YAP在人甲状腺乳头状癌中的表达及对细胞生长的影响

目的：探讨Yes相关蛋白（YAP）在人甲状腺乳头状癌中的表达及对甲状腺乳头状癌细胞生长的影响。方法收集57例该院普通外科行手术切除的甲状腺乳头状癌及对应癌旁组织标本,所有患者均经病理诊断确认,免疫组织化学染色检测甲状腺乳头状癌及癌旁组织中的YAP表达,统计分析YAP蛋白与肿瘤临床病理资料间的相关性。siRNA沉默甲状腺乳头状癌B‐CPAP细胞中YAP基因表达,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）及流式细胞技术检测沉默YAP后B‐CPAP细胞增殖及凋亡水平变化。结果 YAP蛋白在甲状腺乳头状癌组织中表达水平显著高于对应癌旁组织（P＜0．05）;且YAP蛋白表达与TNM分期和肿瘤体积呈显著正相关（P＜0．05）,沉默YAP基因可显著降低B‐CPAP细胞的增殖能力,并促使细胞发生凋亡（P＜0．05）。结论YAP在甲状腺乳头状癌组织中高表达并与肿瘤不良临床病理特征有关,下调YAP基因可显著抑制甲状腺乳头状癌细胞生长。     

MMP-2和TIMP-2在甲状腺乳头状癌中的表达及与转移的关系

目的探讨基质金属蛋白酶MMP-2和金属蛋白酶组织抑制剂TIMP-2在甲状腺乳头状癌中的表达及其与甲状腺乳头状癌侵袭与转移的关系.方法应用原位杂交技术检测95例甲状腺乳头状癌及59例癌旁组织中MMP-2 mRNA,TIMP-2mRNA的表达水平.用免疫组化S-P法检测上述组织中MMP-2蛋白、TIMP-2蛋白的表达.结果MMP-2mRNA和蛋白在甲状腺乳头状癌中的阳性率分别为74.7%和77.9%,而在癌旁组织中的阳性率分别为10.2%和25.4%,两者差异有显著性(P＜0.01,P＜0.01).TIMP-2 mRNA和蛋白在甲状腺乳头状癌中的阳性率分别为58.9%和64.29%,而在癌旁组织中的阳性率分别为20.3%和16.9%,两者差异有显著性(P＜001,P＜0.01).结论基质金属蛋白酶MMP-2mRNA和蛋白、TIMP-2mRNA和蛋白在甲状腺乳头状癌中呈高表达,MMP-2mRNA和蛋白的表达随甲状腺癌侵袭程度升高、转移而升高,而TIMP-2 mRNA和蛋白的表达随甲状腺癌侵袭程度升高、转移而降低,提示MMP-2和TIMP-2表达失衡与甲状腺乳头状癌侵袭与转移有密切关系.     

