microRNA-23b对Aβ25-35导致神经细胞凋亡的作用及机制研究

为了研究miR-23b对阿尔茨海默病（Alzheimer′s disease，AD）细胞模型的作用及机制，采用Aβ_25-35诱导SH-SY5Y细胞损伤建立细胞模型；采用Annexin V-FITC/PI双染结合流式细胞术检测转染miR-23b对Aβ_25-35诱导SH-SY5Y细胞凋亡情况的影响；采用JC-1探针检测转染miR-23b对Aβ_25-35损伤SH-SY5Y细胞后细胞内线粒体膜电位的影响；采用Western blot检测转染miR-23b对Aβ_25-35诱导SH-SY5Y细胞内凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2以及自噬相关蛋白p62、LC3B、Beclin-1表达水平的变化。结果显示：miR-23b能够改善Aβ_25-35诱导SH-SY5Y细胞的凋亡水平和异常的线粒体膜电位，并缓解Aβ_25-35引起的神经细胞凋亡蛋白和自噬蛋白表达的异常，提示miR-23b能够改善Aβ_25-35导致的凋亡通路和自噬通路异常，进而缓解Aβ_25-35导致的神经细胞凋亡。     

藁本内酯预处理对Aβ25-35诱导人脑神经瘤母细胞SH-SY5Y细胞毒性的保护作用

目的探讨藁本内酯(Z-ligustilide,LIG)对β淀粉样蛋白(Aβ)25-35引起的人脑神经瘤母细胞SH-SY5Y细胞毒性的保护作用。方法 0.1、1.0、2.5、5.0μg/mL LIG作用于SH-SY5Y细胞,24h后以50μmol/LAβ25-35诱导SH-SY5Y细胞凋亡建立阿尔茨海默病体外模型,MTT法检测细胞活性,Western blot法检测细胞中凋亡蛋白含量。结果经Aβ25-35处理后,细胞存活率下降,细胞内凋亡相关蛋白——Bax、cleaved caspase3、细胞色素C、caspase8表达上调,但Bcl-2蛋白表达下降(P均<0.05)。细胞经过LIG一定浓度预处理,细胞存活率提高,凋亡相关蛋白——Bax、cleaved caspase3、细胞色素C、caspase8蛋白表达下降,Bcl-2表达上升(P均<0.05)。结论 LIG具有对Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞毒性的保护作用,其机制可能是抑制Aβ诱导的细胞凋亡。     

异钩藤碱通过mTOR非依赖性途径诱导SH-SY5Y细胞自噬发生

目的探讨异钩藤碱(Isorhynchophylline,IRN)人胶质瘤细胞SH-SY5Y细胞自噬的发生及其与mTOR信号通路的关系。方法用不同浓度IRN(6、12和24μmol/L)处理SH-SY5Y细胞24 h,免疫印迹法检测自噬标志性蛋白LC3-Ⅱ的表达,免疫荧光法观察微管相关蛋白轻链3(LC3)荧光斑点标记的自噬体形成,利用溶酶体稳定剂氯喹(CQ)以及自噬抑制剂3-MA进一步明确IRN作用的途径。Western蛋白印迹法检测mTOR相关蛋白和Beclin1的表达。结果 IRN作用SH-SY5Y细胞24 h后,可显著上调LC3-Ⅱ表达,0、6、12、24μM IRN作用后的相对表达量分别为(0.086±0.02)、(0.39±0.14)、(0.96±0.09)、(1.93±0.14)。自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值增高(P0.01),并呈浓度依赖性,SH-SY5Y细胞内GFP-LC3荧光斑点标记的自噬体增多,在IRN不同浓度处理组(0、6、12、24μM)中分别为2±1/细胞,4±1/细胞,8±1/细胞,和14±2/细胞。IRN联合CQ后可以促进LC3-Ⅱ的表达(0.64±0.052)。IRN可以削弱a-Syn蛋白表达,在0、6、12、24μM组中的相对表达量为(0.71±0.07)、(0.69±0.05)、(0.53±0.04)、(0.36±0.034),并呈浓度依赖性,联合3-MA后a-Syn表达上调(0.63±0.04),提示3-MA可以逆转由IRN对a-Syn的抑制效果,而CQ对a-Syn表达,与对照组比无显著影响。信号通路研究提示,对mTOR以及Beclin1表达不影响,Beclin1特异性si RNA作用后可以抑制IRN诱导的LC3-Ⅱ表达。结论 IRN可诱导SHSY5Y细胞自噬的发生,其机制为mTOR非依赖性自噬途径,Beclin1的表达可以影响IRN诱导的自噬。     

