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恶性疟原虫DNA探针检测血内恶性疟原虫的初步研究 总被引:4,自引:0,他引:4
从培养恶性疟原虫(Fcc-1)中分离纯化基因组DNA,用~(32)P标记,作为探针,按DNA斑点杂交法,检测血样。结果表明:该探针可检出9个恶性疟原虫感染红细胞/10_6红细胞;在现场应用时,与13例恶性疟阳性标本镜检符合率为92%:与1例间日疟原虫病例和正常人血、白细胞之间,未发现非特异性杂交。 相似文献
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本文报告实验室制备恶性疟原虫(Fcc-1/HN分离株)基因组DNA.酶切冻融回收克隆重组pPF14DNA,经32P缺口移位法标记作为探针,按DNA—DNA斑点杂交试验平行检测P.f.DNA及血样中恶性疟原虫的初步结果.两探针检测人工培养的恶性疟原虫(Fcc-1/HN)敏感度,基因组探针为0.00078%原虫血症和7.83pg原虫DNA,pPF14探针为0.0078%和15.63pg。镜检确诊并复核后的56例云南恶性疟病人血样,基因组探针检出53例(94.64%),pPF14探针检出51例(91.07%).9例间日疟病人血样,基因组探针阳性7例,pPF14探针均未显示杂交.2例伯氏鼠疟、1例刚地弓形虫阳性鼠及10例正常人血样皆为阴性.结果揭示:这两种探针似可用于我国疟疾主要流行区恶性疟原虫检测。与基因组探针相比,pPF14探针似是发展适合于我因恶性疟原虫大规模核酸诊断技术中,比较经济、方便的探针来源。 相似文献
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本文用生物素标记的克隆DNA探针,以斑点杂交法检测蚊体内恶性疟原虫。将一组蚊虫在还原性缓冲液中研磨后集体检测时,在25只蚊中有1只感染蚊即可检出,亦可将单个蚊虫直接压在硝酸纤维素膜上进行检测。本技术的高特异性、敏感性以及试剂的稳定性等表明,它可作为一个适用的流行病学调查工具。 相似文献
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光敏生物素DNA探针用于血内和蚊体内疟原虫的检测 总被引:1,自引:0,他引:1
从恶性疟原虫基因文库中筛选的具有P.f种特异的质粒型pBF2克隆DNA经光敏生物素标记后作探针,用核酸杂交方法检测不同疟区病人血内和蚊体内的疟原虫,敏感性和持异性均达应用水平,显示该探针在疟疾监测中具有良好的应用前景。 相似文献
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由于间日疟原虫目前尚不能体外培养,抗原制备困难,使间日疟的流行病学调查及诊断受到限制。本文报道以间日疟原虫红内期基因组DNA库0.24kb DNA片段为探针,用~(32)P标记后进行点杂交试验检测间日疟原虫的初步结果。 材料与方法 含间日疟原虫红内期基因组DNA库亚克隆VPL101/5 0.24kb DNA片段的重组质粒pUC19由澳大利亚昆士兰医学研究所Kidson赠送。按文献方法进行感受态细胞JM 109的制备、重组质 相似文献
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从恶性疟原虫(P.f) 基因文库中筛选的具有P.f 种特异的质粒型pBF2 克隆DNA 经光敏生物素标记后作探针,用核酸杂交方法检测不同疟区病人血内和蚊体内的疟原虫,敏感性和特异性均达应用水平,显示该探针在疟疾监测中具有良好的应用前景。 相似文献
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用固相聚合酶链反应检测恶性疟原虫DNA特异片段 总被引:1,自引:1,他引:1
本文建立了固相聚合酶链反应(PCR)技术检测恶性疟原虫的方法,并对培养的FCCl/HN株及西双版纳恶性疟患者进行检测,结果表明该法对FCCl/HN株DNA敏感到0.2pg,相当于10个疟原虫,对西双版纳疟疾患者检测恶性疟30例,间日疟4例,证实PCR仅特异扩增恶性疟原虫DNA。提示固相PCR是早期、敏感、特异检测恶性疟原虫的方法。 相似文献
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本文通过分子杂交技术,以恶性疟原虫为靶DNA,对从恶性疟基因文库中筛出的含有高度重复顺序的pBF_4DNA探针和含单考贝基因的pBF_(13)DNA探针以及恶性疟原虫全基因组DNA探针进行了杂交比较,结果pBF_(13)DNA探针比全基因组DNA探针敏感度低10倍,比pBF_4DNA探针敏感度低100倍,全基因组DNA探针可检到的DNA含量为100pg。 相似文献
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应用DNA探针检测蚊体内疟原虫的研究 总被引:4,自引:0,他引:4
本文用生物素标记的克隆DNA探针,以斑点杂交法检测蚊体内恶性疟原虫。将一组蚊虫在还原性缓冲液中研磨后集体检测时,在25只蚊中有1只感染蚊即可检出,亦可将单个蚊虫直接压在硝酸纤维素膜上进行检测。本技术的高特异性,敏感性以及试剂的稳定性等表明,它可作一个适用的流行病学调查工具。 相似文献
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本文用鸟枪法将恶性疟原虫基因组 DNA 片段克隆至载体 pBR_(322)质粒中,利用抗性遗传标志和琼脂糖凝胶电泳筛选重组克隆,克隆 pBF_8,pBF_(13),pBF_(23),pBF_(24)用 HindⅢ酶解后,均显示单一插入片段,分子大小分别为1.8,2.3,0.94和6.0kb。经 Southern Blot 和 Dot Blot 分析表明,克隆 pBF_(13)对恶性疟原虫基因组 DNA 特异,与人 DNA 无交叉性杂交,可用作诊断用探针。 相似文献
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Bio—ll—dUTP经切口平移法标记于质粒rep20,自身杂交敏感度为100pg。检出云南株Pf(恶性疟原虫)培养血和病人血样中pf密度低限分别为1/10~5和1/10~4(虫/红细胞),病人血样中最低pf检出数为12000个。检测30份云南省恶性疟患者血样,28份阳性;检测20份云南省和海南省问日疟患者血样、29份正常人血样均为阴性;与三种动物疟原虫及人白细胞的DNA未出现杂交反应。表明质粒rep20对云南株pf具有高度同源性和特异性,该生物素化探针检测Pf具较高敏感性。 相似文献
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江钢锋 《中国人兽共患病杂志》1999,16(5):52-53
目的 比较3 种不同的基因组 D N A 提取方法制备恶性疟原虫基因组 D N A 的效果。方法 分别采用酚- 氯仿- 异戊醇抽提法、 Wizard 基因组 D N A 纯化试剂盒和磷酸钠盐溶液, 分离提取恶性疟原虫基因组 D N A, 通过 D N A 含量测定和 P C R 鉴定, 比较它们的提取效果。结果 前两种方法制备恶性疟原虫基因组 D N A 的效果相仿, 纯度较高; 第三种方法最为简便, 所得的 D N A 含量明显高于前两种方法, 但其纯度较低, 蛋白质含量最高。结论 3 种方法各有优缺点, 第3 种方法简便、快捷、经济, 更有实用价值。 相似文献