沉默赖氨酸乙酰基转移酶基因对人甲状腺乳头状癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨赖氨酸乙酰基转移酶（Kat5）对甲状腺乳头状癌细胞增殖和凋亡的影响及磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/丝氨酸/苏氨酸激酶（AKT）信号通路的作用,阐明Kat5在甲状腺乳头状癌细胞增殖和凋亡中的可能作用机制。方法：RT-PCR和Western blotting法检测甲状腺乳头状癌BHP10-3、TPC-1、K1细胞和甲状腺上皮Nthy-ori3-1细胞中Kat5 mRNA和蛋白表达水平。将对数生长期甲状腺乳头状癌TPC-1细胞分为空白对照组、阴性对照组和沉默Kat5组（si-Kat5组）。空白对照组甲状腺乳头状癌TPC-1细胞不转染,阴性对照组甲状腺乳头状癌TPC-1细胞转染阴性对照siRNA,si-Kat5组甲状腺乳头状癌TPC-1细胞转染Kat5 siRNA。RT-PCR和Western blotting法检测各组甲状腺乳头状癌TPC-1细胞中Kat5 mRNA和蛋白表达水平,CCK-8法检测各组TPC-1细胞增殖活性,克隆形成实验检测各组TPC-1细胞克隆形成率,流式细胞术检测各组TPC-1细胞凋亡率,Western blotting法检测各组TPC-1细胞中周期蛋白依赖性激酶2（CDK2）、P21、P53、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（cleaved caspase-3）、PI3K、磷酸化PI3K （p-PI3K）、AKT和磷酸化AKT （p-AKT）蛋白水平。结果：甲状腺乳头状癌BHP10-3、TPC-1和K1细胞中Kat5 mRNA和蛋白表达水平均高于甲状腺上皮Nthy-ori3-1细胞（P<0.05）。各组TPC-1细胞中Kat5 mRNA和蛋白水平、细胞增殖活性、细胞克隆形成率、细胞凋亡率以及细胞中CDK2、P21、P53、cleaved caspase-3、PI3K、p-PI3K、AKT及p-AKT蛋白表达水平比较差异均有统计学意义（P<0.05）;与空白对照组和阴性对照组比较,si-Kat5组TPC-1细胞中Kat5 mRNA和蛋白表达水平降低（P<0.05）,细胞增殖活性降低（P<0.05）,细胞克隆形成率降低（P<0.05）,细胞凋亡率升高（P<0.05）,细胞中CDK2、p-PI3K和p-AKT蛋白表达水平降低（P<0.05）,P21、P53和cleaved caspase-3蛋白表达水平升高（P<0.05）。结论：甲状腺乳头状癌细胞中Kat5mRNA和蛋白表达水平升高,沉默Kat5基因可抑制甲状腺乳头状癌细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与其抑制PI3K/AKT信号通路有关。     

c-Met蛋白在甲状腺癌中的表达及其临床病理意义

目的 检测c-Met 蛋白在甲状腺癌及癌旁甲状腺组织中的表达,并分析c-Met 蛋白表达与甲状腺乳头状癌患者临床病理特征的关系。方法 采用免疫组织化学En Vision二步法检测81 例甲状腺癌组织及52 例癌旁甲状腺组织中c-Met 蛋白的表达。结果 甲状腺癌和癌旁甲状腺组织中c-Met 蛋白阳性率分别为46.9%（38/81）和7.7%（4/52）,两者比较有统计学差异（P＜0.01）。其中甲状腺乳头状癌中c-Met 蛋白阳性率50.8%（31/61）,髓样癌中阳性率60.0%（3/5）,均高于滤泡癌26.7%（4/15）,但均无统计学差异（均P＞0.05）。甲状腺乳头状癌c-Met蛋白表达与患者各项临床病理特征均无相关性（均P＞0.05）。结论 甲状腺癌中c-Met 表达增强,其高表达可能与甲状腺癌发生相关,有望成为抗甲状腺癌治疗的一个潜在靶点。     

TBX2和PAX9在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义探讨

目的探讨TBX2和PAX9在甲状腺乳头状癌中的表达及临床病理学意义.方法取得60例甲状腺乳头状癌组织及20例癌旁正常甲状腺组织标本,用免疫组化法检测TBX2和PAX9的蛋白表达情况,用RT-PCR法检测TBX2 mRNA和PAX9 mRNA的相对表达量,并分析两者与患者临床病理因素之间的关系.结果免疫组化和RT-PCR结果均显示TBX2和PAX9在甲状腺乳头状癌组织中的表达明显高于正常甲状腺组织,差异有统计学意义(P<0.01);TBX2和PAX9的表达与分化程度、病理分期(pTMN)及淋巴转移密切相关(P<0.05);并且甲状腺乳头状癌组织中TBX2蛋白与PAX9蛋白的表达呈正相关(r=0.471,P<0.01).结论 TBX2和PAX9参与了人类甲状腺乳头状癌的发生、发展,表达水平随着甲状腺乳头状癌组织恶性程度的增高而增高,可作为衡量食管鳞状细胞癌恶性程度的肿瘤分子标志物.     