钙蛋白酶在TOCP诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞自噬中的调节作用

目的探究钙蛋白酶对三邻甲苯基磷酸酯(TOCP)诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞自噬的调节作用。 方法不同浓度TOCP处理未分化和分化的SH-SY5Y细胞,用荧光分光光度法检测钙蛋白酶活性。抑制钙蛋白酶活性后,通过Western blotting检测TOCP对自噬相关蛋白的影响；抑制钙通道后,用荧光分光光度法检测胞质钙离子浓度对钙蛋白酶活性的影响。 结果TOCP诱导未分化和分化的SH-SY5Y细胞钙蛋白酶活性上升；钙蛋白酶抑制剂可降低TOCP诱导的自噬相关蛋白LC3-II和Beclin1表达。维拉帕米和2-APB阻断钙通道后钙蛋白酶活性降低,维拉帕米而非2-APB可以抑制TOCP诱导的自噬相关蛋白LC3-II表达。 结论TOCP在未分化和分化的SH-SY5Y细胞中诱导的自噬受钙蛋白酶活性的调节。     

促红细胞生成素对β-淀粉样蛋白诱导细胞凋亡的保护作用

目的探讨促红细胞生成素(Epo)对凝聚态β-淀粉样蛋白25~35片断(Aβ25-35)诱导细胞凋亡的影响。方法人神经母细胞瘤细胞株(SH-SY5Y)体外传代培养,细胞进入对数生长期后进行实验。MTT比色法检测不同浓度Aβ25-35作用24 h后细胞活力变化;Hoechst 33258核染色和Western blotting法分别观察和检测20μmol/L Aβ25-35作用24 h后,细胞形态及细胞caspase-3、cleaved caspase-3水平的变化。运用同样方法检测不同浓度Epo预处理3 h,对20μmol/L Aβ25-35作用24 h所致细胞活力、细胞形态以及caspase-3和cleaved caspase-3水平改变的影响。结果结果显示不同浓度的Aβ25-35作用24 h后,SH-SY5Y细胞活力均明显下降,并呈剂量依赖性(P<0.05);10 UEpo预处理可明显抑制Aβ25-35诱导的细胞活力下降(P<0.05)。Hoechst 33258核染色发现10 UEpo预处理可明显减轻Aβ25-35诱导的细胞凋亡现象(P<0.05);Western blotting检测表明,10 U Epo可显著抑制Aβ25-35诱导的cleaved caspase-3表达增高(P<0.05)。结论Epo通过抑制Aβ25-35引起的cleaved caspase-3表达增高而对其诱导的细胞凋亡发挥保护作用。本实验为研究阿尔茨海默病的发病机制及探索新的有效治疗药物提供了重要的理论基础。     

