药前予以10μmol·L^-1 ML385预处理6 h, CCK-8法检测各组细胞活性,Western blotting法检测各组细胞中Nrf2、血红素加氧酶1 (HO-1)、B细胞淋巴瘤2 (Bcl-...     

核转录因子-κB与肝星状细胞凋亡

核转录因子-κB(nuclearfactor kappa B,NF-κB)是一个重要的转录调控因子,存在于多种组织的多种细胞中,参与许多病理、生理过程的基因调控,并在细胞的抗凋亡过程中起着至关重要的作用.     

甘草酸对高糖诱导的肾小球系膜细胞氧化应激损伤的影响

目的 探讨甘草酸(GA)对高糖诱导的肾小球系膜细胞氧化应激损伤的影响.方法 将HBZY-1细胞分为:正常对照组(NG组)、高糖组(HG组)、高糖+GA组(HG+GA组).采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性.用紫外分光光度法检测超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平,用激光共聚焦检测活性氧(ROS)变化.采用免疫组织化学和Westernblot检测锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)蛋白的表达,用Q-PCR检测Mn-SOD mRNA.结果 (1)各组HBZY-1细胞形态变化:HBZY-1细胞为菱形,NG组细胞形态正常,结构清晰可辨;HG+GA组细胞数量略增多,个别细胞胞体略肥大;HG组细胞结构不甚清晰,细胞扁平,数量明显增多,胞体略肥大.(2)各组HBZY-1细胞的增殖效应:与NG组相比,HG组OD值明显升高(P＜0.05),HG+ GA组与HG组相比OD值降低(P＜0.05).(3)RDS含量:HG组RDS相对含量较NG组有所上升,HG+GA组ROS相对含量下降(P＜0.05).(4)各组细胞中Mn-SOD的表达:与NG组相比,HG组Mn-SOD相对表达减少(P＜0.05),HG+GA组与HG组相比Mn-SOD表达升高(P＜0.05).结论 GA对高糖诱导的HBZY-1细胞异常增殖有一定的抑制作用,GA可通过氧化应激保护高糖诱导肾小球系膜细胞所致的细胞肥大和细胞损伤,GA能调节高糖诱导下Mn-SOD的表达.     

黄杞苷对H2O2诱导SH-SY5Y细胞氧化应激损伤的保护作用

目的探讨黄杞苷对H₂O₂诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用与分子机制。方法黄杞苷(5、10、20、40、80和160μmol·L^-1)预处理SH-SY5Y细胞12 h, MTT法检测黄杞苷对H₂O₂诱导损伤后细胞活力的影响;通过氮蓝四唑(NBT)法总超氧化物歧化酶(SOD)活力检测试剂盒和总谷胱甘肽过氧化物酶(NADPH)检测试剂盒测定黄杞苷对H₂O₂诱导损伤后SOD和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力的影响;通过流式细胞术对SH-SY5Y细胞进行活性氧(ROS)水平的测定。黄杞苷(20μmol·L^-1)预处理SH-SY5Y细胞12 h, H₂O₂孵育6、12和24 h或用黄杞苷(5、10和20μmol·L^-1)预处理细胞12 h, H₂O₂孵育12 h,采用Western blot法分别检测Nrf...     

虎杖苷抑制肝星状细胞增殖活化的作用和机制研究

目的:研究虎杖苷 (Polydatin) 在体外对HSC-T6细胞的影响,探讨虎杖苷抑制肝纤维化发生的作用及相关机制。方法:体外培养大鼠肝星状细胞HSC-T6,分为对照组和虎杖苷低、中、高浓度（125、250、500 μmol/L）给药组。MTT法检测细胞增殖情况;比色法检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶（LDH）的活性;酶消化法检测细胞培养上清液中羟脯氨酸（Hyp）的含量;蛋白印迹法检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原（CollagenⅠ）、核因子NF-E2相关因子2（Nrf2）和血红素加氧酶-1（HO-1）蛋白表达水平。多组间比较采用单因素方差分析,若方差齐则采用LSD检验,若方差不齐采用Dunnett T3检验,以P<0.05认为差异有统计学意义。结果:与对照组比较,虎杖苷125、250、500 μmol/L给药组细胞活力显著降低（F=252.01, P<0.001）,Hyp含量明显减少（F=16.50,P<0.05）,α-SMA和CollagenⅠ蛋白表达显著减少（F=19.89、182.91, 均P<0.05）,且随着浓度的增加,抑制作用越强,呈一定的剂量依赖性;与对照组比较,虎杖苷125、250、500 μmol/L给药组Nrf2蛋白表达显著增加（F=23.70,P<0.05）,虎杖苷250、500 μmol/L给药组HO-1蛋白表达显著增加（F=12.40,P<0.01）,且随着浓度增加,上调作用越明显,呈一定的剂量依赖性。结论:虎杖苷通过抑制肝星状细胞增殖活化及胶原合成发挥抑制肝纤维化发生的作用,该作用可能与其上调Nrf2/HO-1通路有关。     