microRNA-21对人甲状腺乳头状癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨microRNA-21(miR-21)在人甲状腺乳头状癌中的表达及其对人甲状腺乳头状癌K1细胞增殖和凋亡能力的影响?方法:通过qRT-PCR检测12对甲状腺乳头状癌组织(PTC)与癌旁正常组织中miR-21的表达差异;将miR-21抑制试剂(Anti-miR-21)?过表达试剂(miR-21 mimic)分别转染入K1细胞,并各自设立阴性对照组,运用qRT-PCR验证K1细胞中miR-21的表达;MTT实验检测miR-21对K1细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测转染后K1细胞凋亡的变化,Western blot检测细胞凋亡增殖相关蛋白的表达情况?结果:miR-21在PTC组织中的表达明显高于癌旁正常甲状腺组织(P < 0.05);与阴性对照组相比,瞬时转染Anti-miR-21的K1细胞miR-21的表达明显减弱(P < 0.01);MTT实验结果显示抑制miR-21表达后,K1细胞的增殖能力明显下降(P < 0.05);流式细胞仪检测显示转染Anti-miR-21后的K1细胞凋亡明显增加,凋亡率为19.5%,阴性对照组的凋亡率为9.4%;Western blot结果显示转染Anti-miR-21组K1细胞Bcl-2表达降低,Bax表达升高?转染miR-21mimic的K1细胞增殖和凋亡无明显改动?结论:miR-21在人甲状腺乳头状癌中呈高表达,抑制miR-21的表达能显著降低K1细胞的增殖能力,增加K1细胞凋亡率?     

有丝分裂相关蛋白TPX2、Aurora-A、FBXW7在食管癌发生机制中的作用及预后研究

目的:探讨有丝分裂相关蛋白TPX2、Aurora-A、FBXW7在食管癌发生发展中的作用及预后机制.方法:选取127例食管癌患者的癌组织与癌旁组织标本为癌组织组及癌旁组织组;另选取60例食管高级别上皮内瘤变组织标本为对照组.运用免疫组化检测三组TPX2、Aurora-A、FBXW7蛋白表达情况;分析TPX2、Aurora-A、FBXW7表达与食管癌患者各项临床病理特征的相关性;通过Kaplan-Meier生存分析法分析患者5年生存率与TPX2、Aurora-A、FBXW7表达的关系.结果:癌组织组TPX2、Aurora-A、FBXW7蛋白阳性率高于癌旁组织组及对照组(P<0.05);Aurora-A蛋白表达水平与肿瘤浸润深度和淋巴结转移密切相关(P<0.05);FBXW7在癌组织组中的表达水平低于癌旁组织组和对照组(P<0.05),其与食管癌患者各项病理特征均无明显相关性(P>0.05);Aurora-A与TPX2表达呈正相关(P<0.05),与FBXW7表达呈负相关(P<0.05);TPX2与FBXW7的表达无明显相关性(P>0.05).生存分析示,TPX2与食管癌患者5年生存率相关(P<0.05);Aurora-A与FBXW7与患者预后无明显相关性(P>0.05).结论:食管癌发生发展中,有丝分裂相关蛋白TPX2、Aurora-A、FBXW7均有参与,而在其预后判断中,TPX2具有更高的应用价值.     

丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶激活的长链非编码RNA对甲状腺癌细胞凋亡和自噬行为的影响

目的：探讨丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(serine/threonine-protein kinase B-Raf,BRAF)激活的长链非编码 RNA(BRAF-activated long-chain non-coding RNA,lncRNA -BANCR)对甲状腺癌细胞凋亡和自噬行为的影响及其机制。 方法：RT-PCR检测lncRNA -BANCR在甲状腺癌组织和癌旁正常甲状腺组织中的表达情况;分析lncRNA-BANCR和甲 状腺癌患者的临床病理资料之间的关联;采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测lncRNA-BANCR对甲状 腺癌细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测lncRNA-BANCR对甲状腺癌细胞凋亡行为的影响;Transwell侵袭实验检测 lncRNA-BANCR对甲状腺癌细胞侵袭能力的影响,Wsetern印迹检测抑制lncRNA -BANCR的表达后自噬蛋白LC3-I和LC3- II表达的变化情况。结果：与正常甲状腺组织相比,甲状腺癌组织中lncRNA-BANCR表达水平较高(P<0.05);lncRNABANCR 的表达与甲状腺癌的病理分期和淋巴结转移情况有关,分期越高,lncRNA -BANCR在甲状腺癌组织中表达 越高(P<0.05);抑制lncRNA-BANCR的表达后,在一定程度上可抑制甲状腺癌细胞的增殖和侵袭能力(均P<0.05);同 时可使甲状腺癌细胞的凋亡行为得到一定的促进(P<0.05);自噬蛋白LC3-I和LC3-II的表达水平相应增高(均P<0.05)。 结论：lncRNA-BANCR的表达通过影响甲状腺癌细胞的自噬行为而对其增殖、侵袭及凋亡行为产生影响。     

甲状腺组织中钠/碘转运体基因表达的研究

目的：研究各种病理甲状腺组织中钠／碘转运体（NIS）基因的表达情况，探讨NIS与甲状腺疾病之间的关系。方法：甲状腺组织取自3例Graves病（GD）患者，2例桥本甲状腺炎（HT），2例甲状腺乳头状癌（TC），2例癌旁正常甲状腺组织，运用半定量逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）技术检测NIS mRNA的表达情况。结果：癌旁正常甲状腺组织表达NIS mRNA,GD甲状腺组织NIS基因表达量明显增多（P＜0．05）；HT组织中，1例NIS mRNA表达量减少，1例不表达；甲状腺癌组织不表达NIS基因。结论：不同病理甲状腺组织中NIS基因表达存在一定变化，NIS可能参与自身免疫性甲状腺疾病及甲状腺癌的发病机理。     

miR⁃590⁃3p对甲状腺乳头状癌的抑制作用研究

目的：探究miR?590?3p在甲状腺乳头状癌进展中的作用。方法：利用RT?PCR检测甲状腺乳头状癌患者标本及其细胞系中miR?590?3p的表达。利用CCK?8、EdU、划痕、Transwell实验以及细胞流式技术检测miR?590?3p对细胞相关功能的影响。Western blot检测上皮细胞?间充质转化（epithelial?mesenchymal transition,EMT）途径相关蛋白表达量的变化。结果：在甲状腺乳头状癌组织及细胞系中miR?590?3p的表达量明显低于癌旁组织和正常甲状腺滤泡上皮细胞。与对照组相比,干扰miR?590?3p明显提升TPC?1细胞的增殖活性（P < 0.01）,过表达miR?590?3p则降低K?1细胞的增殖活性（P < 0.01）。干扰miR?590?3p可增加TPC?1细胞的迁移与侵袭能力,抑制细胞凋亡（P < 0.01）,过表达miR?590?3p则降低K?1细胞的迁移与侵袭能力,促进细胞凋亡（P < 0.01）。同时可以抑制EMT相关蛋白的表达。结论：miR?590?3p在甲状腺乳头状癌的发生发展中发挥抑癌基因的作用,可能为甲状腺乳头状癌的治疗提供帮助。     