促红细胞生成素对β-淀粉样蛋白诱导细胞凋亡的保护作用

目的 探讨促红细胞生成素(Epo)对凝聚态β-淀粉样蛋白25～35片断(Aβ25-35)诱导细胞凋亡的影响.方法 人神经母细胞瘤细胞株(SH-SY5Y)体外传代培养,细胞进入对数生长期后进行实验.MTT比色法检测不同浓度Aβ25-35作用24 h后细胞活力变化;Hoechst 33258核染色和Western blotting法分别观察和检测20 μmol/L Aβ25-35作用24 h后,细胞形态及细胞caspase-3、cleaved caspase-3水平的变化.运用同样方法检测不同浓度Epo预处理3 h,对20μmol/L Aβ25-35作用24 h所致细胞活力、细胞形态以及caspase-3和cleaved caspase-3水平改变的影响.结果 结果显示不同浓度的Aβ25-35作用24 h后,SH-SY5Y细胞活力均明显下降,并呈剂量依赖性(P＜0.05);10 U Epo预处理可明显抑制Aβ25-35诱导的细胞活力下降(P＜0.05).Hoechst 33258核染色发现10 U Epo预处理可明显减轻Aβ25-35诱导的细胞凋亡现象(P＜0.05);Western blotting检测表明,10 U Epo可显著抑制Aβ25-35诱导的cleaved caspase-3表达增高(P＜0.05).结论 Epo通过抑制Aβ25-35引起的cleaved caspase-3表达增高而对其诱导的细胞凋亡发挥保护作用.本实验为研究阿尔茨海默病的发病机制及探索新的有效治疗药物提供了重要的理论基础.     

氧糖剥夺(OGD)诱导SH-SY5Y细胞自噬性死亡

目的探讨应用体外氧糖剥夺(Oxygen-glucose Deprivation,OGD)模型诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞自噬性死亡与自噬过程的潜在作用机制。方法应用自噬抑制剂(3-Methyladenine,3MA)和siRNA沉默ATG5的表达后,OGD处理24小时,LDH检测各组细胞的死亡率(P0.01);Western blotting检测各组细胞中自噬相关蛋白的表达水平。结果 OGD诱导SH-SY5Y细胞自噬水平升高;细胞死亡率增加,应用3MA和siRNA技术沉默ULK1基因后,细胞死亡率(P0.05)及自噬蛋白Beclin1、LC3蛋白表达水平显著降低,P62蛋白表达水平升高。结论自噬参与并促进了OGD诱导SH-SY5Y细胞死亡。     

稳定表达EGFP-LC3蛋白SH-SY5Y细胞系的构建

目的:建立稳定表达微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein 1 light chain 3,LC3)与绿色荧光蛋白(EGFP)形成的融合蛋白(EGFP-LC3)的人神经母细胞瘤株SH-SY5 Y细胞系,验证EGFP-LC3点状聚集物能够实时直观地反映自噬小体和自噬流.方法:以人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)的cDNA为模板,克隆LC3,并连接EGFP绿色荧光蛋白.将EGFP-LC3连接入慢病毒载体GV348中,构建慢病毒表达载体EGFP-LC3-GV348.慢病毒转染人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5 Y细胞),使用3μg/mL嘌呤霉素筛选并处理细胞1月,筛选得到EGFP-LC3稳转系.诱导自噬后,用共聚焦显微镜观察LC3荧光斑点并定量分析.Western blot检测目的蛋白表达情况.结果:经酶切证实,EGFP-LC3-GV348慢病毒表达载体构建正确.在激光共聚焦显微镜下,可以观察到细胞内的绿色荧光EGFP代表的自噬小体,活体染料LysoTracker Red DND-99将溶酶体染成红色荧光,红色荧光与绿色荧光重叠代表自噬溶酶体.无血清诱导自噬后,自噬小体(绿色荧光斑点)明显增加,差异有统计学意义(P<0.001).Western Blot免疫印迹可见EGFP-LC3融合蛋白表达条带.结论:成功构建了稳定表达EGFP-LC3的SH-SY5 Y细胞系,EGFP-LC3荧光斑点可以直观实时反映自噬囊泡,为进一步探讨神经退行性疾病的自噬机制提供了实验基础.     