霉酚酸酯对糖尿病大鼠模型肾组织氧化应激的影响

目的探讨霉酚酸酯(MMF)对糖尿病大鼠模型肾组织氧化应激的影响.方法建立单侧肾切除糖尿病模型,大鼠随机分为对照组、糖尿病组与糖尿病MMF 10 mg/(kg*d),灌胃为给药组,每组 10只.8周末观察体重、肾重、肾重/体重及24 h尿白蛋白排泄率 (AER)变化,并检测肾组织与尿丙二醛(MDA)含量及肾组织超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)与谷光甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性.结果 MMF给药组可明显抑制糖尿病大鼠模型肾重、肾重/体重、AER的增加(P<0.05, P<0.01).与对照组相比,糖尿病模型组肾组织及尿MDA含量明显增加(P<0.01),肾组织SOD、CAT、GSH-PX活性明显下降(P<0.05, P<0.01);MMF给药组可明显降低肾组织及尿MDA含量,提高肾组织SOD、CAT、GSH-PX活性(P<0.05).结论 MMF对糖尿病大鼠肾脏有明显保护作用,其机制可能部分与抑制肾组织氧化应激有关.     

胍丁胺对脂多糖诱导RAW264.7细胞氧化应激损伤的保护作用

目的 探讨胍丁胺(agmatine,AGM)对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7氧化应激的抑制作用及其机制.方法 RAW264.7细胞经LPS(10 μg/mL)刺激发生氧化应激,同时AGM(1 mmol/L)对其进行干预.分为对照组、LPS组、LPS+AGM组、AGM组.药物作用24 h,以2,7-二氢二氯荧光素二乙酸酯(2 ',7'-dichlorofluoresce in diacetate,DCFH-DA)为荧光探针检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;Griess法检测细胞内一氧化氮(NO)水平;Western blot检测细胞内的iNOS蛋白及细胞质细胞核内Nrf2蛋白表达;RT-PCR检测Nrf2下游抗氧化酶血红素氧合酶(heme oxygenase-1,HO-1)mRNA的表达.结果 与对照组相比,LPS可显著增加RAW264.7细胞中ROS、NO以及iNOS蛋白水平,而AGM干预后上述指标含量均明显降低(P＜0.05).AGM干预组中细胞核的Nrf2表达及其下游分子HO-1 mRNA表达水平较LPS单独刺激组显著升高,表明Nrf2信号通路在AGM的作用下被活化.结论 AGM可通过活化转录因子Nrf2促进抗氧化酶HO-1的表达,进而减轻细胞内的氧化应激损伤.     