lncRNA MIR31HG 对甲状腺乳头状癌细胞 增殖、迁移、侵袭的影响及作用机制研究

目的 探究长链非编码RNA（lncRNA）MIR31HG对甲状腺乳头状癌（PTC）细胞增殖、迁 移、侵袭的影响及可能的作用机制。方法 选取2018 年8 月—2019 年4 月在湖南省中医药大学第一附属 医院行甲状腺癌根治术的48 例患者的新鲜癌组织及癌旁组织标本,男女各24 例。利用TCGA 数据库验证 lncRNA MIR31HG 在甲状腺癌组织与癌旁组织中的表达,患者术后病理报告确诊为PTC,提取样本RNA 行 qRT-PCR 验证lncRNA MIR31HG 在PTC 组织与癌旁组织中表达情况及与患者临床病理特征的相关性;利 用lncRNA MIR31HG 的小干扰RNA 转染PTC 细胞系TPC-1 并验证抑制率,保证抑制率>60%,MTT 检测 TPC-1 细胞增殖能力,细胞划痕实验和Transwell 小室实验检测细胞迁移及侵袭能力,Western blotting 检测 Akt 信号通路关键蛋白分子Akt、磷酸化Akt（p-Akt）、PTEN 的表达。结果 宫颈鳞状细胞癌、乳头状肾细 胞癌、头颈部鳞癌、胰腺癌及甲状腺癌组织lncRNA MIR31HG 相对表达量较癌旁组织高（P <0.05）,膀胱癌、 前列腺癌组织较癌旁组织低（P <0.05）。PTC 组织lncRNA MIR31HG 相对表达量较癌旁组织高（P <0.05）。 TPC-1、K1 及BCPAP 的lncRNA MIR31HG 相对表达量较Nthy-ori 3-1 高（P <0.05）,且TPC-1 相对表 达量最高。实验组lncRNA MIR31HG 相对表达量均较siRNA-NC 组下降（P <0.05）,其中siRNA-1 组与 siRNA-3 组沉默效率均>60%。各组OD 值比较,差异有统计学意义（P <0.05）。siRNA-1 组与siRNA-3 组 划痕愈合率较siRNA-NC 组低（P <0.05）。siRNA-1 组、siRNA-3 组侵袭至Transwell 小室下室的细胞数较 siRNA-NC 组低（P <0.05）。siRNA-1 组、siRNA-3 组PTEN mRNA 和蛋白较siRNA-NC 组升高（P <0.05）, 且siRNA-3 组最高;siRNA-1 组、siRNA-3 组p-Akt 蛋白较siRNA-NC 组低,且siRNA-3 组最低（P <0.05）。 结论 lncRNA MIR31HG 在PTC 组织中高表达并与PTC 患者肿瘤分期有关;下调lncRNA MIR31HG 的表 达可以抑制TPC-1 细胞增殖、迁移及侵袭能力,其机制可能与lncRNA MIR31HG 抑制PTEN 表达从而激 活Akt 通路有关。     

FHIT基因表达缺失在甲状腺乳头状癌中的研究

目的 研究脆性组氨酸三联体基因（fragile histidine triad gene,FHIT）在甲状腺乳头状癌（papillary thyroid carcinoma,PTC）及其配对癌旁组织（non-carcerous epithelium,NCE）中的表达及其临床意义.方法 采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测60例PTC及相对应NCE中FHIT基因的表达情况.结果 PTC中FHIT基因表达阳性率为45.0％ （27/60）,明显低于NCE 100.0％ （60/60）,其差异有显著性（P＜0.01）;PTC中FHIT基因mRNA表达水平与患者的病理学分级、TNM分期、淋巴结转移有相关性,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 FHIT基因转录表达异常可能为一重要的分子改变参与了PTC的发展及演变,可望成为PTC病情监测及预后判断的一个生物学指标.     

siRNA干扰膜联蛋白AI表达对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞凋亡的影响

目的 通过小干扰RNAs(siRNA)干扰膜联蛋白A1(ANX A1)在甲状腺乳头状癌(PTC)细胞中的表达,探讨ANXA1对PTC细胞的生物学特性的影响.方法 设计并筛选使用高效的siRNA在PTC TPC-1细胞株特异性干扰ANX A1的表达,然后用流式细胞术观察ANX A1干扰后对PTC细胞TPC-1凋亡的影响.结果 筛选的siRNA可高效沉默ANX A1在PTC细胞中的表达,促进PTC细胞的凋亡.结论 siRNA干扰ANX A1表达,可促进PTC细胞的凋亡,提示ANX A1可能是PTC治疗的一个重要的生物学靶标.     