白藜芦醇通过上调SIRT1/自噬通路改善Aβ25-35对PC12细胞增殖的抑制作用

目的 探讨SIRT1/自噬通路在白藜芦醇改善Aβ25-35诱导的PC12细胞增殖活力下降中的作用.方法 用不同浓度(1、5、10、20 μmol/L)白藜芦醇(resveratrol,RSV)单独或加入5 mmol/L自噬特异抑制剂(3-methyladenine,3-MA)、2μmol/L SIRT1选择性抑制剂(EX527)处理PC12细胞2h后,再加入30μmol/L淀粉样蛋白25-35片段(Amyloid β-protein fragment 25-35,Aβ25-35)处理24 h.采用CCK-8检测细胞增殖活力,电镜检测自噬体,Western blot检测自噬标志蛋白P62、LC3和SIRT1蛋白的表达水平.结果 30 μmol/L Aβ25-35可显著降低PC12细胞的增殖活力,为对照组的45.14％(P＜0.05).RSV预处理可显著改善Aβ25-35诱导的PC12细胞增殖活力下降(P＜0.05),且随浓度增加,保护作用增强.同时,RSV可明显促进自噬体的形成,上调SIRT1、LC3-Ⅱ的表达和降低P62的表达,且随浓度增加,表达变化越显著;而加入3-MA和EX527处理能显著抑制RSV的上述效应.结论 RSV可通过激活SIRT1/自噬通路改善Aβ25-35诱导的神经细胞毒性.     

硫化氢对Aβ25-35诱导的小鼠Neuro-2a细胞自噬的影响

目的 探讨硫化氢(H2S)对Aβ25-35诱导的小鼠成神经细胞瘤细胞Neuro-2a自噬的影响及其潜在机制.方法 将Neuro-2a细胞随机分为空白对照组、Aβ25-35处理组、Aβ25-a5+NaHS组、Aβ25 35+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组、NaHs组及Aβ25-35+ NaHS+ LY294002组.Aβ25-35+ NaHS组和Aβ25-35+ 3-MA组细胞分别用NaHS和3-MA预处理2h后均加用Aβ25-35继续处理24 h;Aβ25-35+ NaHS+ LY294002组除加入NaHS预处理外需在Aβ25-35处理前0.5h加入特异性PI3K/Akt通路抑制剂LY294002.采用MTT法观察各组细胞存活率,蛋白质印迹法检测自噬蛋白Beclin-1、微管相关蛋白(LC3)及P62的表达,免疫荧光法检测LC3的表达及分布,透射电镜法观察自噬体的形成.结果 (1)与空白对照组相比,Aβ25-35作用细胞后细胞存活率降低(P＜0.05),Beclin-1及LC3-Ⅱ表达增加,P62表达降低(P＜0.05),荧光显微镜及电镜下可见细胞自噬体明显增多.(2)与Aβ25-35组相比,Aβ25-35+3-MA组和Aβ25-35+NaHS组细胞存活率均增高(P＜0.05),Beclin-1及LC3-Ⅱ表达降低,P62表达增高(P＜0.05),自噬体减少.(3)Aβ25-35+NaHS组p-Akt和p-mTOR的表达高于Aβ25-35组(P＜0.05),而加入LY294002后,Aβ25-35+NaHS+ LY294002组细胞p-Akt和p-mTOR表达与Aβ25-35+ NaHS组相比降低(P＜0.05).结论 外源性H2S能对抗Aβ25-35的细胞毒性,可能与活化PI3K/Akt/mTOR途径抑制Aβ25-35引起的细胞自噬相关.     

灵孢多糖对Aβ_(25-35)损伤SH-SY5Y细胞保护作用的研究

目的观察灵孢多糖(GLPS)对β-淀粉样蛋白(Aβ)诱导损伤的SH-SY5Y细胞的保护作用及其机制。方法将Aβ25-35、GLPS加入体外培养的SH-SY5Y细胞中,建立拟痴呆的细胞模型,用四甲基偶氮唑盐(MTT)检测细胞活力的变化;Western blot技术检测Aβ25-35、金属蛋白酶-2(MMP-2)和金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达。结果 Aβ25-35处理48 h后,细胞活力降至对照组的40.2%,差异有统计学意义(P0.001)。经GLPS低剂量(100μg/m L)预处理后,细胞活力提高17.5%(P0.05);GLPS高剂量(300μg/m L)预处理后,细胞活力提高30.4%(P0.05)。Western blot分析结果证明,GLPS预处理可降低SH-SY5Y细胞MMP-2和MMP-9蛋白表达及活性水平(P0.05)。结论 GLPS预处理对Aβ25-35诱导损伤的SH-SY5Y细胞有一定的保护作用,可能与减少细胞中MMP-2和MMP-9等炎症因子的异常生成相关。     