金丝桃苷通过激活Keap1/Nrf2/HO-1通路保护小鼠GC-2细胞的氧化损伤

目的 从Keap1/Nrf2/HO-1通路角度研究金丝桃苷（Hyp）对H2O2所诱导的小鼠精母细胞（GC-2）氧化损伤的保护作用。方法 将GC-2细胞随机分为正常组、模型组、氮乙酰半胱氨酸组（阳性组,NAC,2.5 mmol/L)以及金丝桃苷组（50、100、200 μmol/L）,各组按剂量孵育48 h后,除正常组外其余各组细胞加入H2O（2 150 μmol/L）处理2 h,正常组给予等容量培养基。采用CCK-8法检测细胞的活力,流式细胞仪检测细胞凋亡水平,酶联免疫法检测超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）、过氧化氢酶（CAT）活力以及丙二醛（MDA）含量,Western blot和RT-qPCR检测Nrf2、Keap1、HO-1蛋白及mRNA的相对表达水平,免疫荧光法检测Nrf2核转位水平。结果 150 μmol/L H2O2干预2 h可制备GC-2细胞氧化损伤模型。与正常组比较,模型组GC-2细胞增殖率以及SOD、GSH、CAT活力显著降低,MDA含量、细胞凋亡率,Keap1和Nrf2 mRNA表达显著升高（P<0.05）以及Keap1蛋白表达水平显著升高（P<0.01）。与模型组比较,NAC组和金丝桃苷200 μmol/L组细胞增殖率和SOD、GSH-PX、CAT活力显著升高,MDA含量、细胞凋亡率显著下降（P<0.05）;金丝桃苷200 μmol/L组Keap1 mRNA表达显著下降,HO-1 mRNA表达显著升高（P<0.01）;金丝桃苷200 μmol/L组Nrf2核蛋白（NEs-Nrf2）以及HO-1的蛋白表达显著升高（P<0.05）,Keap1蛋白表达显著下降（P<0.01）;金丝桃苷组出现了明显的核转位现象（P<0.05）。结论 金丝桃苷可能通过激活Keap1/Nrf2/HO-1信号通路,对H2O2诱导的GC-2细胞氧化损伤具有保护作用。     

奥曲肽对大鼠肝星状细胞增殖的抑制作用

目的：观察奥曲肽（OCT）对肝星状细胞（HSC）Ⅰ型、Ⅲ型胶原和基质金属蛋白酶2（MMP-2）基因及蛋白表达的影响,阐明其抗肝纤维化的机制。方法：体外培养rHSC-99细胞,以不同浓度OCT作用24　h后,MTT法观察细胞增殖,ELISA法测定上清液中Ⅰ型、Ⅲ型胶原,半定量RT-PCR法检测MMP-2、Ⅰ型及Ⅲ型胶原mRNA表达。结果：与对照组比较,OCT能显著抑制体外培养的rHSC-99增殖(P<0.05),在一定剂量范围（1～8 μg?L-1）内,随着OCT浓度升高,细胞增殖抑制率增加。与对照组比较,OCT各组细胞上清液中Ⅰ型、Ⅲ型胶原浓度明显降低(P<0.05),且Ⅰ型、Ⅲ型胶原mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。与对照组比较,OCT组MMP-2 mRNA呈高表达（P<0.05)。结论：OCT能抑制HSC增殖,下调Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA及其蛋白表达,上调MMP-2 mRNA表达水平,这可能是其抗肝纤维化作用机制之一。     

甘草酸对黄芩苷增溶作用的研究

目的 通过测定不同配比黄芩甘草合煎液的表面张力及指标性成分含量,探讨甘草酸对黄芩苷增溶作用的机制.方法 采用Wilhelmy吊片法测定不同配比黄芩甘草合煎液的表面张力;采用HPLC测定不同配比条件下黄芩苷含量和甘草酸的浓度,并作出二者之间的关系图.结果 黄芩甘草的比例为3∶2时,黄芩苷的提取率最高,此时甘草酸的临界胶束浓度是0.22 g/L.在0.22 g/L之前,随着甘草酸浓度的增大,黄芩苷的溶出度逐渐增大;当甘草酸浓度达到0.22 g/L后,黄芩苷的溶出度不再增加.结论 甘草酸对黄芩苷有一定的增溶作用,并且在达到它的临界胶束浓度0.22 g/L时,增溶作用最大.     

甘草酸及其苷元甘草次酸的盐皮质激素样作用研究进展

甘草酸在体内水解成甘草次酸,甘草次酸的化学结构类似于甾体激素,因此甘草酸是甘草次酸的前体药物。甘草酸和甘草次酸是甾体激素代谢失活酶（尤其是Ⅱ型11β-羟化甾体脱氢酶）抑制剂,可提高内源性和外源性皮质激素的活性。甘草酸和甘草次酸又可作为配体,与皮质激素受体结合呈现出糖皮质激素、盐皮质激素样作用。因此长期使用甘草或甘草酸类药物产生的盐皮质激素样作用可用于艾迪生病的治疗,但用于其他疾病治疗时,盐皮质激素样作用就有可能成为不良反应（主要表现为假性醛固酮增多症或高血压）,约占甘草和甘草酸类药物不良反应的50%以上;并对其引起假性醛固酮增多症或高血压的机制进行了讨论。