甲状腺乳头状癌中促甲状腺激素受体与钠碘转运体mRNA的表达

目的钠碘转运体(Na+/I-symporter,NIS)是介导甲状腺细胞摄取碘的重要载体,其表达、定位与促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone,TSH)关系密切。文中主要研究甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinomas,PTC)及癌旁组织中TSH受体(TSH receptor,TSHR)与NIS基因的表达。方法实时荧光定量PCR法测定36例PTC及癌旁组织,20例正常组织中TSHR mRNA及NIS mRNA的表达水平。结果 PTC及癌旁组织中TSHR mRNA表达水平明显低于正常组织,P<0.05;NIS mRNA表达水平在PTC组织中显著下降,P<0.05。结论 PTC组织中TSHR与NIS mRNA基因表达水平呈现同步下降趋势,可能与TSH-TSHR信号通路的调控有关。     

端粒酶基因hTRT在甲状腺乳头状癌的表达及意义

目的：探讨端粒酶基因hTRT在甲状腺乳头状癌的表达及其意义，方法：应用原位杂交方法检测端粒酶基因hTRT在30例甲状腺乳头状癌，19例甲状腺良性病变及16例癌旁正常甲状腺组织中的表达。结果：hTRTmRNA在甲状腺乳头状癌中的阳性率为（25／30，83．3％），显著高于甲状腺良性病变中的阳性率（3／19，15．8％）和正常甲状腺组织中的阳性率（0／16，0％），而且病期晚及有淋巴结转移者阳性率增高，结论：端粒酶基因hTRT为甲状腺乳头状癌恶性表型增高的标志，hTRTmRNA表达检测可望成为甲状腺乳头状癌辅助诊断和预后评估的一个手段。     

survivin和caspase-3在胃癌中的表达以及与凋亡的关系

目的 :评价胃癌组织中survivin和caspase 3的表达情况以及与细胞凋亡的关系。　方法 :采用免疫组化的方法 ,对 6 0例无术前放、化疗史的胃癌患者的手术标本进行survivin和caspase 3检测 ,并用原位末端标记法标记凋亡细胞。　结果 :survivin主要在癌组织中表达 ,caspase 3在正常粘膜的表达高于癌组织 ,survivin的表达强度与组织学分级及临床病理分期有关 (P <0 .0 1 )。caspase 3的表达强度随组织分化程度增高而增强 ;而在不同临床病理分期间无显著差异 (P >0 .75 )。胃癌组织中survivin与caspase 3的表达无直线相关关系 ,survivin阳性组凋亡指数明显低于阴性组 (P <0 .0 0 5 ) ,survivin阴性、caspase 3阳性组平均凋亡指数最高为 1 .5 3%。　结论 :survivin的表达与胃癌分化程度及病理分期密切相关 ,可作为提示预后的重要指标。survivin作为凋亡抑制蛋白显著抑制癌组织的细胞凋亡 ,但不能完全抑制caspase 3的表达     

PTEN mRNA和Smad4 mRNA在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

目的:探讨PTEN mRNA、Smad4 mRNA在甲状腺乳头状癌(PTC)中的表达及意义。方法:采用FQ-PCR法检测94例PTC及癌旁组织,29例甲状腺腺瘤组织中PTEN mRNA和Smad4 mRNA的表达情况。结果:PTC高、中、低转移变型组PTEN mRNA和Smad4 mRNA的表达明显低于甲状腺腺瘤组及癌旁组,差异具有统计学意义(P0.05);且PTEN mRNA表达与Smad4 mRNA表达呈正相关(P0.05)。结论:PTEN和Smad4在PTC的发生发展过程中存在协调关系,二者的低表达可作为判断PTC预后不良的指标。