自噬在双联苄类化合物诱导肿瘤细胞凋亡中的作用机制

目的 探讨自噬在天然萜类、双联苄类化合物诱导肿瘤细胞凋亡中的作用.方法 以前期筛选得到的具有抑制肿瘤细胞增殖活性的三萜化合物ST52和乙酰基-11-酮基-β-乳香酸(AKBA)、双联苄化合物H50、F41、H48和Riccardin D (RD)处理稳定表达GFP-LC3的人胶质瘤细胞株U87,荧光显微镜观察GFP-LC3的聚集斑点,确定化合物的自噬诱导作用.Western blot检测人激素非依赖前列腺癌细胞株PC-3细胞中的自噬相关蛋白LC3、Atg5、Beclinl和p62的表达以及凋亡标志蛋白多聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)的剪切情况.自噬抑制剂或siRNA阻断Atg5表达后进行化合物处理,流式细胞技术检测细胞凋亡,MTT法检测细胞的增殖活力,确定自噬对化合物诱导凋亡的影响.结果 筛选结果显示,双联苄类化合物均有不同程度的自噬诱导作用,其中RD的作用较强.RD促进PC-3细胞中LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ的转化,中等强度诱导Atg5和Beclin1的表达,并导致自噬底物p62的降解.抑制自噬后,能增加RD诱导的细胞凋亡与PARP剪切,但凋亡抑制剂Z-VAD-FMK并不影响RD对LC3-Ⅱ的诱导程度.结论 RD诱导PC-3细胞产生具有保护性作用的自噬现象,抑制自噬可提高RD的抗肿瘤作用.     

利福平对鱼藤酮诱导的神经细胞SH-SY5Y凋亡的抑制作用

目的 探讨利福平对鱼藤酮所诱导的人多巴胺能神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y凋亡的抑制作用.方法 采用100 nmol/L鱼藤酮作用SH-SY5Y细胞24 h,建立SH-SY5Y细胞凋亡模型;再用100、200、300 μmol/L不同浓度的利福平进行干预,采用MTT比色法检测细胞活性,采用流式细胞术(FCM)及原位缺口末端标记染色法(TUNEL)检测细胞凋亡, Western blot法检测前凋亡蛋白3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)的表达水平.结果 用100 nmol/L鱼藤酮作用SH-SY5Y细胞24 h,能够诱导该细胞产生凋亡并降低其活性;利福平干预后,鱼藤酮所诱导的SH-SY5Y细胞凋亡被抑制,并且这一抑制作用与利福平浓度有明显的剂量-效应关系;而且利福平干预后能降低GAPDH蛋白的表达水平.结论 利福平对鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞凋亡具有明显的抑制作用,这一抑制作用可能是通过下调GAPDH蛋白的表达而得以实现.     

β-淀粉样蛋白Aβ25-35诱导HT22细胞自噬及其对V-ATPase表达的影响

【目的】探讨β-淀粉样蛋白Aβ25-35诱导HT22细胞产生自噬及与V-ATPase变化的关系。【方法】将HT22细胞分为对照组、无血清培养组、Aβ处理组和Aβ+Bafilomycin A1组,不同浓度的Aβ25-35作用于HT22细胞24 h,用CCK8测定细胞活力变化,免疫细胞荧光检测自噬斑点变化,及Western blot检测LC3、V-ATPase蛋白变化。【结果】Aβ可以诱导HT22细胞出现明显的自噬现象,且这种自噬同Aβ的浓度以及作用时间具有一定的相关性。V-ATPase的表达伴随自噬的增多也逐渐增多。Bafilomycin A1可以进一步诱导V-ATPase增加,增加细胞内自噬体的聚积。【结论】Aβ25-35可诱导HT22细胞产生自噬,且与V-ATPase表达有关。     

Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞Tau蛋白的过度磷酸化

目的采用凝聚态Aβ25-35建立Tau蛋白过度磷酸化的阿尔茨海默病样细胞模型.方法用不同浓度凝聚态Aβ25-35作用于SH-SY5Y细胞24,48,72 h,通过四唑盐比色法及乳酸脱氢酶释放实验观察Aβ25-35对SH-SY5Y细胞存活的影响;选择对细胞存活影响较小的适宜浓度和作用时间处理细胞,以蛋白免疫印迹法研究Tau蛋白磷酸化水平的变化.结果 Aβ25-35对细胞存活的影响随着作用时间的延长或作用浓度的增加而增强.10 μmol/L Aβ25-35作用于细胞72 h或20 μmol/L Aβ25-35作用于细胞≥48 h时,MTT代谢率均明显下降(P<0.05).Aβ25-35作用浓度>20 μmol/L作用72 h后,细胞LDH释放率明显增加(P<0.05).选用细胞毒性小的10,20 μmol/L Aβ25-35作用于SH-SY5Y细胞0,3,6,12,24,48 h,蛋白免疫印迹示Tau蛋白在Ser396、Ser199/202位点的磷酸化水平增高,于6 h达到最高峰.结论凝聚态Aβ25-35可诱导建立阿尔茨海默病样Tau蛋白过度磷酸化的细胞模型.     

Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞Tau蛋白的过度磷酸化

目的采用凝聚态Aβ25-35建立Tau蛋白过度磷酸化的阿尔茨海默病样细胞模型.方法用不同浓度凝聚态Aβ25-35作用于SH-SY5Y细胞24,48,72 h,通过四唑盐比色法及乳酸脱氢酶释放实验观察Aβ25-35对SH-SY5Y细胞存活的影响;选择对细胞存活影响较小的适宜浓度和作用时间处理细胞,以蛋白免疫印迹法研究Tau蛋白磷酸化水平的变化.结果 Aβ25-35对细胞存活的影响随着作用时间的延长或作用浓度的增加而增强.10 μmol/L Aβ25-35作用于细胞72 h或20 μmol/L Aβ25-35作用于细胞≥48 h时,MTT代谢率均明显下降(P<0.05).Aβ25-35作用浓度>20 μmol/L作用72 h后,细胞LDH释放率明显增加(P<0.05).选用细胞毒性小的10,20 μmol/L Aβ25-35作用于SH-SY5Y细胞0,3,6,12,24,48 h,蛋白免疫印迹示Tau蛋白在Ser396、Ser199/202位点的磷酸化水平增高,于6 h达到最高峰.结论凝聚态Aβ25-35可诱导建立阿尔茨海默病样Tau蛋白过度磷酸化的细胞模型.     

地黄饮子对Aβ_(1-42)诱导的SH-SY5Y细胞中RAGE/ROS/凋亡通路的影响

【目的】探讨地黄饮子对Aβ_(1-42)诱导的SH-SY5Y细胞中RAGE/ROS/凋亡通路的影响。【方法】(1)采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测胎牛血清组、空白组及地黄饮子含药血清低、中、高剂量组的细胞活力,确定地黄饮子含药血清的最佳浓度和作用时间。(2)以0~20μmol/L Aβ_(1-42)寡聚体处理SH-SY5Y细胞24 h和48 h后,采用MTT法检测细胞活力,Annexin V/碘化丙啶(PI)双染法观察细胞凋亡,确定Aβ_(1-42)作用细胞的最佳浓度及时间,以建立阿尔茨海默病(AD)细胞模型。(3)采用MTT法检测空白组、模型组、西药对照组及地黄饮子含药血清低、中、高剂量组细胞活力,采用Annexin V/PI双染法观察各组细胞凋亡,采用二氢乙啶(DHE)染色法检测各组活性氧(ROS)含量,观察地黄饮子对Aβ_(1-42)诱导的SH-SY5Y的细胞损伤的修复作用。(4)采用Western blot法检测空白组、模型组、地黄饮子含药血清中剂量组RAGE蛋白;进一步将Aβ_(1-42)诱导的SH-SY5Y细胞进行RAGE转染后,采用DHE染色法检测各组ROS含量,采用Annexin V/PI双染法检测各组细胞凋亡率,观察地黄饮子对Aβ_(1-42)诱导的SH-SY5Y细胞凋亡及RAGE表达的影响。【结果】作用时间为24 h时,地黄饮子含药血清低、中剂量组细胞活力较空白组均显著增强(P0.05或P0.01)。建立AD体外模型的Aβ_(1-42)浓度为5μmol/L,作用时间为24 h。各给药组Aβ_(1-42)诱导细胞活力较模型组显著增强,细胞凋亡率和ROS含量显著下降(P0.05或P0.01),而地黄饮子中剂量组细胞活力最强,细胞凋亡率最低。地黄饮子中剂量组Aβ1-42诱导细胞RAGE蛋白表达较模型组显著降低(P0.05)。地黄饮子中剂量组能降低RAGE转染的Aβ_(1-42)诱导SH-SY5Y细胞的ROS生成和细胞凋亡率(P0.01)。【结论】地黄饮子可能通过抑制ROS产生和细胞凋亡发挥抗氧化作用,进而抑制RAGE蛋白来防治AD。     

Max作用蛋白1⁃0在氧糖剥夺诱导SH⁃SY5Y细胞凋亡中的作用

目的：探讨Max作用蛋白1?0（max action protein 1?0,Mxi1?0）在氧糖剥夺（oxygen?glucose deprivation,OGD）诱导SH?SY5Y细胞凋亡中的作用。方法：利用Western blot检测SH?SY5Y细胞在OGD条件下Mxi1?0和线粒体自噬相关蛋白LC3?Ⅱ、p62、Tom20的表达水平。Mxi1?0 siRNA转染SH?SY5Y细胞,以CCK?8法和Annexin V/PI染色法检测Mxi1?0在OGD诱导细胞凋亡中的作用。结果：OGD条件下,SH?SY5Y细胞中Mxi1?0的表达先上升后下降。OGD处理使线粒体自噬相关蛋白LC3?Ⅱ表达升高,p62和Tom20蛋白表达下降。OGD条件下,Mxi1?0沉默可抑制OGD诱导的线粒体自噬,增强OGD诱导的SH?SY5Y细胞凋亡。结论：Mxi1?0通过增强线粒体自噬拮抗OGD诱导的SH?SY5Y细胞凋亡。     

14-3-3蛋白过表达对SH-SY5Y细胞的保护作用

目的探讨14-3-3蛋白过表达对神经母细胞瘤细胞株（SH-SY5Y）的保护作用和可能机制。方法利用脂质体转染的方法在SH-SY5Y细胞株中瞬时表达14-3-3蛋白。通过四甲基偶氮唑盐（MTT）法、Ho-echst 33342染色法、流式细胞仪和荧光显微镜分别检测14-3-3蛋白过表达对神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y的细胞活性、细胞凋亡、细胞内活性氧类物质（ROS）水平的影响。结果 14-3-3蛋白过表达可促进SH-SY5Y细胞的增殖;抑制SH-SY5Y细胞内ROS的产生。结论 14-3-3过表达对SH-SY5Y起神经保护作用,其机制可能是通过抑制细胞内ROS的产生而实现的。     

补脑软胶囊对Aβ1-42诱导SH-SY5Y细胞凋亡的影响

目的探讨补脑软胶囊对Aβ_(1-42)诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的影响。方法采用不同剂量的补脑软胶囊作用于经Aβ_(1-42)诱导损伤的SH-SY5Y细胞24 h,采用Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测SH-SY5Y细胞的凋亡情况。结果与空白组比较,模型组SH-SY5Y细胞平均凋亡率明显升高,差异有统计学意义(P0.01);与模型组比较,多奈哌齐阳性对照组及补脑软胶囊内容物中、低剂量组SH-SY5Y细胞平均凋亡率均明显降低,差异有统计学意义(P0.01)。结论补脑软胶囊可减少经Aβ_(1-42)诱导损伤引起的SH-SY5Y细胞凋亡,降低细胞凋亡率。